全 文 ：食用菌学报２０１５．２２（３）：５５～５９
收稿日期：２０１５－０２－２３原稿；２０１５－０４－１５修改稿
基金项目：广东省产学研省部合作专项基金项目（２０１２Ｂ０９０６０００５０）、广东省工程技术研究开发中心建设项目
（２０１０Ｂ０８０１０００６８）、广东省引进领军人才项目和广东省自然科学基金项目（２０１５Ａ０３０３１３７１１）资助
作者简介：余雄涛 （１９８３－），男，硕士，研究助理，从事食药用真菌研究及开发工作。
＊本文通讯作者　Ｅ－ｍａｉｌ：ｐｈｈｃｙｓ＠１２６．ｃｏｍ
ＤＯＩ：１０．１６４８８／ｊ．ｃｎｋｉ．１００５－９８７３．２０１５．０３．０１２
皱盖假芝水提物抑制单纯疱疹病毒研究
余雄涛１，黄纪国１，韩园园１，谢意珍１，２，潘鸿辉１＊
（１广东省微生物研究所，省部共建华南应用微生物国家重点实验室，广东省菌种保藏与应用重点实验室，
广东省微生物应用新技术公共实验室，广东广州５１００７０；２广东粤微食用菌技术有限公司，广东广州５１０６６３）
摘　要：研究了皱盖假芝（Ａｍａｕｒｏｄｅｒｍａ　ｒｕｄｉｓ）水提物（ＡＥＲＡ）对单纯疱疹病毒（Ｈｅｒｐｅｓ　Ｓｉｍｐｌｅｘ　Ｖｉｒｕｓ，
ＨＳＶ）感染细胞的抑制效果。体外细胞试验结果表明：皱盖假芝水提物能有效抑制 ＨＳＶ感染非洲绿猴肾细胞
（Ａｆｒｉｃａｎ　ｇｒｅｅｎ　ｍｏｎｋｅｙ　ｋｉｄｎｅｙ，Ｖｅｒｏ）（半数有效浓度ＩＣ５０为１０７μｇ／ｍＬ），且具有低毒性优点（半数致死浓度
ＣＣ５０为１４７７μｇ／ｍＬ）。不同加样时间和加样顺序试验结果表明：水提物ＡＥＡＲ是作用于 ＨＳＶ病毒感染细胞
的早期阶段。
关键词：皱盖假芝；单纯疱疹病毒；抗病毒
　　皱盖假芝（Ａｍａｕｒｏｄｅｒｍａ　ｒｕｄｉｓ）又名血芝，灵
芝科（Ｇａｎｏｄｅｒｍａｔａｃｅａｅ）假芝属（Ａｍａｕｒｏｄｅｒｍａ）真
菌，分布于热带及亚热带地区，在我国分布于
华南及西南地区，皱盖假芝形态特异，在固体
培养基上生长出的菌丝分泌大量红褐色色素，
其幼嫩子实体损伤伤口处会分泌血一样的
液体［１－２］。
单 纯 疱 疹 病 毒 （Ｈｅｒｐｅｓ　Ｓｉｍｐｌｅｘ　Ｖｉｒｕｓ，
ＨＳＶ）是一个发病率高、全球分布广泛的人类疱
疹病毒。单纯疱疹病毒属于疱疹病毒科中的α－
疱疹病毒亚科，有 ＨＳＶ－１和 ＨＳＶ－２ 两个血清
型［３］。其中，ＨＳＶ－１主要感染躯体上半部，典型
症状为口腔疱疹、疱疹性角膜炎脱落和疱疹性脑
炎［３］，免疫缺陷者或新生儿感染会导致严重疾病
如中枢神经系统疾病［４－５］，ＨＳＶ－１导致的脑炎若
不及时治疗可能会危及生命［６］。早期的抗 ＨＳＶ
药物以碘苷（ｉｄｏｘｕｒｉｄｉｎｅ）为代表，其选择性低，
对正常细胞毒性大［７］。
目前，对皱盖假芝的研究主要集中在皱盖假
芝的培养条件领域［８－１１］，对其生物活性的研究却
鲜有报道，尤其是在抗病毒研究方面。笔者对皱
盖假芝水提物进行了抗人单纯疱疹病毒的体外
实验研究，并初步探究了其作用机制，以期为皱
盖假芝的开发应用提供参考。
１　材料与方法
１．１供试材料
　　皱盖假芝（Ａ．ｒｕｄｉｓ）子实体购自广东粤微
食用菌技术有限公司，并经广东省微生物研究所
食用菌研究发展中心鉴定。
非洲绿猴肾细胞（Ａｆｒｉｃａｎ　ｇｒｅｅｎ　ｍｏｎｋｅｙ
ｋｉｄｎｅｙ，Ｖｅｒｏ）（ＡＴＣＣ ＣＣＬ－８１ＴＭ）来源于美国
菌种保藏中心（ＡＴＣＣ）。
ＨＳＶ－１病毒受赠于ＣＯＨＥＮ和 ＥＩＳＥＮＢＥＲＧ
（Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ），保存于中国科学院
广州生物医药与健康研究院实验室。
Ｄｕｌｂｅｃｃｏｓ　Ｍｏｄｉｆｉｅｄ　Ｅａｇｌｅ　Ｍｅｄｉａ（ＤＭＥＭ）
培养液、胰酶和乙二胺四乙酸（ＥＤＴＡ）均购自美
国Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ公司；组织培养板（美国 Ｎｕｎｃ　Ｉｎｃ
公司）；胎牛血清（ＦＢＳ）（美国 Ｈｙｃｌｏｎｅ公司）；噻
唑蓝（ＭＴＴ）（美国Ｓｉｇｍａ公司）。
Ｏｌｙｍｐｕｓ　ＩＸ７１显微镜（日本 Ｏｌｙｍｐｕｓ公
司）；Ｓｙｎｅｒｇｙ　ＨＴ 多功能微孔板检测仪（美国
Ｂｉｏ－ｔｅｋ公司）。
１．２样品制备
　　取２００ｇ子实体粉（２００目）分别用９５％和
８５％的乙醇脱脂脱色［１２］，然后用７５％的乙醇浸
泡过夜，离心（５５００　ｇ，３０ｍｉｎ），沉淀５０℃干燥
食　用　菌　学　报 第２２卷
后，加入３０倍体积的去离子水，８０℃提取２ｈ，离
心（５５００　ｇ，３０ｍｉｎ）后收集上清液，沉淀水提２
次，合并上清液，加入３倍体积９５％乙醇过夜，离
心（５５００　ｇ，３０ｍｉｎ）收集沉淀，并将沉淀于５０℃
烘干，再用ＤＭＥＭ培养基溶解至１０ｍｇ／ｍＬ，用
０．２２μｍ的无菌过滤器过滤得到皱盖假芝水提
物，简称ＡＥＡＲ（ａｑｕｅｏｕｓ　ｅｘｔｒａｃｔ　ｏｆ　Ａ．ｒｕｄｉｓ）。
１．３细胞培养
　　用含１％青霉素、１％链霉素和１０％胎牛血清
（ＦＢＳ）的ＤＭＥＭ培养液进行非洲绿猴肾细胞培
养，细胞浓度为每毫升１．５×１０５个。将含有１０％
ＦＢＳ的ＤＭＥＭ细胞悬液接种于９６孔组织培养
板上，每孔 １００μＬ，置于 ３７ ℃、５％ ＣＯ２ 的
Ｔｈｅｒｍｏ　Ｆｏｒｍａ　３１１０组织培养箱（德国Ｔｈｅｒｍｏ
公司）中培养２４ｈ。
１．４病毒培养
　　ＨＳＶ－１病毒和１．３培养的Ｖｅｒｏ细胞共培养
７２ｈ后，收集细胞于－８０℃保存。
１．５细胞毒性分析
　　ＡＥＡＲ细胞毒性用 ＭＴＴ方法进行分析。取
对数生长期的 Ｖｅｒｏ细胞以１．５×１０４个／孔的密
度接种到９６孔细胞培养板，加入用ＤＭＥＭ培养
基稀释好的 ＡＥＡＲ（终浓度为５０００、２５００、１２５０、
６２５和３１２．５μｇ／ｍＬ），同时设置不添加 ＡＥＡＲ
的ＤＭＥＭ培养基为对照。置３７℃，５％ ＣＯ２培
养箱中培养３ｄ后，用 ＭＴＴ法检测光吸收值
（Ａ４９０）计算细胞活力，计算各浓度的抑制率［１３］。
抑制率 ＝（对照孔光吸收值Ａ４９０－给药孔光吸收
值Ａ４９０）／对照孔光吸收值Ａ４９０×１００％
利用ＳＰＳＳ１９的ｐｒｏｂｉｔ　ｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎ计算样品
对细胞的半数毒性浓度ＣＣ５０。
１．６样品对ＨＳＶ病毒的抑制作用
　　ＨＳＶ－１病毒基因组中有β－Ｇａｌ糖苷酶基因，
可以通过检测β－Ｇａｌ糖苷酶的活性来反应 ＨＳＶ－
１的数量；通过计算抑制率来评价样品的抗病毒
效果［１４］。取对数生长期的 Ｖｅｒｏ细胞以１．５×
１０４个／孔的密度接种到９６孔细胞培养板，过夜培
养，长成细胞单层。同时加入７．５×１０３个 ＨＳＶ
病毒粒子和稀释好的样品液（终浓度５００、２５０、
１２５、６２．５和３１．２５μｇ／ｍＬ），３７℃、５％ ＣＯ２培养
箱培养２４ｈ后进行活性检测。在酶标仪上进行
５７０ｎｍ光吸收的测定。根据公式计算每个浓度
样品对病毒抑制率：
抑制率＝（阴性对照孔测量值－样品孔测量
值）／阴性对照孔测量值×１００％
１．７不同加样时间的影响
　　在７．５×１０３个病毒粒子感染细胞悬液（每孔
１．５×１０４个）前２ｈ（－２ｈ）、感染时（０ｈ）、感染后
２、４、６ 和 ８ｈ 加入终浓度为 ２５０μｇ／ｍＬ 的
ＡＥＡＲ，并设不加样品为对照。３７ ℃作用２ｈ
后，吸走药物及游离病毒，加入 １０％ ＦＢＳ的
ＤＭＥＭ培养基，３７℃、５％ ＣＯ２培养箱培养２４ｈ
后进行β－Ｇａｌ活性检测。
１．８作用阶段分析试验
　　用托盘盛冰，实验处理分成 Ａ、Ｂ、Ｃ　３组。
Ａ：１．５×１０４个细胞接种７．５×１０３个ＨＳＶ病毒粒
子，体积共５０μＬ，维持液（含２％ＦＢＳ的ＤＭＥＭ
培养基）补至１００μＬ，４℃吸附１．５ｈ后，吸弃
ＨＳＶ病毒液，１００μＬ维持液洗１遍，加入梯度稀
释样品液（终浓度１００、１５０、２００、２５０和３００μｇ／ｍＬ，
下同），４℃作用１．５ｈ后，转至３７℃培养５ｈ后
检测报告β－Ｇａｌ活性。Ｂ：梯度稀释样品液在４℃
与细胞作用１．５ｈ后，吸弃药液，１００μＬ维持液
洗１遍，加入７．５×１０３个 ＨＳＶ病毒粒子，４℃放
置１．５ｈ后，１００μＬ维持液洗１遍，加入１００μＬ
维持液后转至３７℃培养５ｈ后检测β－Ｇａｌ活性。
Ｃ：梯度稀释样品液与 ＨＳＶ 病毒在４ ℃作用
１．５ｈ后，加到１．５×１０４个细胞上，４℃放置１．５ｈ
后，１００μＬ维持液洗１遍，加入１００μＬ维持液后
转至３７℃培养５ｈ后检测β－Ｇａｌ活性。
２　结果与分析
２．１ＡＥＡＲ对Ｖｅｒｏ细胞毒性
　　ＡＥＡＲ的Ｖｅｒｏ细胞毒性结果显示，当ＡＥＡＲ
的质量浓度在６２５和３２１．５μｇ／ｍＬ时没有出现细
胞毒性，在浓度为１２５０μｇ／ｍＬ时显示出低的细
胞毒性（图１），其ＣＣ５０为１４７７μｇ／ｍＬ。
２．２ＡＥＡＲ对ＨＳＶ－１病毒的抑制作用
　　β－Ｇａｌ活性检测结果显示，ＡＥＡＲ具有强烈
的抗ＨＳＶ作用（图２），在２５０μｇ／ｍＬ的浓度下
抑制率达到了１００％，其ＩＣ５０为１０７μｇ／ｍＬ。
２．３ＡＥＡＲ对ＨＳＶ病毒作用时间
　　在加入病毒前２ｈ和加入病毒的同时加入样
品的处理中，细胞被病毒感染受到完全抑制；先
加入病毒后再加入样品的处理，细胞受病毒感染
程度随加样时间延迟而加重 （图 ３）。因此，
ＡＥＡＲ发挥抗病毒ＨＳＶ－１作用需与病毒共同孵
育。这表明 ＡＥＡＲ的抗病毒作用在 ＨＳＶ 病毒
６５
第３期 余雄涛，等：皱盖假芝水提物抑制单纯疱疹病毒研究
感染的早期阶段，这个阶段包含了病毒的吸附和
侵入寄主细胞。
Ａ　ｓｔｏｃｋ　ｓｏｌｕｔｉｏｎ　ｏｆ　Ａ．ｒｕｄｉｓ　ｅｘｔｒａｃｔ　ｗａｓ　ｐｒｅｐａｒｅｄ　ｂｙ　ｓｕｓｐｅｎｄｉｎｇ
２００ｇ　ｐｏｗｄｅｒｅｄ　ｆｒｕｉｔ　ｂｏｄｙ （２００ ｍｅｓｈ）ｏｖｅｒｎｉｇｈｔ　ｉｎ　７５％
ａｌｃｏｈｏｌ，ｃｅｎｔｒｉｆｕｇｉｎｇ，ｄｒｙｉｎｇ　ｔｈｅ　ｐｅｌｅｔｅｄ　ｍａｔｅｒｉａｌ　ａｔ　５０℃，ｒｅ－
ｓｕｓｐｅｎｄｉｎｇ　ｉｎ　３０ｖｏｌｓ　ｏｆ　ｄｄＨ２Ｏ　ａｎｄ　ｅｘｔｒａｃｔｉｎｇ　ａｔ　８０℃ｆｏｒ　２ｈ．
Ａｆｔｅｒ　ｃｅｎｔｒｉｆｕｇｉｎｇ，ｔｈｅ　ｓｕｐｅｒｎａｔａｎｔ　ｗａｓ　ｒｅｔａｉｎｅｄ，ｔｈｅ　ｐｅｌｅｔｅｄ
ｍａｔｅｒｉａｌ　ｗａｓ　ｅｘｔｒａｃｔｅｄ　ａ　ｓｅｃｏｎｄ　ｔｉｍｅ．Ｔｈｒｅｅ　ｖｏｌｓ　ｏｆ　７５％ｅｔｈａｎｏｌ
ｗａｓ　ａｄｄｅｄ　ｔｏ　ｔｈｅ　ｃｏｍｂｉｎｅｄ　ｓｕｐｅｒｎａｔａｎｔｓ　ａｎｄ，ａｆｔｅｒ　ｓｔａｎｄｉｎｇ
ｏｖｅｒｎｉｇｈｔ，ｐｒｅｃｉｐｉｔａｔｅｄ　ｍａｔｅｒｉａｌｓ　ｗａｓ　ｃｏｌｅｃｔｅｄ　ｂｙ　ｃｅｎｔｒｉｆｕｇａｔｉｏｎ，
ｄｒｉｅｄ　ａｔ　５０ ℃，ａｎｄ　ｄｉｓｓｏｌｖｅｄ　ｉｎ　ｄｉｓｏｄｉｕｍ　ｅｔｈｙｌｅｎｅｄｉａｍｉｎｅ
ｔｅｔｒａａｃｅｔａｔｅ　ｍｅｄｉｕｍ（ＤＭＥＭ）ｔｏ　ａ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　１０ｍｇ／ｍＬ．
Ｖｅｒｏ　ｃｅｌｓ（１．５×１０４　ｐｅｒ　ｗｅｌ）ｗｅｒｅ　ｉｎｃｕｂａｔｅｄ　ｗｉｔｈ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ
ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ　ＡＥＡＲ　ａｔ　３７ ℃ ｆｏｒ　３ ｄ ａｎｄ　ｃｅｌ　ｖｉａｂｉｌｉｔｙ
ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ　ａｓ　ｄｅｓｃｒｉｂｅｄ　ｉｎ　Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ［１３］
图１　ＡＥＡＲ对Ｖｅｒｏ细胞毒性
Ｆｉｇ．１　Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　Ａ．ｒｕｄｉｓ　ｅｘｔｒａｃｔ　ｏｎ
Ｖｅｒｏ　ｃｅｌ　ｖｉａｂｉｌｉｔｙ
Ｗｅｌ　ｐｌａｔｅｓ　ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ　Ｖｅｒｏ　ｃｅｌ　ｍｏｎｏｌａｙｅｒｓ（１．５×１０４　ｃｅｌｓ）
ｗｅｒｅ　ｉｎｃｕｂａｔｅｄ　ｗｉｔｈ　７．５×１０３　ＨＳＶ－１ｐａｒｔｉｃｌｅｓ　ｐｅｒ　ｗｅｌ　ａｎｄ
ｖａｒｙｉｎｇ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ　ｏｆ　ＡＥＡＲ （５００，２５０，１２５，６２．５，
３１．２５μｇ／ｍＬ）．Ａｆｔｅｒ　ｉｎｃｕｂａｔｉｏｎ　ｆｏｒ　２４ｈｏｕｒｓ　ａｔ　３７ ℃，β－
ｇａｌａｃｔｏｓｉｄａｓｅ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｗａｓ　ｍｅａｓｕｒｅｄ．Ｄａｔａ　ｐｒｅｓｅｎｔｅｄ　ａｒｅ　ｔｈｅ
ｍｅａｎｓ±ＳＤ　ｏｆ　ｔｈｒｅｅ　ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔ　ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓ［１４］
图２　ＡＥＡＲ对ＨＳＶ－１病毒的抑制作用
Ｆｉｇ．２　Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　Ａ．ｒｕｄｉｓ　ｅｘｔｒａｃｔ　ｏｎ
ＨＳＶ－１ｉｎｆｅｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　Ｖｅｒｏ　ｃｅｌｓ
２．４加样顺序对ＨＳＶ－１侵染Ｖｅｒｏ细胞的影响
　　Ａ组和Ｃ组处理中系列浓度的ＡＥＡＲ均表
现出良好的抗ＨＳＶ作用，并呈现出浓度依赖性，
而Ｂ组处理中各浓度的ＡＥＡＲ都没有抑制ＨＳＶ
的作用 （图４）。推测 ＡＥＡＲ 主要是通过抑制
ＨＳＶ 病毒吸附或者穿透细胞来抑制ＨＳＶ。
－２：①２５０μｇ／ｍＬ　ＡＥＡＲ　ｗａｓ　ａｄｄｅｄ　ｔｏ　１．５×１０４　Ｖｅｒｏ　ｃｅｌｓ
ｓｕｓｐｅｎｄｅｄ　ｉｎ　ＤＭＥＭ　ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ　１０％ ＦＢＳ （ｔｏｔａｌ　ｖｏｌｕｍｅ　ｐｅｒ
ｗｅｌ，１００μＬ），ａｎｄ　ｉｎｃｕｂａｔｅｄ　ｆｏｒ　２ｈａｔ　３７℃；②７．５×１０３
ＨＳＶ－１ｗｅｒｅ　ａｄｄｅｄ　ｔｏ　ｔｈｅ　ｗｅｌ　ａｎｄ　ｉｎｃｕｂａｔｅｄ　ｆｏｒ　２ｈ　ａｔ　３７℃；③
ＡＥＡＲ　ａｎｄ　ＨＳＶ－１ ｗｅｒｅ　ｒｅｍｏｖｅｄ　ａｎｄ　ｔｈｅ　Ｖｅｒｏ　ｃｅｌｓ　ｗｅｒｅ
ｒｅｓｕｓｐｅｎｄｅｄ　ｉｎ　１００μＬ　ＤＭＥＭ　ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ　１０％ ＦＢＳ　ａｎｄ　ｔｈｅｎ
ｉｎｃｕｂａｔｅｄ　ｉｎ　ａ　５％ ＣＯ２ｉｎｃｕｂａｔｏｒ　ａｔ　３７ ℃ ｆｏｒ　２４ｈ；④ β－
Ｇａｌａｃｔｏｓｉｄａｓｅ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｃｅｌ　ｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎ　ｗａｓ　ｍｅａｓｕｒｅｄ
０：ＨＳＶ－１ａｎｄ　ＡＥＡＲ　ｗｅｒｅ　ａｄｄｅｄ　ｔｏ　Ｖｅｒｏ　ｃｅｌｓ　ａｔ　ｔｈｅ　ｓａｍｅ
ｔｉｍｅ；２，４，６，８ ａｎｄ　１０：ＨＳＶ－１ ｗａｓ　ａｄｄｅｄ　ｔｏ　Ｖｅｒｏ　ｃｅｌ
ｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎ　ａｎｄ　ｉｎｃｕｂａｔｅｄ　ｆｏｒ　２，４，６，８ａｎｄ　１０ｈｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ，
ａｆｔｅｒ　ｗｈｉｃｈ　ＡＥＡＲ　ｗｅｒｅ　ａｄｄｅｄ
图３　加样时间对ＨＳＶ－１病毒侵染Ｖｅｒｏ细胞效果的影响
Ｆｉｇ．３　Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｅｘｐｏｓｕｒｅ　ｔｉｍｅ　ｏｎ　ＡＥＡＲ－ｍｅｄｉａｔｅｄ
ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｖｅｒｏ　ｃｅｌ　ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ　ｂｙ　ＨＳＶ－１
３　讨论
　　近年来，单纯疱疹病毒（ＨＳＶ）感染的流行率
正逐步上升，是全球性的流行病，世界超过１／３
的人受到了复发性的 ＨＳＶ感染。近些年随着阿
昔洛韦（Ａｃｙｃｌｏｖｉｒ，ＡＣＶ）类药物的广泛使用，病
毒感染者对此类药物产生抗药性，需要延长抗病
毒的治疗时间［１５－１６］。食药用菌等天然药物具有
无污染、低毒副作用等优点，在我国抗感染领域
中的作用己日益受到重视，从中筛选有效成分成
为当前抗病毒新药研究的热点。本研究表明，皱
盖假芝水提物（ＡＥＡＲ）具有显著的体外抑制
ＨＳＶ活性，并且对Ｖｅｒｏ细胞的生存和生长没有
明显的抑制作用。对 ＡＥＡＲ作用时间检测实验
结果表明，ＡＥＡＲ的抗病毒作用在 ＨＳＶ病毒感
染的早期阶段，这个阶段包含了病毒的吸附和侵
入寄主细胞。临床药物阿昔罗维作用靶点是在
ＴＫ激酶及ＤＮＡ聚合酶上，属于病毒复制阶段，
而 ＡＥＡＲ能够有效的预防病毒感染，这表明与
７５
食　用　菌　学　报 第２２卷
Ａ：①Ｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎｓ　ｏｆ　１．５×１０４　Ｖｅｒｏ　ｃｅｌｓ　ａｎｄ　７．５×１０３　ＨＳＶ－１ｉｎ　ＤＭＥＭ　ｍｅｄｉｕｍ　ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ　２％ＦＢＳ（ｔｏｔａｌ　ｖｏｌｕｍｅ　ｐｅｒ　ｗｅｌ　１００μＬ）
ｗｅｒｅ　ｉｎｃｕｂａｔｅｄ　ａｔ　４℃ｆｏｒ　１．５ｈ，ａｆｔｅｒ　ｗｈｉｃｈ　ｔｈｅ　ｃｅｌｓ　ｗｅｒｅ　ｗａｓｈｅｄ　ｗｉｔｈ　１００μＬ　ＤＭＥＭ　ｍｅｄｉｕｍ　ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ　２％ＦＢＳ，②ＡＥＡＲ（１００，
１５０，２００，２５０ｏｒ　３００μｇ／ｍＬ）ｗａｓ　ａｄｄｅｄ，ａｎｄ　ｒｅａｃｔｉｏｎ　ｍｉｘｔｕｒｅｓ　ｗｅｒｅ　ｉｎｃｕｂａｔｅｄ　ａｔ　４℃ｆｏｒ　１．５ｈｆｏｌｏｗｅｄ　ｂｙ　ｉｎｃｕｂａｔｉｏｎ　ｆｏｒ　５ｈａｔ
３７℃，③β－Ｇａｌａｃｔｏｓｉｄａｓｅ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｗａｓ　ｍｅａｓｕｒｅｄ
Ｂ：① Ｒｅａｃｔｉｏｎ　ｍｉｘｔｕｒｅｓ　ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ　１．５×１０４　Ｖｅｒｏ　ｃｅｌｓ＋１００，１５０，２００，２５０ｏｒ　３００μｇ／ｍＬ　ＡＥＡＲ　ｗｅｒｅ　ｉｎｃｕｂａｔｅｄ　ａｔ　４℃，ｆｏｒ　１．５ｈ，
ｔｈｅ　ＡＥＡＲ　ｗａｓ　ｔｈｅｎ　ｒｅｍｏｖｅｄ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｃｅｌｓ　ｗｅｒｅ　ｗａｓｈｅｄ　ｗｉｔｈ　１００μＬ　ＤＭＥＭ　ｍｅｄｉｕｍ　ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ　２％ ＦＢＳ；②ＨＳＶ－１ｐａｒｔｉｃｌｅｓ
（７．５×１０３　ｐｅｒ　ｗｅｌ）ｗｅｒｅ　ａｄｄｅｄ　ｆｏｌｏｗｅｄ　ｂｙ　ｉｎｃｕｂａｔｉｏｎ　ａｔ　４℃ｆｏｒ　１．５ｈ，ｗａｓｈｉｎｇ　ｗｉｔｈ　１００μＬ　ＤＭＥＭ　ｍｅｄｉｕｍ　ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ　２％ＦＢＳ，
ａｄｄｉｔｉｏｎ　ｏｆ　１００μＬ　ＤＭＥＭ　ｍｅｄｉｕｍ　ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ　２％ＦＢＳ，ａｎｄ　ｉｎｃｕｂａｔｉｏｎ　ａｔ　３７℃ｆｏｒ　５ｈ；③β－Ｇａｌａｃｔｏｓｉｄａｓｅ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｗａｓ　ｍｅａｓｕｒｅｄ
Ｃ：① Ｒｅａｃｔｉｏｎ　ｍｉｘｔｕｒｅｓ　ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ　７．５×１０３（ｐｅｒ　ｗｅｌ）ＨＳＶ－１＋１００，１５０，２００，２５０ｏｒ　３００μｇ／ｍＬ　ＡＥＡＲ　ｗｅｒｅ　ｉｎｃｕｂａｔｅｄ　ａｔ　４℃，ｆｏｒ
１．５ｈ；②１．５×１０４　Ｖｅｒｏ　ｃｅｌｓ　ｗｅｒｅ　ａｄｄｅｄ　ｆｏｌｏｗｅｄ　ｂｙ　ｉｎｃｕｂａｔｉｏｎ　ａｔ　４℃ｆｏｒ　１．５ｈ，ｗａｓｈｉｎｇ　ｗｉｔｈ　１００μＬ　ＤＭＥＭ　ｍｅｄｉｕｍ　ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ
２％ＦＢＳ，ａｄｄｉｔｉｏｎ　ｏｆ　１００μＬ　ＤＭＥＭ　ｍｅｄｉｕｍ　ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ　２％ ＦＢＳ，ａｎｄ　ｉｎｃｕｂａｔｉｏｎ　ａｔ　３７ ℃ ｆｏｒ　５ｈ；③ β－Ｇａｌａｃｔｏｓｉｄａｓｅ　ａｃｔｉｖｉｔｙ
ｗａｓ　ｍｅａｓｕｒｅｄ
图４　不同加样处理对ＡＥＡＲ抑制ＨＳＶ－１病毒侵染Ｖｅｒｏ细胞的影响
Ｆｉｇ．４　Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｔｒｅａｔｍｅｎｔｓ　ｏｎ　ＡＥＡＲ－ｍｅｄｉａｔｅｄ　ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｖｅｒｏ　ｃｅｌ　ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ　ｂｙ　ＨＳＶ－１
核苷类药物相比，ＡＥＡＲ作用于不同的靶点。其
具体通过何种途径发挥作用及在临床使用中与
ＡＣＶ是否会具有相辅相成的效果有待于进一步
研究。
由于本研究仅对皱盖假芝水提物进行初步
研究，并不清楚具体发挥作用的组分及结构，因
此需要对水提物进行分离纯化，以得到相关活性
单体。此外，活性成分在抑制病毒过程中以何种
方式作用于何种靶点仍需要进一步研究。
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［１３］ＰＡＮ　ＨＨ，ＹＵ　ＸＴ，ＬＩ　Ｔ，ｅｔ　ａｌ．Ａｑｕｅｏｕｓ　ｅｘｔｒａｃｔ
ｆｒｏｍ　ａ　Ｃｈａｇａ　ｍｅｄｉｃｉｎａｌ　ｍｕｓｈｒｏｏｍ，Ｉｎｏｎｏｔｕｓ
ｏｂｌｉｑｕｕｓ（ｈｉｇｈｅｒ　Ｂａｓｉｄｉｏｍｙｃｅｔｅｓ），ｐｒｅｖｅｎｔｓ　ｈｅｒｐｅｓ
ｓｉｍｐｌｅｘ　ｖｉｒｕｓ　ｅｎｔｒｙ　ｔｈｒｏｕｇｈ　ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ　ｏｆ　ｖｉｒａｌ－
ｉｎｄｕｃｅｄ　ｍｅｍｂｒａｎｅ　ｆｕｓｉｏｎ ［Ｊ］． Ｉｎｔ　Ｊ　Ｍｅｄ
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ｃｏｍｐｌｅｘ　ｏｆ　ｈｅｒｐｅｓ　ｓｉｍｐｌｅｘ　ｖｉｒｕｓ　ｓｔｉｍｕｌａｔｅｓ
ｎｅｕｔｒａｌｉｚｉｎｇ　ａｎｔｉｂｏｄｙ　ａｎｄ　ｐｒｏｔｅｃｔｓ　ｍｉｃｅ　ａｇａｉｎｓｔ
ＨＳＶ　ｔｙｐｅ　１ｃｈａｌｅｎｇｅ［Ｊ］．Ｊ　Ｖｉｒｏｌ，１９９８，７２：
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Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙ　ｔｏ　ａｎｔｉｖｉｒａｌ
ａｇｅｎｔｓ　ｏｆ　ｈｅｒｐｅｓ　ｓｉｍｐｌｅｘ　ｖｉｒｕｓ　ｔｙｐｅ　１ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ　ａ
ｕｎｉｑｕｅ　ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ　ｋｉｎａｓｅ　ｇｅｎｅ　ｗｉｔｈ　ａｎ　ａｍｂｅｒ　ｃｏｄｏｎ
ｂｅｔｗｅｅｎ　ｔｈｅ　ｆｉｒｓｔ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｓｅｃｏｎｄ　ｉｎｉｔｉａｔｉｏｎ　ｃｏｄｏｎｓ
［Ｊ］．Ａｒｃｈ　Ｖｉｒｏｌ，２００８，１５３（２）：３０３－３１４．
［１６］ＷＡＮＧ　Ｋ，ＭＡＨＡＬＩＮＧＡＭ　Ｇ，ＨＯＯＶＥＲ　ＳＥ，ｅｔ
ａｌ．Ｄｉｖｅｒｓｅ　ｈｅｒｐｅｓ　ｓｉｍｐｌｅｘ　ｖｉｒｕｓ　ｔｙｐｅ　１ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ
ｋｉｎａｓｅ　ｍｕｔａｎｔｓ　ｉｎ　ｉｎｄｉｖｉｄｕａｌ　ｈｕｍａｎ　ｎｅｕｒｏｎｓ　ａｎｄ
ｇａｎｇｌｉａ［Ｊ］．Ｊ　Ｖｉｒｏｌ，２００７，８１（１３）：６８１７－６８２６．
Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　Ａｑｕｅｏｕｓ　Ｅｘｔｒａｃｔｓ　ｏｆ　Ａｍａｕｒｏｄｅｒｍａ　ｒｕｄｉｓ
Ｆｒｕｉｔ　Ｂｏｄｉｅｓ　ｏｎ　Ｈｅｒｐｅｓ　Ｓｉｍｐｌｅｘ　Ｖｉｒｕｓ　Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ
ｏｆ　Ｖｅｒｏ　Ｃｅｌｓ　ｉｎ　Ｖｉｔｒｏ
ＹＵ　Ｘｉｏｎｇｔａｏ１，ＨＵＡＮＧ　Ｊｉｇｕｏ１，ＨＡＮ　Ｙｕａｎｙｕａｎ１，ＸＩＥ　Ｙｉｚｈｅｎ１，２，ＰＡＮ　Ｈｏｎｇｈｕｉ　１＊
（１　Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ　Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ　ｏｆ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，Ｓｔａｔｅ　Ｋｅｙ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　ｏｆ　Ａｐｐｌｉｅｄ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ　Ｓｏｕｔｈｅｒｎ　Ｃｈｉｎａ，
Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ　Ｐｒｏｖｉｎｃｉａｌ　Ｋｅｙ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　ｏｆ　Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ　Ｃｕｌｔｕｒｅ　Ｃｏｌｅｃｔｉｏｎ　ａｎｄ　Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ，Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ
Ｏｐｅｎ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　ｏｆ　Ａｐｐｌｉｅｄ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ，Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ　５１００７０，Ｃｈｉｎａ；２　Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ
Ｙｕｅｗｅｉ　Ｅｄｉｂｌｅ　Ｆｕｎｇｉ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　Ｃｏ．Ｌｔｄ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ，Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ　５１０６６３，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ａｑｕｅｏｕｓ　ｅｘｔｒａｃｔｓ　ｏｆ　Ａｍａｕｒｏｄｅｒｍａ　ｒｕｄｉｓ　ｆｒｕｉｔ　ｂｏｄｉｅｓ（ＡＥＡＲ）ｉｎｈｉｂｉｔｅｄ　ｔｙｐｅ　１ｈｅｒｐｅｓ　ｓｉｍｐｌｅｘ　ｖｉｒｕｓ
（ＨＳＶ－１）ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｖｅｒｏ　ｃｅｌｓ　ｉｎ　ｖｉｔｒｏ　ｂｙ　５０％ａｔ　１０７μｇ／ｍＬ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ．Ｔｈｅ　ＣＣ５０ｖａｌｕｅ　ｏｆ　ＡＥＡＲ　ｆｏｒ
Ｖｅｒｏ　ｃｅｌｓ　ｗａｓ　１４７７μｇ／ｍＬ．Ｔｈｅ　ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ　ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ＡＥＡＲ　ｏｃｃｕｒｒｅｄ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｅａｒｌｙ　ｓｔａｇｅｓ　ｏｆ　ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ．
Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ａｍａｕｒｏｄｅｒｍａ　ｒｕｄｉｓ；ｈｅｒｐｅｓ　ｓｉｍｐｌｅｘ　ｖｉｒｕｓ；ａｎｔｉｖｉｒａｌ　ｅｆｆｅｃｔ
［本文编辑］　于荣利
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