全 文 ：基金项目:广西科学研究与技术开发计划项目(No.桂科重 1355001)
作者简介:兰保强，男，副主任药师，研究方向:中药药物及其制剂的研发，E － mail:lanbaoqiang2008@ 126． com
HPLC法测定五叶泡中没食子酸的含量
兰保强1，吴超伟1，饶伟源1，邱宏聪2
(1．广西中医药研究院，广西 南宁 530022;2．广西中药质量标准研究重点实验室，广西 南宁 530022)
摘要:目的 通过建立五叶泡药材中没食子酸的含量测定方法，完善其质量标准。方法 采用高效液相色谱
法，色谱柱:Kromasil C18(4. 6 mm × 250 mm，5 μm) ，流动相:甲醇 － 0. 1%磷酸(10∶90) ，检测波长:272 nm，流速:1. 0
mL·min －1。结果 没食子酸在 1. 532 ～ 30. 640 μg·mL －1范围内线性关系良好(r = 0. 999 9) ，平均回收率为
100. 60%，ＲSD = 1. 45%(n = 6)。结论 所采用的方法可靠，操作简单，重复性好，能较好地控制五叶泡的质量。
关键词:五叶泡;没食子酸;高效液相色谱法
中图分类号:Ｒ927． 2 文献标识码:A 文章编号:2095 －5375(2016)05 －0267 －003
doi:10． 13506 / j． cnki． jpr． 2016． 05． 006
Determination of gallic acid in Ｒubus rosaefolius Smith. by HPLC
LAN Baoqiang1，WU Chaowei1，ＲAO Weiyuan1，QIU Hongcong2
(1． Guangxi Academy of Traditional Medical and Pharmaceutical Sciences，Nanning 530022，China;2． Guangxi
Key Laboratory of Traditional Chinese Medicine Quality Standards，Nanning 530022，China)
Abstract:Objective To improve the quality standard of Ｒubus rosaefolius Smith. by developing a method for the de-
termination of gallic acid. Methods HPLC was used with Kromasil C18 column (4. 6 mm × 250 mm，5 μm). The mobile
phase consisted of methanol － 0. 1% phosphoric acid(10∶90)at a flow rate of 1. 0 mL·min －1 . The detection wavelength
was 272 nm. Ｒesults The linear range of gallic acid was 1. 532 ～ 30. 640 μg·mL －1(r = 0. 999 9). The average recovery
was 100. 60% with ＲSD was 1. 45% . Conclusion The method was reliable，simple and reproducible for the determination
of gallic acid in Ｒubus rosaefolius Smith． ．
Key words:Ｒubus rosaefolius Smith.;Gallic acid;HPLC
五叶泡为蔷薇科植物蔷薇莓(Ｒubus rosaefolius
Smith. )的干燥根及根茎，具有清热解毒、收敛、凉
血、止血、接骨的功效，用于痢疾、急性胃肠炎、倒经、
喘咳、盗汗［1］。《中华本草》《广西本草选编》《中药
大辞典》《广西药用植物名录》《中国本草图录》等均
有记载，主要分布于广西、福建、广东、云南、四川等
地。广西部分制药企业生产的中药品种使用五叶泡
作为原料药材，但五叶泡现有的质量控制标准尚未
收载进《广西地方药材标准》等法定标准，并且其现
有质量控制标准只有对性状、显微和理化鉴别的部
分简单规定，急需完善标准。五叶泡含有没食子酸、
齐墩果酸、熊果酸、槲皮素等活性成分，没食子酸具
有抗炎、抑菌、抗病毒和抗肿瘤等作用［2 － 3］。本文以
高效液相色谱(HPLC)法对五叶泡进行研究，建立
没食子酸含量测定方法［4 － 7］，为完善其质量标准提
供了依据。
1 仪器与试药
LC －20AT高效液相色谱仪(日本岛津) ;SPD －
20A 紫外检测器(日本岛津) ;AUW220D 电子天平
(日本岛津) ;B2200S 超声仪(Branson 公司) ;没食子
酸对照品(批号:110831 － 201204，供含量测定用，含
量按 89. 9%计，中国食品药品检定研究院) ;五叶泡
药材(由广西中医药研究院采集，经广西中医药研究
院饶伟源副主任药师鉴定) ;甲醇为色谱纯;水为重蒸
水;其余试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2. 1 色谱条件与系统适用性试验 色谱柱:Kroma-
sil C18(4. 6 mm × 250 mm，5 μm) ，流动相:甲醇 －
·762·药学研究·Journal of Pharmaceutical Ｒesearch 2016 Vol． 35，No． 5
0. 1%磷酸(10 ∶ 90) ，检测波长:272 nm，流速:1. 0
mL·min －1，进样量为 10 mL，柱温为室温。在上述
色谱条件下，没食子酸峰与相临峰分离度 ＞ 1. 5，拖
尾因子在 0. 95 ～ 1. 05 之间，没食子酸峰理论板数≥
8 000，色谱图见图 1。
A．对照品溶液;B．供试品溶液
图 1 HPLC色谱图
2. 2 溶液的制备
2. 2. 1 对照品溶液的制备 取没食子酸对照品适
量，精密称定，加水制成每 1 mL含 10 mg的溶液，即
得。
2. 2. 2 供试品溶液的制备 取本品粗粉约 3. 0 g，
精密称定，置具塞锥形瓶中，加水 50 mL，称定重量，
加热回流 4 h，取出，放冷，再称定重量，用水补足减
失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
2. 3 线性关系考察 精密称取没食子酸对照品
8. 52 mg，置 100 mL量瓶中，加水使溶解并稀释至刻
度，摇匀，作为对照品贮备溶液(按 89. 9%含量计算
得浓度为 76. 60 mg·mL －1)。精密量取上述对照品
贮备溶液 0. 5、1、2、5、10 mL，分别置 25 mL量瓶中，
加水稀释至刻度，摇匀，得浓度分别为 1. 532、
3. 064、6. 128、15. 320、30. 640 mg·mL －1的对照品溶
液，按“2. 1”项下的色谱条件分别进样 10 mL 测定，
记录峰面积。以没食子酸对照品峰面积对进样浓度
(μg·mL －1)进行回归，回归方程为:Y = 3. 46 ×
104X － 2. 39 × 103(r = 0. 999 9) ，结果表明，当进样
量在 1． 532 ～ 30． 640 μg·mL －1范围内时，没食子酸
线性关系良好。
2. 4 精密度试验 对同一供试品溶液，照“2. 1”项
下的色谱条件，连续测定 6 次，记录没食子酸峰面
积，测定峰面积的 ＲSD为 1. 36%(n = 6) ，结果表明
仪器精密度良好。
2. 5 稳定性试验 对同一供试品溶液，在 0、2、4、
6、8、10、12 h分别进样测定，结果 7 次测定没食子酸
峰面积的 ＲSD为 1. 81%(n = 7) ，结果显示，供试品
溶液在 12 h内稳定。
2. 6 重复性试验 对同一批样品(广西桂平产药
材) ，照“2. 2. 2”项下方法平行制备 6 份供试品溶
液，进样测定，结果没食子酸含量的平均值为 0. 168
mg·g －1，ＲSD = 1. 92%(n = 6)。结果表明，本品在
本法的色谱条件下重复性较好。
2. 7 加样回收率试验 精密称取没食子酸对照品
(供含量测定用，按 89. 9%计)5. 45 mg，置 1 000 mL
量瓶中，加水使溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照
品溶液(浓度为 4. 90 mg·mL －1)。精密称取五叶
泡药材粉末(没食子酸含量为 0. 168 mg·g －1)1. 5
g，平行取 6 份样，分别精密加入上述没食子酸对照
品溶液 50 mL，称定重量，照“2. 2. 2”项下方法提取，
测定，计算回收率，结果平均回收率为 100. 60%，
ＲSD = 1. 45%(n = 6) ，结果见表 1。
表 1 加样回收率试验结果(n = 6)
取样量
(g)
原含量
(mg)
加入量
(mg)
测得量
(mg)
回收率
(%)
平均回收率
(%)
ＲSD
(%)
1． 506 1 0． 253 0 0． 245 0． 498 100． 00
1． 573 7 0． 264 4 0． 245 0． 514 101． 88
1． 569 6 0． 263 7 0． 245 0． 513 101． 76
1． 438 5 0． 241 7 0． 245 0． 482 98． 08
1． 501 4 0． 252 2 0． 245 0． 498 100． 33
1． 507 3 0． 253 2 0． 245 0． 502 101． 55
100． 60 1． 45
2. 8 样品测定 按拟订的含量测定方法，测定了广
西 3 个不同产地五叶泡药材的没食子酸含量，结果
桂平、陆川、高峰林场 3 个产地五叶泡中没食子酸的
含量分别为 0. 168、0. 301、0. 265 mg·g －1。
3 讨论
3. 1 经前期试验，从五叶泡中鉴别出没食子酸、齐
墩果酸、熊果酸、槲皮素等成分，经对广西 3 个不同
产地采集的五叶泡药材进行测定，齐墩果酸、熊果
酸、槲皮素等的含量均很低(＜ 0. 01%) ，无重要意
义，故只建立没食子酸的含量测定方法。
3. 2 付煜荣等［8］用甲醇、无水乙醇和水为提取溶
剂，提取景天三七中的没食子酸，结果表明使用水为
提取溶剂的提取率最高。分别考察了 3 种提取溶
剂:a．使用 10%盐酸加热回流提取再加水稀释;b．
使用水作为提取溶剂加热回流;c． 使用乙醚作为提
取溶剂，采用索氏提取法提取，挥干乙醚，水定溶。
对以上 3 种方法制备的供试品溶液分别进样测定，
结果提取率 b ＞ a ＞ c，且 b 出现的杂质峰比 a 小，故
选择用水作为提取溶剂。
3. 3 超声波提取和加热回流提取效果比较 分别
称取样品约 3. 0 g，分别精密加水 50 mL，称定重量，
分别超声提取(功率 240 W，频率 40 kHz)1 h 和加
热回流 1 h，结果超声波提取率只有加热回流提取率
的 50%左右，故加热回流提取优于超声波提取，经
试验，加热回流提取 4 h基本可以提取完全，结果见
表 2。 (下转第 294 页)
·862· 药学研究·Journal of Pharmaceutical Ｒesearch 2016 Vol． 35，No． 5
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(上接第 268 页)
表 2 不同提取时间试验结果
加热回流时间(h) 1 2 3 4 5 6
没食子酸含量(mg·g － 1) 0． 053 0． 103 0． 144 0． 168 0． 169 0． 169
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