全 文 ：·中药及天然药物·
太白花活性成分的筛选与药理作用相关性研究
张汉利 ,杨广德 ,贺浪冲＊ ,杨银京 (西安交通大学药学院 ,陕西 西安 710061)
摘要:目的　筛选太白花中对主动脉血管有舒张作用 、对心肌收缩力有抑制作用的有效成分。方法　采用柱色谱法分离 , 反
相高效液相色谱法与细胞膜色谱法联用 , 并结合离体药理实验确定太白花中的有效成分。结果　太白花乙醚提取部位中
TBH2-2 和 TBH2-6 含有对血管细胞膜及膜受体有作用的活性成分;太白花石油醚提取部位中所含成分 TBHG8 是对心肌细
胞膜及膜受体有作用的活性成分;太白花中含量较高的松萝酸不是对血管以及心肌细胞膜及膜受体有作用的活性成分 。结
论　太白花中含有对主动脉血管有舒张作用 、对心肌收缩力有抑制作用的有效成分;细胞膜色谱法的筛选结果与其药理作用
有显著的相性。
关键词:活性成分;筛选;药理作用;太白花
中图分类号:R963 文献标识码:A 文章编号:1001-2494(2003)02-0092-03
作者简介:张汉利 ,女 ,硕士研究生
＊通讯作者:贺浪冲 ,男 ,教授 ,博士生导师 Tel:(029)5275451;Fax:(029)5275451 E-mail:helc@mai l.xjtu.edu.cn
Studies on screening the effective components of Cladonia alpestris and its correlation with pharmacological
effects
ZHANG Han-li , YANG Guang-de ,HE Lang-chong＊ , YANG Yin-jing(Collegeof Pharmacy , X i an J iaoTong Univer-
sity , Xi an 710061 , China)
ABSTRACT:OBJECTIVE　To screen the effective components of Cladonia alpestris and study the correlation between the compo-
nents and pharmacological effects.METHODS　The effective component w as determined by cell membrane chroma tog raphy and re-
versed phase high performance liquid chromatography.The pharmacological actions in vitro w ere testified.RESULTS:The results
show ed that the TBH2-2 and TBH2-6 were two active parts of the TBH2 for vascul.The TBHG8 w as found to be the effective com-
ponent of the TBH1 fo r cardiac muscle.While the usnic acid was no t the effective component fo r both the vascul and cardiac muscle.
CONCLUSION　It was found the effectiv e components for vascul and cardiac muscle in Cladonia alpestris.The retention of compo-
nent on the CMC model w as found to have a good correlation with pharmacolo gical effects.
KEY　WORDS:effective components;screening;pharmacological effect;Cladonia alpestris
　　太白花原植物为雀儿石蕊(Cladonia alpestris L.Rabht)
地衣门植物 ,石蕊科石蕊属。一般认为松萝酸为地衣门植物
的主要有效成分之一[ 1] 。 细胞膜色谱法(cell membrrane
chromatography , CMC)是一种新的生物亲和色谱法 , 被分析
成分如果与特定的细胞膜及膜受体有特异性结合[ 2] , 则可在
CMC 模型中反映出来 , 它能有效地将药物的体内作用过程
在体外进行模拟研究。本实验以 CMC 筛选模型为手段 , 并
用药理实验结果作为药效指标进行跟踪研究 ,结果发现太白
花中含有对主动脉血管有舒张作用 、对心肌收缩力有抑制作
用的有效成分 ,并与药理作用的相关性良好 , 同时也发现松
萝酸不具有相同的药理作用。
1　仪器与试药
Waters高效液相色谱系统 , 486 紫外检测器 , 510 型色谱
泵 , U6K 进样器 , ANASTAR 色谱工作站(日本), ZFQ-85A
旋转蒸发器(上海医械专机厂), PHS-2型酸度计(上海第二
分析仪器厂)。
太白花雀(儿石蕊)1999 年采自太白县太白山海拔 2 300
～ 2 500 m 处 , 经西安交通大学药学院生药学教研室牛晓峰
副教授鉴定 , 药用部位为太白花地衣全体。松萝酸对照品
(西安交通大学药学院有机教研室)。
盐酸维拉帕米(±verapamil hydrochlo ride , VP)、普萘洛
尔(心得安 , propranolol , PP , 美国 Sigma 公司), 重酒石酸去甲
肾上腺素注射液(武汉制药厂)。磷酸二氢钠 、磷酸 、氯化钠 、
氯化镁 、氯化钾 、氯化钙 、碳酸氢钠 、葡萄糖 , 石油醚 、乙醚等
均为分析纯。柱色谱硅胶 H 、薄层色谱硅胶 G(青岛海洋化
工集团公司)。色谱纯甲醇 、三蒸去离子水(本实验室自制)。
2　方法与结果
2.1　筛选样品的制备
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取太白花适量 ,用 95%乙醇回流提取 2 次 , 每次 2 h , 过
滤 ,合并滤液 , 回收乙醇 , 取稠膏适量 , 加吡啶溶解 ,得太白花
乙醇总提取物供试品溶液(TBH)。其余稠膏加适量水 ,得混
悬液。依次用不同极性的溶剂:石油醚 、乙醚 、醋酸乙酯 、正
丁醇萃取 ,回收各溶剂 , 残渣用适量吡啶溶解 ,依次得到 4 种
不同溶剂提取的供试品溶液(TBH1 , TBH2 , TBH3 , TBH4)。
2.2　色谱条件
色谱柱:血管细胞膜固定相和心肌细胞膜固定相[ 3](50
mm×2 mm)色谱柱;流动相:磷酸盐缓冲液(pH =7.4);流
速:0.5 m L·min-1;检测波长:236 nm;柱温:37℃。平衡 3 ～
4 h 后 ,进样分析。
2.3　太白花有效部位筛选
以 VP 为对照 ,分别吸取各供试品溶液 3 ～ 5 μL , 注入血
管CMC 柱分析 , 结果供试品溶液 TBH 和 TBH2 在血管
CMC 柱上具有与 VP类似的保留特性(图 1), 表明太白花乙
醚提取部位中可能含有与血管细胞膜及膜受体作用的有效
成分。同时以 PP为对照 ,分别吸取各供试品溶液 3 ～ 5 μL ,
注入心肌 CMC 柱分析 , 结果供试品溶液 TBH 和 TBH1 在心
肌 CMC 柱上具有与 PP 类似的保留特性(图 2),表明太白花
石油醚提取部位中可能含有与心肌细胞膜及膜受体作用的
有效成分。
图 1　在血管 CMC 柱上的色谱图
1-VP;2-TBH;3-TBH2
Fig 1　Chromato gram on vascular CMC model
1-VP;2-TBH;3-TBH2
2.4　有效部位分离
2.4.1　乙醚有效部位　将太白花乙醚部位(TBH2)用硅胶
色谱柱(300 mm×30 mm)分离。 用石油醚-乙醚混合液梯度
洗脱 ,收集洗脱液 , 以薄层色谱法检测 , 合并相同组分 , 回收
溶剂。最后得不同极性样品组分 12 份(TBH2-1 ～ TBH2-
12),分别用血管 CMC 柱筛选 , 结果有 2 个组分(TBH2-2 ,
TBH2-6)在柱上具有与 VP类似的保留特性(图 3)。
2.4.2　石油醚有效部分　将太白花石油醚部分(TBH1)用
硅胶色谱柱(400 mm×80 mm)分离。用石油醚-乙醚 、甲醇
图 2　在心肌 CMC 柱上的色谱图
1-PP;2-TBH;3-TBH1
Fig 2　Chromatogram on cardiac muscle CMC model
1-PP;2-TBH;3-TBH1
图 3　TBH2-2 , TBH2-6 在血管柱上的色谱图
1-TBH2-2;2-TBH2-6
Fig 3 　Chromatog ram of TBH2-2 and TBH2-6 on vascular
CMC model
1-TBH2-2;2-TBH2-6
梯度洗脱 ,收集洗脱液 , 回收溶剂 ,最后得不同极性样品组分
15 份(TBH1-1 ～ TBH1-15), 分别用心肌 CMC 柱筛选 , 结果
组分 TBH1-15 在柱上具有与 PP 类似的保留特性(图 4)。
将 TBH1-15 用硅胶色谱柱(900 mm× 45 mm)分离 , 氯
仿-甲醇梯度洗脱 , 收集洗脱液 , 回收溶剂 , 得不同极性样品
组分 12 份 , 同法用心肌 CMC 柱筛选 , 结果只有一个组分在
柱上具有与 PP 类似的保留特性(图 4),用 TBHG 表示。
将 TBHG用反相 HPLC 以甲醇-水(65∶35)pH=8 为流
动相进行分离 ,连续收集其中保留时间为 8 , 12 , 33 min 的流
出组分 ,挥去甲醇 , 剩余水液用石油醚同法萃取 , 回收石油
醚 ,残渣用吡啶溶解 , 得供试品溶液 TBHG-8 , TBHG-12 和
TBHG-33。用心肌 CMC 柱筛选 , 结果 TBHG-8 在柱上具有
与 PP 类似的保留特性(图 4)。表明 TBHG-8 是太白花中与
心肌细胞膜及膜受体作用的有效成分。其在太白花药材中
·93·中国药学杂志 2003年 2月第 38卷第 2期　　　　　　　　　　　　　 Chio Pharm J , 2003 February , Vol.38 No.2
图 4　TBH1-15 , TBHG , TBHG8 在心肌柱上的色谱图
1-TBH1-15;2-TBHG;3-TBHG8
Fig 4　Chromatog ram of TBH1-15 , TBHG , and TBHG8 on car-
diac muscle CMC model
1-TBH1-15;2-TBHG;3-TBHG8
的含量约为0.02‰,含量极微。
2.5　太白花中松萝酸分析
太白花石油醚部位经石油醚-乙醚柱层析梯度洗脱 , 获
得的 TBH1-3 为一橘黄色溶液 , 放置后有大量黄色针状结晶
析出 ,用氯仿-无水乙醇重结晶 , 并与松萝酸标准品用薄层色
谱和反相 HPLC 法对照分析 , 其纯度为 98.6%, 太白花药材
中松萝酸含量约为 0.96%。但其在血管 CMC 和心肌 CMC
模型上均无保留特性。
2.6　离体药理试验验证
兔离体动脉条试验:按文献[ 4]方法进行 , 累加 TBH2 的
浓度为 6.0～ 1 414 μg·mL-1 。结果(n=3)TBH2 对 NE 所
致主动脉收缩有一定的抑制作用(图 5)。 TBH2-6 对主动脉
血管有一定的舒张作用 ,松萝酸对主动脉血管没有作用。
离体蛙心试验:按照文献[ 4] 方法进行 , 累加 TBHG-8 的
浓度为 3.14～ 282 μg·m L-1。 结果(n =3)TBHG-8 对离体
蛙心的心肌收缩力有一定的抑制作用(图 5)。而松萝酸没有
相同的药理作用。
3　讨　论
图 5　TBH2 对去甲肾上腺素所致动脉条收缩及 TBHG8 对
离体蛙心心肌收缩力的抑制作用曲线
1-TBH2;2-TBHG8
Fig 5　The inhibition effect on vascular contraction produced by
TBH2 and on myocardial contraction produced by TBHG8
1-TBH2;2-TBHG8
实验结果表明 TBH2-6 是太白花乙醚部分中对主动脉
血管有舒张作用的有效部位。 TBH 对心肌收缩力有抑制作
用 , TBHG-8 是太白花中对心肌收缩力有抑制作用的有效成
分。太白花中松萝酸含量较高 , 但在本实验条件下 , 表明它
可能不是太白花中对血管和心肌有作用的有效成分。这与
文献所报道的松萝酸主要具抗菌消炎作用的结论相符。 所
有实验结果充分证明化合物在细胞膜色谱模型上的保留特
性与其药理作用有显著的相关性 ,该模型基本可反映化合物
与细胞及膜蛋白(包括受体)的相互作用。利用该模型可以
迅速地筛选出成分复杂的天然药物中的活性成分。
应用 CMC 模型对加速发现药用植物中的有效成分的具
有实际意义。本文和前文[ 5 ～ 6] 的研究结果表明 , 由 CMC 法
结合制备色谱技术以及药效实验方法形成的有效成分快速
筛选系统 ,对筛选有明确作用靶体的活性成分特别实用。
参考文献
[ 1] 孙汉董 ,林中文 ,等.七种云南地衣植物的化学成分[ J] .云南
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[ 4] 徐叔云 ,卞如濂 ,陈修.药理实验方法学[ M] .第 2版 ,北京:人
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[ 5] 赵惠茹 ,杨广德 ,贺浪冲.用细胞膜色谱法筛选当归中的有效
成分[ J] .中国药学杂志 , 2000 , 35(1):13.
[ 6] 赵小娟 ,党高潮 ,贺浪冲.用细胞膜色谱法筛选研究淫洋藿地
下部分有效成分[ J] .分析化学 , 2002 , 30(1):74.
(收稿日期:2001-05-14)
作者简介:王冰 ,男 ,教授 ,硕士生导师 Tel:(024)86202457
小花鬼针草染色体的核型分析
王冰 ,张巍巍 ,沙明 ,郑红月 ,尹海波 (辽宁中医学院 ,辽宁沈阳 110032)
摘要:目的　对小花鬼针草染色体核型等进行研究 , 为研究该种鉴定 、起源 、演化 、良种培育等提供必要的细胞学资料。方法
　采用常规制片方法 ,结合显微摄影对染色体进行检测分析。结果　小花鬼针草体细胞染色体数目 2n=48;核型公式是 K
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