全 文 ：第 14卷第 3期 菌 物 研 究 Vol. 14 No. 3
2016年 9月 Journal of Fungal Ｒesearch Sep． 2016
! 基金项目:吉林省世行贷款农产品质量安全项目(2011－Y18)
作者简介:丁国栋，硕士研究生，研究方向:微生物资源开发与应用。
收稿日期:2015-03-27
!! 通讯作者:宋慧，E-mail:songhuinongda@ 163．com
树舌发酵浸膏对肉鸡盲肠微生物菌群
及 SCFA的影响!
丁国栋1，曾巧丽1，宋 慧1，2!!
(1． 吉林农业大学生命科学学院，长春 130118;2． 食药用菌教育部工程研究中心，长春 130118)
摘 要:为研究肉鸡日粮中添加树舌［Ganoderma applanatum (Pers．ex Gray．)Pat．］发酵浸膏对肉鸡盲肠道微
生物菌群及短链脂肪酸的影响，选用 1日龄 AA肉鸡 225只，随机分为 5个处理组，即空白组(基础日粮)、抗
生素组(基础日粮中添加 5 mg /kg 黄霉素)、3 个剂量的 GAC 添加组(基础日粮中分别添加 1. 57，3. 15，
6. 29 g /100 g的 GAC)，每个处理 3 组重复，每组重复 15 只。试验期 42 d。结果表明:肉鸡 21 日龄时，各
GAC添加组沙门氏菌显著低于空白组(P＜0．05);各 GAC 添加组乳酸杆菌显著高于空白组(P＜0. 05);各
GAC添加组盲肠乙酸、丙酸浓度显著高于空白组(P＜0. 05);6．29%GAC添加组盲肠丁酸浓度显著高于空白
组(P＜0. 05)。肉鸡 42日龄时，1．57%和 6．29%GAC添加组沙门氏菌显著低于空白组(P＜0．05)，6. 29%GAC
添加组效果较好;各 GAC添加组乳酸杆菌显著高于空白组(P＜0．05)。1．57%与 6．29%GAC 添加组盲肠乙
酸、丙酸浓度显著高于空白组(P＜0．05);各 GAC添加组盲肠丁酸浓度显著高于空白组(P＜0．05)。以上结果
提示，GAC在肉鸡生长过程中可以增加肠道短链脂肪酸浓度，促进肠道乳酸杆菌的增殖，抑制沙门氏菌的生
长，具有改善肠道菌群的作用。
关键词:树舌发酵浸膏;肉鸡;肠道菌群;短链脂肪酸
中图分类号:Ｒ282. 7;S852. 6 文献标识码:A 文章编号:1672-3538(2016)03-0167-08
DOI:10．13341 / j．jfr．2014．1078
引文格式:丁国栋，曾巧丽，宋慧．树舌发酵浸膏对肉鸡盲肠微生物菌群及 SCFA的影响［J］．菌物研究，2016，
14(3):167-174．
Effects of Dietary Fermentation Concentrate of Ganoderma applanatum
on Cecal Microflora and SCFA of Broiler Chickens!
DING Guo-dong1，ZENG Qiao-li1，SONG Hui1，2!!
(1． School of Life Sciences，Jilin Agricultural University，Changchun 130118，China;2． Engineering
Ｒesearch Center of Chinese Ministry of Education for Edible and Medicinal Fungi，Changchun
130118，China)
Abstract:The experiment was conducted to study the effects of dietary fermentation concentrate of
Ganoderma applanatum (Pers． ex Gray．)Pat． (GAC)on cecal microflora and short chain fatty
acids (SCFA)of broiler chickens． A total of 225 one－day-old Arbor Acres broilers were randomly
divided into 5 dietary treatments (15 broilers per pen and 3 pens per treatment):blank group
(basal diet) ，antibiotic group (basal diet supplemented with 5 mg flavomycin /kg) ，and three lev-
els of GAC (basal diet supplemented with 1．57%，3．15% and 6．29% of GAC，respectively)． The
experiment lasted for 42 d． The results included that:on day 21，Salmonella were signicantly re-
菌 物 研 究 2016年
duced in the broilers fed with GAC than that of the blank group (P＜0．05)． Lactobacillus were sig-
nificantly increased in the broilers fed with GAC than that of the blank group (P＜0．05)． The con-
centrations of acetic acid and propionic acid were significantly increased in the caecum fed with
GAC than that of the blank group (P ＜ 0． 05)． Butyric acid concentration were significantly
increased fed with 6．29% GAC than that of the blank group (P＜0．05)． Salmonella were signifi-
cantly reduced in the broilers fed with 1．57% and 6．29% GAC than that of the blank group (P＜
0. 05)，and 6．29% GAC is better than 1．57% GAC in reducing Salmonella． Lactobacillus were sig-
nificantly increased in the broilers fed with GAC than that of the blank group (P＜0．05)． Acetic
acid and propionic acid concentration were significantly increased in the caecum fed with 1．57%
and 6．29% GAC than that of the blank group (P＜0．05)． Butyric acid concentration were signifi-
cantly increased fed with GAC than that of the blank group (P＜0．05)． It could conclude that diet-
ary supplementation with GAC could increase concentration of SCFA and gut Lactobacillus counts，
inhibited Salmonella growth，and improve the functions of intestinal flora．
Key words:fermentation concentrate of Ganoderma applanatum;broiler;intestinal flora;SCFA
抗生素在使用过程中，产生的耐药性和残留
问题给人类和环境造成了巨大危害，一些国家已
经明确禁止或限制使用抗生素。有研究报道，抗
生素的促生长作用与动物肠道微生物菌群组成密
切相关［1］。近年来，开发促进动物生长及肠道发
育，调控肠道菌群组成，且毒副作用小、无残留的
绿色饲料添加剂成为研究的热点。多糖作为绿色
安全动物饲料添加剂和免疫增强剂已经被广泛应
用于动物饲养［2］。多糖广泛存在于动植物细胞
膜和微生物细胞壁中，是生命有机体不可缺少的
组成部分，并履行一系列不同的生理功能［3］。已
有的研究表明，多糖具有提高免疫力、抗肿瘤、抗
氧化、降血脂等生物学活性［4-5］。多糖能够以未
经消化的形式进入动物肠道，通过被微生物发酵，
给宿主提供短链脂肪酸(SCFA)、维生素和氨基酸
等［6］营养物质及能量需求，降低肠道 pH 值，维持
肠道微环境，同时促进乳酸杆菌和双歧杆菌等有
益菌的增殖，抑制沙门氏菌和致病性大肠杆菌等
有害菌的生长，改善动物肠道微生物菌群的结构，
促进肠道微生态平衡，进而提高动物健康水平、免
疫力和生长性能等。
树舌 Ganoderma applanatum (Pers． ex Gray．)
Pat．是灵芝属 Ganoderma药用真菌，含有多种化学
成分，主要包括多糖类化合物、甾体化合物、三萜
类化合物、脂类、氨基酸、微量元素等，其中研究最
多的是多糖类化合物［7］，有研究表明多糖组成成
分葡聚糖和甘露聚糖都具有调节动物肠道菌群平
衡的作用［8］。目前，树舌多糖多是从其子实体中
获得，但子实体生产周期长，容易受季节、气候及
地域等因素影响，限制了其开发与利用［9］。应用
液体深层发酵技术能够在短时间内获得大量的多
糖，具有适宜规模化、工厂化生产;生产周期短、产
量高、成本低;目的产物可控、产品质量稳定;不受
季节性及地域性的限制、对环境无污染等优
点［10-11］。吉林农业大学生物化学教研室沈思杰、
吴波等选用小刺猴头发酵浸膏及其多糖提取物为
肉鸡饲料添加剂，证实了它们对肠道菌群具有调
节作用，本试验选用树舌发酵浸膏(GAC)为试验
材料，以 AA 肉鸡为试验动物，研究日粮中添加
GAC对肉鸡盲肠微生物菌群和 SCFA 的影响，旨
在为 GAC在肉鸡生产中的应用提供理论依据。
1 材料和方法
1．1 试验材料
树舌发酵浸膏由吉林大学白求恩医大制药厂
提供，多糖含量为 3．18%。鸡沙门氏菌 S－5［12］由
吉林农业大学生命科学学院提供，鼠李糖乳酸杆
菌 ATCC 53103 由吉林农业大学动物科学技术学
院提供。
1．2 试验动物与设计
试验用 AA肉鸡购自吉林省梅河口市德坤禽
类食品有限公司，在吉林农业大学中药材学院经
济动物室进行肉鸡饲养试验，动物室在饲养之前
用甲醛和高锰酸钾密闭熏蒸消毒。选用 1 日龄
861
第 14卷 第 3期 丁国栋等:树舌发酵浸膏对肉鸡盲肠微生物菌群及 SCFA的影响
AA肉鸡 225只，随机分为 5 个处理组，分别为空
白组(基础日粮)、抗生素组(基础日粮中添加
5mg /kg黄霉素)、3 个剂量的 GAC 添加组(基础
日粮中分别添加 1． 57、3． 15 和 6． 29 g /100g 的
GAC)，每个处理 3 组重复，每组重复 15 只，试验
期 42 d。试验肉鸡分笼饲养，自由采食和饮水，进
行常规免疫，即 7 日龄、21 日龄时分别使用新城
疫弱毒苗免疫，14 日龄、28 日龄时使用法氏囊苗
免疫。日粮组成及营养水平见表 1。
1．3 盲肠食糜肠道菌群的检测
采用 SYBＲ Green I 实时荧光定量 PCＲ 法进
行检测。
1．3．1 DNA的提取 参照文献［13］，略有改动，
具体步骤如下:
(1)在无菌操作台中，将保藏的鸡沙门氏菌
S－5和鼠李糖乳酸杆菌 ATCC53103 接种到相应
的液体培养基中，密封，摇床过夜培养。取适量菌
液置于 2 mL 离心管，12 000 r /min 离心 10 min，
弃上清，保留沉淀。
(2)向沉淀中加入 200 μL丙酮，12 000 r /min
离心 5 min，洗涤沉淀 2 次，再用 200 μL TE 缓冲
液以 12 000 r /min离心 5 min 洗涤沉淀。向沉淀
中加入 50 mg /mL溶菌酶 3 μL，37℃水浴 1 h。向
离心管中加入 TE 缓冲液 600 μL、10% SDS 溶液
15 μL和 20 mg /mL 蛋白酶 K 3 μL，上下颠倒混
匀，37℃ 水浴 1 h。再加入 5 mol /L NaCl 溶液
100 μL、预热的 CTAB /NaCl 溶液 80 μL，充分混
匀，65℃水浴 20 min，期间反复颠倒数次。
(3)加入等体积的 V(Tris － Cl 平衡酚) ∶
V(氯仿)∶ V(异戊醇)= 25 ∶ 24 ∶ 1 溶液进行抽
提，反复颠倒几次，静置 5 min，12 000 r /min 离心
15 min，吸取上清液。再加入与上清液等体积的
V(氯仿)∶ V(异戊醇)= 24 ∶ 1 溶液，颠倒混匀，
静置 5 min，12 000 r /min离心 15 min，反复抽提直
至溶液中不出现白色薄膜为止。
(4)取上清液，加入 0．8 倍体积预冷的异丙
醇，反复颠倒，静止 1 h，离心管中应出现白色絮
状 DNA。
(5)用牙签挑取白色絮状 DNA 放入 200 μL
70%乙醇的离心管中，洗涤絮状 DNA，12 000 r /min
离心 5 min，弃上清，常温挥发 30 min，当离心管中
乙醇挥发完用 TE 缓冲液 50 μL 溶解，再加入
1 mg /mL ＲNaseA溶液 1 μL，37℃水浴 1 h，－20℃
保存备用。
(6)将左侧盲肠于冰水上解冻，称取肠道食
糜 0．2 g于 2 mL离心管中，加入 1 mL 无菌 PBS，
漩涡振荡混匀，3 000 r /min 离心 5 min，取上清于
另一无菌的离心管中，向沉淀中再加入 1mL 无菌
的 PBS，3 000 r /min离心 5 min离心取上清，合并
两次上清液，12 000 r /min 离心 10 min，弃上清，
收集菌体。食糜中细菌基因组 DNA 的提取见上
述步骤(2)～(5)。
表 1 日粮组成及营养水平 %
Table 1．Ingredients and nutrient level of experimental diet
项目
Item
0～21日龄
0～21 Days old
21～42日龄
21～42 Days old
原料
Ingredient
玉米 Maize 54．69 58．70
豆粕 Soybean meal 37．40 33．90
玉米油 Corn oil 3．50 3．50
蛋氨酸 Met 0．20 0．10
磷酸氢钙
CaHPO4·2H2O
1．90 1．30
石粉 Limestone 1．10 1．30
食盐 NaCl 0．21 0．20
预混料 Premixa 1．00 1．00
营养水平
Nutrient level*
代谢能 /
(MJ /kg)ME
12．45 12．64
粗蛋白 CP 21．18 19．97
钙 Ca 0．97 0．89
有效磷 AP 0．45 0．35
注:“* ”为计算值;“a”预混料为每千克基础日粮提供:维生素 A
1500 IU，维生素 B1 1．8 mg，维生素B2 3．6 mg，维生素B6 3．5 mg，
维生素 B12 0．01 mg，维生素 D3 200 IU，维生素 E 10mg，维生
素 K 0．5 mg，泛酸 10 mg，烟酸 35 mg，叶酸 0．55 mg，生物素
0．15 mg，胆碱 1300 mg，锰 60 mg，锌 40 mg，铁 80 mg，铜
8 mg，碘 0．35 mg，硒 0．15 mg
Note:“* ”The calculated values．“a”Premix provided per kg of diet:
vitamin A 1500 IU，vitamin B1 1．8 mg，vitamin B2 3．6 mg，vi-
tamin B6 3．5 mg，vitamin B12 0．01 mg，vitamin D3 200 IU，vi-
tamin E 10mg，vitamin K 0．5 mg，pantothenic acid 10 mg，nia-
cin 35 mg，folic acid 0．55 mg，biotin 0．15 mg，choline chloride
1300 mg，Mn 60 mg，Zn 40 mg，Fe 80 mg，Cu 8 mg，I 0．35 mg，
Se 0．15 mg
1．3．2 引物的设计 参照文献［13-14］，用软件
Primer Premier 5. 0 设计引物，引物由上海生工生
物工程有限公司合成，引物序列见表 2。
961
菌 物 研 究 2016年
表 2 实时荧光定量 PCＲ引物
Table 2． Primers used for real－time PCＲ
细菌种类
Bacterial type
目的基因
Target gene
引物序列(5－3)
Primer sequence (5－3)
产物大小 /bp
Product size
乳酸杆菌
Salmonella
16S rDNA
AGCAGTAGGGAATCTTCCA
CACCGCTACACATGGAG
341
沙门氏菌
Lactobacillas
16S rDNA
GTGGCGGACGGGTGAGTA A
CCGTGTCTCAGTTCCAGTGTG
231
1．3． 3 标准品的制备 参照文献［15］，用
AxyPrep DNA 凝胶回收试剂盒进行 PCＲ 产物的
回收，回收产物与 pMD 18－T Vector过夜连接，
连接产物进行转化，后采用 AxyPrep 质粒 DNA小
量试剂盒进行质粒提取。重组质粒经 PCＲ 及双
酶切鉴定，并在上海生工生物工程公司进行测序，
测序结果在 GenBank 经 BLAST 进行同源性比对
分析，目的基因成功转入质粒中，可作为标准品。
沙门氏菌:重组质粒的 DNA浓度为 107．7 ng /μL，
换算成目的基因的拷贝数为 3．36×1010copies /μL;
乳酸杆菌:重组质粒的 DNA浓度 157．4 ng /μL，换
算成目的基因的拷贝数为 4．73×1010 copies /μL。
重组质粒进行 10倍梯度稀释，进行检测。
1．3．4 荧光定量 PCＲ 反应体系及条件 沙门氏
菌:取 DNA 模板 1 μL，2 倍 All-in-One Qpcr Mix
10 μL，引物(10 μmol /L)各 0．4 μL、总反应体积
为 20 μL。95℃预变性 3 min;95℃变性 10 s，61℃
退火加延伸 30 s，共 45 循环;在每一个扩增循环
的温度段结束后检测荧光强度，最后进行融解曲
线监测。乳酸杆菌:取 DNA 模板 1 μL，2 倍 All-
in-One Qpcr Mix 10 μL，引物(10 μmol /L)各
0. 2 μL，总反应体积为 20 μL。95℃预变性 3 min;
95℃变性 30 s，64℃退火 30 s，72℃延伸 30 s，共
40循环;在每一个扩增循环的温度段结束后检测
荧光强度，最后进行融解曲线监测。
1．3．5 标准曲线的制作及肉鸡盲肠食糜中细菌
的定量检测 以沙门氏菌和乳酸杆菌梯度稀释标
准品 DNA作为模板，按本文“1．3．4”确定的荧光
定量 PCＲ 反应体系及条件进行实时荧光定量
PCＲ反应。标准曲线由荧光定量 PCＲ 仪自动生
成，横轴(X)为目的基因起始模板拷贝数，纵轴
(Y)为相应扩增曲线的 CT值。
以 21、42日龄 AA肉鸡左侧盲肠基因组 DNA
作为模板，进行实时荧光定量 PCＲ 反应。每个样
本做 3 次重复，扩增曲线的 CT 值取平均值，通过
标准曲线的线性关系可知每个盲肠样本中沙门氏
菌和乳酸杆菌目的基因的起始拷贝数(copies /
μL)，其结果最终表示为 lg copies /g。
1．4 盲肠短链脂肪酸与 pH值的测定
1．4．1 样品处理 方法参照文献［16-17］，略有
改动。取肉鸡右侧盲肠食糜 0．5 g于 2 mL离心管
中，编号，各管加入 1．25 mL超纯水，漩涡振荡 3～
5 min，充分溶解后 10 000 r /min离心 10 min，取上
清液 1 mL于 2 mL离心管中，加入 0．2 mL 25%偏
磷酸溶液，充分混匀并置冰水浴 30 min，以
10 000 r /min离心 10 min，取上清液 1 mL 于进样
瓶中，待测。如无法立即测定，可将样品处理后溶
液移入干净的离心管中，于－20℃冰箱保存，待上
机前，将样品溶液解冻，以 10 000 r /min 离心
10 min，取上清液于进样瓶中备测。
1．4．2 色谱条件 色谱柱:DB－FFAP 毛细管柱
(30 m×250 μm×0．25 μm);进样口温度 220℃;检
测器 FID，温度 250℃;柱温升温程序:初始温度
65℃，然后以 20℃ /min 升温速率升至 190℃，分
流比 25 ∶ 1;气体流速:载气为氮气;氢气 H2
40 mL /min;空气 400 mL /min;进样量:1 μL。
1．4．3 标准曲线的制作 混合标准溶液(混标):
40 mmol /L 乙酸，5 mmol /L 丙酸和 10 mmol /L 正
丁酸混合标准溶液。将混标 2 倍稀释，依次制备
5个不同浓度的标准溶液，分别取 1 mL 混标置于
1．5 mL离心管中，加入 0．2 mL 25%偏磷酸，漩涡
混匀，以 10 000 r /min离心 10 min，取离心上清液
1 mL于进样瓶中，使用安捷伦气相色谱仪 7890A
进行分析检测，记录峰面积，以峰面积(y)对浓度
(x)作标准曲线。
2 结果与分析
2．1 SYBＲ Green I 实时荧光定量 PCＲ 法检测
GAC对肉鸡盲肠菌群的影响
2．1．1 标准曲线的建立 沙门氏菌选用 3．36×
071
第 14卷 第 3期 丁国栋等:树舌发酵浸膏对肉鸡盲肠微生物菌群及 SCFA的影响
104 ～3．36×108的梯度标准品建立标准曲线，结果
见图 1，其结果为:Y = －3．322×lgX + 48．89，Ｒ2 =
0．996，Eff． = 100．0%，Ｒ2和扩增效率均符合实验
要求。乳酸杆菌选用 4．73×102 ～ 4．73×108的梯度
标准品建立标准曲线，结果见图 2，其结果为:Y =
－3．326×lgX+ 37．80，Ｒ2 = 0．998，Eff． = 99．8%，Ｒ2
和扩增效率均符合实验要求。
2．1．2 GAC对肉鸡盲肠食糜肠道菌群的影响
以食糜中细菌基因组 DNA作为模板，进行实时荧
光定量 PCＲ反应。测得 CT值见表 3，将 CT值代
入标准曲线，可知每个盲肠食糜样本中沙门氏菌
和乳酸杆菌目的基因的起始拷贝数 copies /μL，再
根据提取基因组 DNA所用食糜质量，计算食糜沙
门氏菌和乳酸杆菌的数量(表 4)。
GAC 对沙门氏菌的影响。在肉鸡 21 日龄
时，抗生素组沙门氏菌显著低于空白组(P ＜
0. 05)，说明抗生素在肉鸡生长早期可以抑制沙
门氏菌的生长;各 GAC添加组沙门氏菌显著低于
空白组(P＜0．05)，且随着 GAC 添加量的增加，
GAC对沙门氏菌的抑制越好，GAC 在肉鸡生长早
期可以抑制沙门氏菌的增殖;6．29%GAC 添加组
沙门氏菌显著低于抗生素组(P＜0．05)，说明高浓
度 GAC抑制沙门氏菌增殖的效果比抗生素好。
在肉鸡 42日龄时，1．57%和 6．29%GAC 添加组沙
门氏菌显著低于空白组(P＜0．05)，且 6．29%GAC
添加组对沙门氏菌的抑制较好，说明一定浓度的
GAC在肉鸡生长后期仍然可以抑制沙门氏菌的
生长;抗生素组沙门氏菌显著高于空白组(P ＜
0. 05)，说明抗生素在肉鸡生长后期对沙门氏菌
抑制性减弱，可能是沙门氏菌耐药菌株的产生造
成的。
GAC 对乳酸杆菌的影响。在肉鸡 21 日龄
时，各 GAC添加组乳酸杆菌显著高于空白组(P＜
0．05)，且随着 GAC 添加量的增加对乳酸杆菌的
促增长作用减小，说明 GAC对乳酸杆菌具有益生
作用;抗生素组乳酸杆菌与空白组相比无显著变
化(P＞0．05)。在肉鸡 42 日龄时，各 GAC 添加组
乳酸杆菌显著高于空白组(P＜0．05)，说明 GAC
在肉鸡生长后期仍具有对乳酸杆菌的增殖作用;
抗生素组乳酸杆菌显著低于空白组(P＜0．05)，说
明在肉鸡生长后期抗生素干扰了乳酸杆菌的
增殖。
图 1 沙门氏菌标准曲线图
Fig． 1． The standard curve for Salmonella
图 2 乳酸杆菌标准曲线图
Fig． 2 ．The standard curve for Lactobacillus
表 3 CT值
Table 3． CT value
细菌种类
Bacterial type
日龄
Days old
GAC添加水平 levels of dietary GAC
空白组 1．57%组 3．15%组 6．29%组
抗生素组
Antibiotic group
沙门氏菌
Salmonella
21
42
29．22±0．24c
32．12±0．19b
29．93±0．56b
32．23±0．28b
30．45±0．26a
31．72±0．21c
30．82±0．17a
32．89±0．22a
30．62±0．33a
31．14±0．26d
乳酸杆菌
Lactobacillus
21
42
23．71±0．49a
18．73±0．33a
20．22±0．22c
17．12±0．47c
20．61±0．20c
17．76±0．18b
22．33±0．44b
16．57±0．47c
23．98±0．46 a
18．60±0．25a
注:同行数据后所标字母相异表示差异显著(P＜0．05)，所标字母相同表示差异不显著(P＞0．05)。下表同
Note:Different letters in the same row means significant difference between the treatments (P ＜0．05)，the same letter in the same row means not
significant difference between treatments (P ＞0．05)． The same as below
171
菌 物 研 究 2016年
表 4 GAC对肉鸡盲肠细菌数量的影响
Table 4． Effects of GAC on the flora of caecum in broilers lg copies /g
细菌种类
Bacterial type
日龄
Days old
GAC添加水平 levels of dietary GAC
空白组 1．57%组 3．15%组 6．29%组
抗生素组
Antibiotic group
沙门氏菌
Salmonella
21
42
7．92±0．03a
7．04±0．02b
7．69±0．04b
6．90±0．04c
7．55±0．02c
7．10±0．03b
7．36±0．04e
6．77±0．03d
7．46±0．02d
7．34±0．03a
乳酸杆菌
Lactobacillus
21
42
6．23±0．06d
8．08±0．02c
7．40±0．05a
8．35±0．05a
7．23±0．04b
8．20±0．04b
6．85±0．05c
8．37±0．02a
6．33±0．02 d
7．90±0．04d
2．2 GAC对肉鸡盲肠短链脂肪酸的影响
2．2．1 乙酸、丙酸和丁酸标准曲线的绘制 以标
准乙酸、丙酸和丁酸的浓度为横坐标(x 分别为
x1，x2，x3)，以气相色谱测得的 3 种酸的峰面积为
纵坐标(y分别为 y1，y2，y3)，用 Excel 绘制标准曲
线(图 3)。结果表明，乙酸、丙酸和丁酸的峰面积
与其浓度呈现了较好的线性关系，回归方程分别
为 y1 = 9．4338x1 － 1．7516;y2 = 19．0195x2 － 0. 3199;
y3 =28．9938x3－0．9422;Ｒ
2值分别为 0．999 9，0．999 9，
1．0000。
图 3 乙酸、丙酸和丁酸标准曲线
Fig． 3． The standard curve of acetic acid，propanoic
acid and butyric acid
2．2．2 GAC对肉鸡盲肠短链脂肪酸的影响 将
气相色谱测得食糜样本的峰面积代入方程，计算
得到乙酸、丙酸和丁酸的浓度(表 5)。
GAC对乙酸的影响。在肉鸡 21 日龄时，各
GAC添加组和抗生素组乙酸浓度显著高于空白
组(P＜0．05);抗生素组乙酸浓度显著高于各 GAC
添加组(P＜0．05)。在肉鸡 42 日龄时，1．57%和
6. 29%GAC添加组乙酸浓度显著高于空白组(P＜
0．05);3．15%GAC添加组相比空白组能够增加乙
酸浓度，但差异不显著(P＞0．05);抗生素组乙酸
浓度显著低于空白组和各 GAC 添加组(P ＜
0. 05)。说明 GAC在肉鸡整个生长过程中能够增
加盲肠乙酸浓度，抗生素在肉鸡生长早期可以增
加盲肠乙酸浓度，但是在肉鸡生长后期降低了乙
酸浓度。
GAC对丙酸的影响。在肉鸡 21 日龄时，各
GAC添加组和抗生素组丙酸浓度显著高于空白
组(P＜0．05);抗生素组丙酸浓度低于各 GAC 添
加组，但差异不显著(P＞0．05)。在肉鸡 42 日龄
时，1．57%与 6．29%GAC 添加组丙酸浓度显著高
于空白组(P＜0．05);3．15%GAC 添加组相比空白
组降低了丙酸浓度，但差异不显著(P＞0．05);抗
生素组丙酸浓度显著低于空白组和各 GAC 添加
组(P＜0．05)。说明 GAC 在肉鸡整个生长过程中
能够增加盲肠丙酸浓度，抗生素在肉鸡生长早期
可以增加盲肠丙酸浓度，但是在肉鸡生长后期降
低了丙酸浓度。
GAC 对丁酸的影响。在肉鸡 21 日龄时，
6. 29%GAC添加组和抗生素组丁酸浓度显著高
于空白组(P＜0．05);1．57%与 3．15% GAP 添加组
相比空白组能够增加盲肠丁酸浓度，但差异不显
著(P＞0．05)。在肉鸡 42 日龄时，各 GAC 添加组
丁酸浓度显著高于空白组(P＜0．05);抗生素组丁
酸浓度相比空白组无显著差异(P＞0．05)。说明
GAC和抗生素在肉鸡整个生长过程中能够增加
盲肠丁酸浓度。
271
第 14卷 第 3期 丁国栋等:树舌发酵浸膏对肉鸡盲肠微生物菌群及 SCFA的影响
表 5 GAC对肉鸡盲肠短链脂肪酸的影响
Table 5． Effects of GAC on the SCFA of caecum in broilers μmol /g
日龄
Days old
项目
Items
GAP 添加水平 levels of dietary GAC
空白组 1．57%组 3．15%组 6．29%组
抗生素组
Antibiotic group
21
乙酸
丙酸
丁酸
22．07±1．22c
1．23±0．05b
4．12±0．20c
44．11±3．52b
3．34±0．20a
4．78±0．28c
48．20±2．55b
3．04±0．36a
4．52±0．29c
46．83±2．31b
2．93±0．20a
6．40±0．38b
66．43±1．43a
2．85±0．30a
11．63±0．83a
42
乙酸
丙酸
丁酸
33．13±0．62c
5．70±0．18c
4．64±0．24c
45．43±3．11b
7．40±0．27b
9．84±1．00a
35．88±1．44c
5．13±0．16c
6．49±0．15b
71．69±1．02a
9．74±0．34a
10．81±0．58a
20．34±3．38 d
4．30±0．12d
4．69±0．57c
3 讨 论
实时荧光定量 PCＲ 与传统细菌分离、培养、
鉴定法相比具有敏感、特异、简便、快速省时、实时
监测、定量准确等优点，主要有 SYBＲ Green I 染
料法和 TaqMan 探针法，TaqMan 探针法应用广
泛，特异性高，但是需要设计一个荧光探针，不仅
增加引物设计难度，而且价格昂贵、成本较高，而
SYBＲ Green I 染料法是常用且简单易行的方法，
需要添加融解曲线分析，成本较低。目前生乳、肉
制品、水果等中沙门氏菌定量检测报道较
多［18-19］，而应用 SYBＲ Green I染料法定量检测粪
便(食糜)中沙门氏菌报道较少，原因可能是粪便
成分复杂，微生物种类多，数量大，不易定量检测，
本试验成功建立肉鸡盲肠食糜中沙门氏菌的定量
检测，其 PCＲ扩增体系:DNA模板 1 μL，2倍 All-
in-One Qpcr Mix 10 μL，引物(10μmol /L)各 0. 4 μL，
共 20 μL;扩增程序:95℃ /3 min;95℃ /10 s，
61℃ /30 s，共 40循环;标准曲线为 Y = －3．322×
lgX + 48．89，Ｒ2 = 0．996，Eff． = 100．0%，最低检出
限为 102 copies /μL，融解曲线为单峰，变异系数为
1．45%。
近年来研究发现，真菌多糖具有改善肠道菌
群的作用，沈思捷等［20］研究饲粮中添加不同比例
的小刺猴头菌发酵浸膏多糖(HFP)对肉鸡肠道
菌群的影响，结果表明 HFP 能够显著增加肉鸡盲
肠 SCFA的浓度，显著提高肉鸡的回肠、盲肠中乳
酸杆菌和双歧杆菌的数量，降低大肠杆菌、沙门氏
菌和肠球菌的数量。杜金等［21］研究 HFP 酶解后
的寡糖对小鼠肠道菌群的影响，结果发现其酶解
得到的寡糖可以显著增加小鼠肠道中乙酸、丙酸
和丁酸的浓度，促进小鼠肠道中乳酸杆菌和双歧
杆菌的增殖，抑制大肠杆菌的生长。罗兰等［22］用
香菇多糖治疗肠道微生态失调小鼠，观察其对肠
道菌群的调节作用，发现治疗后小鼠肠道内双歧
杆菌、乳酸杆菌的数量显著增加，而大肠杆菌、肠
球菌的数量显著降低。本实验发现:1)在肉鸡日
粮中添加 GAC可以增加盲肠乙酸、丙酸、丁酸的
浓度，且效果明显。2)肉鸡日粮中添加 GAC可显
著抑制沙门氏菌生长(P＜0．05)，促进乳酸杆菌的
增殖(P＜0．05)。以上结果与前人研究基本一致，
说明 GAC在肉鸡肠道产生 SCFA，使肠道显酸性，
pH降低，乳酸杆菌增殖，沙门氏菌生长受到抑制，
具有改善肉鸡肠道菌群作用。推测原因可能是
GAC中含有多种成分，其总糖含量较高，多糖为
3．18%，而多糖被认为是一种非常重要的生物活
性物质，它可以被肉鸡肠道菌群发酵利用，促进肉
鸡肠道乳酸杆菌和双歧杆菌等有益菌群的增殖，
并产生大量乳酸、SCFA 等有机酸，维生素和氨基
酸等，这些物质参与肉鸡各种能量和物质代谢，降
低肠道 pH值，使其呈偏酸性，抑制不耐酸细菌及
其他致病菌的生长，保持肠道微生态平衡，从而促
进肉鸡肠道的发育。
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