全 文 ：0 引言
裂褶菌(Schizophyllum commune)又称白参、树花，
隶 属 于 真 菌 门 (Eumycota)，担 子 菌 亚 门
(Basidiomycotina)，层菌纲(Hymenomycetes)，非褶菌目
(Aphyllophorales)，裂褶菌科(Schizophyllaceae)，裂褶菌
属（Schizophyllum）[1]。其食用价值高，质嫩味美，具有
特殊浓郁香味，性平，具有滋补强壮、镇静作用[2]。李
兆兰[3]对裂褶菌的子实体及发酵液进行成分分析，发
现子实体与发酵液中均含有丰富的多糖、蛋白质、生物
活性L-型氨基酸以及人体所必需的8种氨基酸和多种
微量元素等。这些物质对心血管和肝、肾等多种器官
疾病有防治作用，并具有抗癌、抗衰老、抗炎症等功
效[4]。液体培养技术因其生产周期短、产量大、质量高
等优势而被广泛研究和应用[5]。进行裂褶菌液体深层
培养技术研究，有利于实现其规模化生产。目前，关于
裂褶菌液体培养报道较少，孙金旭等[6]报道添加VB1有
利于菌丝体得率的提高，陈文强等[7]通过正交试验研
究发现裂褶菌对碳源中葡萄糖利用率最高，对氮源中
酵母膏和黄豆粉的利用率较高，优化后生物量为
29 g/L。Maushmi Kumari等[8]利用响应面法优化了裂
褶菌培养方法，提高了裂褶菌多糖的产量。裂褶菌还
含有丰富的食品添加剂苹果酸，Mikio Kawagoe等[9]以
苹果酸产量为标准，优化了裂褶菌发酵条件。在前期
研究中，笔者发现裂褶菌中具有抗植物病毒活性物质，
为进一步提高菌丝体产量，从培养基筛选以及培养参
数优化等出发，对裂褶菌的液体深层培养进行了研究，
基金项目：北京市科技新星计划资助项目“裂褶菌抗植物病毒蛋白的基因克隆”(2009B28)。
第一作者简介：周莹，女，1982年出生，甘肃礼县人，助理研究员，硕士，主要从事抗植物病毒天然活性物质的研究。通信地址：100097北京市农林科
学院植物保护环境保护研究所，Tel：010-51503434，E-mail：zhouying2009@yahoo.cn。
收稿日期：2011-06-23，修回日期：2011-10-12。
裂褶菌液体培养条件的初步研究
周 莹，李兴红，严 红，林秀敏
（北京市农林科学院植物保护环境保护研究所，北京 100097）
摘 要：裂褶菌是一种药食兼用的珍贵食用菌资源，具有广泛的应用前景。为了提高裂褶菌液体培养效
率，通过摇瓶培养对裂褶菌(Schizophyllum commune)液体培养的培养基和培养参数进行了筛选和优
化。结果表明：适合裂褶菌菌丝生长的培养基配方为可溶性淀粉6%，葡萄糖5.5%，玉米粉4%，小麦粉
3%，黄豆粉1%，酵母膏0.6%，蛋白胨0.6%，KH2PO4 0.1%，MgSO4 0.05%，VB1 0.001%；优化培养参数为温
度 24℃，接种量 10%，一级菌种种龄为 120 h，培养周期为 120 h。优化后菌丝生物量由起初的
2.04 g/100 mL提高到7.04 g/100 mL。
关键词：裂褶菌；培养基；发酵条件
中图分类号：S646 文献标志码：A 论文编号：2011-1837
Research on the Culture Condition of Schizophyllum commune
Zhou Ying, Li Xinghong, Yan Hong, Lin Xiumin
(Institute of Plant & Environment Protection, Beijing Academy of Agriculture & Forestry Science, Beijing 100097)
Abstract: Schizophyllum commune was a kind of food and medicine of the most precious edible fungus
resources. Liquid medium and culture condition of Schizophyllum commune were improved. The best liquid
medium formulations included 6% soluble starch, 5.5% glucose, 4% corn meal, 3% wheat meal, 1% bean
flour, 0.6% yeast extract, 0.6% peptone, 0.1% KH2PO4, 0.05% MgSO4 and 0.001% VB1. The optimal growth
temperature was 24℃ . The optimal age of liquid strain was 120 h. The optimal cultural time was 120 h. The
yield increased from 2.04 g/100 mL to 7.04 g/100 mL after improving culture condition.
Key words: Schizophyllum commune; liquid medium; culture condition
中国农学通报 2012,28(01):187-190
Chinese Agricultural Science Bulletin
中国农学通报 http://www.casb.org.cn
%
为这一珍贵的真菌资源的利用开发提供参考。
1 材料与方法
1.1 供试菌种
裂褶菌(S. commune)Sc-1由云南云覃科技开发有
限公司馈赠。
1.2 培养基
1.2.1 活化培养基 马铃薯 200 g，葡萄糖 20 g，琼脂
20 g，水1000 mL，pH 7左右。
1.2.2 液体基础培养基 葡萄糖4%，小麦粉1.5%，黄豆
粉 2%，酵母膏 0.3%，KH2PO4 0.1%，MgSO4 0.05%，
VB1 0.001%。
1.3 方法
1.3.1 一级菌种的制备 将 20块左右活化菌丝块
(<1 mm)转接于装有 100 mL 液体基础培养基的
500 mL摇瓶中，于 28℃、240 r/min条件下培养 120 h，
获得一级菌种。
1.3.2 液体培养生长曲线的测定 按照体积百分比为
10%的接种量将一级菌种接到装有 100 mL液体基础
培养基的 500 mL摇瓶中，培养条件同 1.3.1。自接种
48 h开始取样，每24 h取一次，直至216 h，测菌丝体生
物量，每次 3个重复。结合对烟草花叶病毒的抑制活
性，确定后续试验的培养时间。
1.3.3 菌丝体生物量测定 将摇瓶培养的裂褶菌菌液抽
滤到定性滤纸上（提前记录每张滤纸的质量），将抽滤
好的菌饼连同滤纸一起40℃烘干至恒重，称重后，减去
滤纸的质量即为菌丝体生物量。
1.3.4 培养基碳、氮源优化试验 碳源选择可溶性淀粉、
葡萄糖、小麦粉、玉米粉4个因素，氮源选择酵母膏、黄
豆粉、蛋白胨 3个因素，利用正交设计助手 3.1版设计
L18(37)正交实验，各因素水平见表 1，每个处理 3次重
复。其他无机盐及维生素比例同1.2中液体基础培养
基。培养和菌丝体生物量测定同1.3.2。
水平
1
2
3
因素
A可溶性淀粉
6
4
2
B葡萄糖
2.5
4
5.5
C小麦粉
3
2
1
D玉米粉
1
2
4
E酵母膏
0.2
0.4
0.6
F黄豆粉
1
0.8
0.5
G蛋白胨
0.6
0.4
0.2
表1 碳氮源正交试验因素水平
1.3.5 培养温度对菌丝体生物量的影响 培养温度设为
20、22、24、26和28℃，每个处理3次重复。培养基使用
1.3.4优化配方，接种、培养和菌丝体生物量测定同
1.3.2。
1.3.6 接种量对菌丝体生物量的影响 接种量设为3%、
5%、10%、15%和 20%，每个处理 3次重复。培养温度
为24℃，其他同1.3.5。
1.3.7 菌种种龄对菌丝体生物量的影响 液体种子的种
龄分别为 48、72、96、120、144 h，每个处理 3次重复。
培养温度为24℃，其他同1.3.5。
1.4 数据统计分析
对正交试验所得数据用正交设计助手软件分析；
其他数据进行方差分析（0.05水平）。
2 结果与分析
2.1 裂褶菌液体培养生长曲线
通过对不同培养时间的生物量进行测定，得到裂
褶菌液体培养生长曲线图（图1）。从图1中可以看出，
该菌在液体培养 48~144 h期间，生物量逐步上升，处
于 生 长 期 ，144 h 菌 丝 体 生 物 量 达 到 最 高 值
2.04 g/100 mL，之后开始下降。培养 120 h和培养
144 h的菌丝体生物量间无显著差异，前者抗植物病毒
活性高于后者（未发表），所以后续试验的培养时间选
用120 h。
2.2 培养基碳、氮源优化
极差分析可知，7种碳、氮源对菌丝生长影响大小
依次为A>D>C>E>F>G>B，即可溶性淀粉>玉米粉>小
麦粉>酵母膏>黄豆粉>蛋白胨>葡萄糖（表2）。最佳组
培养时间/h
e d cd
ab a bc cd d
0
0.5
1
1.5
2
2.5
48 72 96 120 144 168 192 216
菌
丝
体
生
物
量
/(g/1
00 m
L)
图1 裂褶菌液体培养生长曲线
·· 188
周 莹等：裂褶菌液体培养条件的初步研究
合配方是 A1B3C1D3E3F1G1：可溶性淀粉 6%，葡萄糖
5.5%，小麦粉 3%，玉米粉 4%，酵母膏 0.6%，黄豆粉
1%，蛋白胨0.6%。
2.3 培养温度对菌丝体生物量的影响
由图 2可知，裂褶菌菌丝在 20~28℃均可生长，但
低于24℃时生长较缓慢，最适生长温度为24℃，此温度
下菌丝体生物量可达6.32 g/100 mL。
2.4 接种量对菌丝体生物量的影响
本试验4个接种量中，以10%接种量的菌丝生物量
最高，可达7.04 g/100 mL，故最佳接种量为10%（图3）。
表2 培养基成分优化正交试验结果
试验编号
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
18
k1
k2
k3
R
因素
A
1
1
1
2
2
2
3
3
3
1
1
1
2
2
2
3
3
3
4.85
4.227
3.568
1.282
B
1
2
3
1
2
3
1
2
3
1
2
3
1
2
3
1
2
3
4.145
4.195
4.305
0.16
C
1
2
3
1
2
3
2
3
1
3
1
2
2
3
1
3
1
2
4.392
4.235
4.018
0.374
D
1
2
3
2
3
1
1
2
3
3
1
2
3
1
2
2
3
1
3.913
4.203
4.528
0.615
E
1
2
3
2
3
1
3
1
2
2
3
1
1
2
3
3
1
2
4.043
4.22
4.382
0.339
F
1
2
3
3
1
2
2
3
1
2
3
1
2
1
2
1
2
3
4.387
4.125
4.133
0.262
G
1
2
3
3
1
2
3
1
2
1
2
3
2
3
1
2
3
1
4.317
4.218
4.11
0.207
菌丝体生物量/(g/100 mL)
4.61
4.61
4.89
4.20
5.04
3.62
3.23
3.23
4.37
5.06
4.94
4.99
4.18
3.72
4.60
3.59
3.63
3.36
c c
a ab b
0
2
4
6
8
20 22 24 26 28
培养温度/℃
菌
丝
体
生
物
量
/(g/10
0 mL
)
b b
a ab
0
1
2
3
4
5
6
7
8
3 5 10 15
接种量/%
菌
丝
体
生
物
量
/ (g/1
00 m
L)
图2 培养温度对菌丝体生物量的影响 图3 接种量对菌丝体生物量的影响
·· 189
中国农学通报 http://www.casb.org.cn
2.5 菌种种龄对菌丝体生物量的影响
5个供试液体菌种种龄的菌丝体生物量间差异不
显著，其中种龄120 h的生物量略高于其他4个供试种
龄（图4）。
3 结论与讨论
笔者参照前人报道裂褶菌对碳源中葡萄糖利用率
最高，对氮源中酵母膏和黄豆粉的利用率较高[7]的结
论，在碳氮源选择上进行了侧重和丰富。通过正交试
验极差分析，4种碳源中可溶性淀粉对菌丝生长影响
最大，随后依次是玉米粉、小麦粉、葡萄糖，该结果与前
人报道裂褶菌对碳源中葡萄糖利用率最高有所区别，
可能与静置和转速培养两种培养方式有关；3种氮源
中酵母膏对菌丝生长影响最大，黄豆粉和蛋白胨次之；
最后得出了适合裂褶菌生长的液体培养基配方为：可
溶性淀粉6%，葡萄糖5.5%，玉米粉4%，小麦粉3%，黄
豆粉 1%，酵母膏 0.6%，蛋白胨 0.6%，KH2PO4 0.1%，
MgSO4 0.05%，VB1 0.001%。对培养周期、培养温度、
接种量以及一级菌种种龄几个重要培养参数进行了单
因素筛选，培养温度低于 24℃生长较缓慢，24~28℃适
合菌丝生长；一级菌种接种量并非越大越好，10%为最
适接种量；120 h种龄的一级菌种达到了生物量最大
值，但与其他4个种龄的结果无显著差异；因此确定最
适发酵条件：培养周期为120 h，培养温度24℃，一级菌
种种龄为 120 h，接种量 10%，以上条件及培养基优化
后，生物量最终可达到 7.04 g/100 mL，实现了短期内
获得大量菌丝体，与前人研究相比大大提高。试验过
程中还发现在一级菌种制备过程中，如将活化菌丝进
行切割，增加菌丝生长点，促使菌丝更好生长，菌球小
且密，非常适合定量接种用。液体培养与固体培养相
比，有诸多优点，但操作不当也更容易染菌，因此操作
和培养环境这两方面应多加注意。笔者的研究未涉及
溶氧条件的优化，这点也是今后可以研究的一个方面。
参考文献
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commune for Production of L-Malic Acid [J]. Journal of
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a a a
a
a
0
1
2
3
4
5
6
7
8
48 72 96 120 144
种龄/h
菌
丝
体
生
物
量
/(g/1
00 m
L)
图4 菌种种龄对菌丝体生物量的影响
·· 190