全 文 ：第 27卷　第 6期 中 南 林 业 科 技 大 学 学 报 Vol. 27　 No. 6
　 2007年 12月 Journal o f Central South Univ er sity o f Fo rest ry& Techno log y Dec. 2007　
⒇
文章编号: 1673- 923X ( 2007) 06- 0109- 06
思茅松优良家系的分子遗传变异
姜远标 1 ,陈少瑜 2 ,吴　涛 2
( 1.思茅地区林科所 ,云南 思茅 665000; 2.云南省林业科学院 ,云南昆明 650204)
摘　要: 　在提取高质量基因组 DNA以及建立稳定的 RAPD-PCR反应体系的基础上 ,采用 RAPD分子标记方法对思茅松 20个优良
家系进行了分子遗传分析 .结果表明: 15条具有多态性随机引物对 20个家系的扩增共检测到 155个位点 ,其中多态性位点有 68个 ,占
总位点数的 43. 87% ;遗传分析表明 ,各家系的相似性系数分布范围为 0. 941 2～ 0. 725 5,平均值为 0. 854,说明 20个思茅松家系之间
具有一定的遗传分化 ,其中 20号家系与其它家系的遗传差异较大 .研究结果为思茅松优良家系选育、鉴别以及分子辅助的杂交亲本
选配提供理论依据 .
关键词: 　林木遗传育种 ;思茅松 ;优良家系 ; RAPD;分子遗传变异
中图分类号: 　 S722. 3+ 4; S791. 259　　　　文献标志码:　 A
Molecular Genetic Variation of the Superior Families of
Pinus kesiya var. langbianensis
JIAN G Yuan-biao
1 , CHEN Shao-yu
2 , WU Tao
2
( 1. Fores t Ins titute of Simao Prefecture, Simao 665000, Yunnan, Ch ina; 2. Yunnan Academ y of Forest ry, Kunming 650204, Yunnan , China)
Abstract: Bas ed on th e ex t raction of good-quality DN A and the establishment of s table RAPD-PCR system, a genetic analysis of 20
Pinus kesiya var. lan gbianensis superio r fami lies w as conducted by the method of RAPD molecular markers. A total of 155 bands,
including 68 polymorphic ones w hich accoun t for 43. 87% of the to tal, was detected wi th 15 screened p rimers. The g enetic analysis
show s that the g enetic simi lari ti es among all families lie w i thin th e range of 0. 941 2～ 0. 725 5, and that the average being 0. 854
indicates that genetic variation occurs am ong them. Th e analyt ical resul ts w ill p rovide s ome information for mark er-assi sted
germ plasm col lection, paren t grouping in hyb ridi zation and genet ic div ersi ty evaluation on breeding material s in imp rovemen t of P inus
kesiya var. langbianensis .
Key words: f ores t heridity breeding; Pinus kesiya var. lan gbianensis; su perior families; RAPD; molecular genet ic variat ion
思茅松 Pinus kesiya va r. langbianensis是云南省主要的用材及采脂树种 ,分布于云南省西南部 ,集中分布
于哀牢山以西亚热带南 [1 ] .该树种具有树干通直、纹理好、变形小、松脂含量高等特点 ,已成为云南省主要的造
纸和采脂树种 ,对全省的林产业发展有着举足轻重的作用 [ 2] .鉴于此 ,已有专家对这一树种进行了广泛的遗传
育种研究 ,如优良种源和优良家系的选优、种子园建设、半同胞子代测定、不同种源的核型及同工酶分析
等 [3～ 6 ] ,但对所选出的优良材料却没有进行更为深入的分子遗传变异研究 .本研究以通过表型选择选出的 20个
思茅松优良家系为研究对象 ,采用 RAPD分子标记技术 ,建立各家系的指纹图谱 ,通过 DNA多态度、遗传距离
(D )、遗传一致度 ( I )以及聚类关系等的计算和分析 ,阐明各家系在分子水平上的遗传变异情况 ,探讨家系间的
遗传关系 ,这对思茅松优良家系选育、鉴别以及分子辅助的杂交亲本的选配具有重要意义 .
⒇　收稿日期: 2007-02-07
基金项目: 思茅林产业发展科技平台建设项目 ( 2004ng05-19) .
作者简介: 姜远标 ( 1967- ) ,男 ,云南景东人 .硕士研究生 ,主要从事热带人工林培育技术的研究及推广 . E-mai l: lk sjyb@ yahoo. com. cn
通讯作者: 陈少瑜 , E-mail: sherry9872@ yah oo. com. cn
DOI : 10. 14067 /j . cnki . 1673 -923x . 2007. 06. 033
1　实验材料
1. 1　主要仪器设备和试剂
实验使用的主要仪器有 BECKMAN公司生产的 Avanti-30高速冷冻离心机 , Perkin Elmer公司生产的
Gene Amp 9700 PCR仪 , SYN GEN E公司生产的 GEN EGEN IUS Bio Imaging System凝胶成像仪 , BIO-RAD
公司生产的 Power Pac Basic电泳仪等 . RAPD引物由北京奥科生物技术公司合成 (长度均为 10 bp) , dN TP、
Taq酶、 10× Reaction Buf fer、 MgCl2均购自上海申能博彩生物技术有限公司 , DN A Marker ( DL2000)购自
TaKaRa宝生物工程 (大连 )有限公司 ,另外还有 CTAB缓冲液、氯仿、异戊醇、乙醇、 T E缓冲液等 .
1. 2　实验材料
实验材料由思茅林科所提供 ,为 20个思茅松优良家系实生幼苗的叶子 .家系号及各家系的来源见表 1.
表 1　参试的思茅松家系
Table 1　 20 f amilies of Pinus kesiya var. langbianensis
employed in the study
编号 家系号 来　源
1 58
2 60
3 53
4 54
5 56
6 73
7 50
普洱
( 1～ 7)
一工段Ⅲ -1号
一工段Ⅲ -5号
一工段Ⅲ -6号
一工段Ⅲ -10号
一工段Ⅲ -16号
一工段Ⅲ -19号
二工段Ⅳ -17号
8 2
9 4
10 62
11 42
墨江
( 8～ 11)
永马 9号
永马 12号
永马Ⅳ -34号
永马 35号
12 14
13 15
14 20
翠云区
( 12～ 14)
木乃河 10号
木乃河 11号
木乃河 19号
15 39
16 47
景谷
( 15～ 16)
碧安 3号
碧安Ⅴ -11号
17 23
18 26
19 28
翠云区
( 17～ 19)
曼歇坝 6号
曼歇坝 12号
曼歇坝 18号
20 45 景东 ( 20) 者后Ⅴ -10号
2　实验方法
2. 1　基因组 DNA提取
DNA提取采用高盐沉淀法并略有改动 [7 ] .具体方
法如下:秤取 1 g思茅松新稍 (带幼嫩针叶 ) ,用液氮研
磨至细粉状后 ,转入 10 mL离心管中 ;加入 3 mL提取
液 ,充分摇匀 ;之后 65℃水浴 30 min, 12 000 r /min离
心 10 min;取上清液 ,加入等体积的氯仿异戊醇混合液
(V氯仿∶V异戊醇 = 24∶ 1) ;充分混匀后 10 000 r /min离
心 10 min;重复抽提 2次 ,取上清液 ;加入 2. 5倍体积无
水乙醇 (预冷 ) ,在冰箱中静置 1 h,用无菌枪头挑出白
色絮状沉淀物 ;用 70%乙醇洗涤 2次 , 风干后溶于 100
μLTE中 .加入适量 4 mo l· L- 1NaCl,使溶液中 NaCl
的终浓度达到 2. 5 mo l· L- 1 ,然后再用无水乙醇将
DNA沉淀出来 ,经 70%乙醇洗涤风干后溶于 100
μLTE中 .将提取的 DNA用 0. 8%琼脂糖凝胶电泳检
测 ,并与λDNA进行浓度比较和调整 .
2. 2　实验体系的建立和优化
根据有关研究文献 [8, 9 ] ,试验初步选定思茅松
RAPD反应各因素的浓度范围 .反应体系 20μL, Buffer均为 2μL中 ,运用均匀设计的方法对模板 DNA、Mg2+ 、
dN TP、引物浓度以及 Taq DN A聚合酶用量 5个因素的不同水平及组合进行试验 ,通过两次均匀设计试验优化
出最佳反应体系 ,具体方法见文献 [10 ].
2. 3　引物的筛选
应用 2. 2优化的反应体系和程序 ,选用 2～ 3个样品模板进行广泛引物筛选 ,以确定谱带清晰且多态性强的
引物对所有样品进行 RAPD-PCR扩增 .
2. 4　扩增结果的检测及记录
扩增产物用 1. 2%的琼脂糖凝胶电泳检测 ,电泳缓冲液为 0. 5× TBE,电压为 4 V /cm, EB染色 ,记录试验结
果 ,凝胶成像系统观察并成像 .
2. 5　数据统计及遗传分析
对每个引物扩增出的 RAPD多态位点进行统计 ,用“ 1”表示谱带出现 ,“ 0”表示谱带没有出现 .根据公式
F= 2X 1, 2 / (X 1+ X 2 )计算各家系间的相似性系数 .其中: F表示相似性系数 ; X 1, 2表示家系 1和家系 2共有的谱
带数 ; X 1为家系 1扩增出的谱带数 ; X 2为家系 2扩增出的谱带数 . F值越大 ,表示各家系亲缘关系越近 ,值越小
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则亲缘关系越远 .根据相似性系数计算出各家系的遗传距离 (D ) ,公式为 D= 1- F ,之后利用软件 PopGene32
和 phylip进行各家系的 U PGMA ( unw eighted pai r g roup method wi th a ri thematic mean)聚类分析 ,绘制聚类
图 .
3　结果与分析
3. 1　基因组 DNA的提取
图 1为高质量的思茅松基因组 DNA.
1～ 10为不同家系样品 , 11～ 13为λDN A,质量浓度分别为 30、 60和 90 ng /μL
图 1　思茅松基因组 DNA的电泳检测
Fig. 1　 Argarose gel electrophoresis of genomic DNA from leave of P inus kesiya samples
3. 2　思茅松 RAPD-PCR反应体系及反应程序
在 20μL反应体系中 , DN A模板为 30～ 50 ng ,引物浓度为 0. 5 mmo l· L- 1 , M g2+ 浓度为 4 mmo l· L- 1 ,
TaqDN A聚合酶为 1. 0～ 2. 0 U, dN TP浓度为 0. 75 mmol· L- 1 . PCR扩增程序为: 94℃预变性 4 min; 94℃变
性 1 min, 36℃复性 1 min, 72℃延伸 2 min, 40个循环 ; 72℃延伸 7 min; 4℃保存 .
3. 3　引物筛选及结果
经大量引物筛选后得到 15条用以所有样品扩增的多态性引物 ,各引物的编号和碱基序列见表 2.
表 2　 RAPD引物编号及序列
Table 2　 The number and sequence of RAPD primers
编号 序列 ( 5′- 3′) 编号 序列 ( 5′- 3′)
P1 G TGACGTAGG P9 GACGGATCAG
P2 GGGT AACGCC P10 GGTCTACACC
P3 CAATCGCCGT P11 CACCGTAT CC
P4 GTT TCGCTCC P12 ACAACGCCTC
P5 GTCCACACGG P13 CTCACGT TGC
P6 CTGCTGGGAC P14 GGT ACTCCCC
P7 CCACAGCAG T P15 ACCTCAGCTC
P8 CT CACCGTCC
3. 4　 RAPD扩增结果
用筛选出的 15条多态性引物对供试的 20个家系材料按其优化的反应体系和反应程序进行 RAPD扩增 ,扩
增产物电泳后得到 15张直观反映 20个家系 DNA多态性状况及谱带特征的指纹图谱 (见图 2和图 3) .
111第 6期 姜远标等:思茅松优良家系的分子遗传变异
M为长度标定的 DN A M ark er, 1～ 20分别为 20个家系
图 2　引物 P10对 20个家系扩增的电泳图
Fig. 2　 Electrophoresis patterns of 20 samples by RAPD primer of P10
M为长度标定的 DN A M ark er, 1～ 20分别为 20个家系
图 3　引物 P11对 20个家系扩增的电泳图
Fig. 3　 Electrophoresis patterns of 20 samples by RAPD primer of P11
3. 5　 DNA多态性分析
通过对 15张指纹图谱统计分析 ,得到分析群体 DNA水平上的多态性信息 (见表 3) . 15条随机引物共检
表 3　 15条引物对供试材料的扩增结果
Table 3　 RAPD amplication result of the materials with 15 primers
单株 P1 P2 P3 P4 P5 P6 P7 P8 P9 P10 P11 P12 P13 P14 P15 总数
1 11 13 7 9 9 8 10 7 13 8 4 9 8 4 4
2 11 10 8 9 9 9 11 7 13 7 3 9 8 4 4
3 11 12 7 9 10 9 10 7 9 11 3 10 8 3 6
4 11 13 8 9 10 8 10 8 13 10 8 8 7 3 7
5 11 13 8 11 10 8 9 8 13 11 7 9 8 4 8
6 11 13 8 11 10 8 10 6 13 10 6 10 8 3 7
7 11 11 8 12 9 7 9 9 13 10 5 8 4 4 6
8 11 12 8 12 12 7 12 7 13 10 5 8 8 3 9
9 10 12 8 12 12 7 10 8 12 10 2 9 8 4 8
10 9 13 8 11 11 7 9 9 13 11 5 10 9 4 8
11 11 12 8 11 9 7 10 6 13 12 6 10 8 4 8
12 9 12 8 11 10 7 10 7 13 10 5 10 8 4 8
13 10 8 7 10 11 7 11 7 13 10 6 10 8 4 8
14 9 12 7 12 11 7 12 8 11 10 5 10 8 3 9
15 10 12 7 12 11 7 10 7 13 11 5 10 8 3 8
16 11 8 7 12 11 7 10 8 12 12 8 10 8 4 8
17 10 13 8 12 10 7 10 7 13 12 8 9 8 3 8
18 9 13 8 11 11 7 9 8 13 12 8 10 5 3 9
19 11 12 8 12 11 7 11 8 8 10 5 10 8 3 9
20 11 12 8 11 11 7 12 8 8 9 5 10 8 4 9
总位点数 11 13 8 12 13 9 13 9 13 12 9 12 8 4 9 155
多态位点数 4 6 3 4 3 2 8 3 5 7 6 6 4 1 6 68
多态位点百分数 /% 43. 87
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测到 155个位点 ,其中多态性位点有 68个 ,占总位点数的 43. 87% .换句话说 ,在 155条扩增带中有 87条为 20个
家系所共有 ,这在一定程度上表明了各家系的同源性 , 15条引物中 ,扩增出的谱带数最多的有 13条 ( P2, P9号
引物 ) ,最少的有 3条 ( P14号引物 ) ,平均 10. 3条 .另外 ,从表 3还可以看出: 不同引物扩增的带数不同 ,同一引
物对于不同的供试材料扩增的带数也不相同 ,这充分说明了思茅松分析样本遗传背景的复杂性和 DNA分子水
平上较为丰富的多态性 .
3. 6　基于相似性系数 (遗传距离 )的遗传关系和聚类分析
表 4列出了基于 RAPD标记的 20个思茅松家系的遗传相似性系数 (对角线的右上角 )和遗传距离 (对角线
的左下角 ) .由表 4可看出 ,各家系的相似性系数分布范围为 0. 941 2～ 0. 725 5,平均值为 0. 854.其中相似性系
数分布于 0. 8～ 0. 9间的占 60%以上 ,说明 20个思茅松家系之间产生了遗传分化 ,但各家系间的遗传分化不是
很大 .相对而言 ,其中第 20号家系 (景东家系 )的相似性系数最小 ,普遍在 0. 7～ 0. 8之间 ,表明 20号家系与其它
家系的遗传差异较大 .
表 4　基于 RAPD分子标记的遗传距离和遗传相似性系数†
Table 4　 Genetic distance and similarity coef ficient of the samples based on RAPD markers
编号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20
1 * * * * 0. 928 1 0. 856 2 0. 888 9 0. 862 7 0. 856 2 0. 862 7 0. 843 1 0. 836 6 0. 823 5 0. 862 7 0. 836 6 0. 817 0 0. 817 0 0. 843 1 0. 823 5 0. 823 5 0. 784 3 0. 810 5 0. 745 1
2 0. 074 6 * * * * 0. 849 7 0. 830 1 0. 830 1 0. 836 6 0. 856 2 0. 836 6 0. 843 1 0. 790 8 0. 817 0 0. 830 1 0. 862 7 0. 797 4 0. 810 5 0. 817 0 0. 790 8 0. 764 7 0. 790 8 0. 725 5
3 0. 155 2 0. 162 9 * * * * 0. 862 7 0. 823 5 0. 856 2 0. 849 7 0. 830 1 0. 849 7 0. 797 4 0. 849 7 0. 849 7 0. 803 9 0. 856 2 0. 843 1 0. 810 5 0. 823 5 0. 797 4 0. 862 7 0. 797 4
4 0. 117 8 0. 186 3 0. 147 6 * * * * 0. 908 5 0. 915 0 0. 895 4 0. 888 9 0. 817 0 0. 869 3 0. 882 4 0. 843 1 0. 823 5 0. 849 7 0. 888 9 0. 856 2 0. 882 4 0. 869 3 0. 843 1 0. 764 7
5 0. 147 6 0. 186 3 0. 194 2 0. 096 0 * * * * 0. 915 0 0. 921 6 0. 902 0 0. 869 3 0. 882 4 0. 895 4 0. 843 1 0. 849 7 0. 862 7 0. 888 9 0. 856 2 0. 869 3 0. 856 2 0. 882 4 0. 777 8
6 0. 155 2 0. 178 4 0. 155 2 0. 088 8 0. 088 8 * * * * 0. 941 2 0. 895 4 0. 836 6 0. 836 6 0. 888 9 0. 888 9 0. 843 1 0. 869 3 0. 895 4 0. 823 5 0. 888 9 0. 862 7 0. 875 8 0. 797 4
7 0. 147 6 0. 155 2 0. 162 9 0. 110 5 0. 081 7 0. 060 6 * * * * 0. 888 9 0. 869 3 0. 856 2 0. 895 4 0. 882 4 0. 875 8 0. 862 7 0. 902 0 0. 843 1 0. 856 2 0. 843 1 0. 869 3 0. 790 8
8 0. 170 6 0. 178 4 0. 186 3 0. 117 8 0. 103 2 0. 110 5 0. 117 8 * * * * 0. 915 0 0. 875 8 0. 902 0 0. 902 0 0. 882 4 0. 921 6 0. 934 6 0. 888 9 0. 902 0 0. 875 8 0. 928 1 0. 810 5
9 0. 178 4 0. 170 6 0. 162 9 0. 202 1 0. 140 1 0. 178 4 0. 140 1 0. 088 8 * * * * 0. 869 3 0. 856 2 0. 882 4 0. 888 9 0. 888 9 0. 902 0 0. 843 1 0. 856 2 0. 817 0 0. 895 4 0. 803 9
10 0. 194 2 0. 234 6 0. 226 4 0. 140 1 0. 125 2 0. 178 4 0. 155 2 0. 132 6 0. 140 1 * * * * 0. 895 4 0. 869 3 0. 849 7 0. 875 8 0. 888 9 0. 856 2 0. 882 4 0. 882 4 0. 869 3 0. 790 8
11 0. 147 6 0. 202 1 0. 162 9 0. 125 2 0. 110 5 0. 117 8 0. 110 5 0. 103 2 0. 155 2 0. 110 5 * * * * 0. 908 5 0. 849 7 0. 875 8 0. 928 1 0. 882 4 0. 908 5 0. 856 2 0. 882 4 0. 817 0
12 0. 178 4 0. 186 3 0. 162 9 0. 170 6 0. 170 6 0. 117 8 0. 125 2 0. 103 2 0. 125 2 0. 140 1 0. 096 0 * * * * 0. 888 9 0. 862 7 0. 875 8 0. 843 1 0. 882 4 0. 869 3 0. 869 3 0. 843 1
13 0. 202 1 0. 147 6 0. 218 3 0. 194 2 0. 162 9 0. 170 6 0. 132 6 0. 125 2 0. 117 8 0. 162 9 0. 162 9 0. 117 8 * * * * 0. 869 3 0. 882 4 0. 902 0 0. 862 7 0. 836 6 0. 849 7 0. 797 4
14 0. 202 1 0. 226 4 0. 155 2 0. 162 9 0. 147 6 0. 140 1 0. 147 6 0. 081 7 0. 117 8 0. 132 6 0. 132 6 0. 147 6 0. 140 1 * * * * 0. 921 6 0. 862 7 0. 888 9 0. 875 8 0. 928 1 0. 836 6
15 0. 170 6 0. 210 2 0. 170 6 0. 117 8 0. 117 8 0. 110 5 0. 103 2 0. 067 6 0. 103 2 0. 117 8 0. 074 6 0. 132 6 0. 125 2 0. 081 7 * * * * 0. 888 9 0. 915 0 0. 849 7 0. 915 0 0. 797 4
16 0. 194 2 0. 202 1 0. 210 2 0. 155 2 0. 155 2 0. 194 2 0. 170 6 0. 117 8 0. 170 6 0. 155 2 0. 125 2 0. 170 6 0. 103 2 0. 147 6 0. 117 8 * * * * 0. 882 4 0. 856 2 0. 869 3 0. 764 7
17 0. 194 2 0. 234 6 0. 194 2 0. 125 2 0. 140 1 0. 117 8 0. 155 2 0. 103 2 0. 155 2 0. 125 2 0. 096 0 0. 125 2 0. 147 6 0. 117 8 0. 088 8 0. 125 2 * * * * 0. 934 6 0. 869 3 0. 777 8
18 0. 242 9 0. 268 3 0. 226 4 0. 140 1 0. 155 2 0. 147 6 0. 170 6 0. 132 6 0. 202 1 0. 125 2 0. 155 2 0. 140 1 0. 178 4 0. 132 6 0. 162 9 0. 155 2 0. 067 6 * * * * 0. 843 1 0. 764 7
19 0. 210 2 0. 234 6 0. 147 6 0. 170 6 0. 125 2 0. 132 6 0. 140 1 0. 074 6 0. 110 5 0. 140 1 0. 125 2 0. 140 1 0. 162 9 0. 074 6 0. 088 8 0. 140 1 0. 140 1 0. 170 6 * ** * 0. 856 2
20 0. 294 2 0. 320 9 0. 226 4 0. 268 3 0. 251 3 0. 226 4 0. 234 6 0. 210 2 0. 218 3 0. 234 6 0. 202 1 0. 170 6 0. 226 4 0. 178 4 0. 226 4 0. 268 3 0. 251 3 0. 268 3 0. 155 2 * * * *
平均 0. 178 0. 205 0. 183 0. 149 0. 138 0. 143 0. 127 0. 112 0. 147 0. 145 0. 130 0. 143 0. 155 0. 122 0. 137 0. 172 0. 153 0. 219 0. 155 0. 146
　† 对角线右上方为遗传一致度 ,左下方为遗传距离 .
　　在聚类分析中 ,把两个样品聚为一类的依据有两个 ,一是样品间的相似性系数 ,另一个是样品间的遗传距
离 .本研究中基于 RAPD扩增的结果 ,采用 U PGAM软件的类平均法对各样品进行聚类 ,结果见图 4.由图 4可
知 ,当遗传距离 D值取 0. 3时 , 20份供试材料被分成 3组 , 1～ 3号聚为一组 , 4～ 19号聚在一组 , 20号家系单独
为一组 ;当遗传距离 D取 0. 35时 , 20份供试材料被分作两个组 , 1～ 19号为一组 , 20号单独为一组 .
4　结论与讨论
4. 1　 DNA提取的质量是影响实验结果的关键因素之一
由于植物组织含有复杂的次生化合物 ,从植物组织提取高纯度 DNA相对较难 [11 ] ,尤其是针叶树种 ,其树
脂 (萜烯类化合物 )和酚类化合物含量高 [12 ] ,获得高质量的 DNA难度就更大 .因此在具体的研究中 ,常常要针
对研究对象的特点进行试验 ,并常常在常规的 DNA制备程序基础上做些改进和调整 .本项研究以带幼嫩针叶
的思茅松新稍为提取 DNA的材料目的就是尽量减少其次生化合物对提取质量的影响 .以大量提取 (至少 1 g提
取材料 )的办法解决幼嫩组织 DNA含量低的问题 .参照已有的工作基础 ,通过进一步地调整和稳定提取系统 ,
最终采用高盐沉淀法从思茅松新稍组织中获得高质量的能满足实验需要的基因组 DNA.
4. 2　 RAPD-PCR反应体系的稳定性是实验结果可靠性的保证
尽管有关 RAPD反应体系建立及优化的报道很多 [13～ 23 ] ,对其结果的稳定性也存在一些争议 ,但大量实验
表明不同植物的 RAPD最佳反应体系差别很大 ,所谓“最佳”或“优化” ,其目的就是针对研究对象反复试验获
得其清晰、稳定、重复性高的扩增结果 ,只要在获得高质量 DNA的基础上 ,建立针对某一植物的最佳反应体系
113第 6期 姜远标等:思茅松优良家系的分子遗传变异
图 4　思茅松优良家系的 UPGM A聚类图
Fig. 4　UPGMA dendrogram of 20 superior Pinus kesiya families based on RAPD
并严格控制试验条件和反应体系 ,实验结果的稳定性是可以保证的 .本项研究也进一步证明了这一点 .
4. 3　育种材料的分子遗传分析对于了解其遗传背景及进一步育种具有重要意义
无性系 RAPD的聚类分析一定程度上可以反映无性系的起源和分类 [24 ] ,相同起源地点的无性系一般遗传
距离相对较近 ,反之则遗传距离较远 .本研究中各家系间的遗传距离不是很大 (大多在 0. 2左右 ) ,可以在一定
程度上反映它们的起源和分类情况 .另外对于遗传相似性极高的育种材料 ,比如 1号和 2号、 6号和 7号、 17号
和 18号、 8号与 15号等材料 ,在大批种质资源保存和经营时只保存其中的 1份材料 ,这样既可以保存育种材料
较高的遗传多样性水平 ,又可以减少费用 ,提高种质资源保存和经营的效率 .
本项研究对通过表型选择获得的思茅松 20个优良家系 RAPD分子标记实验及遗传分析 ,得到了分析群体
的遗传多样性状况和各家系的遗传关系及遗传分化情况 ,同时建立了 20个家系的 RAPD分子鉴别体系 ,研究
为在分子水平上更为深入地了解育种材料的遗传背景提供了基础资料 ,也将对分子标记辅助的杂交亲本的选
配具有重要意义 .
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114 中　南　林　业　科　技　大　学　学　报 第 27卷
定位精度没有明显提高 .而定位时间太短 ,将一定程度损失定位精度 .
( 3)通过 RTK定位结果与静态 GPS控制测量、全站仪导线测量的结果进行对比分析 , RT K定位结果与全
站仪导线测量的结果大致相当 , RTK定位具有较好的外部可靠性 .从精度上看 , RTK定位技术可应用于带状
地形图根控制测量 . RTK定位相对全站仪导线测量而言 ,不受通视条件限制 ,且可以实时提供三维坐标 .但
RTK受 GPS接收信号和差分距离的限制 .在平坦、丘陵地区 ,高度角 10°以上无障碍物 ,采用 RTK定位可以用
于带状地形图根控制测量 .
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[本文编校:邱德勇 ]
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[本文编校:谢荣秀 ]
126 中　南　林　业　科　技　大　学　学　报 第 27卷