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无患子皂苷对自发性高血压大鼠心肌炎症因子及左心室重构的影响



全 文 :收稿日期:2012-07-31
基金项目:安徽省教育厅高等学校优秀青年人才基金项目(2009SQRZ114) ;安徽中医学院青年科学研究基金项目(2012QN005)
作者简介:陈明(1979-) ,女,博士,讲师,从事心脑血管药理研究;Tel:0551-5169216,E-mail:chenming_ming@ sina. com。
* 通讯作者:龙子江,Tel:0551-5169216,E-mail:lzjyls@ sina. com。
·药理·
无患子皂苷对自发性高血压大鼠心肌
炎症因子及左心室重构的影响
陈 明1,2,陈志武2,龙子江1* ,刘金林3,卞 海1,王雅娟1,王 靓1
(1. 安徽中医学院药理学教研室,安徽 合肥 230038;2. 安徽医科大学基础医学院,安徽 合肥 230031;
3. 安庆医药高等专科学校,安徽 安庆 246052)
摘要 目的:研究无患子皂苷对自发性高血压大鼠(SHR)心肌炎症因子及左心室重构的影响。方法:取 SHR
40只,随机均分为 5 组,即模型组、卡托普利组(27 mg /kg)、无患子皂苷 27、54、108 mg /kg 组,另取 8 只健康 WKY
大鼠作为正常对照组,连续给药 8 w,检测以下指标:①计算左心室质量指数(LVMI) ;② HE 染色观察左心室心肌
组织形态学变化;③Masson染色观察左心室心肌胶原分布情况;④免疫组化法检测心肌组织 TGFβ1 蛋白表达水平。
结果:无患子皂苷可有效逆转 SHR左心室肥厚现象,降低 LVMI,抑制心肌细胞的肥大及胶原纤维的增生,并可抑制
炎症因子 TGF-β1 在心肌的表达水平,上述指标与模型组比较均有显著性差异(P < 0. 05 或 P < 0. 01)。结论:无患
子皂苷可逆转 SHR 左心室重构的病理状态,其机制可能与抑制心肌组织炎症因子 TGF-β1 的表达有关。
关键词 无患子皂苷;自发性高血压;心肌肥厚;炎症反应
中图分类号:R285. 5 文献标识码:A 文章编号:1001-4454(2013)02-0249-07
Effect of Sapindus Saponins on Myocardial Inflammation and Left Ventricular
Remodeling in Spontaneously Hypertensive Rats
CHEN Ming1,2,CHEN Zhi-wu2,LONG Zi-jiang1,LIU Jin-lin1,BIAN Hai1,WANG Ya-juan1,WANG Liang1
(1. Department of Pharmacology,Anhui University of Traditional Chinese Medicine,Hefei 230038,China;2. School of Basic Medicine,
Anhui Medical University,Hefei 230031,China;3. Anqing Medical and Pharmaceutical College,Anqing 246052,China)
Abstract Objective:To investigate the effect of Sapindus saponins on myocardial inflammation and left ventricular remodeling in
spontaneously hypertensive rats. Methods:Forty 16-week-old spontaneously hypertensive rats were randomly divided into five groups,
placebo as model group,captopril tablets(27 mg /kg)as positive control,low-dose Sapindus saponins(27 mg /kg) ,medium-dose(54 mg /
kg)and high-dose(108 mg /kg)groups. And another eight healthy Wistar-Kyoto strain(WKY)rats were used as the normal group. The
animals were treated for eight weeks,and the detection indexes were as follows:①Calculated left ventricular mass index(LVMI) ;②Ob-
served the morphological changes on left ventricular myocardial tissue by HE staining;③Observed the collagen distribution in left ven-
tricular myocardial by Masson staining;④Detected the protein expression of TGF-β1 by immunohistochemical assay. Results:Sapindus
saponins could effectively reverse the left ventricular hypertrophy phenomenon in SHR,lowered LVMI,inhibited the myocardial cell hy-
pertrophy and hyperplasia of collagen fibers,and blocked the expression level of TGF-β1 in myocardial when compared with the SHR
model group,there were significant differences(P < 0. 05 or P < 0. 01). Conclusion:Sapindus saponins can reserve the left ventricular
remodeling in pathological conditions,its possible mechanism may be related to the inhibition of myocardial tissue inflammation factor of
TGF-β1.
Keywords Sapindus saponins;Spontaneously hypertension;Cardiac hypertrophy;Inflammatory response
心肌肥厚是高血压最常见的并发症之一,而且
很可能是独立于血压之外的一种危险因素,它是由
于高血压时心脏负荷过大而引起的代偿性增生的结
果。主要包括心肌细胞肥大、非心肌细胞增生和间
质纤维化,临床上多数表现为左心室心肥厚(left
ventricular hypertrophy,LVH) ,因此,LVH 和高血压
可能是同一疾病的两个方面〔1〕。现代医学研究表
明:高血压是一种慢性低级别炎症性疾病,炎症因素
在原发性高血压的发生、发展及靶器官损害中扮演
着极其重要的角色〔2〕。本课题组前期研究表明无
患子皂苷可降低自发性高血压模型大鼠的血压,改
善其左心室做功〔3〕,对脑缺血-再灌注损伤模型大鼠
炎症反应也有一定的抑制作用〔4〕,本实验拟通过观
察无患子皂苷对自发性高血压大鼠(spontaneously
·942·Journal of Chinese Medicinal Materials 第 36 卷第 2 期 2013 年 2 月
DOI:10.13863/j.issn1001-4454.2013.02.027
hypertensive rats,SHR)的影响,研究其对高血压左
心室重构的作用。
1 材料与仪器
1. 1 实验动物 16 周龄 SHR 40 只,雌雄各半,体
质量(200 ~ 250)g,由北京维通利华实验动物技术
有限公司提供,许可证号:SCXK(京)2007-001;相同
周龄健康 Wistar-Kyoto strain(WKY)大鼠 16 只,雌
雄各半,体质量(200 ~ 250)g,由南京医科大学动物
中心提供,许可证号:SCXK(苏)2008-0004。鼠料,
由安徽长临河医药科技有限公司提供。
1. 2 药物与试剂 无患子皂苷(sapindus saponin)
为无患子科植物无患子树的种子无患子假种皮中提
取的有效部位。由安徽中医学院天然药化教研室提
取鉴定,制备方法如下:无患子的成熟果实,水洗、晾
干、去籽、粉碎,加 12 倍量水煎煮 3 次,每次 1 h。提
取液过滤、浓缩,上大孔吸附树脂柱,依次用水、20%
和 70%乙醇洗脱,收集 70%乙醇洗脱液,减压回收
乙醇后以混合溶剂萃取,即得无患子总皂苷。以常
春藤皂苷元为对照品,紫外分光光度法测定,无患子
总皂苷含量为 95. 6%。本品为淡棕色粉末,临用时
用蒸馏水配成适当浓度使用。以常春藤皂苷元为对
照品,经紫外分光光度法测定,总皂苷含量达
95. 6%,临用时用蒸馏水配制为适当浓度备用;转化
生长因子-β1(TGF-β1)兔抗鼠多克隆抗体,购于北京
中杉金桥生物技术有限公司,批号:F0317;Masson
三色试剂盒购于福州迈新生物技术有限公司,批号:
1112028004;甲醛、乙醇、二甲苯等均为市售分析纯。
1. 3 主要仪器 MK3 全自动酶标分析仪(上海弘
联公司) ;- 80 ℃超低温冰箱(美国 Advantage) ;
LDZ4 型微量离心机(北京医用离心机厂) ;电子天
平(美国 METTLER TOLEDO) ;微量移液器(德国
Eppendorf) ;切片机(Leica RM2135 德国) ;QP-B 切
片漂烘仪(科力飞仪器有限公司) ;GHX-9270B-1 恒
温箱(上海福马仪器有限公司) ;DHG-9140A干燥箱
(上海精宏仪器有限公司) ;ZT-12P型生物组织自动
脱水机(湖北孝感仪器有限公司) ;BM-Ⅱ型病理组
织包埋机(安徽电子科学研究所) ;Olympus BX51 型
光学显微镜(日本 Olympus公司) ;X胶片(Kodak)。
2 方法
2. 1 动物分组及给药 取 SHR 40 只,雌雄各半
(雌性未孕) ,体质量(200 ~ 250)g,适应实验室 7 d
后,随机均分为 5 组,每组 8 只,即 SHR 模型对照
组、阳性对照组(卡托普利,27 mg /kg,按照体表面积
折算,相当于临床成人日用量的 2 倍)及无患子皂
苷低、中、高(27、54、108 mg /kg,根据前期预试验得
到无患子皂苷大致的最小有效量约为 25 mg /kg,最
大有效量约为 486 mg /kg,故在此剂量范围内,设定
3 个剂量组)剂量组。另取 8 只健康 WKY大鼠作为
正常对照组。各药物组大鼠分别按照上述剂量灌胃
给药,10 mL /kg 体质量,正常对照组和模型组大鼠
灌胃等容量蒸馏水,给药时间持续 8 w。
2. 2 左心室质量指数的测定 将各组大鼠称体质
量,用 20%乌拉坦麻醉取血后,开胸迅速取出心脏,
生理盐水冲洗净残血,滤纸吸干,去除大血管残根和
结缔组织,沿房室交界处剪去心房,沿室间隔剪去右
心室,保留室间隔,左心室肌以滤纸吸干后称量左心
室质量(left ventricular mass,LVM) ,并计算 LVM 与
体质量之比,作为左心室质量指数(left ventricular
mass index,LVMI)。
2. 3 心肌病理组织学观察 于心肌冠状沟下约 1
mm处,纵向剪取左心室游离壁中段横截面 2 块 3
mm ×3 mm心肌 1 块,置于福尔马林中固定、脱水透
明、包埋切片。
2. 3. 1 HE染色:切片脱蜡至水洗,用自来水和蒸
馏水洗涤。weigert苏木精染色 5 min,盐酸乙醇分化
15 s,氨水返蓝 15 s,伊红复染 2 min,系列乙醇脱水,
透明,封片,于 Olympus BX51 型光学显微镜下进行
观察,摄片,并按照以下标准(表 1)进行病理学积分
统计。
表 1 心肌组织学观察指标及记分标准
心肌病变情况
病理评分
0 分(-) 1 分(+) 2 分(++) 3 分(+++)
心肌变性坏死 无变性坏死 小灶性变性坏死 多灶性变性坏死 广泛性变性坏死
心肌萎缩或肥大 无萎缩或肥大 小灶性萎缩或肥大 多灶性萎缩或肥大 大片萎缩或肥大
间质充血出血 无血管充血或出血 局灶性血管充血或出血 多灶性血管充血或出血 广泛性血管充血或出血
间质炎细胞浸润 无炎细胞浸润 局灶或散在炎细胞浸润 多灶性炎细胞浸润 广泛性炎细胞浸润
心肌纤维化 无纤维组织增生及肉芽
组织形成
少量纤维组织增生及肉
芽组织形成
多灶性纤维组织增生及
肉芽组织
广泛性纤维组织增生及
肉芽组织形成
·052· Journal of Chinese Medicinal Materials 第 36 卷第 2 期 2013 年 2 月
2. 3. 2 Masson 染色:将切片置于二甲苯内,用
weigerit铁苏木素染 20 min,再用丽春红-品红染 5
min,酸性水洗,用 1%磷钼酸分化至胶原纤维呈淡
粉红色,肌纤维呈鲜红色,酸性水洗,直至胶原纤维
呈蓝色,酸性水洗,脱水,透明,封片,于 Olympus
BX51 型光学显微镜下进行观察,摄片。并采用全自
动图像分析系统,切片上随机选取 5 个视野,通过灰
度调节区别胶原和非胶原成分,血管周围胶原面积
为每一标本测量 3 支呈横切面壁内小动脉的周围胶
原面积与管腔面积的比值,取其均值。测定心肌胶
原容积分数(collagen volume fraction,CVF)和血管
周围胶原面积(perivascular circumferential area,PV-
CA ) :
CVF =心肌胶原面积
心肌总面积
(其中胶原面积不包括血管周围胶原面积)
PVCA =心肌小动脉管腔周围胶原面积
动脉管腔面积
2. 4 免疫组化法检测左心室心肌 TGF-β1 蛋白表
达 取左心室游离壁 100 mg 迅速置于液氮罐中冷
冻,供免疫组化法,检测心肌 TGF-β1 蛋白表达用。
以光镜下观察到心肌细胞胞浆及间质内黄色、棕黄
色或棕褐色颗粒状物质为阳性表达,按阳性染色细
胞所占比例分为 3 级:阳性染色细胞占 15% ~ 35%
为弱阳性反应(+) ;阳性染色细胞占 36% ~ 75%为
阳性反应(++) ;阳性染色细胞占 75%以上为强阳
性反应(+++)。并用 JEDR801D 形态学图像分析
系统 Version6. 0 进行图像半定量拍照并分析,每张
切片随机选取不重叠的 5 个视野,测定其积分光密
度值,取其平均值代表达水平,结果以阳性率和光密
度值表示。
2. 5 统计学处理 试验数据采用 SPSS 13. 0 软件
包处理,结果以 珋x ± s 表示,多组间比较采用单因素
方差分析,以 P < 0. 05 为有显著性差异,P < 0. 01 为
有极显著性差异。
3 结果
3. 1 无患子皂苷对 SHR 左心室质量指数的影响
模型组大鼠左心室肥厚,左心室质量指数显著高
于正常对照组(P < 0. 01) ;无患子皂苷各剂量能显
著降低 SHR 左心室肥厚程度,降低左心室质量指
数,与模型组比较有显著性差异(P < 0. 05 或 P <
0. 01) ;在同等剂量下,无患子皂苷低剂量组(27
mg /kg)与卡托普利对照组比较,未见显著性差异(P
> 0. 05)。见表 2。
表 2 无患子皂苷对 SHR左心室质量指数
(LVMI)的影响(珔x ± s,n =8)
组别 剂量 /(mg /kg) LVMI /(mg /g)
正常对照组 - 2. 38 ± 0. 19
模型组 - 3. 02 ± 0. 24**
卡托普利组 27 2. 72 ± 0. 20#
无患子低剂量组 27 2. 78 ± 0. 12#
无患子中剂量组 54 2. 63 ± 0. 07##
无患子高剂量组 108 2. 53 ± 0. 25##
注:与正常对照组比较,** P < 0. 01;与模型组比较,# P <
0. 05,##P < 0. 01
3. 2 无患子皂苷对 SHR 左心室心肌病理组织学
的影响 正常对照组大鼠纤维染色均匀,心肌细胞
大小正常、排列规则,心肌间质无炎细胞浸润、充血、
水肿等异样变化;模型组大鼠心肌细胞肥大、细胞核
增大,心肌纤维明显增粗,肌纤维束变宽,肌纤维间
变得疏松,部分肌纤维有中断现象;无患子皂苷各剂
量组及阳性对照组大鼠心肌细胞结构基本正常、排
列较规则、心肌纤维未见明显增粗,细胞核未见明显
增大。见表 3、图 1。
表 3 无患子皂苷对 SHR左心室心肌病理积分的影响(珔x ± s,n =8)
组别
剂量
/(mg /kg)
心肌病变
变性和坏死 萎缩或肥大
心肌间质病变
充血和出血 炎细胞浸润 间质纤维化
正常对照组 - 0. 00 ± 0. 00 0. 00 ± 0. 00 0. 00 ± 0. 00 0. 00 ± 0. 00 0. 00 ± 0. 00
模型组 - 1. 69 ± 0. 37** 1. 94 ± 0. 32** 1. 25 ± 0. 27** 2. 00 ± 0. 27** 1. 63 ± 0. 52**
卡托普利组 27 1. 19 ± 0. 26## 1. 13 ± 0. 35## 1. 00 ± 0. 27 1. 31 ± 0. 37## 0. 94 ± 0. 32##
无患子低剂量组 27 1. 25 ± 0. 38# 1. 50 ± 0. 38# 1. 06 ± 0. 32 1. 19 ± 0. 46## 1. 13 ± 0. 35#
无患子中剂量组 54 1. 13 ± 0. 35## 1. 19 ± 0. 26## 0. 88 ± 0. 35# 1. 06 ± 0. 42## 1. 00 ± 0. 38#
无患子高剂量组 108 0. 69 ± 0. 26## 0. 81 ± 0. 26## 0. 75 ± 0. 27## 0. 81 ± 0. 37## 0. 81 ± 0. 26##
注:与正常对照组比较,**P < 0. 01;与模型组比较,#P < 0. 05,##P < 0. 01
·152·Journal of Chinese Medicinal Materials 第 36 卷第 2 期 2013 年 2 月
图 1 无患子皂苷对 SHR心肌病理组织学的影响(HE,×200)
A. 正常对照组 B. 模型组 C. 卡托普利组 D. 无患子皂苷低剂量组 E. 无患子皂苷中剂量组 F. 无患子皂苷高剂量组
图 2 无患子皂苷对 SHR心肌胶原的影响(Masson染色,×400)
A. 正常对照组 B. 模型组 C. 卡托普利组 D. 无患子皂苷低剂量组 E. 无患子皂苷中剂量组 F. 无患子皂苷高剂量组
3. 3 无患子皂苷对 SHR 左心室心肌胶原分布的
影响 经 Masson 染色,心肌细胞及纤维被染成红
色,红细胞呈橘红色,胶原纤维呈蓝绿色,细胞核呈
蓝黑色。正常对照组心肌纤维排列整齐,细胞核位
于肌纤维中央,心肌纤维束间隙较小,心肌纤维间及
血管周围仅有少量的胶原沉积;模型组心肌纤维增
·252· Journal of Chinese Medicinal Materials 第 36 卷第 2 期 2013 年 2 月
粗,肌纤维变宽,肌纤维束间距变大,可见分布大量
的胶原纤维,心肌小动脉周围胶原纤维明显增生,且
动脉管腔变狭窄;无患子皂苷各剂量组及阳性对照
组大鼠心肌纤维增粗减轻,肌纤维束间隙较变小,心
肌间隙及血管周围胶原纤维增生明显减少,较模型
大鼠有很大的改善。见表 4,图 2、3。
表 4 无患子皂苷对 SHR心肌胶原纤维
增生情况的影响(珔x ± s,n =8)
组别 剂量 /(mg /kg)
心肌胶原分布
CVF /% PVCA/%
正常对照组 - 3. 30 ± 0. 65 1. 08 ± 0. 29
模型组 - 6. 49 ± 1. 70** 2. 58 ± 0. 59**
卡托普利组 27 4. 84 ± 0. 66# 1. 92 ± 0. 45#
无患子低剂量组 27 5. 04 ± 0. 79# 1. 86 ± 0. 42#
无患子中剂量组 54 4. 61 ± 0. 55## 1. 65 ± 0. 42##
无患子高剂量组 108 4. 33 ± 0. 32## 1. 42 ± 0. 37##
注:与正常对照组比较,** P < 0. 01;与模型组比较,# P <
0. 05,##P < 0. 01
3. 4 无患子皂苷对 SHR 左心室心肌 TGF-β1 蛋白
表达的影响 免疫组化法检查结果可见,光镜下观
察大鼠心肌细胞 TGF-β1 阳性染色呈棕黄色颗粒状,
主要分布在心肌细胞胞浆及间质内。正常对照组大
鼠心肌细胞胞浆及间质内可见少量散在的棕黄色物
质,表达呈弱阳性反应;模型组大鼠心肌细胞胞浆及
间质内分布大量的棕褐色颗粒状物质,表达呈强阳
性反应;无患子皂苷低剂量组和卡托普利组大鼠心
肌细胞胞浆及间质内可见一些散在的棕黄色物质,
表达呈阳性反应;无患子皂苷中、高剂量组大鼠心肌
细胞胞浆及间质内可见少量散在的棕黄色物质,表
达呈弱阳性反应。经 JEDR801D形态学图像分析系
统 Version-6. 0 进行图像半定量拍照并分析可知,
SHR心肌 TGF-β1 光密度值显著高于正常对照组(P
< 0. 01) ;无患子皂苷低、高剂量可显著降低 SHR 心
肌细胞内 TGF-β1 的蛋白表达水平(P < 0. 05 或 P <
0. 01) ;在同等剂量(27 mg /kg)下,无患子皂苷低剂量
组与卡托普利对照组比较,差异无显著性(P >
0. 05)。见表 5、图 4。
表 5 无患子皂苷对 SHR心肌细胞内 TGF-β1
蛋白表达的影响(珔x ± s,n =8)
组别 剂量
/
(mg /kg) 阳性率 /% D(λ)
正常对照组 - 18. 00 ± 3. 87 0. 202 ± 0. 038
模型组 - 86. 63 ± 5. 81** 0. 320 ± 0. 069**
卡托普利组 27 43. 75 ± 5. 20## 0. 240 ± 0. 075#
无患子低剂量组 27 41. 38 ± 4. 84## 0. 235 ± 0. 070#
无患子中剂量组 54 31. 13 ± 3. 56## 0. 2133 ± 0. 0195##
无患子高剂量组 108 23. 38 ± 5. 34## 0. 195 ± 0. 042##
注:与正常对照组比较,** P < 0. 01;与模型组比较,# P <
0. 05,##P < 0. 01
图 3 无患子皂苷对 SHR心肌小动脉管腔周围胶原的影响(Masson染色,×400)
A. 正常对照组 B. 模型组 C. 卡托普利组 D. 无患子皂苷低剂量组 E. 无患子皂苷中剂量组 F. 无患子皂苷高剂量组
·352·Journal of Chinese Medicinal Materials 第 36 卷第 2 期 2013 年 2 月
图 4 无患子皂苷对 SHR心肌细胞内 TGF-β1 的影响(×400)
A. 正常对照组 B. 模型组 C. 卡托普利组 D. 无患子皂苷低剂量组 E. 无患子皂苷中剂量组 F. 无患子皂苷高剂量组
4 讨论
高血压时,心脏长期处于压力负荷过重的状态,
使得冠状动脉的供血量不能满足肥大心肌的耗氧
量,造成心肌缺血从而引起心肌重构,其结构改变主
要表现为心肌细胞增大和纤维化。高血压引起左心
室重构发生机制的研究已经涉及到炎症、细胞增殖
和凋亡等复杂的细胞及分子机制。肾素-血管紧张
素-醛固酮系统(renin-angiotensin-aldosterone system,
RAAS)的激活被认为是诱发左心室心肌肥厚的体
液因素之一,而许多动物实验表明 RAAS 对心脏有
明显的炎症损害作用〔5〕。心肌肥厚是心力衰竭的
早期重要病理过程,也是引起心血管疾病发生率和
死亡率升高的独立危险因素〔6〕。本实验中 Masson
及 HE染色结果均显示,模型大鼠出现心肌细胞肥
大、心肌间质纤维化等病理表现,且 LVMI 升高;无
患子皂苷各剂量均可显著抑制 SHR 心肌肥厚的病
理进程,降低 LVMI,起到逆转心肌肥厚的作用。
TGF-β1 是近年来研究较多的转化生长因子,它
是具有调节细胞增殖、凋亡、转化等多项功能的细胞
因子〔7〕。TGF-β1是一种多潜能的生长因子,在高血
压左心室肥厚的病理过程中发挥重要作用,其表达
水平与左心室肥厚程度呈正相关〔8〕。TGF-β1 可表
达在心脏心肌细胞、成纤维细胞中,可促进心肌细胞
肥大、成纤维细胞增生及迁移、胶原纤维的增殖及沉
积,在左心室重构中扮演着重要的角色。Brooks
等〔9〕研究发现,在 24 月龄的 TGF-β1杂合子小鼠中
心肌纤维化的程度及结缔组织数量显著低于正常对
照组,表明 TGF-β1等位基因的缺失可抑制心肌肥厚
及心室重构的发生。另有研究发现在体内运用中和
性抗体阻断 TGF-β1 信号的转导过程,发现压力负荷
性大鼠心肌重构及心功能得到显著改善〔6〕。扩张
性心肌病及原发性高血压患者左心室心肌中 TGF-
β1mRNA 表达明显增加
〔11〕。高血压左心室肥厚患
者血清 TGF-β1 浓度与其 LVMI 呈正相关,经血管紧
张素转化酶抑制剂或血管紧张素受体拮抗剂治疗
后,可降低左心室肥厚,改善心功能,血清 TGF-β1浓
度也随之下降〔12〕。故 TGF-β1表达水平与高血压患
者心肌肥厚具有一定的相关性,可视为高血压左心
室肥厚的评价指标之一。本实验研究结果显示:模
型组大鼠心肌细胞内 TGF-β1 蛋白表达较正常对照
组显著升高,与研究报道一致;无患子皂苷各剂量均
可显著抑制 SHR 心肌细胞内 TGF-β1 蛋白表达,表
明无患子皂苷对 SHR 左心室肥厚的抑制作用与抑
制心肌组织炎症因子 TGF-β1 的表达有关。
综上所述,无患子皂苷可逆转 SHR 左心室重构
的病理状态,其机制可能与抑制心肌组织炎症因子
TGF-β1 的表达有关。
·452· Journal of Chinese Medicinal Materials 第 36 卷第 2 期 2013 年 2 月
参 考 文 献
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收稿日期:2012-07-31
基金项目:国家“重大新药创制”科技重大专项(2009ZX09103-354)
作者简介:包永睿(1978-) ,男,在读硕士研究生,专业方向:组分中药及中药现代化;Tel:0411-87406496,E-mail:byr1026@ 163. com。
* 通讯作者:孟宪生,Tel:0411-87406496,E-mail:mxsvvv@ 126. com。
水红花子黄酮类成分对人肝癌细胞株 SMMC-7721 的影响
包永睿,王 帅,孟宪生* ,丑 静,杨欣欣
(辽宁中医药大学药学院,辽宁 大连 116600)
摘要 目的:研究水红花子黄酮类成分对人肝癌细胞株 SMMC-7721 增殖、细胞周期及细胞凋亡的影响。方
法:采用 MTT法研究水红花子黄酮类成分对人肝癌细胞 SMMC-7721 的抑制作用及时效量效关系;并通过 PI 染色
法和 Annexin V-EGFP /PI双染法观察水红花子黄酮类成分作用于人肝癌细胞株 SMMC-7721 后细胞周期 DNA含量
变化及细胞凋亡率。结果:水红花子黄酮类成分能调节 SMMC-7721 人肝癌细胞株 G1 /S转换,使肿瘤细胞发生 S期
阻滞,造成 S期细胞堆积,阻断细胞的 DNA合成和复制,阻滞肿瘤细胞进入 G2 /M期,从而抑制肿瘤细胞的增殖,诱
导 SMMC-7721 细胞凋亡,且具有明显的时效及量效关系。结论:水红花子黄酮类成分对人肝癌细胞株 SMMC-7721
具有明显的抑制作用,且抑制作用和时间剂量成线性关系,其作用机制为抑制肿瘤细胞的增殖和诱导该细胞的凋
亡。
关键词 水红花子黄酮类成分;MTT法;流式细胞技术;人肝癌细胞株 SMMC-7721
中图分类号:R285. 5 文献标识码:A 文章编号:1001-4454(2013)02-0255-05
Effect of Flavonoids of Polygoni Orientails Fructus on Human Hepatoma Cell Line SMMC-7721
BAO Yong-rui,WANG Shuai,MENG Xian-sheng,CHOU Jing,YANG Xin-xin
(College of pharmacy,Liaoning University of Traditional Chinese Medicine,Dalian 116600,China)
Abstract Objective:To investigate the inhibitory effects of flavonoids of Polygoni Orientails Fructus on cell cycle and apoptosis of
human hepatoma cell line SMMC-7721. Methods:MTT method was used to study the inhibitory rate and time-dose relationship of fla-
vonoids on SMMC-7721. Flow cytometry PI staining and Annexin V-EGFP /PI double staining were used to measure the DNA concentra-
tion and apoptosis rate in SMMC-7721. Results:Flavonoids of Polygoni Orientails Fructus had obvious inhibitory effect and with good
·552·Journal of Chinese Medicinal Materials 第 36 卷第 2 期 2013 年 2 月