全 文 ：·短篇论著·
鬼毛针多糖对小鼠细胞免疫功能影响的实验研究
王惠国 1　关洪全 1　赵依娜 2　李忻红 1
(1.辽宁中医药大学微生物与免疫教研室 ,沈阳 110032;2.齐齐哈尔医学院 ,齐齐哈尔 161005)
【关键词】　鬼毛针多糖;淋巴细胞转化率;T细胞增殖能力;IL-2
【中图分类号】　R446.63　　【文献标识码】　B　　【文章编号】　1673-3827(2007)03-0152-02
　　20世纪 80年代后多种真菌多糖的抑瘤活性
被发现以来 ,真菌多糖作为一类新型药物引起越
来越多的关注 ,成为一个非常活跃的研究领域 。
目前已证实多种真菌多糖可以通过激活 T淋巴细
胞 、B淋巴细胞 、活化巨噬细胞和 NK细胞 、激活
补体 、调节细胞因子分泌等对免疫系统发挥多方
面的调节活性 [ 1] 。我国真菌资源丰富 ,但对药用
真菌的研究还很不深入 ,目前应用到临床的具有
自主 知 识 产 权 的 新 产 品 较 少 。 鬼 毛 针
(Marasmiusandrosaceus)又称安络小皮散 、茶褐
小皮伞 ,系担子菌纲 、伞菌目 、白蘑科 、小皮伞属
真菌 。现代医学研究表明:鬼毛针在镇痛方面呈
现突出的药理功效 [ 2] ,但迄今为止 ,有关鬼毛针
多糖的免疫调节活性 ,国内外报道较少。本研究
采用形态学观察 、MTT法 、ELISA方法 ,研究鬼毛
针多糖对小鼠细胞免疫功能的影响 。
1　材料与方法
1.1　主要药品和试剂
鬼毛针多糖 ,按照文献报道提取[ 3] ,香菇多糖
(lentinan, LNT), 购自湖北吉达药业有限公司 ,
RPMIl640细胞培养液购自 Hyclone,小牛血清购自
Gibco公司 ,酸性异丙醇购自苏州博洋化学品有限
公司 ,植物血凝素(PHA)、MTT购自 sigma公司 ,小
鼠 IL-2试剂盒购于晶美公司。
1.2　实验动物分组及给药
昆明小鼠 100只 , (20 ±2)g, 6 ～ 8周龄 ,雌雄
各半 ,由中国医科大学实验动物中心提供。上述小
鼠随机分为 5组 ,每组 20只 ,以蒸馏水溶解稀释鬼
毛针多糖 ,每只小鼠均按 0.2ml/d腹腔注射 。阴
作者简介:王惠国 ,女(汉族),博士研究生.E-mail:wanghuiguo163@
163.com
性对照(A)组(腹腔注射生理盐水 0.2ml/d);阳性
对照(B)组(腹腔注射香菇多糖 10mg/kg· d), C、
D、E组小鼠腹腔注射鬼毛针多糖剂量分别为 5mg/
kg· d、10mg/ kg· d和 20mg/ kg· d,各组分别于
给药 14d后进行细胞免疫功能测试 。
1.3　小鼠淋巴细转化率的测定
于用药后第 11d,每组取出 10只小鼠 ,每日均
加肌注 PHA8mg/kg,最后 1次给药后 2h,小鼠剪尾
取血 ,制片经瑞氏染色后油镜观察 ,计算外周血淋
巴细胞转化率。
1.4　小鼠血清 IL-2水平的测定
小鼠腹腔注射鬼毛针多糖 14d后 ,摘眼球取
血 , 1000r/min离心 ,取上层血清 ,按试剂盒说明操
作 ,检测各组小鼠血清中 IL-2的水平。
1.5　小鼠 T淋巴细胞增殖能力的测定
无菌取脾 ,将脾撕碎 ,经 200目筛网过滤 ,用红
细胞裂解液裂解红细胞后 ,用 Hanks液洗 3次 ,调
整细胞浓度为 2 ×106 /mL。加入 24孔培养板中 ,
每孔 1 ml(每只鼠占 2孔 ),其中一孔加浓度为
100μg/mlPHA液 50μl, 另一孔不加 PHA作为对
照 ,置 5 % CO2 , 37℃培养 72 h。培养结束前 4 h,
每孔轻轻吸去上清液 0.7 ml,加入 0.7 ml不含小
牛血清 RPMI1640培养液 ,同时每孔加入 MTT(5g/
L)50μl,继续培养 4h后 ,每孔加入 1 ml酸性异丙
醇 ,完全溶解紫色结晶后 ,分装到 96孔板中 ,每孔
分装 3孔作为平行样 ,用酶联免疫检测仪 ,以 570
nm波长测定光密度值 。用加 PHA孔的光密度值
减去不加 PHA孔的光密度值代表淋巴细胞的增殖
能力。
1.6　统计学方法
实验结果均以 χ±S表示 ,应用 SPSS10.0软件
处理实验数据 ,进行 t检验 , P<0.05为差异有统
计学意义。
·152· 　中国真菌学杂志 2007年 6月 第 2卷 第 3期　ChinJMycol, June2007, Vol2, No.3　
2　结　　果
小鼠腹腔注射鬼毛针多糖 14d后 ,淋巴细胞转
化试验 、血清 IL-2水平 、小鼠脾脏 T淋巴细胞增殖
能力均高于阴性对照组(见表 1)。其中以中 、高剂
量组升高尤为明显 ,差异具有统计学意义(P<0.
05),相同浓度的鬼毛针多糖(中剂量组)与阳性对
照组比较 ,组间差异不显著 ,说明相同剂量的鬼毛
针多糖与香菇多糖具有同等的免疫促进作用 。
表 1　鬼毛针多糖对小鼠细胞免疫功能的影响
Tab.1　EfectofMarasmiusandrosaceusamyloseoncelimmunologicfunctionofmice
组　　别 淋巴细胞转化率(%) 血清 IL-2水平(OD) 脾脏 T淋巴细胞增殖能力(OD)
阴性对照组(A) 39.33±3.91# 0.315±0.021# 0.422±0.061#
阳性对照组(B) 51.25±8.46 0.572±0.076 0.651±0.129
低剂量组(C) 42.11±7.72# 0.474±0.062＊# 0.455±0.037#
中剂量组(D) 54.33±5.94＊ 0.582±0.073＊ 0.621±0.104＊
高剂量组(E) 50.44±7.27＊ 0.670±0.064＊# 0.479±0.049＊#
　　　　注:＊与阴性对照组比较差异具有统计学意义(P<0.05), #与阳性对照组比较差异具有统计学意义(P<0.05)
3　讨　　论
食用菌多糖与动物和植物多糖相比具有分布
广 、易培养 、世代短 、生物量大 、产量和质量不受
自然条件影响等优点而成为多糖类新药研发的一
个热点 。在日本 ,香菇多糖已用于肿瘤等疾病的
免疫治疗 ,巴西蘑菇多糖 、裂褶菌多糖等也已在欧
美临床上得到广泛应用 。我国的真菌多糖研究也
有很大的进展 ,但同时也存在一些不容忽视的问
题 ,如:在真菌类药物研究范围方面 ,对药用真菌
的研究还不够深入 ,我国真菌资源丰富 ,刘波著的
《中国药用真菌》收集了 117种真菌 ,但目前我国
仅对少数真菌进行了深入探讨 ,其他真菌的药用
价值亟待进一步研究 。鬼毛针为我国民间传统的
药用真菌 ,但目前的研究仅局限在对鬼毛针粗提
物镇痛作用的研究上 [ 4, 5] ,对其免疫作用 、作用成
分及免疫作用机制的研究甚少。本次实验研究结
果显示:鬼毛针多糖能增强小鼠细胞免疫功能 。
给小鼠腹腔注射鬼毛针多糖 14d后 ,中 、高剂量鬼
毛针多糖均能明显增强小鼠淋巴细胞的转化率 、
增加小鼠血清中 IL-2的水平 、促进小鼠淋巴细胞
增殖能力 ,并且相同剂量的鬼毛针多糖具有与香
菇多糖同等的免疫促进作用 。因此我们认为鬼毛
针多糖是一种具有提高小鼠细胞免疫功能的药
物 ,具有较好的药用价值 ,是极具开发潜力的和应
用前景的食用菌多糖 。因此 ,今后应对鬼毛针多
糖免疫活性进行详细的研究 ,为鬼毛针的进一步
开发提供更多的依据。
参 考 文 献
[ 1] 　张秀娟 ,季宇彬.真菌多糖的免疫药理作用的研究.哈尔滨商
业大学学报 , 2002, 18(1):63-65
[ 2] 　戴芳澜.中国真菌总汇.北京:科学出版社 , 1979.532-534
[ 3] 　程超.花菇多糖的提取工艺优化.食品与机械 , 2006, 22(1):
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[ 4] 　朱绍雄 ,李顺祥 ,刘立群等.鬼毛针固体培养菌丝化学成分研
究.中草药 , 1988, 19(8):2-3
[ 5] 　陈西广 ,张冀伸 ,李润秋.鬼毛针中水溶性多糖的研究.真菌
学报 , 1990, 9(2):155-160
[收稿日期 ] 　 2007-03-22
[本文编辑 ] 　王　飞
·153·　中国真菌学杂志 2007年 6月第 2卷 第 3期　ChinJMycol, June2007, Vol2, No.3