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复方树舌液对肠道微生态失调小鼠的调节作用



全 文 :【收稿日期】2010-03-22
【作者简介】李丽秋(1951-),女 ,从事中草药微生态学研究;马淑霞 ,
通讯作者 , Email:weishengwu2006@126.com
文章编号:1005-376X(2010)06-0518-02 【论  著】
复方树舌液对肠道微生态失调小鼠的调节作用
李丽秋 1, 2 ,黄列 3 ,王春敏 1 ,代月 1 ,任继秋 1 ,吴庆田1 ,杨春佳 1 ,崔刚 1 ,马淑霞 1
(1.佳木斯大学基础医学院 ,黑龙江 佳木斯 154007;2.佳木斯大学 儿童神经康复实验室 ,黑龙江 佳木斯 
154002;3.银川市第一人民医院 ,宁夏 银川 754000)
  【摘要】 目的 应用复方树舌液作为微生态调节剂对肠道微生态失调小鼠进行调节。方法 用盐酸林可霉
素造成菌群失调模型 ,用复方树舌液进行治疗 , 在治疗期间分别检测各组小鼠的肠道优势菌群 、乙酸 、内毒素含量
及肝脏肠杆菌易位。结果 小鼠肠道菌群失调得到恢复 、小鼠肠道内乙酸含量增加 、内毒素含量下降 、易位至肝脏
的肠杆菌数量减少 ,与自然恢复组相比 , 差异有统计学意义(P<0.05), 树舌组优于丽珠肠乐组。结论 复方树舌
液作为益生元对小鼠肠道菌群失调具有调节作用。
【关键词】 微生态失调;内毒素;复方树舌液
【中图分类号】R378    【文献标识码】A
TheefectofChinesemedicineFuFangShuShe(CompoundGanodermalipsiense)on
intestinalmicrofloraimbalance
LILi-qiu1, 2 , HUANGLie3 , WANGChun-min1 , DAIYue1 , RENJi-qiu1 , WUQin-tian1 , YANGChun-jia1 ,
CUIGang1 , MAShu-xia1
(1.ColegeofBasicMedicalScience, JiamusiUniversity, Jiamusi154000, China;2.Children′sNeurologicalRehabilitation,
JiamusiUniversity, Jiamusi154000, China;3.TheFirstPeople′sHospitalofYinchuan, Yinchuan754000, China)
【Abstract】 Objective ToinvestigatetheefectofChinesemedicineFuFangShuShe(CompoundGanodermalip-
siense)onintestinalmicrofloraimbalance.Method Themousemodelsofintestinalmicrofloraimbalancewereestablished
byintragastricadministrationoflincomycinhydrochlorideinjection.ThenthemiceweregiventhedecoctionofChinese
medicineFuFangShuShe(CompoundGanodermalipsiense)andthechangesofpredominantintestinalflora, aceticacid, en-
dotoxinandliverenterobactertranslocationwereobserved.Result Thecontentofaceticacidintheintestinesincreased
(P<0.05), whileendotoxinintheintestinesandtranslocationofliverenterobacterdecreasedcomparedwiththecontrol
group(P<0.05).ThecurativeeffectwassignificantlyimprovedinFuFangShuShegroupcomparedwithLi-Zhu-Chang-Le
group.Conclusion ChinesemedicineFuFangShuSheasaprebioticscanadjusttheintestinalmicrofloraimbalance.
【Keywords】 Micro-ecologicalmbalance;Endotoxin;CompoundShuShe
  随着抗生素的广泛使用 ,特别是广谱抗生素的广
泛使用是引起菌群失调的主诱发因素。抗生素引起
菌群失调的主要症状是腹泻 ,称抗生素相关性腹泻
(AAD)。引起抗生素相关性腹泻的主要原因是破坏
了胃肠道的正常菌群平衡引起菌群紊乱 ,有益菌的定
植抗性降低 ,而致病菌大量繁殖 。此外 ,同位素 、激
素 、放疗 、化疗 、手术 、感染 、肿瘤 、外伤及环境恶化等
均可引起菌群失调 [ 1] 。复方树舌片是树舌 、黄芪和
白术等天然名贵中药经科学提炼加工而成 [ 2] 。在大
量的中药实验研究中 ,我们发现部分补益类中药具有
扶植正常菌群生长作用 ,可调整菌群失调 、提高定植
抗力 ,起到益生元效果 ,是理想的微生态调节剂 [ 3] 。
本实验应用复方树舌液作为微生态调节剂对肠道微
生态失调小鼠进行调节 ,为防治菌群失调提供一条新
的思路。
1 材料与方法
1.1 实验动物 50只昆明种小鼠 ,雌雄各半 , 4周
龄 ,体重 (18 ±2)g, 由佳木斯大学动物实验中心
提供。
1.2 药物及其制备 树舌 、黄芪和白术等中药购于
佳木斯医药公司 ,符合药典标准。洗净 、温水浸泡 30
min,水煎 3次 , 浓缩至 1 ml含生药量 1 g水溶液 ,
4 ℃保存备用;丽珠肠乐由珠海丽珠集团丽珠制药厂
出品;乙酸标准品购于美国 Sigma公司;盐酸林可霉
素购于河南天方药业有限公司。
1.3 动物分组及给药 50只昆明种小鼠 ,随机取出
10只作为正常对照组 ,其余 40只每天灌胃 0.3 g/ml
518 ChineseJournalofMicroecology, Jun.2010, Vol.22No.6
DOI :10.13381/j.cnki.cjm.2010.06.013
的盐酸林可霉素 ,每日 2次 ,每次 0.3ml,连续 3d,造
成小鼠肠道微生态失调模型 ,正常对照组灌胃等量生
理盐水 。第 4天处死正常组小鼠和模型组小鼠各
10只 ,进行肠道优势菌群检测 ,以判断模型是否构建
成功。模型成功后 ,将 30小鼠随机分为 3组 ,每组
10只 ,分笼饲养 ,即自然恢复组 、丽珠肠乐组(阳性对
照组)和树舌组 。树舌组小鼠灌胃 0.5 g/ml的复方
树舌液 ,丽珠肠乐组灌胃 0.5亿活菌 /ml的丽珠肠乐
溶液 ,自然恢复组灌胃等量生理盐水 ,每日 2次 ,每次
0.3ml,连续 7d[ 4] 。
1.4 小鼠肠道菌群测定 参照文献 [ 5] ,进行菌落
计数。计算公式:CFU /每克粪便 =每一稀释度平均菌落
数 ×稀释倍数 /滴种体积 (ml)。
1.5 乙酸含量测定 取 1 ml标准酸溶液 ,加 20 μl
浓度为 50%硫酸 ,混匀后用微量加样器吸取 1 μl,注
入装有 FID检测器的气相色谱中 ,利于色谱工作站
制作出标准曲线。无菌采取小鼠结肠内容物 0.1 g,
加 20 μl硫酸酸化 5 min,离心机 8 000 r/min离心
1 min,用微量注射器取 1 μl上清液 ,注入色谱仪 ,进
行检测 ,观察波峰 ,记录结果 。
1.6 内毒素含量测定 参照文献 [ 6] ,求得吸光度 A
值 ,查对内毒素标准曲线求得内毒素含量。
1.7 细菌易位检测 参照文献 [ 7] ,计算公式同小
鼠肠道菌群测定。
1.8 统计学处理 所有实验数据用 “平均数 ±标准
差 ”表示 ,采用 SPSS17.0软件进行统计学分析 。
2 结果
2.1 小鼠经盐酸林可霉素连续灌胃 3d,双歧杆菌和
乳酸杆菌数量降低 ,肠球菌和肠杆菌数量升高;乙酸
含量降低;内毒素含量升高;肝脏发生了大量的肠杆
菌易位 ,与正常组相比 P<0.05,表明小鼠肠道已发
生微生态失调 。
表 1 正常组与模型组各项检测指标(lgN/g, x±s, n=10)
组别 双歧杆菌 乳酸杆菌 肠球菌 肠杆菌
模型组 8.52±0.41* 7.35±0.25* 10.11±0.15* 10.01±0.16*
正常组 10.83±0.26 10.61±0.12 8.05±0.40 8.25±0.17
         注:与正常组相比 , *P<0.05。
2.2 经复方树舌液和丽珠肠乐治疗后 ,小鼠肠道菌
群失调症状得到缓解 ,各治疗组双歧杆菌 、乳酸杆菌
数量明显上升 ,肠球菌 、肠杆菌数量下降 ,阳性菌与阴
性菌比值恢复正常;均明显好于自然恢复组 (P<
0.05),树舌组与丽珠肠乐组相比 ,差异有统计学意
义(P<0.05)。
表 2 用药治疗后肠道菌群检测结果(lgN/g, x±s, n=10)
组别 双歧杆菌 乳酸杆菌 肠球菌 肠杆菌
树舌组   10.31±0.50* 10.12±0.06*# 8.57±0.09*# 8.61±015*#
丽珠肠乐组 10.56±0.07* 9.58±0.05* 9.15±0.06* 9.23±0.20*
自然恢复组 9.15±0.14  8.31±0.23  9.98±0.08 9.89±0.04 
        注:与自然恢复组相比 , *P<0.05;与丽珠肠乐组相比 , #P<0.05。
2.3 经复方树舌液和丽珠肠乐治疗后 ,各治疗组小
鼠肠道内乙酸含量增加 ,内毒素含量下降 ,易位至肝
脏的肠杆菌数量减少 ,与自然恢复组相比 ,差异有统
计学意义(P<0.05),树舌组优于丽珠肠乐组。
表 3 用药治疗后肠道乙酸 、内毒素和肝脏肠杆菌检测结果(lgN/g, x±s, n=10)
组别 乙酸 内毒素 肠杆菌
树舌组   0.36±0.06* 30.58±1.20*# 1.15±011*#
丽珠肠乐组 0.34±0.01* 40.47±0.36* 2.45±0.25*
自然恢复组 0.11±0.02  75.47±2.10  4.63±0.07 
         注:与自然恢复组相比 , *P<0.05;与丽珠肠乐组相比 , #P<0.05
3 讨论
肠道微生态失调主要包括肠道细菌数量和 /或质
量失调。造成微生态失调的因素相当复杂 ,但以抗生
素影响最突出且有深远意义 。长期使用(下转第 522页)
519中国微生态学杂志 2010年 6月第 22卷第 6期
3 讨论
蒲公英属草本植物 ,在全世界都有分布 ,并且有
悠久的药用历史 ,在民族医药中用于治疗关节炎 、风
湿以及湿疹和其他皮肤性疾病 。近年来 ,国内外对其
药理作用进行了大量研究。实验已经证实蒲公英具
有抗炎 、抗氧化 、抗癌 、降血糖和抗血栓形成等功效 。
蒲公英的主要活性成分是黄酮类 、有机酸和甾醇类物
质 。有机酸经初步鉴定为绿原酸 。蒲公英中黄酮资
源广 、提取方便 、抗氧化作用显著 ,具有良好应用前
景 。绿原酸具有广谱抗菌和利胆作用 ,是蒲公英抗菌
的主要有效成分 [ 3] 。本实验中通过先造小鼠腹水瘤
模型 ,然后口服蒲公英提取液调整肠道菌群治疗腹水
瘤 ,实验结果证实 ,蒲公英具有能够调节荷瘤小鼠肠
道菌群 、改善小鼠生存质量 ,延长小鼠生命等功效 。
蒲公英抑制肿瘤生长的机制可能是通过蒲公英扶植
双歧杆菌等有益菌的生长 、增强小鼠免疫力来实现
的 。在后续实验中 ,我们将进一步对其机制进行深入
研究。
【参考文献】
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(上接第 519页)广谱抗生素 ,一方面 ,杀灭肠道敏感的专
性厌氧菌 ,另一方面使易产生耐药的肠杆菌科细菌
(如大肠埃希菌 、克雷伯杆菌等)、外源性耐药菌及真
菌易黏附到肠上皮细胞上 ,并获得优势生长 ,同时扩
大肠道内毒素池 ,引起肠道细菌及内毒素易位 ,从而
导致菌群失调。口服抗生素引起肠道正常菌群平衡
紊乱是导致机体免疫功能降低的重要原因 [ 8] 。
中草药是我国得天独厚的药物资源 ,具有丰富的
理论和实践基础 ,为发现和寻找新药提供了丰富的资
源 。多年研究表明中药不仅有副作用小等优点 ,部分
中药还具有抗炎 、扶植正常菌群生长 、调节菌群失调 、
提高定植抗力及机体免疫力等作用 [ 9] 。
本文应用复方树舌液对肠道微生态失调小鼠进
行调节 ,肠道菌群失调得到恢复 、小鼠肠道内乙酸含
量增加 ,内毒素含量下降 ,易位至肝脏的肠杆菌数量
减少 ,与自然恢复组相比 ,差异有统计学意义(P<
0.05),树舌组优于丽珠肠乐组 。复方树舌液通过扶
持小鼠体内优势菌群生长 ,提高厌氧菌代谢产物含
量 ,控制细菌及内毒素易位 ,从而达到缓解肠道菌群
失调状态。这不仅为治疗抗生素引起的微生态失调
提供了新型参考药物 ,也为中药作为微生态调节剂防
治感染的机制研究打下良好理论基础 。
【参考文献】
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