全 文 ：[ 作者简介] 钟方丽 ,女 ,博士 ,副教授 ,电话:0432-3083905 , E-m ail:f anglizh on g@sina.com
返魂草中总黄酮提取工艺研究
钟方丽 ,王晓林 ,安媛 ,祝波　(吉林化工学院制药与应用化学系 , 吉林 吉林 132022)
[ 摘要] 　目的:用正交试验法优选返魂草中总黄酮的提取工艺。方法:以 50 g 原药材的总黄酮提取量为评价指标 ,选择提取
用水量(倍)、提取时间(h)、提取次数(次)为考察因素 , 采用正交试验法确定返魂草中总黄酮的最佳提取工艺 , 采用分光光度
法对干浸膏中总黄酮的含量进行测定 ,检测波长 500 nm。 结果:最佳提取工艺条件为提取所用水量为 12 倍 , 提取次数为 3
次 ,回流提取时间为 3 h ,芦丁在9.52～ 57.12 mg·L-1范围内呈良好的线性关系。平均回收率为98.48%, RSD 为0.86%。结
论:总黄酮正交提取工艺的研究结果比较可靠 , 含量测定方法简便 、准确 ,可用于返魂草干浸膏中总黄酮的含量测定。
[ 关键词] 　返魂草;总黄酮 ;正交试验
[中图分类号] R282.71 　　[ 文献标识码] A　　[ 文章编号] 1001-5213(2008)22-1937-03
Study on extraction process of total flavonoids in sehecio cannabif olius less
ZHONG Fang-li ,WANG Xiao-lin ,AN Yuan ,ZHU Bo(Department of Pharmacy and Applied Chemistry , Jilin Insti-
tute of Chemical Technolog y , Jilin Jilin 132022 , China)
ABSTRACT:OBJECTIVE　To study the optimum ex traction pr ocess o f total flav onoids in Sehecio cannabi f olius less.METH-
ODS　Using the ex traction yield o f to tal flav onoids a s the asse ssment index , some impor tant factor s in the experimental o rthog-
onal design , such as vo lume of ex traction w ater , ex tracting time , times , w ere studied in detail.The to ta l flavonoids content ex-
tracted fr om Sehecio cannabi folius less w as determined by spectrophotome tric method a t detection waveleng th of 500 nm.RE-
SULTS　The optimum ex tr ac ting conditions w ere as fo llow s:adding 12 fold of ex traction reagent , three times , heating fo r 3
hours.Standa rd sample of Rutin show ed a good linear r elationship over the range o f 9.52-57.12 mg·L-1 and the ave rage re-
covery was 98.48% and RSD was 0.86%.CONCLUSION　The optimum ex tr adion process o f total flav onoids in Sehecio can-
nabi f olius less wa s reliable and the determination method is easy and accurate which can be used fo r the ex traction o f total fla-
vonoids in this he rb.
KEY WORDS:Senecio cannabi f olius extr action;to tal f lavono ids;o rthogonal design
　　返魂草(Sehecio cannabi f ol ius less)又名麻叶
千里光 , 为菊科(Composi tae)千里光属(Senecio
L.)多年生草本植物 ,主要分布于我国东北 、河北等
地及朝鲜 、日本 、前苏联远东地区 ,生长于山沟 、林缘
及湿草甸上 ,该植物具有散瘀 、止血 、止痛的功效 ,在
民间被广泛用于病毒性感冒 、抗炎的治疗[ 1] 。返魂
草中的有效成分总黄酮对人体有特殊的生理活性和
药理作用[ 2-3] ,其制剂可清热祛痰 ,镇咳平喘 。用于
肺内感染 ,慢性支气管炎 ,喘息性支气管炎 ,急性呼
吸道感染等病的治疗[ 4] 。为提高返魂草提取工艺的
科学性 , 进一步利用和研究返魂草 ,特以其主要药
效成分总黄酮为考察指标 ,采用正交试验优选其提
取工艺的最佳条件[ 5-6] 。
1　材料
752N 型三用紫外分析仪;芦丁对照品(中国药
品生物制品检定所 ,批号 0080-9705);返魂草(安徽
省亳州市华申药业有限公司);所用试剂均为分析
纯。
2　方法与结果
2.1　因素及水平考察　根据单因素探索性实验所
得结论 ,选择提取次数(1 , 2 , 3次)、0.5%的氢氧化
钠水溶液用量(12 , 15 , 18 倍)、提取时间(2.0 , 2.5 ,
3.0 h)3个因素 ,每个因素选择 3个水平 ,设定因素
水平表 ,见表 1 。
表 1　因素水平表
Tab 1　Table of facto rs and levers
水平因素 A 提取次数 B提取溶剂量/倍 C提取时间/ h
1 1 12 2.0
2 2 15 2.5
3 3 18 3.0
2.2　提取方法　取返魂草 50 g ,按正交表设计方案
进行试验 ,加0.5%的氢氧化钠水溶液煎煮 ,合并煎
液 ,滤过 ,滤液浓缩至小于 50 mL ,放入干燥箱内(70
℃)进行干燥 ,等到充分干燥至恒重后取出称重 。以
测定的干浸膏中总黄酮的含量为指标 ,结果与方差
分析见表 2 ,表 3。
以干浸膏中总黄酮量为指标 ,确定最佳提取方
·1937·中国医院药学杂志 2008年第 28卷第 22期 Chin H osp Pharm J , 2008 Nov , Vol 28 , No.22
表 2　正交试验结果
Tab 2　Results of o r thogonal e xperiments
试验号 A B C 误差 浸膏量/ g 浸膏中总黄酮含量/ %
1 1 1 1 1 12.4 2.16
2 1 2 2 2 17.1 1.86
3 1 3 3 3 18.0 1.71
4 2 1 2 3 30.3 1.46
5 2 2 3 1 21.2 1.66
6 2 3 1 2 19.9 1.79
7 3 1 3 2 29.6 2.16
8 3 2 1 3 31.5 1.86
9 3 3 2 1 30.8 1.52
K 1j 0.30 0.41 0.40 0.38
K 2j 0.35 0.43 0.37 0.44
K 3j 0.56 0.38 0.45 0.40
Qj 0.12 0.00 0.01 0.01
MAX 0.56 0.43 0.45 0.44
极差 0.27 0.05 0.08 0.06
优水平 A3 B2 C3
表 3　方差分析
Tab 3　Ana ly sis o f default squa re
差异源 Q f MS F值 显著性
因素 A 0.12 2 0.059 20.363 显著
因素 B 0.00 2 0.002 0.781 不显著
因素 C 0.01 2 0.005 1.691 不显著
误差 0.01 2 0.003
总计 0.138 8
案 ,由方差分析可以看出 ,以 A 3 B2 C3为总黄酮含量
最高的提取工艺 ,由 F 值确定影响大小为 A >C >
B ,B因素对总黄酮含量影响最不显著 ,从节约能源 ,
减少成本等方面综合考虑 ,以 A 3B1C3为最适宜的提
取方案 ,即以提取 3次 ,加 12倍量溶剂 ,提取 3 h 为
最佳方案 。
2.3　工艺验证性试验　为考察上述优选提取工艺
的稳定性 ,按最佳工艺条件进行重复试验 ,实验结果
见表 4。
表 4　验证性实验结果
Tab 4　Results of te st expe riment
实验号 浸膏量/ g 出膏率/ % 吸光度/ A 浸膏总黄酮含量/ %
1 29.7 59.40 0.078 2.058
2 27.6 55.20 0.083 2.182
3 28.8 57.60 0.079 2.083
2.4　返魂草干浸膏中总黄酮含量的测定
2.4.1　对照品溶液的制备　精密称取在 120 ℃干
燥至恒重的芦丁对照品23.8 mg ,置 100 mL 量瓶
中 ,加 60%的乙醇适量 ,超声使溶解 ,放冷并稀释至
刻度 ,摇匀 ,即得 。
2.4.2　样品溶液的制备　取返魂草干浸膏粗粉约
1.0 g ,研细 ,精密称定 ,置 50 mL 量瓶中 ,加 60%的
乙醇适量 ,超声使溶解 ,放冷并稀释至刻度 ,摇匀 ,滤
过 ,弃去初滤液 ,精密吸取续滤液 10 mL ,置 50 mL
量瓶中 ,用 60%的乙醇稀释至刻度 ,摇匀 ,即得 。
2.4.3　测定法　精密量取供试品溶液 5 mL ,置 50
mL 量瓶中 ,加入 60%的乙醇 10 mL ,摇匀 ,精密加
入 5%的亚硝酸钠溶液 2 mL ,摇匀 ,放置 6 min ,加
入 10%的硝酸铝溶液 2 mL ,摇匀 ,放置 6 min ,加入
4%的氢氧化钠溶液 10 mL ,然后加入 60%的乙醇
稀释至刻度 ,摇匀 ,放置 10 min ,测定吸光值 。
2.4.4　检测波长的选择　取芦丁对照品溶液 、供试
品溶液及空白溶液 2 mL ,照分光光度法 ,在 200 ～
600 nm 之间进行光谱扫描 ,得芦丁的最大吸收波长
在 496 ～ 502 nm 之间 ,供试品最大吸收波长为 500
nm ,故选用 500 nm 为检测波长。
2.4.5 　线性关系考察 　精密量取对照品溶液
(0.238 g·L-1)0.0 , 2.0 , 4.0 , 6.0 , 8.0 , 10.0 , 12.0
mL 置 50 mL 量瓶中 ,按测定法中的方法在 500 nm
处测定吸光度 。以浓度 C为横坐标 ,吸光度值为纵
坐标 ,绘制标准曲线 ,进行线性回归 ,得回归方程:A
=10.117C -0.005 3 , r=0.999 9 。结果表明芦丁
在9.52 ～ 57.12 mg·L-1范围内呈良好的线性关系 。
2.4.6　稳定性试验　取供试品溶液 ,每间隔一定时
间 ,即在 0 ,0.5 ,1.0 , 1.5 , 2.0 ,2.5 ,3.0 h按“2.4.3”
项下方法测定吸光度 ,结果 RSD 为0.71%(n=7)。
结果表明供试品的吸光度3.0 h内基本稳定。
2.4.7　精密度试验　取对照品溶液按“2.4.3”项下
方法 ,连续 5 次测定 ,结果 RSD 为 0.19%(n=5)。
结果表明 ,仪器精密度良好 。
2.4.8　重复性试验　取同一批号的样品 5份 ,按
“2.4.2”项下方法制备 ,“2.4.3”项下方法测定 ,结果
RSD为0.19%(n=5)。表明方法重复性良好。
2.4.9　回收率试验　精密称取已知含量的样品 5
份 ,精密加入芦丁对照品约 17 mg ,按“2.4.2”项下
方法制备 , “2.4.3”项下方法测定 ,计算回收率 ,结果
见表 5。
表 5　回收率测定结果
Tab 5　De te rmination results of recovery
编号 取样量/ g
样品含量
/mg
对照品加
入量/mg
测得总量
/mg
回收率
/ %
平均值
/ %
RSD
/ %
1 1.005 6 17.454 17.80 34.934 98.20
2 1.009 0 17.854 18.10 35.684 98.51
3 1.001 7 17.125 18.30 35.411 99.92 98.48 0.86
4 1.003 8 17.336 17.90 34.880 98.01
5 1.006 9 17.573 17.60 34.781 97.77
3　讨论
3.1　溶剂量对出膏率及总黄酮含量的影响　正交
试验所得出最佳溶剂量为 15 倍量 。但此因素对总
黄酮含量影响不明显 ,为节约能源消耗 ,故选用 12
倍量 。
3.2　提取时间对出膏率及总黄酮含量的影响　正交
试验所得出最佳提取时间为 3 h ,但此因素亦为不明
显因素 ,因此在实际生产中可适当缩短提取时间。
·1938· 中国医院药学杂志 2008年第 28卷第 22期 Chin H osp Pharm J , 2008 Nov , Vol 28 , No.22
3.3　提取次数对出膏率及总黄酮含量的影响　正
交试验所得出最佳提取次数为 3次 ,且此因素为显
著因素 ,因此对总黄酮含量影响较为明显。所以最
佳提取方案为提取 3次 ,加 12倍量水 ,提取 3 h 。
3.4　返魂草中提取物醇沉后对总黄酮含量的影响
　本实验对返魂草粗提取物用碱水溶解后进行了醇
沉实验 ,结果干膏量有所减少 ,表明醇沉后可除去蛋
白质 ,多糖等大分子类水溶性杂质。但总黄酮含量
未见明显增加 ,可能由于返魂草中提取物中的总黄
酮在碱水提取液中的含量本来就不高 ,经醇沉处理
后 ,大部分会沉淀或被沉淀包裹而滤除 ,所以醇沉后
总黄酮含量未见明显增加 。
参考文献:
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[ 3] 　李丽静 ,王继彦 ,王本祥 ,等.返魂草提取物及其有效成分抗病
毒机制的研究[ J] .陕西中医学院学报 , 2004 , 11(06):585-587.
[ 4] 　粟晓黎 ,徐继民.肺宁冲剂的 TLC鉴别方法改进[ J] .中国药
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[ 5] 　黎乃维 ,杨建荣 ,金海珠 ,等.洋葱黄酮类化合物的水提工艺条
件研究[ J] .食品与机械 , 2006 , 22(05):57-59.
[ 6] 　范莹莹 ,黄小凤.银杏叶中黄酮类化合物的提取工艺研究[ J] .
云南化工 , 2006 , 13(02):66-68.
[收稿日期] 2007-11-30
[ 作者简介] 黄小玉 ,女 ,硕士研究生 ,电话:13983783256 , E-mai l:101hxy@sina.com 　[ 通讯作者] 廖红 ,女 , 讲师 ,电话:023-68485070, E-m ail:
cqliaoh ong@126.com
高效液相-质谱法测定人血浆中乐卡地平的浓度
黄小玉1 ,尚京川1 ,曲斐1 ,杨国章2 ,廖红1 　(1.重庆医科大学药学院 , 重庆 400016;2.中山市东升医院 , 广东 中山
528414)
[ 摘要] 　目的:建立测定人血浆中乐卡地平浓度的高效液相-质谱(H PLC-MS)方法。方法:血浆中加入内标贝尼地平 , 经正己
烷与异丙醇混合液(体积比 100∶1)提取后 , 利用 H PLC-MS 法测定血浆中乐卡地平的浓度。本实验测定了 19 名志愿者单剂
量交叉口服乐卡地平试验制剂与参比制剂后的血药浓度的经时过程。结果:乐卡地平在 0.2 ～ 10 μg·L -1范围内线性关系良
好 ,最低检测限为0.1 μg·L-1 , 定量限为0.2μg·L-1 ,方法回收率大于 80%, 日内 、日间的精密度均小于9.7%。结论:本方法
灵敏度高 ,准确性好 , 能满足乐卡地平治疗药物的临床监测要求 , 并适用于乐卡地平药动学和生物利用度的研究。
[ 关键词] 　乐卡地平;高效液相色谱-质谱法;血浆
[中图分类号] R927.2 　　[ 文献标识码] A　　[ 文章编号] 1001-5213(2008)22-1939-04
Quantification of lercanidipine in human plasma by HPLC-MS
HUANG Xiao-yu1 ,SHANG Jing-chuan1 ,QU Fei1 , YANG G uo-zhang 2 , LIAO Hong1(1.Schoo l of pha rmacy ,
Chongqing Medical Unive rsity , Chongqing 400016 , China;2.Dongsheng H ospital of Zhongshan , Guangdong Zhongshan
528414 , China)
ABSTRACT:OBJECTIVE　To establish a de termination me thod fo r ler canidipine in human plasma by high-perfo rmance liquid
chr omatog raphy-mass spectr ometry (HPLC-MS).METHODS　The human plasma added internal standard benidipine was ex-
tracted by hexane/ isopropanol(100∶1 , v/ v), subsequently , the ext raction w as determined by H PLC-MS.LC-ESI MS was used
in the selected po sitiv e ion monito ring(SIM)mode.In this assay , concentr ations of ler canidipine in plasma of 19 volunteer s af-
te r or al administration of ler candipine hydro chloride testand reference tablets were de te rmined.RESULTS　The assay quantifies
over a linea r range o f 0.2μg·L-1 to 10μg·L -1 with a minimum detectable limit of 0.1μg·L -1 at a signal/noise ra tio of 3 , and
the limit of quantification w as 0.2 μg·L-1 .The recovery o f the method w as mo re than 80%.The intra-assay RSD(same-day)
and the inter-assay RSD(diffe rent day)w ere low er than 9.7%.CONCLUSION　The determination method fo r ler canidipine in
human plasma by HPLC-MS described in this paper is sensitive , accura te and suitable fo r quantitativ e determination and pha r-
macokinetics and bio availability study of lercanidipine.
KEY WORDS:ler canidipine;HPLC-MS;the human plasma
　　乐卡地平是第三代二氢吡啶类钙通道阻滞剂 , 具亲脂性高 ,对血管平滑肌的舒张作用缓慢 、持久 、
·1939·中国医院药学杂志 2008年第 28卷第 22期 Chin H osp Pharm J , 2008 Nov , Vol 28 , No.22