全 文 ：下降 ,一直维持在非常高的状态 , 这可能是由于在此条件下菌
体能不断产生絮凝剂从而弥补絮凝效果下降量的缘故。由
此 ,利用固定化菌连续生产絮凝剂后期 , 所产生发酵液若不能
及时处理或使用可将其存放在反应器中 ,停止通气 , 防止杂菌
污染 ,在室温下保存数天 , 仍可维持较高的絮凝活性。
3　讨论
XN1 菌是优良的絮凝剂产生菌 , 利用多孔聚酯可吸附固
定 XN1菌丝细胞 , 菌体在很短时间内即可全部吸附在载体上 ,
且能够长期保持高的活性。
为了控制菌体生长过快而影响后期通气效果 , 可在菌体
固定化后降低流加培养基的糖浓度 ,采用 1%的初糖浓度就能
满足固定化菌产絮凝剂的需要。
利用三相流化床反应器进行固定化菌连续生产絮凝剂实
验 ,结果发现 ,固定化菌在反应体系中固定化强度高 , 连续运
行13d无菌膜脱落现象 ,发酵液清亮透明 , 无明显悬浮菌体产
生 ,且产絮凝剂性能良好 , 平均絮凝水平一直维持在 90%以
上。说明利用多孔聚酯泡沫颗粒为固定化载体 , 连续生产絮
凝剂的方法是可行的 ,且固定化操作简单 , 仅需要一次接种便
可以实现连续化操作 ,可省去后期接种及菌体增殖时间 , 菌体
不易流失 ,发酵液清亮透明 , 不需要后处理即可直接作为絮凝
剂使用。
该絮凝剂具有较高的热稳定性 , 且在反应器中室温下存
放数日仍可维持较高的絮凝活性。
参考文献:
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无患子愈伤组织诱导的多因子正交试验研究
陈光蓉1 , 2 ,殷家明1 ,张凤龙2 ,谢必武2 ,卿励2(1.西南大学农学与生命科学学院 ,重庆 400716;2.重庆三峡职业学院生物工程系 , 重庆 404001)
摘要:目的:探寻无患子愈伤组织诱导的最佳外植体 、培养基和培养条件。方法:采用 5 因素混合水平正交设计 , 用 DPS2000
统计软件对其结果进行方差分析和多重比较(SSR)。结果:诱导愈伤组织的最佳外植体为当年生枝条水培芽的嫩茎段 , 用 0.2%
HgCl2 消毒 2min , 其无菌存活率为 98.33%, 培养条件为光照或黑暗 , 最佳培养基配方为:MS(B5)+6-BA 1.5mg· l-1 +NAA
0.2mg·l -1 ,其愈伤组织的诱导率为 97.78%。结论:激素配比是影响愈伤组织诱导的主要因素。较高的6-BA 浓度(1.5 ～ 2.5mg·
l-1)与较低的 NAA浓度(0.2mg·l-1)配比 , 有利于无患子愈伤组织的诱导。
关键词:正交设计;外植体;存活率;愈伤组织;诱导
中图分类号:Q813.1+2　　文献标识码:A　　文章编号:1004-311X(2007)01-0078-04
Studies on Callus Induction in Sopindus mukorossi Gaertn by Orthogonal Design
CHEN Guang-rong1 ,2 , YIN Jia-ming1 , ZHANG Fong-long2 , XIE Bi-wu2 , Qing Li2
(1.College of Agronomy and Life Science Southwest University , Chongqing 400716 ,China;
2.Chongqing Three Gorges Vocational College , Chongqing 400716 , China)
Abstract:Objective:It was to search after the optimal explants , medium and condition of callus inducement of Sopindus mukorossi Gaertn.Meth-
ods:The Orthogonal design L8(4×24)was used in this experiment and the statistic software DPS2000 was employed to analyse the result s vari-
ance and multiple comparisons.Results:The results showed that the tender stem on the twig which grew in sterile water was best explants , which
was sterilized with 0.2%HgCl2 for 2min.Its surviving rate was 98.33%;Inducing condition was darkness or light;the optimal medium was MS
(B5)+6-BA 1.5mg·l-1+NAA 0.2mg·l -1 , On which callus induction rate was 97.78%.Conclusion:The influence of the combination of 6
-BA and NAA on callus induction was a key.A considerable 6-BA concentration(1.5～ 2.5mg·l-1)in combination with a little NAA(0.2mg
·l-1)would avail callus induction.
Key words:orthogonal design;explants;surviving rate;callus;induction
收稿日期:2006-07-09;修回日期:2006-11-20
基金项目:重庆市万州区重点科技项目资助(“无患子的生物学特性及
快繁研究” ,编号:2004102)
作者简介:陈光蓉(1964-),女 ,重庆市万州人 ,重庆三峡职业学院副
教授 ,西南大学硕士 ,从事农学及植物组织培养技术的教学研究 ,发表
论文 20余篇 , Tel:023-58801898 , E-mail:sxycgr@163.com。
　　无患子(Sapindus mukorossi Gaertn)又名油患子 , 属无患子
科无患子属植物 ,是一种皂素类野生乔木 , 集洗涤 、药用 、水土
保持 、环保等多种用途于一身 ,具有广阔的开发前景。无患子
主要分布于长江流域以南[1] , 无患子果皮含有大量的无患子
皂苷 , 它是优良的植物表面活性剂 , 利用现代科学技术可以将
其制成实用的纯天然无患子皂乳;无患子根 、果可入药 , 能清
热解毒[ 2] ;无患子种仁含有丰富的植物油脂 , 其含油量高达
40%以上 , 无患子油是优良的植物油 , 可作为工业用油利用;
大规模栽培无患子树 , 能有效地绿化治理荒山 , 另外 ,无患树
树型优美[ 3] ,特别在秋冬季节 , 树叶会成为一片金黄 , 其景观
第 17卷第 1 期:78
2007 年 2 月 　　　　　　　　　　　　　　　　
生　物　技　术
BIOTECHNOLOGY
　　　　　　　　　　　　　　　　　Vol.17 , No.1:78
Feb.2007
DOI :10.16519/j.cnki.1004-311x.2007.01.028
比著名的枫树有过之而无不及 , 可以发展成特色休闲旅游产
业。而无患子主要靠种子播种繁殖 , 繁殖系数低 , 周期长[ 4] ,
不能满足生产发展的需要。关于无患子的研究主要集中在无
患子的栽培技术 、整枝技术 、及药用成分的生理 、生化研究和
加工应用研究方面 ,尚未见无患子组培快繁研究方面的报道。
本文以无患子为材料 ,采用正交试验设计法 , 旨在明确不同的
消毒剂和消毒时间对不同外植体存活率的影响 , 以及不同外
植体类型 、不同植物生长物质及其不同浓度组合 、不同基本培
养基 、不同培养条件对无患子愈伤组织诱导的影响 , 以期快速
获得优良的无菌存活外植体 ,建立优良无性系 ,并对无患子愈
伤组织诱导的条件 、激素浓度等进行筛选 , 期望能为无患子的
进一步研究与利用提供一定的技术依据。
1　材料与方法
1.1　材料与试剂
试验所用材料均采自重庆三峡职业学院苗圃内的两年生
实生苗 , 该实生苗系 2003年引种自重庆市万州区武陵镇长江
北岸一颗成年结果母树种子播种而得。
实验所用的琼脂粉为生化试剂 ,其它试剂均为分析纯。
1.2　方法
1.2.1　外植体消毒试验方法
2005年 5 月采摘 4月份萌芽 10 ～ 15d的嫩叶片 ,用洗衣粉
浸洗5min、用清水冲洗 2min 、用 75%的酒精浸泡 5～ 8s , 再按试
验要求进行消毒处理后 ,用无菌水冲洗 4 次接入培养基中。
2005年 6 月采当年生尚未木质化的枝条 , 用洗衣粉浸洗
20min、用清水冲洗 30min 、用 75%的酒精浸泡 5 ～ 8s , 再按试验
要求进行消毒处理后 ,用无菌水冲洗 4次 , 剪成1 ～ 2cm 的带节
茎段接入培养基中。
2005年 12 月采集当年生的带芽枝条 , 用洗衣粉浸洗
30min、用清水冲洗 1h、用 75%酒精浸泡 2min、用 0.2%的升汞
浸泡 10min、用 0.5%的高锰酸钾溶液浸泡 1h、用无菌水冲洗 4
次 ,然后放入烧杯中在无菌培养室进行水培 , 每天换 1 次水
(无菌水), 15～ 20d 萌发 , 当芽长约 3 ～ 5cm 时剪下 、用 75%的
酒精浸泡 5 ～ 8s , 再按试验要求进行消毒处理后 ,用无菌水冲
洗 4次 , 接入培养基中。
外植体消毒试验所用培养基为 MS+BA 1.0mg·l-1+NAA
1.0mg· l-1 , 含琼脂 9g·L-1 , 蔗糖 30g·L-1 , pH 5.8 , 于(25 ±
2)℃, 1 500lx下培养 15d后统计无菌存活率。采用 3 因素 3 水
平正交试验 L9(34)设计(表 1), A 因素外植体的 3 个水平分别
对应田间采摘的嫩叶片 , 室内的水培芽和田间采摘的未木质
化茎段;B 因素消毒剂的 3 个水平分别对应 2% NaClO、0.2%
HgCl2 、12%H2O2;C因素消毒时间的 3 个水平分别对应 10min 、
5min和 2min。正交表和各因素水平的搭配见表 3。试验设 3
次重复 ,每重复 40 瓶 ,每处理 120 瓶 , 每瓶接种 1个外植体。
1.2.2　愈伤组织诱导试验方法
将无菌存活率高的当年生枝条水培芽的叶片和嫩茎段作
为外植体 , 在无菌条件下将其嫩茎段切成长度为 5 ～ 8mm 的小
段 ,叶片切成 5～ 8mm×5～ 8mm 的小块 , 分别接种在诱导愈伤
组织的不同处理的培养基上。
表 1　无患子外植体选择正交试验表 L9(34)
Table 1　Design form of Orthogonal Test L9(34)
水平 因　素
A外植体 B消毒剂 C消毒时间(min)
1 田间萌发的嫩叶片 2%NaClO 10
2 水培芽 0.2% HgCl2 5
3 未木质化的节段 12%H2O2 2
　　愈伤组织诱导试验采用 A 因素 6-BA 4 水平 、B 因素
NAA 、C 因素外植体 、D因素基本培养基和 E 因素培养条件各 2
水平的混合水平正交设计 L8(4×24)(表 2)。正交表中 A因素
6-BA 的 4 个水平对应浓度分别为 1.0mg· l-1 、1.5mg· l-1 、
2.0mg·l-1 、2.5mg·l -1;B 因素 NAA 的 2 个水平对应浓度分别
为 0.2mg·l-1 、1.0mg·l-1;C 因素外植体的 2 个水平对应水培
芽上的嫩茎段和嫩叶片;D因素基本培养基的 2 个水平对应
MS 和 B5 培养基;E 因素培养条件的 2 个水平对应光照和黑暗
条件。正交表和各因素水平的详细配比见表 6。试验设 3 次
重复 , 每重复 15瓶 , 每处理 45瓶 , 每瓶接种 3个外植体。愈伤
组织诱导所用培养基的琼脂含量为 9g·L-1 、蔗糖 30g·L-1 , pH
为5.8 ,培养温度为 25±2℃。
表 2　无患子愈伤组织诱导正交试验表 L8(4×24)
Table 1　The Design Form of Orthogonal Test L8(4×24)
水
平
因　素
A(6-BA) B(NAA) C(外植体) D(基本培养基)E(培养条件)
1 1.0 0.2 水培芽嫩茎段 MS 光
2 1.5 1.0 水培芽嫩叶片 B5 暗
3 2.0
4 2.5
2　结果与分析
2.1　影响存活无菌外植体的因素
无患子外植体选择 L9(34)的试验结果见表 3 , 对表 3 的试
验结果用 DPS2000 统计软件[ 5] 进行方差分析和多重比较
(SSR)。直观分析见表 4 , 从表 4可看出 , 本试验因素 A外植体
的 R值最大 ,为34.47;因素 C 消毒时间次之 , 为12.79;因素 B
消毒剂种类最小 , 为7.81;说明因素 A的效应最大 , 因素 C 次
之 , 因素 B最小 , 即参试 3因素对无患子外植体存活率的影响
依次为外植体种类 , 消毒时间和消毒剂种类 A>C>B , 根据各
因素水平的平均值 x 大小 ,可得最优组合为 A2B2C3 , 其存活率
高达 98.33%。
表 3　无患子外植体选择正交设计 L9(34)试验结果
Table 3　Results of Orthogonal Design L9(34)
处理号
A　　 B　C
1　2　3　4
接种外植体数
Inoculat ion
Ⅰ 　Ⅱ　Ⅲ
无菌存活外植体
Surviving explants
Ⅰ 　Ⅱ　Ⅲ
无菌存活率(%)
Surviving rate
Ⅰ 　Ⅱ　 Ⅲ
无菌存活率的反正弦转换＊
sin-1 p of surviving rate
Ⅰ 　　　Ⅱ　　　Ⅲ
1=A1B1C1 1　1　1　1 40　40　40 18　14　16 45　35 　40 42.13　36.27　39.23
2=A1B2C2 1　2　2　2 40　40　40 20　16　22 50　40　 55 45.00　39.23　47.87
3=A1B3C3 1　3　3　3 40　40　40 28　24　30 70　60　 75 56.79　50.77　60.00
4=A2B2C3 2　1　2　3 40　40　40 40　38　40 100　95　 100 90.00　77.08　90.00
5=A2B3C1 2　2　3　1 40　40　40 26　26　30 65　65　 75 53.73　53.73　60.00
6=A2B1C2 2　3　1　2 40　40　40 36　38　38 90　95　 95 71.56　77.08　77.08
7=A3B3C2 3　1　3　2 40　40　40 16　18　18 40　45　 45 39.23　42.13　42.13
8=A3B1C3 3　2　1　3 40　40　40 12　14　8 30　35　 20 33.21　36.27　26.56
9=A3B2C1 3　3　2　1 40　40　40 16　14　20 40　35　 50 39.23　36.27　45.00
　　＊有些处理的无菌存活率不在 30～ 70%范围内 ,为了提高显著性检验的精确度 ,故对其进行反正弦转换。
792007 年 2 月　　　　　　　　　　　　　　　无患子愈伤组织诱导的多因子正交试验研究　　　　　　　　　　　　　　　
表 4　L9(34)试验结果直观分析
Table 4　Audio-visual Analysi s Concerning to the sin-1 p of Result of Test
L9(34)
因素水平 因　素
A B C
x1 46.37 48.82 45.07
x2 72.25 56.63 53.48
x3 37.78 50.94 57.86
R 34.47 7.81 12.79
　　方差分析(表 5)表明 , 因素 A 外植体 、因素 B 消毒剂种类
和因素 C消毒时间都达极显著水平。对试验因素各水平间的
差异显著性 SSR检验表明 , 试验因素 A 各水平间差异达极显
著水平。B2 与 B3 、B1 间差异达极显著水平 , B3 和 B1 间差异不
显著。C3 、C2 与 C1 间差异达极显著水平。
综合以上直观和方差分析可得出:在无患子组培中 , 快速
获得无菌存活外植体的最佳水平组合为 A2B2C3 , 以当年生枝
条水培芽为外植体 ,用 0.2%HgCl消毒 2min最好 。
2.2　影响无患子愈伤组织诱导的因素
无患子愈伤组织诱导 L8(4×24)试验结果见表 6 , 对表 6
进行直观分析 、方差分析和多重比较 , 分析结果见表 7、表 8。
从表 7 可知 , B 因素NAA 的 R值(34.66)最大 ,其次为 A因素 6
-BA(13.07), 第三为 C 因素外植体(5.27), 第四为 E 因素培
养条件(4.82),最后为 D因素基本培养基(2.81)。因此在参试
5因素中 , 对无患子愈伤组织诱导影响最大的因素是 B 因素 ,
其次为 A因素和 C 因素 ,影响最小的是 E 因素和 D因素 ,最佳
组合为:A2B1C1D1E2 。根据无患子愈伤组织诱导 L8(4×24)试
验直观分析结果 ,诱导无患子愈伤组织的最佳配方为:MS+6
-BA 1.5mg·l-1+NAA 0.2mg·l -1 , 外植体为水培芽的嫩茎段 ,
培养条件为黑暗。
表 5　无患子外植体选择正交设计 L9(34)试验结果方差分析
Table 5　Variance analysis of the sin-1 p of result of test L9(34)
变异来源 SS DF MS F F0.05 F0.01
区组 85.15 2 42.57
A 5 795.81 2 2 897.90 173.94＊＊ 3.63 6.23
B 293.35 2 146.67 8.80＊＊
C 760.60 2 380.30 22.83＊＊
误差 266.50 16 16.66
总变异 8 117.59
表 6　无患子愈伤组织诱导的L8(4×24)试验结果
Table 6　The Result of Callus Induction of Sapindus mukorossi Gaertn in Orthogonal Test L8(4×24)
处理号
A　B　C　D　E
1　2　3　4　5
接种外植体数
Inoculation
Ⅰ 　Ⅱ　Ⅲ
初见愈伤(d)
First day
Ⅰ 　Ⅱ　Ⅲ
出愈数
Induct ion sum
Ⅰ 　Ⅱ　 Ⅲ
＊诱导率的反正弦转换
sin-1 pof induction rate
Ⅰ 　　Ⅱ　　Ⅲ
愈伤组织大小
Callus shap
Ⅰ 　　Ⅱ　　Ⅲ
1=A1B1C1D1E1 1　1　1　1　1 45　45　45 16　14　14 41　39　39 72.65　68.59　68.59 +-+　+-+　+-+
2=A1B2C2D2E2 1　2　2　2　2 45　45　45 17　19　17 13　11　14 32.51　29.63　33.90 -+-　-+-　-+-
3=A2B1C1D2E2 2　1　1　2　2 45　45　45 14　12　14 42　45　45 75.03　90.00　90.00 ++-　++-　++-
4=A2B2C2D1E1 2　2　2　1　1 45　45　45 17　15　16 19　20　24 40.52　41.81　46.91 --+　--+　--+
5=A3B1C2D1E2 3　1　2　1　2 45　45　45 15　15　17 42　43　45 75.03　77.82　90.00 ++-　++-　++-
6=A3B2C1D2E1 3　2　1　2　1 45　45　45 14　15　14 20　21　24 41.81　43.09　46.91 --+　--+　--+
7=A4B1C2C2E1 4　1　2　2　1 45　45　45 17　17　18 40　41　40 70.53　72.65　70.53 +-+　+-+　+-+
8=A4B2C1D1E2 4　2　1　1　2 45　45　45 12　14　14 24　27　27 46.91　50.77　50.77 -+-　-+-　-+-
　　注:“ +++”表示多 、黄色 、疏松;“ -”少 、黄白 、紧;
＊有些处理的诱导率不在 30～ 70%范围内 ,为了提高显著性检验的精确度 ,故对其进行反正弦转换。
表 7　无患子愈伤组织诱导L8(4×24)试验结果直观分析
Table 7　Audio-visual Analysi s Concerning to the sin-1 p of Result of Test
L8(4×24)
因素水平 因　素
A B C D E
x1 50.98 76.79 62.09 60.86 57.05
x2 64.04 42.13 56.82 58.05 61.86
x3 62.44
x4 60.36
R 13.07 34.66 5.27 2.81 4.82
方差分析(表 8)表明 , 因素 A、B、C、对愈伤组织诱导率的作用
都达到 F0.01 的极显著水平 , 因素 D和因素 E 对无患子愈伤
组织诱导率的影响不显著。随着 B 因素 NAA 浓度的增大 , 愈
伤组织诱导率减小。C 因素外植体由嫩茎段变为嫩叶片时 ,愈
伤组织的诱导率也减小。对A 因素 6-BA各水平间的差异显
著性 SSR检验表明:2 水平与 3 水平和 4 水平间差异不显著;
2 、3、4 水平与 1 水平间差异达极显著 ,因此 A因素可选用2 、3 、
4 水平的浓度。根据经济原则选用 A因素 6-BA 的 2 水平 1.
5mg9· l-1为宜。 因此无患子愈伤组织诱导的最佳组合是
A2B1C1D1E1 或 A2B1C1D2E2 , 即:MS(B5)+6-BA 1.5mg·l -1+
NAA 0.2mg·l -1 ,外植体为水培芽的嫩茎段 , 培养条件为黑暗或
光照 ,其诱导率为 97.78%, 与直观分析所得结论一致。
从表 6还可看出 , 在本试验条件下 ,两种外植体均能在不
同的培养基上 、不同时间内诱导出愈伤组织 , 两种外植体出愈
时间基本相近。外植体接种培养 4～ 5d 观察 ,可见叶片块和小
茎段的切口处膨大 , 1w 后叶片块变黄 , 出现凹凸不平的可粒状
物 ,小茎段的两端切口处出现细小的颗粒。两种外植体产生
的愈伤组织在形态上可分两种:一种为黄色 , 组织颗粒较粗
大 ,质地紧密 ,用解剖刀撑能剥离;另一种为黄白色 , 组织颗粒
细小 , 质地疏松。两种外植体均能产生两种类型 , 主要取决于
培养条件 , 一般暗培养下产生的愈伤组织颗粒粗大 , 质地紧
密 ,呈黄色;而光照下产生的愈伤组织颗粒细小 , 质地疏松 , 呈
黄白色(图 2)。
表 8　无患子愈伤组织诱导 L8(4×24)试验结果方差分析
Table 8　Variance analysis of the sin-1 p of of Result of Test L8(4×24)
变异来源 SS DF MS F F0.05 F0.01
区组 113.75 2 56.87
A 616.12 3 205.37 12.36＊＊ 3.34 5.56
B 7206.76 1 7206.76 433.66＊＊ 4.6 8.86
C 166.75 1 166.75 10.03＊＊
D 47.52 1 47.52 2.86
E 139.161 1 39.16 8.37
误差 232.66 14 16.62
总变异 8522.71 23
3　讨论
3.1　国内外已有将正交设计实验法应用于植物组织培养的
报道[6-12] ,有关作者一致认为 , 正交设计法是选择最佳实验方
80　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　生　物　技　术　　　　　　　　　　　　　　　　　　第 17 卷第 1期
图 1　黑暗下黄色紧实的愈伤组织
Fig.1　Yellow compact callus under darkness
图 2　光照下黄白疏松的的愈伤组织
Fig.2　Ivory yellow loose callus under light
案的十分有效工具 ,其优越性在于省时省力 , 对建立一个新的
组培系统是有必要的。无患子组培快繁尚未见前人报道 , 本
文用正交设计方法 ,仅用较少的试验组合 , 通过统计学分析筛
选出了无患子组培体系建立所需的外植体及诱导愈伤组织的
培养基和培养条件。
3.2　从作者试验中发现:无患子在组培过程中无褐化现象 ,
与无患子科的荔枝 、龙眼不一样 , 荔枝 、龙眼在组培过程中褐
化严重[ 13-15] 。
3.3　材料消毒是组织培养的第一步 , 也是最关键的一步 , 它
直接关系到无菌快繁体系能否建立 , 不同外植体 、不同年龄的
同一外植体以及不同季节采取的外植体 , 其消毒方法各不相
同 ,其无菌存活率也不一样[ 16] 。无患子是高大的乔木 , 在野外
生长的时间长 ,植株体内带有无法用表面消毒剂消除的内生
杂菌 ,无论用何种表面消毒方法都不能彻底消除 , 对这种有内
生杂菌的外植体很多学者在培养基中加入杀菌剂的方法来抑
制体内杂菌的生长 ,但这些杀菌剂对组培苗的生长 、分化有一
定程度的影响[ 17 ,18] , 不利于快繁体系的建立。从本试验结果
分析可以看出:无患子无菌存活率受外植体种类 、消毒时间和
消毒剂种类的影响。无菌存活率随着消毒时间的延长而降
低;用已木质化枝条在室内培养的水培芽作组培外植体 , 感染
杂菌的几率低 , 组织培养无菌存活率高 , 三种消毒剂中以
0.2% HgCl2 较好。因此笔者认为在无患子组织培养体系的建
立中应当首选枝条水培的水培芽为外植体建立无性系。
3.4　无患子愈伤组织的诱导受多种因素影响 ,其中激素是影
响愈伤组织诱导的主要因素。本试验的各种条件下均有愈伤
组织产生 , 说明无患子的愈伤组织诱导比较容易。从本次试
验结果分析看 , 较高的 6-BA浓度(1.5～ 2.5mg·l-1)与较低的
NAA 浓度(0.2mg·l -1)配比 ,有利于无患子愈伤组织的诱导。
3.5　基本培养基和培养条件对无患子愈伤组织诱导率的影
响不大。但不同培养条件下产生的愈伤组织在形态上不一
样 ,一种是质地疏松 , 颗粒细小的黄白色愈伤组织 , 另一种是
质地紧实 ,颗粒粗大的黄色组织 , 这和苏明申 、林顺权和陈振
光研究的荔枝叶片诱导的愈伤组织相似[ 17] 。应根据不同的应
用目的选用不同的愈伤组织及其培养条件 。
3.6　本试验条件下产生的两类愈伤组织在以后的继代繁殖
过程中能否发生变化 , 能否进一步通过器官发生途径再生出
完整植株 , 正在试验中。
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超级稻沈农 265 、沈农 606成熟胚愈伤组织诱导的研究
胡凯 ,张立军＊ ,崔震海 ,白雪梅 ,崔玉娜(沈阳农业大学 生物科学技术学院 , 辽宁 沈阳 110161)
摘要:超级稻沈农 265 、沈农 606 具有高产 、优质等特点 ,是通过基因工程进行遗传改良的良好基础材料 ,该文以这两个品种
的成熟胚为材料研究了这的愈伤组织诱导条件 , 以便为进一步转基因的工作奠定基础。结果表明:以 MS 基本培养基为诱导培养
基 ,其中添加 3mg L 2 , 4—D、30g L蔗糖 、0.8%琼脂 , pH 为 5.8 , 在 27℃条件下培养 30d , 能够诱导出质量较好的愈伤组织 , 诱导率
均可以达到 90%以上。研究还表明生长素 2 , 4—D对愈伤组织的诱导起着主要作用;适量的 6-BA和 ABA 对愈伤组织的诱导起
到一定的积极作用 ,但效果不明显;蔗糖浓度高于 40g L时 , 诱导率急剧下降;愈伤组织的诱导受温度的影响很大;而有无光照对
愈伤组织的诱导没有影响。
关键词:超级稻;成熟胚;愈伤组织;激素;温度
中图分类号:Q813.1　　文献标识码:A　　文章编号:1004-311X(2007)01-0081-05
第 17卷第 1 期:81
2007 年 2 月 　　　　　　　　　　　　　　　　
生　物　技　术
BIOTECHNOLOGY
　　　　　　　　　　　　　　　　　Vol.17 , No.1:81
Feb.2007