全 文 ：第 8卷 第 3期
198 4 年 9 月
水 产 学 报 V o l. 8 ,
J O U R N人L o r r I S H E R I E S o r C习江N A 跳 p
N o
.
3
19 84
条斑紫菜营养细胞的分离培养试验 ’
赵 焕 登 张 学 成
(山东海洋学院生物系 )
提 要
本文介绍了用条斑紫菜的单个营养细胞培养成叶状体的试验 。 试验表明 ,单个营养细胞 ,
在适宜的培养液中有可能经过 20 天培养成小紫菜叶状体 ; 其成活率为 3 男左右 。 此外 , 还介
绍了冷冻度夏后的叶状体单个营养细胞的培养试验和不同含水量的叶状体营养细胞的培养试
验 .
紫菜是一种营养价值很高的海藻 。 目前世界上进行人工养殖的有我国 、 日本和朝鲜
等国 。 条斑紫莱 ( P二夕入夕犷。 ge : oe 、 菇 U e da )是主要养殖品种之一 。
紫菜生活史中有叶状体阶段和丝状体阶段 。 目前是用贝壳来培养丝状体 , 由丝状体
放散壳抱子 , 采苗并养成食用紫菜 。 培养贝壳丝状体需要很多人力物力 , 培养时间也长
(约五个月 ) ,而且易受病害。 为了解决这一间题 , 日本的岩崎英雄进行了游离丝状体的研
究闭 , 我国于 1 9 7 5 年也开展了这一工作 , 在坛紫菜方面 , 培养游离丝状体 已取得成功 , 并
投入了生产 〔 1 1。 在条斑紫菜方面则取得了一定的进展`气 但是 , 条斑紫菜现在仍需要将
游离丝状体采到贝壳上 , 以产生壳抱子 。
能不能不经丝状体而培养出条斑紫菜呢 ? 即能不能将叶状体的营养细胞分离培养 ,
成为新的叶状体呢 ? 如果可能用于生产 , 将会大大简化紫菜养殖的过程 , 降低生产成本 ,
而且有利于选育和保持优良品种 , 提高产量 。 为此 ,进行了一系列的巍 : 春季采集叶状体 , 进行适当处理后 , 置于冰箱内冷冻度夏 ,到十月份将叶状体取出 , 将其营养细胞分离 ,
然后采到筛绢上 , 经过一段时闻室内培养 , 置海上养殖 。
材 料 与 方 法
实验材料采自青岛海滨 ,为 自然生长的条斑紫菜 。 采集时间是二月至五月 。
选择健康的叶状体 ,在室内晾干 , 至藻体表面析出一层白末 ,且藻体富有弹性时 , 用塑
料袋包扎密封 ,置于 一 2 0℃冰箱内度夏 。
到十月份紫菜采苗时 , 将材料从冰箱内取出 ,先在室温下置于海水中恢复 24 小时 , 然
后进行营养细胞的分离。
营养细胞分离的方法如下 : 先将材料进行再一次选择 , 挑选形状细长 ,表面较干净的
本文在方宗熙和郑拍林教授指导下进行的 ,特表衷心谢意 。
(1) 王素平 、 姜红如 , 1盯 9。 条斑紫菜游离丝状体生态的研究 。 中国海洋湖沼学会第三次代表大会曦学术年会
论文汇编 , 40 1一 4 02 。
水 产 学 报 8卷
藻体 ,用毛笔充分洗刷 , 以除去表面的杂藻和污物 , 然后用剪刀剪成 5一 10 平方毫米的碎
块 , 放入研钵内 ,磨成浆液 , 用 S P 、 。 号筛绢过滤 , 滤去未研细的藻体块 , 滤液 中即得到分
离的营养细胞 。 如进行实验观察 ,可用吸管将营养细胞液滴在载玻片上 , 数小时后 , 待营
养细胞沉落在玻片上 ,再缓缓加入培养液 , 进行培养 。 如要采苗 , 可将筛绢浸入含有营养
细胞的培养液中 ,让营养细胞附着在筛绢上 , 进行采苗 。
为了搞清紫菜营养细胞的适当的培养条件 ,将它们在不同的光照时间 、培养液及温度
下进行培养 。
1
. 在不 同的光照时间和培养液中培养。
分成 4 组迸行比较试验 :
( l) 室温短 日照培养 ( A 一 1 ) : 每 日光照 10 小时 , 光强 1 5 0 L二 。 培养液为加有 氮
( 4
.
o P P m )
、磷 ( 0 , 4 p pm )的消毒海水 。
( 2) 室温连续光照培养 ( A 一2 ) : 每日光照 24 小时 , 其他条件与 A 一 1 相同 。
( 3) 室温短日照混合营养液培养 ( A一 3 ) : 混合营养液除加氮 、 磷外 , 在 工。。。 毫升培养
液中添加 E D T A一Na 4 毫克 , F es .O · 7且。 0 5 毫克 ,维生素 B , 0 . 25 毫克 , 维生素 lB : 。 . 6
微克 , 其他条件与 A - 1 组相同 。
(4 ) 室温连续光照 , 混合营养液培养 (-A 4 ) : 每日光照 24 小时 , 其他条件与 A 一 3 组
相同 。
以上各组的培养温度均为 1 5一 2 2 ” C 。
2
. 在不同温度条件下培养 。
共分三组 , 培养温度分别为 1 5一 2 2 , C , 1 2一 1 3O C和 4一 6” 0 。 培养液为添加氮和磷的
消毒海水 , 每 日光照 10 小时 ,光强 1 5 0 0 L u勤
每周在显微镜下观察两次 。 观察营养细胞发育成小紫菜的情况 , 统计小紫菜的细胞
数目。 各组都观察到营养细胞发育成 10 个细胞 以上的小紫菜叶状体为止。
为了进一步观察分离的营养细胞的成活率和发育情况 ,分离出单个营养细胞 1 29 个 ,
每块玻片上只放置一个细胞 , 在同一条件下进行培养 。 温度 8一 1 8a C , 光照时间每日 10
小时 , 光强 15 0 o L u 二 。 培养液为添加氮和磷的消毒海水 。 观察营养细胞的发育情况 ,死亡
数 目和发育成 10 个细胞以上的小紫菜的数目。
实 验 结 果
1
. 用机械磨碎 、 过滤的方法 , 可以从条斑紫菜叶状体分离出完整的单个营养细胞 ( 图
3一 1 ) , )i(l 且在不同实验条件下都能发育成小紫菜叶状体。 但由于培养条件不 同 , 发育的速
度也不相同 (图 1 , 图 2) 。
( 1) 连续光照有加速营养细胞发育成小紫菜叶状体的作用 。 A一 1 组每 日光 照 10 小
时 , 41 天后营养细胞全部发育成 10 个细胞以上的小紫菜叶状体 , 而 A 一 2 组只要 20 天就
全部发育成 10 个细胞以上的小紫菜叶状体 。
3期 赵焕登 、 张学成 : 条斑紫菜营养细胞的分离培养试验
盆 4 8 61 01 21怪 一1 6r日e sZO 2 2洲
(天 )
图 1 小紫菜的发育速度 (另 )
( A
一
1
, 一 , -A 在为不同光照和培养液组 )
竺 感 6 8 1 0 12 1妥 I G I日 1 0 2您 习1
(天 )
图 2 各组不同培养天数的平均细胞数
( -A i
, , ` · , 人碑 ,同图 1注 )
( 2 ) 本实验采用的混合营养液有加快营养细胞发育成小紫菜叶状体的作用 。 培养液
中只加氮 、 磷的 A 一 1 组全部营养细胞发育成 10 个细胞以上的小紫菜叶状体需 41 天 , 而
棍合培养液的 A一 3 组只需 2 3 天。
( 3 ) 在不同温度下营养细胞发育成小紫菜叶状体的平均细胞数如表 1所示 :
表 1 在不同温度下营养细胞发育成小紫菜叶状体的平均细胞数
漂渔 ; 0 7 加 14 又7 即
15一 2 2 1 甲 0 1 . 1 1 . 3 3 . 3 6 . 3 6 . 3
1 2一 丁3 1 ` O 2 . 8 7 , 7 7 。 7 8 、 4 8 甲 7
4一 10 1 , 0 1 . 3 4 。 8 5 . 7 3 . 4 7 ` 0.
从表 l 可以看出 ,在温度为 4一 2 o2 C的培养条件下 , 营养细胞都可以发育成小紫菜叶
状体 , 以在 12 一 13 口 C下发育较快 。 培养 2 0 天后 , 平均细胞数为 8 . 7 个 。
2
. 分离的营养细胞的发育过程和成活率。
用机械磨碎方法得到的单个营养细胞 ,色素正常 , 细胞呈圆形或椭回形 (图 3一 1 ) 。 个
别细胞因受机械损伤严重 ,在 24 小时内颜色变绿 , 然后整个细胞解体 。
完整的单个营养细胞 ,培养 2 天后 , 细胞壁明显增厚 (图 3 一 2 ) ,培养 6 天后 , 细胞进行
分裂 , 发育成两个细胞 ( 图 3一3 ) ,其中一个细胞长出假根丝 , 另一个细胞进行细胞分裂 , 形
成多细胞的小紫菜叶状体 (图 3一 4 ) 。
单个营养细胞的总数为 129 个 , 经过 34 天培养后 , 有 43 个营养细胞发育成 10 个细
胞以上的小紫菜 ,而其余 86 个先后死亡 , 其成活率为 3 拓 。

3 期 赵焕登 、 张学成 : 条斑紫菜营养细胞的分离培养试验
讨 论
目前 , 已有许多种高等植物的营养细胞在适当的条件下能再生 植株川 。 在 藻类方
面 , 海带 ( L “ 。 感解“ “ 扣夕。 。 `ca )川 、 凋毛藻 (俞访泛动 : 亿 夕a o if , )〔月 、 尾丝藻 〔价 , , “
g落夕 a。 ) t . 〕 , 石药 ( U乙。 a 乙落林 : L ) 、 袋礁膜 ( M0 0 0 s者二 o , 必 a呵艺阅公 a K je l l二 )工, 〕 , 水棉 (召夕计 -o
口夕犷 a) ,双星藻 (艺夕夕~ a)
〔 , “ 等从分离的营养细胞诱导 出新的藻体 。 为验证条斑紫菜的营
养细胞有无发育能力 , 我们 从 1 9 7 9 年 3 月以来反复实验 ,结果表明 , 条斑紫菜营养细胞发
育的能力是存在的 。
目前在条斑紫莱养殖生产中 , 主要靠培养贝壳丝状体来解决苗源川 。 为了简化养殖
过程 , 降低成本 , 提高产量 , 进行了一系列实验 。 实验证明了紫菜叶状体可以冷冻度夏 , 然
后用机械磨碎法把紫菜营养细胞分离出来 , 采苗并在海上养殖 。 采苗密度达每平方厘米
20 一 25 棵小紫菜 。 但能否用紫菜营养细胞进行大规模的生产 , 尚需进一步实验 。
参 考 文 献
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【4 了 岩畸英雄 , 1盯2 。 夕 夕一系状体 、 培普 巴采苗O 手引斗。 全海苔连 , 束京版 。
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〔 8 〕 M o r o s l a v G a b r j e l , 1 5 7 9 , F O T l a 七i o n , g r o w 七h a ” d r e g e n e r a 七: o n o ￡ p T o t o p孕$七$ o f g r c “ “ a l g a ,
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加 2 水 产 学 报 8 卷
e x P e r im e力 t o w e r o e a r , i e d o u 七 i二 v ol 朽公 9 t h e f r e : 血 9 of th o s妞 w e e d an d ke e p i n g i t
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