全 文 ：山东中医杂志 2014 年 6 月第 33 卷第 6 期
蛇莓［Duchesnea indica indica（Andrews） Focke］
系蔷薇科蛇莓属多年生草本植物，全草入药。 味甘、
苦，性寒，有毒，有清热凉血、消肿解毒之功。 用以治
疗热病、惊痫、咳嗽、吐血、咽喉肿痛、痢疾、痈肿疔
疮、蛇虫咬伤、烧烫伤等症。 药理研究表明蛇莓具有
抗肿瘤、抑菌、抗炎、抗诱变、抗氧化、抑制中枢神经
系统、增强免疫、降压、抗凝、兴奋子宫平滑肌等多种
药理活性。 在民间临床实践中，蛇莓对带状疱疹、肝
炎等病毒性疾病有明显疗效。 目前尚未有蛇莓抗单
纯疱疹病毒（HSV）的报道。 本实验采用不同极性的
溶剂分别提取蛇莓，采用 HSV-Hep-2 体外病毒感染
模型研究了蛇莓对单纯疱疹病毒的体外抑制作用，
并进一步分离纯化，为寻找筛选抗 HSV 的活性部位
及单体做准备。
1 实验材料与仪器
1.1 药品 蛇莓采自山东中医药大学长清校区校
园内，经本校高德民副教授鉴定为 Duchesnea indica
indica （Andrews） Focke。
1.2 细胞株与病毒株 Hep-2 细胞（山东省医学科
学院基础医学研究所微生物室提供）；单纯疱疹病
毒（引自中国疾病预防控制中心病毒病研究所流感
病毒研究室）。
1.3 主要试剂 MEM 培养基 （GIBCO 公司），1640
细胞培养液 （美国 GIBCO 产品 ，含 10%牛血清 ），
1640 细胞维持液 （美国 GIBCO 产品 ，含 2%牛血
清），pH 值 7.4 的磷酸盐缓冲液（PBS），中性红染液，
中性红脱色液，其他化学试剂均为分析纯。
1.4 实验仪器 超净工作台，MK3 酶标仪，CKX-31
倒置显微镜，隔水式二氧化碳培养箱，高速台式离心
机，高压灭菌锅，超低温冰柜（-80 ℃，725 型），低温
冰柜（-40 ℃），荧光倒置显微镜，微量移液器。 旋转
蒸发仪，水浴锅。
2 实验方法
2.1 各种提取物的制备 ①水总提取物的制备：蛇
莓药材 50 g，加水煎煮提取两次（10 倍水，8 倍水；每
次 2 h），合并滤液，趁热抽滤，水浴加热浓缩至干，刮
取粉末，装入 EP管中贴标签备用。 ②乙醇总提取物
的制备：蛇莓药材 20 g，95%乙醇回流提取两次（10
倍量，每次 1.5 h），合并滤液后抽滤，减压回收乙醇，
得浸膏 5 mL（4 g/mL），装入 EP管中贴标签备用。 ③
乙酸乙酯总提取物的制备：蛇莓药材 10 g，乙酸乙酯
回流提取两次（10 倍量，每次 1.5 h），合并滤液后抽
滤，减压回收乙酸乙酯，水浴蒸干乙酸乙酯，保留
粉末状物，装入 EP 管中贴标签备用。 ④水提醇沉
法：蛇莓药材 30 g，加水煎煮提取两次（10 倍水，8 倍
水；每次 2 h），合并两次滤液，趁热抽滤，水浴浓缩至
1∶1［1］，缓慢向浓缩液中加入 95%乙醇，并不断搅拌，
直至含醇量达 70%后静置冷藏 24 h［2］，滤过，滤饼用
蒸馏水溶解，水浴浓缩至（1 g/mL），保存至 EP 管中
编号备用，滤液减压回收乙醇至浓度为（1 g/mL）［3］，
保存至 EP管中编号备用。 ⑤醇提水沉法：蛇莓药材
20 g，95%乙醇回流提取两次（10 倍量，每次 1.5 h），
合并滤液后抽滤，减压回收乙醇，得浓缩液 20 mL
（1 g/mL），缓慢向浓缩液中加入等体积的蒸馏水，并
不断搅拌，使含醇量达 50%后静置冷藏 24 h，滤过，
滤饼用乙醇溶解，水浴浓缩至（1 g/mL），保存至 EP
管中编号备用，滤液水浴浓缩至 1∶1，保存至 EP 管
中编号备用。
蛇莓提取物体外抗单纯疱疹病毒作用初报
杜世芳 1，崔燕霞 2，姚梅悦 3，王 旭 2，孔 静 2，庞 荣 2 指导：周长征
（1．山东中医药大学 2011 年级硕士研究生，山东 济南 250355； 2.山东中医药大学药学院 2010 年级本科生，
山东 济南 250355； 2.山东中医药大学药学院，山东 济南 250355）
［摘要］ 目的：研究蛇莓不同极性的粗提物对单纯疱疹病毒 I 型（HSV-1）的体外抗病毒活性。 方法：预实验分别以水、95%乙
醇、乙酸乙酯为溶剂提取药物。 采用 HSV-Hep-2 细胞感染模型，初步检测其体外抗 HSV 活性。 根据预实验结果，分别采用醇提水
沉法和水提醇沉法对不同的总提取物进一步分离纯化，将上清液和沉淀物分别进行体外抗病毒试验，显微镜下观察细胞病变，酶
标仪测定中性红染色 A540值，计算治疗指数。 结果：水、乙醇、乙酸乙酯三种总提取物中乙醇总提取物对单纯疱疹病毒的抑制效果
最好，TI> 81.57；水总提取物对单纯疱疹病毒有一定的抑制效果，TI> 7.11。 分别用水沉法和醇沉法对两种总提取物分离后，水提
醇沉后的上清液 TI> 13.15。 结论：蛇莓乙醇总提取物具有良好的抗 HSV 活性，其水总提取物在醇沉后的上清液具有一定的抗
HSV 活性。
［关键词］ 蛇莓；总提取物；醇提水沉；水提醇沉；单纯疱疹病毒；体外抗病毒
［中图分类号］ R285.5 ［文献标志码］ A ［文章编号］ 0257-358X（2014）06-0484-03
［收稿日期］ 2013-09-25
［基金项目］ 国家级大学生创新创业训练计划项目（编号：20031
0441029）
［作者简介］ 杜世芳（1986-），女，山东济南人，主要研究方向药
物新剂型与新技术 ，邮箱：dushifang1213@163.com。 周长征 ，男 ，教
授，硕士研究生导师，邮箱：568712561@qq.com。
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DOI:10.16295/j.cnki.0257-358x.2014.06.035
山东中医杂志 2014 年 6 月第 33 卷第 6 期
表 2 540 nm 处抑毒实验后各浓度的吸光度
分组
各稀释度的吸光度
1 2-1 2-2 2-3 2-4 2-5 2-6 2-7 2-8 2-9 2-10 2-11
A 0.404 0.290 0.165 0.180 0.146 0.132 0.305 0.252 0.120 0.113 0.108 0.113
B 0.145 0.137 0.225 0.186 0.161 0.205 0.175 0.122 0.109 0.105 0.108 0.137
C 0.495 0.230 0.330 0.479 0.252 0.176 0.133 0.182 0.190 0.197 0.200 0.148
D 0.362 0.220 0.144 0.141 0.106 0.132 0.105 0.123 0.104 0.102 0.110 0.111
病毒 0.111 0.118 0.169 0.102 0.110 0.124 0.106 0.119 0.119 0.232 0.118 0.109
正常 0.628 0.619 0.639 0.643 0.648 0.683 0.687 0.694 0.608 0.565 0.627 0.549
表 1 540 nm 处抑毒实验后各浓度的吸光度
分组
各稀释度的吸光度
1 2-1 2-2 2-3 2-4 2-5 2-6 2-7 2-8 2-9 2-10 2-11
水提物 0.719 0.801 0.703 0.280 0.228 0.133 0.187 0.122 0.173 0.094 0.105 0.109
醇提物 0.799 0.423 0.787 0.813 0.802 0.720 0.457 0.163 0.099 0.163 0.093 0.100
酯提物 0.217 0.234 0.101 0.094 0.138 0.091 0.111 0.091 0.091 0.095 0.092 0.096
病 毒 0.108 0.107 0.106 0.108 0.100 0.099 0.096 0.105 0.104 0.105 0.103 0.111
正 常 0.683 0.628 0.676 0.764 0.693 0.707 0.785 0.723 0.754 0.719 0.643 0.705
注：①水提物、乙醇提取物、乙酸乙酯提取物的起始浓度分别为 1 g/mL、4 g/mL、1 g/mL；②实验细胞存活率＝实验组平均 OD 值/细胞对照组平
均 OD 值×100%［5］。若 > 50%则视为有效。细胞存活率 > 50%之前的浓度为药物半数中毒浓度（TC50），细胞存活率 > 50%最后一个浓度为药物半数
有效浓度（EC50），抑毒指数（TI）＝TC50/EC50［6］
2.2 体外抗病毒试验 ①细胞复苏传代：参照文
献 ［4］。 ②提取物处理：将固体粉末状提取物用 2%
1640，1∶1溶解，使浓度为 1 g/mL，同其他药物一样分
装至小青瓶中，高压灭菌。 ③抑毒实验：参照文献
［7］，同时用电子显微镜观察，二者相互佐证，找出较
为有效的部位，为第二次试验筛选待测药品。 根据
预实验结果，将蛇莓醇提物加水沉淀，得上清液和沉
淀物，编号为 A、B，水提物加乙醇沉淀，得上清液和
沉淀物，编号为 C、D。 将 A、B、C、D 组重复上述操作
过程。
3 结果
3.1 预实验结果 通过电子显微镜观察，HSV-1 对
Hep-2 毒性作用表现在细胞形态肿胀，变圆，细胞间
融合，脱落，破裂。 在实验所测浓度范围内未观测到
药物对 Hep-2细胞的毒性作用。 将不同极性的蛇莓
提取物进行体外抗病毒实验，用酶标仪测定吸光度值，
结果如表 1。 细胞对照组平均 OD值为 0.707，则 50%
正常细胞吸光度值为 0.354。表 1中，吸光度大于 50%
的水总提取物组有 1、2-1、2-2；乙醇总提取物组有 1、
2-1～2-6。水总提取物的半数细胞中毒浓度 TC50> 1 g/mL，
乙醇总提取物 TC50> 4 g/mL。由 Reed-Muench氏法计
算得：乙醇总提取物中的 EC50为 2-6.35 g/mL，TI> 81.57；
水总提取物的 EC50为 2-2.83 g/mL，TI> 7.11，表明蛇莓
乙醇总提取物对 HSV-1 有明显的抑制作用，水总提
取物对其有一定的抑制作用，乙酸乙酯总提取物对
其无抑制作用。
3.2 二次实验结果 根据预实验，分别采用醇沉法
和水沉法对蛇莓的水粗提物、醇粗提物进一步分离
纯化后进行体外抗病毒实验，用酶标仪测定吸光度
值，结果如表 2。 分析数据得，细胞对照组平均 OD
值为 0.633，则 50%正常细胞吸光度值为 0.317。 表 2
中细胞存活率大于 50%的，醇提水沉的上清液有 1；
水提醇沉的上清液有 1、2-2、2-3；水提醇沉的沉淀物
有 1。 由表观察可知 ，药物的半数细胞中毒浓度
TC50> 1 g/mL，由 Reed-Muench 法计算得：水提醇沉
的上清液 EC50 为 2-3.72 g/mL，TI> 13.15；水提醇沉的
沉淀物 EC50为 2-0.56 g/mL，TI> 1.48；醇提水沉的上清
液 EC50为 2-0.77 g/mL，TI> 1.71。 表明蛇莓水提醇沉的
上清液对 HSV-1 具有一定的抑制作用，而其他部分
仅在最大浓度出现抑制作用，1＜TI＜2，判为无显著
作用。 醇提水沉的沉淀物则对其无抑制作用。
4 讨论
本实验采用 HSV-1-Hep-2体外感染模型对蛇莓
进行了抗病毒活性研究。 预实验得出蛇莓的乙醇总
提取物对 HSV 有明显的抑制作用，TI> 81.57，水总
提取物的 TI> 7.11。 二次实验对乙醇总提取物和水
总提取物分别采用水沉法和醇沉法进行了分离纯
化，得出水总提取物中的上清液对 HSV 有一定的抑
制作用，TI> 13.15，分离纯化后治疗指数得到了提
高；乙醇总提取物中的上清液和沉淀物 1＜TI＜2，
治疗效果迅速降低，可能表明蛇莓醇提物的抗病毒
作用不一定是单体，可能是多个有效部位的联合作
用。 TI是检测药物使用安全性的指标，TI 越大，TC50
就越大，药物 EC50就越小，药物使用安全性就越高。
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山东中医杂志 2014 年 6 月第 33 卷第 6 期
黄连解毒汤收载于唐·王焘所著《外台秘要》，由
黄连、黄芩、黄柏、栀子配伍组成，是清热解毒的代表
方，具有泻火解毒功效，主治实热火毒、三焦热盛之
证，广泛应用于临床各科。 近年来有学者将其用于 2
型糖尿病的临床治疗，取得较好疗效 ［1-2］。 本研究通
过高糖高脂喂养，联合低剂量链脲佐菌素诱导 2 型
糖尿病大鼠模型 ［3］，观察黄连解毒汤对糖尿病大鼠
血糖、血脂代谢的影响，为其治疗糖尿病及其并发症
提供一定的实验依据。
1 实验材料
1.1 仪器 血糖检测仪（美国强生）；318MC 型酶标
仪 （上海三科仪器 ）；高速台式冷冻离心机 （美国
Thermo）；UV-2102 型紫外分光光度计 （上海尤尼
柯）。
1.2 药物及试剂 黄连解毒汤由黄连、黄芩、黄柏、
栀子按 3∶2∶2∶2 的比例组成，由医院制剂科自制；盐
酸二甲双胍片，深圳市中联制药有限公司；链脲佐菌
素 （STZ），Sigma 公司 ；TC、TG、HDL-C、LDL-C，北京
中生北控生物科技股份有限公司；Ins 放免试剂盒，
北京北方生物技术研究所；胆固醇、猪胆酸盐、蔗糖，
南京生化制药厂。 高糖高脂饲料（10%猪油、2.5%胆
固醇、1%猪胆酸盐、20%蔗糖、65.5%普通饲料）。
1.3 动物 雄性健康 SD 大鼠 90 只，体质量 180～
220 g，SPF 级，购自山东大学实验动物中心，合格证
号 SCXK（鲁）20090001。
黄连解毒汤调节糖脂代谢的药效学研究
王修彬，张勇刚，迟雪洁，窦锦明
（潍坊市中医院，山东 潍坊 261041）
［摘要］ 目的：观察黄连解毒汤（HLJDT）对 2 型糖尿病大鼠血糖、血脂代谢的影响。 方法：采用高糖高脂饲料喂养联合链脲佐
菌素腹腔注射造成 2 型糖尿病大鼠模型，造模成功后分 HLJDT 高、中、低剂量组及二甲双胍组灌胃治疗。 治疗 56 d 后，观察
HLJDT 各剂量组对模型大鼠血糖指标空腹血糖（FBG）、胰岛素（Ins），血脂指标总胆固醇（TC）、三酰甘油（TG）、低密度脂蛋白胆固
醇（LDL-C）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）代谢的影响。 结果：黄连解毒汤不仅可以降低糖尿病模型大鼠血清中 FBG、TC、TG、
LDL-C 含量，而且可以提高血清 Ins、HDL-C 含量。 结论：黄连解毒汤能够有效调节糖尿病大鼠的血糖、血脂水平。
［关键词］ 黄连解毒汤；2 型糖尿病；血糖；血脂
［中图分类号］ R285.5 ［文献标志码］ A ［文章编号］ 0257-358X（2014）06-0486-02
［收稿日期］ 2013-09-08
［基金项目］ 潍坊市卫生局课题（2013 年一类，编号：001）
临床药理学规定临床用药 TI 应该 > 4［7］。 蛇莓乙醇
总提取物的抑毒效果最好，更具有研究价值。 蛇莓水
提醇沉的上清液中主要是醇溶性成分，所以对 HSV
有一定抑制作用的还是醇溶性成分。 文献报道从蛇
莓中分离得到的化合物主要有三萜及其苷类、香豆
素类、黄酮类、甾醇类、有机酸类、酚性物质、内酯类、
鞣质等 ［8-11］。 研究将采用不同的分离纯化方法继续
对蛇莓的醇溶性成分进行系统的抗病毒研究，以期
得到具有更高治疗指数的有效部位群甚至单体化合
物。 本研究初步报道了蛇莓对单纯疱疹病毒的体外
抑制作用，在三种不同极性的蛇莓总提取物中，乙醇
总提取物显示出明显的抑毒效果，TI 值 > 81.57，抑
毒效果最好。 分离纯化后，蛇莓水提醇沉的上清液
具有一定的抑毒效果，TI 值 > 13.15，上清液中主要
成分也是醇溶性成分。 蛇莓的醇溶性成分可以作为
继续寻找筛选具有抗 HSV 活性的有效部位的实验
材料。
［参考文献］
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