全 文 ：74 CHINA MEDICINE AND PHARMACY Vol.4 No.23 December 2014
2 0 1 4 年 1 2 月 第 4 卷 第 2 3 期·中医中药·
裂褶菌（Schizophyllum commne Fr .）又称白参、
树花、八担柴，隶属于真菌门（Eumycophyta ），担子
菌纲（Basidiomycetes ），伞菌目（Agaricales），裂褶菌
科（Schizophyllaceae ），裂 褶 菌 属（Schizophyllum ），
食用有滋补、强身的作用 [1]。近年来，日本及欧美等
国在分子生物学、抗癌活性物质和优良菌株的选育
等方面进行了广泛的研究 [2-4]，我国李梦杰等 [5] 对
其培养研究并分离出了产漆酶的裂褶菌 GGHN08-
104 菌株。裂褶菌子实体中含有多种活性成分，郭
孟璧等 [6] 对裂褶菌挥发油的化学成分进行了研究，
结果鉴定出（Z，Z） -9，12- 十八二烯酸等 12 种化
学成分，毛绍春等 [7] 用硅胶柱反复层析从子实体中
分离出了麦角甾醇等多种化合物。药用真菌目前
研究最多的是真菌多糖，裂褶菌多糖可增强巨噬细
胞的吞噬活性，对巨噬细胞、自然杀伤性细胞有激
活作用，能提高白细胞介素产生能力 [8]，对体外培养
的人肝癌 HepG2、Bel-7402 及喉癌 Hep-2 细胞的
生长繁殖具有显著的抑制作用 [9]，所以其子实体中
多糖含量可以作为裂褶菌食药用价值高低的指标
之一。王凤仙等 [10] 测定出裂褶菌子实体中含有 15
种氨基酸，赵琪等 [11] 综述裂褶菌能产生多种酶，所
以对其蛋白质含量测定也可以衡量其食药用价值
的高低。本研究建立了裂褶菌子实体中多糖和蛋
白含量的测定方法，具有一定的理论和实际意义。
1 仪器与材料
紫外 - 可见分光光度计（UV2450 日本岛津），
葡萄糖对照品、牛血清蛋白对照品（购于北京索莱
宝科技有限公司），裂褶菌子实体（采于长春中医药
大学校园）。
2 方法与结果
2.1 子实体多糖含量的测定[12]
采用 3，5—二硝基水杨酸定糖法测定裂褶菌子
实体中多糖的含量。
2.1.1 对照品溶液的制备 精密称取 105℃干燥
至恒重的无水葡萄糖标准品 25mg，置 25mL 容量瓶
裂褶菌子实体中多糖及蛋白质含量的测定
孙鹏珍 刘 月 王大可 李爱欣 王淑敏▲
长春中医药大学药学院，吉林长春 130117
[ 摘要 ] 目的 建立裂褶菌子实体中多糖、蛋白质含量的测定方法。 方法 采用分光光度法测定多糖和总蛋白
含量，检测波长分别为 479nm 和 595nm。 结果 多糖浓度在 0.012~0.040mg/mL 范围内具有良好的线性关系，
回归方程为 Y=23.0753X-0.1733，r=0.9998，子实体多糖含量为 7.26%；蛋白浓度在 0.0078~0.0321mg/mL
范围内具有良好的线性关系，回归方程为 Y=20.0830X+0.1451，r=0.9997，子实体总蛋白含量为 0.2631%。
结论 本研究建立的方法简便、快速、准确，重复性好，为裂褶菌子实体多糖和蛋白质含量的测定提供了依据。
[ 关键词 ] 裂褶菌；多糖；蛋白质；含量测定
[ 中图分类号 ] TQ461 [ 文献标识码 ] B [ 文章编号 ] 2095-0616（2014）23-74-04
Content determination of polysaccharide and protein in
Schizophyllum commune sporophore
SUN Pengzhen LIU Yue WANG Dake LI Aixin WANG Shumin
School of Pharmaceutical Sciences, Changchun University of Chinese Medicine, Changchun 130117, China
[Abstract] Objective Set up Schizophyllum commune sporophore polysaccharide and protein content
determination method. Methods Use spectrophotometry to determine polysaccharide and protein content,
detection wavelength is 479nm and 595nm. Results Polysaccharide concentration possesses good linear
relationship between 0.012-0.010mg/mL, regression equation is Y=23.0753X-0.1733, r=0.9998, sporophore
polysaccharide content is 7.26%; protein concentration possesses good linear relationship between 0.0078-
0.0321mg/mL, regression equation is Y=20.0830X+0.1451, r=0.9997, sporophore total protein is 0.2631%.
Conclusion The method set up by the research is simple, fast, accurate and has good repeatability which provides
basis for Schizophyllum commune sporophore polysaccharide and protein content determination.
[Key words] Schizophyllum commune ; Polysaccharide; Protein; Content determination
[ 基 金 项 目 ] 长 春 中 医 药 大 学 大 学 生“SRT”项 目
（201310199051）。
▲
通讯作者
CHINA MEDICINE AND PHARMACY Vol.4 No.23 December 2014 75
2 0 1 4 年 1 2 月 第 4 卷 第 2 3 期 ·中医中药·
表1 回收率试验结果
样品量 （g） 样品已知含量（mg） 标准品加入量（mg） 测得值（mg） 回收率（%） 平均值（%） RSD（%）
1.2508 90.81 91.00 181.85 100.05 99.90 0.41
1.2520 90.90 91.00 181.12 99.15
1.2515 90.86 91.00 180.88 98.92
1.2523 90.92 91.00 181.06 99.06
1.2534 100.00 91.00 181.21 99.14
1.2506 90.79 91.00 181.33 99.49
中加水定容至刻度，即得 1mg/mL 葡萄糖的标准品
溶液。
2.1.2 供试品溶液的制备 （1）供试品溶液的制
备：精密称取子实体粉末 2.5081g，加热回流提取 3
次，每次 30min，合并滤液并浓缩，定容至 50mL 量
瓶中，即得。作为总糖供试品和还原糖供试品备
用。（2）总糖供试液的制备：精密量取供试品溶液
2mL，置 25mL 容量瓶中，加 6N 盐酸 8mL，置沸水浴
加热 30min，冷却，加 1 滴酚酞指示剂，用 40% 氢氧
化钠溶液中和至微红色，加水定容至刻度，即得总
糖供试液。（3）还原糖供试液制备：即为上述供试
品溶液。
2.1.3 方法学考察
2.1.3.1 线性关系考察 精密量取葡萄糖标品溶
液 0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0mL 分
别置于 25mL 容量瓶中，均加蒸馏水至 2mL，再加入
1.5mL 3，5 －二硝基水杨酸试剂溶液，水浴 5min，定
容至刻度，摇匀。479nm 波长下测定样品吸光值。
以浓度为横坐标，吸光度为纵坐标绘制标准曲线，
求得回归方程为 Y=23.0753X-0.1733，r=0.9998，葡
萄糖在 0.0120 ～ 0.0400mg/mL 范内呈良好的线性
关系。
2.1.3.2 精密度试验 取 葡 萄 糖 对 照 品 溶 液
0.7mL，置于 25mL 量瓶中，加蒸馏水至 2mL，再加入
1.5mL 3，5 －二硝基水杨酸试剂溶液，水浴 5min，定
容至刻度，摇匀。479nm 波长下连续测定 6 次吸光
度值，RSD 值为 0.5981%。表明仪器精密度良好。
2.1.3.3 稳定性试验 取供试品溶液 1mL，置于
25mL 量瓶中，加水至 2mL，再加入 1.5mL 3，5 －二
硝基水杨酸试剂溶液，水浴 5min，定容至刻度，摇
匀。置于 479nm 波长下，分别于 0、0.5、1.0、1.5、2h
测定吸光度。其 RSD 值为 0.7197%，表明供试品溶
液在 2h 内稳定。
2.1.3.4 重复性试验 取同一子实体样品 5 份，
分别按照 2.1.2 项下方法制备供试品溶液，分别取
1mL，置于 25mL 量瓶中，加蒸馏水至 2mL，再加入
1.5mL 3，5 －二硝基水杨酸试剂溶液，水浴 5min，
定容，摇匀。置于 479nm 波长下测定吸光度值。其
RSD 值为 1.0752%，表明本方法重复性良好。
2.1.3.5 加样回收率试验 称取已知总糖含量的
子实体粉末 6 份，每份约 1.25 g，精密称取，分别精
密加入一定量的葡萄糖标准品，按照“2.1.2”项下
制备方法制得续滤液，依法分别测总糖含量，计算
加样回收率。实验数据见表 1。结果表明，本方法
葡萄糖加样回收率 RSD 为 0.41%，说明该方法测定
裂褶菌子实体糖的含量稳定可靠。
2.1.4 样品含量测定 按 3，5- 二硝基水杨酸定糖
法对样品中总糖和还原糖进行测定，总糖减去还原
糖即为多糖含量。计算出裂褶菌子实体中多糖的
含量为 7.26%。见表 2。
表2 样品多糖含量测定结果
序号 含量（%） 平均值（%）
总糖 8.36 8.58
8.64
8.74
还原糖 1.33 1.32
1.27
1.36
2.2 蛋白质的含量测定[13-15]
采用考马斯亮蓝法测定裂褶菌子实体中蛋白
质的含量。
2.2.1 标准蛋白质溶液的配制 精密称定 20mg 牛
血清蛋白，置于 10mL 的容量瓶中，用生理盐水定容
至刻度，即得 2mg/mL 标准蛋白质溶液。
2.2.2 供试品溶液的制备 精密称取子实体粉末
5.0082g，加 8 倍量生理盐水浸渍 24h，滤液透析浓
缩，定容至 10mL 量瓶中，即得供试品溶液。
2.2.3 方法学考察
2.2.3.1 线性关系考察 精密加入标准蛋白溶液
0.04、0.06、0.08、0.10、0.12、0.14、0.16mL 于 试 管 中，
分别加生理盐水至 0.2mL，再加入考马斯亮蓝试剂
10mL，混匀，5min 后于 595nm 波长下测定其吸光
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表3 回收率试验结果
样品量 （g） 样品已知含量（mg） 标准品加入量（mg） 测得值（mg） 回收率（%） 平均值（%） RSD（%）
2.5008 6.50 6.50 13.01 100.12 99.63 1.54
2.5023 6.51 6.50 12.92 98.68
2.5005 6.50 6.50 12.87 97.98
2.5014 6.50 6.50 12.93 98.87
2.5031 6.51 6.50 13.16 102.34
2.5006 6.50 6.50 12.99 99.82
注：RSD=1.54%，表明该方法测定蛋白质含量稳定可靠
度值。以浓度为横坐标，吸光度值为纵坐标，得回
归 方 程：Y=20.0830X+0.1451，r=0.9997，蛋 白 质 在
0.0078 ～ 0.0312mg/mL 范内呈良好的线性关系。
2.2.3.2 精密度试验 取供试品溶液，按照 2.2.2 项
下制备，移取 0.2mL 溶液，依法在 595nm 波长下测
定其吸光度，重复 6 次，其 RSD 值为 0.5142%，表明
仪器精密度良好。
2.2.3.3 稳定性试验 取供试品溶液，按照 2.2.2 项
下制备，移取 0.2mL 溶液，按照测定法每间隔 5min
测定其在 595nm 波长下吸光度，测定 20min 内吸光
度值的变化，其 RSD 值为 0.5920%，表明样品溶液
在 20min 内稳定。
2.2.3.4 重复性试验 取子实体粉末 6 份，按照
2.2.2 项下制备，移取 0.2mL 溶液，依法在 595nm 波
长下测定其吸光度值，其 RSD 值为 1.0867%，表明
该方法测定蛋白质含量重复性良好。
2.2.3.5 加样回收率试验 取已知蛋白质含量的
子实体粉末 6 份，每份约 2.5g，精密称定，分别精密
加入一定量的蛋白标准品，按供试品溶液制备方法
得续滤液，依法测定吸光度，计算回收率，实验数据
见表 3。
2.2.3.6 样品含量测定 对供试品溶液进行测定，
按照 2.2.2 项下操作，平行 3 份，测定其吸光度值。
代入标准曲线计算样品蛋白质含量，子实体中总蛋
白含量为 0.26%，结果见表 4。
表4 样品蛋白质含量测定结果
序号 含量（%） 平均值（%）
1 0.26 0.26
2 0.26
3 0.26
3 讨论
裂褶菌子实体中多糖浓度在0.0120～0.040mg/m L 范
围 内具有良好的线性关系，回归方程为 Y=23.0753X-
0.1733，r=0.9998，子实体多糖含量为 7.26%；蛋白浓
度在 0.0078 ～ 0.0321mg/mL 范围内具有良好的线
性关系，回归方程为 y=20.0830x+0.1451，r=0.9997，
子实体总蛋白含量为 0.26%；本研究建立的方法简
便、快速、准确，重复性好，为裂褶菌子实体多糖和
蛋白质含量的测定提供了依据。多糖有提高免疫
力等多种良好的药理作用，所以具有良好的研究
与开发前景，本实验为开发新型药物提供了理论
依据。
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（下转第 210 页）
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时玲听音乐还可能会刺激脑垂体分泌一种叫做内啡肽
的化学物质，这种物质与吗啡的化学结构相似，在血液
中的含量升高之后，人们可以体验到明显的欢欣感
和愉悦感，从而减轻身体的多种不适感 [12-13]。
本研究中，插管前两组患者的心率、收缩压比
较，差 异 无 统 计 学 意 义（P ＞ 0.05）；研 究 组 音 乐
疗 法 后 插 管 中 心 率（82.16±5.59）次 /min、收 缩 压
（118.44±6.05）mm Hg 均 低 于 对 照 组（96.64±5.67）
次 /min、（129.37±6.76）mm Hg，差异有统计学意
义（P ＜ 0.05）。体现出研究组在气管插管过程中心
血管系统较为稳定。两组患者气管插管中焦虑情况
比较，患者焦虑评分分别为研究组（27.04±5.16），对
照组（40.16±6.52），差异有统计学意义（P ＜ 0.05）。
研究组患者通过听音乐，焦虑状况明显得到改善。
说明音乐疗法对气管插管术中患者具有缓解焦虑
的作用。研究组 50 例，疼痛程度 0 级 38 例（76%），
I 级 9 例（18%），Ⅱ 级 3 例（6%），Ⅲ 级 0 例；对 照
组 50 例，0 级 13 例（26%），I 级 22 例（44%），Ⅱ级
6 例（12%），Ⅲ级 9 例（18%）。研究组音乐疗法后，
对两组患者疼痛程度比较，研究组疼痛程度明显减
轻，这提示了通过音乐疗法可以减轻气管插管中对
患者的不良刺激，提高患者舒适度。
说明音乐不仅对人们的生理机能具有一定的
影响作用，还可以作为环境中其他声音的掩盖物。
特别是在医院的大环境下，请患者聆听音乐（特别
是戴耳机聆听），可以掩盖环境中医疗器械的声音、
患者的哭喊声以及医生对患者病情的探讨声等，从
而缓解患者的焦虑、恐惧情绪。同时音乐还可以作
为积极的环境刺激，帮助患者在医院这个陌生的
环境中增加熟悉、可控感，增强内心的放松、舒适
感，从而有利于患者更好的接受治疗，早日康复。
综上所述，音乐疗法能抑制降低对清醒气管内
插管术中患者焦虑、疼痛的作用，从而提高患者在气
管内插管时舒适度，对医疗服务质量的提升有着重
要的意义。
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