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薏苡叶乙酸乙酯提取物体外抗活性氧自由基作用研究



全 文 :第 33 卷
Vol. 33
第 3 期
No. 3
微 量 元 素 与 健 康 研 究
Studies of Trace Elements and Health
2016 年 05 月
May 2016
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收稿日期:2015 - 10 - 14
基金项目:国家自然科学基金资助项目(No. 81160347);广
西壮族自治区百色市科学研究与技术开发计划第一批项目
(百 科 计 1001013 );广 西 自 然 科 学 基 金 项 目
(2013GXNSFBA019197)
作者简介:黄凯玲(1991 -),女,壮族,临床医学专业本科生,研究
方向:天然产物化学、药物化学、食品卫生。通迅作者:肖 刚,副教
授。
薏苡叶乙酸乙酯提取物体外抗活性氧自由基作用研究
黄凯玲1,黄建红2,黄锁义3,黎为能3,肖 刚3
(右江民族医学院:1.临床学院;2.检验学院;3.药学院:广西 百色 533000)
摘要:目的:测定薏苡叶乙酸乙酯提取液中多酚的含量,以及其提取液体外抗氧化能力的作用,为充分利用薏
苡资源提供理论依据。方法:用乙酸乙酯作溶剂,在 78℃水浴中超声提取 30 min,通过紫外分光光度法测定
薏苡中多酚的含量以及提取液清除羟自由基( ·OH) 、超氧自由基( ·O2 - ) 、1,1—二苯基—2—三硝基苯肼
( DPPH) 自由基能力。结果:薏苡叶提取液中含有较高的多酚,其提取液有较强的清除羟自由基( ·OH) 、超
氧自由基( ·O2 - ) 和 1,1—二苯基—2—三硝基苯肼( DPPH) 自由基的能力。结论:薏苡叶乙酸乙酯提取液有
较强的抗氧化能力,其抗氧化性随着提取液浓度的增大而增强。
关键词:薏苡叶;乙酸乙酯提取物;抗氧化
中图分类号:R284. 2 文献标识码:B 文章编号:1005 - 5320(2016)03 - 0004 - 02
薏苡,又称 薏黍、草珠儿,是禾本科草本植物,其种子又
名苡仁、薏米、薏珠子、水玉米。我国大部分地区均有分布,
多生于湿润的屋旁、池塘、河沟、山谷、溪涧或易受涝的农田
等地方,其性凉,味甘、淡,入脾、肺、肾经,具有利水、健脾、除
痹、清热排脓的功效。薏苡的一些提取物对动物艾氏腹水
癌、肉瘤 180、子宫颈癌有一定抑制作用,并对细胞免疫、体
液免疫有促进作用。其营养价值也很高,被誉之为“世界禾
本科之王”,含有丰富的蛋白质、脂肪、淀粉、糖类、维生素
B1、薏苡素、薏苡仁酯和亮氨酸、赖氨酸、精氨酸、酪氨酸等氨
基酸,薏米可用作煮粥、作汤,既能充饥、又有滋补作用[1,2]。
薏苡仁油既能兴奋呼吸,也能使肺血管显着扩张,从而减少
肌肉及末梢神经的挛缩及麻痹。薏苡仁素有解热镇痛之功
效[3]。薏米的叶,可以煎茶饮用,既清香,味也醇美。薏苡还
有养颜和美容功效,对年轻人身上或面部的瘊子,有很好的
疗效。有前人对其提取物的抗癌、抗肿瘤作用进行了研
究[4 ~ 6]。本实验通过测定其多酚的含量以及用 DPPH 法、
Feton法和邻苯三酚法对薏苡叶提取液抗氧化能力进行研
究,为进一步充分利用薏苡资源提供实验参考资料。
1 材料与试剂
1. 1 材 料
薏苡叶干品(产于百色市西林县,经右江民族医学院民
族中药学教研室刘春荣副教授鉴定),粉碎,于乙酸乙酯
78℃水浴超声 30 min,抽滤,将滤液转移至容量瓶中备用。
1. 2 试 剂
乙酸乙酯(分析纯):天津市百世化工有限公司;水杨酸
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(分析纯):成都市科龙化工试剂厂;盐酸(分析纯):廉江市
爱廉化试剂有限公司;30%过氧化氢(分析纯):天津市富宇
精细化工有限公司;硫酸亚铁(分析纯):国药集团化学试剂
有限公司;酒石酸(分析纯):天津市大茂化学试剂厂;Tris
(三羟甲基氨基甲烷):上海浦化有限公司;邻苯三酚(分析
纯):贵港遵义佳宏化工有限公司;DPPH(化学纯):东京化
成工业株式会社;实验室用水均为二次蒸馏水。
1. 3 实验仪器
722 可见光分光光度计:上海菁华科技仪器有限公司;
FA1004 天子天平:上海舜宇恒平科学仪器有限公司;
KQ5200DB型数控超声波清洗器:昆山市超声仪器有限公
司;马头牌 JYT - 5 架盘药物天平:上海医用激光仪器厂;
SHZ - D(Ⅲ))循环水式真空泵:巩仪市子华仪器有限责任
公司;紫外线分光光度计:岛津企业管理有限公司。
2 试验方法
2. 1 薏苡叶乙酸乙酯提取液的制备
将薏苡叶粉碎,精确称取 6 g 已粉碎的薏苡叶,加入乙
酸乙酯,在 78℃下水浴超声 30 min,抽滤,然后将滤液转移
至 100 ml的容量瓶中,用乙酸乙酯定容到 100 ml 备用。再
取上述溶液 1 ml于 10 ml的比色管中,加入一定体积的乙酸
乙酯定容至刻度,然后测其吸光度。
2. 2 酒石酸亚铁法测定多酚以及工作曲线绘制
取 11 支 25 ml的试管,标记序号,分别加入 1 mg /ml 的
没食子酸溶液 0、0. 25、0. 5、0. 75、1. 0、1. 25、1. 50、1. 75、2. 0、
2. 25、2. 5 ml,再往每根试管中加入水 4 ml 和刚配置好的酒
石酸亚铁溶液 5. 0 ml,用缓冲液定容至 25 ml刻度,摇匀,静
置 1 h后,在最大吸收波长为 549 nm处以空白对照作参比,
测其吸光度。以吸光度 A 为纵坐标,没食子酸浓度 C(μg /
ml)为横坐标绘出标准曲线并求出其回归方程。
2. 3 样品中活性物质多酚含量的测定
分别移取一定体积稀释一定倍数的提取液,用上述方法
测其吸光值,代入回归方程,求出浓度,按下列公式计算:
含量(μg /ml)= 浓度(μg /ml)× 稀释倍数 × 提取液体积
(ml)/原料干重 × 106 × 100%
尽量取多次提取液稀释后测其吸光值,求其平均含量。
2. 4 薏苡叶乙酸乙酯提取液体外抗氧化能力测定
2. 4. 1 羟自由基的清除(Feton法)
羟自由基(·OH)具有极强的氧化能力。本实验通过
Feton法来测定薏苡乙酸乙酯提取液的抗氧化能力。利用
H2O2 与 Fe反应产生羟自由基(·OH),基本反应如下:
H2O2 + Fe
2 +→·OH + OH - + Fe3 +
羟自由基在水杨酸环境中产生有色物质,该物质在 510
nm处有强吸收峰,可测出其吸光度。如加入抗氧化物质,则
会减少·OH的产生,即有色物质生成减少,吸光度降低。
试验方法:取 4 支试管,往每支试管加入 9 mmol /L Fe-
SO41ml、9 mmol /L水杨酸 -乙酸乙酯溶液 2. 0 ml,在其中 3
支试管中分别加入 0. 5、1. 0、2. 0 ml 的提取液,另一试管中
2. 0 ml蒸馏水作空白对照。最后往 4 支试管中加入 8. 8
mmol /L H2O2 2 ml开始反应,用乙酸乙酯定容至 10 ml,静置
1 h。以蒸馏水作参比,于 510 nm 波长处测其吸光度,并计
算其清除率:
清除率 =
A0 - As
A0
× 100%
式中: A0 为空白对照液的吸光度; As 为加入提取液后的
吸光度。
2. 4. 2 1,1—二苯基—2—三硝基苯肼自由基清除(DPPH
法)
DPPH在有机溶剂中是一种稳定的自由基,其乙酸乙酯
溶液呈紫色,具有单一电子,能接受一个电子或氢离子,与氧
化剂发生反应,提 H被还原。其在波长为 517 nm 处具有最
强吸收峰。
试验方法:取 8 支试管,编号为 1、2、3、4、5、6、7、8。在 1
号试管中加入 10 ml的乙酸乙酯溶液;2 号试管加入 2 ml 2
× 10 -4mol /L DPPH溶液,用乙酸乙酯定容至 10 ml;3、4、5 号
试管分别加入 2 × 10 -4 mol /L DPPH 溶液 2 ml 和 0. 5、1. 0、
2. 0 ml提取液,用乙酸乙酯定容至 10 ml;6、7、8 号试管分别
加入 0. 5、1. 0、2. 0 ml 提取液,加入乙酸乙酯定容至 10 ml。
摇匀,30 min后测上述 8 支试管中溶液吸光值。根据下面公
式计算清除率:
清除率(%)=
A对 - A样
A对
× 100%
=
(A对照 - A参比)-(A样品 - A样参)
A对照 - A参比)
× 100%
式中: A参比为加入乙酸乙酯时的吸光度值; A对照为加入
DPPH的自由基体系的吸光值; A样参为加入不同提取液后吸
光值; A样品为加入不同提取液和 DPPH·后自由基体系的吸
光值。
2. 4. 3 抑制邻苯三酚自氧化测定(邻苯三酚法)
邻苯三酚,又名焦性没食子酸,白色结晶体,其溶液可在
空气中发生自氧化反应。试验方法:取 4 支试管,分别加入
2 ml新配置的 pH = 8. 43 的缓冲溶液,在其中 3 支中分别加
入 0. 5、1. 0、2. 0 ml的提取液,再往 4 支试管中分别加入 1 ml
0. 2 × 10 -3mol /L邻苯三酚溶液,用水定容至 10 ml,在吸收波
长为 322 处每隔 30 s记录一次吸光值,测量时间为 4 min,每
支试管测得 8 个吸光值。
3 结果与讨论
3. 1 酒石酸亚铁法测定多酚及其曲线绘制结果
由 2. 2、2. 3 试验方法测得数据见表 1。
表 1 722 可见光分光光度计测多酚溶液吸光值
浓度 C
(μg /ml)
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
吸光
值 A
0. 207 0. 358 0. 404 0. 555 0. 659 0. 929 1. 091 1. 256 1. 404 1. 556 1. 704
由表 1 可绘制出多酚曲线图,求得回归方程为:A =
0. 0156C + 0. 1425(R2 = 0. 9904)
3. 2 薏苡中多酚含量的测定
按照试验 2. 2、2. 3,测出了薏苡中多酚的含量为:0. 12
mg /g。
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3. 3 薏苡叶提取液的抗氧化能力测定
按照试验方法 2. 4. 1、2. 4. 2、2. 4. 3 分别测了薏苡提取
液的抗氧化能力,结果见表 2。
表 2 不同体积薏苡叶提取液抗氧化性比较
样品加入
体积(ml)
DPPH法
清除率(%)
Feton法
清除率(%)
邻苯三酚法
清除率(%)
0. 5 91. 59 5. 33 8. 11
1. 0 93. 36 9. 33 10. 81
2. 0 95. 58 33. 33 37. 84
由表 2 可以看出:薏苡叶乙酸乙酯提取液对 DPPH·和
·OH的清除率以及对 O2 -·的抑制率随着提取液体积的增
大,即活性成分多酚的含量的增高,自由基的清除率以及抑
制率不断增强,两者之间呈一定的量效关系。而且,在相同
体积的提取液中,用不同的方法测得的薏苡叶提取液的抗氧
化能力表现为:DPPH·清除率 > O2 -·清除率 >·OH 清除
率。从上面结果说明,薏苡叶乙酸乙酯提取液具有较强的抗
氧化能力,尤其对 DPPH·的清除能力,且随着提取液体积
的增高,抗氧化能力也不断增强。
4 讨 论
人类生存的环境中充斥着不计其数的自由基,我们无时
无刻不暴露在自由基的包围和进攻中,它们对人体中的危害
较大,使人体产生各种各样的疑难杂症[7],如致衰老[8]、对
脑缺氧后再灌流的损害以及致动脉粥样硬化和脑血栓形
成[9,10]。随着人们生活水平的不断提高以及社会的不断发
展,人们对天然抗氧化物质的需求量也不断增加。从本实验
中可以看出,薏苡是一种非常好的天然抗氧化物质,这预示
着它在医学和人类健康事业上具有潜在的利用价值。
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收稿日期:2015 - 10 - 15
基金项目:2014 年牡丹江市科学技术计划项目(Z 2014 s
086)
作者简介:何 莉(1971 -),女,副主任护师,护理专业。
阿加曲班联合凯利康治疗急性脑梗死临床研究
何 莉,王 梅,张 昱,崔玉峰
(牡丹江医学院第二附属医院,黑龙江 牡丹江 157009)
摘要:目的:分析阿加曲班联合凯利康治疗急性脑梗死的疗效。方法:治疗组与对照组各选入急性脑梗死病
人 110 例,治疗组给予阿加曲班、凯利康标准剂量治疗,对照组给予奥扎格雷纳等药物治疗。结果:治疗前、后
两组神经功能缺损评分差异有统计学意义 ( P < 0. 05) 。结论: 阿加曲班联合凯利康治疗急性脑梗死疗效显
著,值得临床推广应用。
关键词:急性脑梗死;阿加曲班;尤瑞克林
中图分类号:R743. 3 文献标识码:B 文章编号:1005 - 5320(2016)03 - 0006 - 02
卒中是最常见的神经系统疾病之一,发病率、死亡率、复
发率和致残率均很高,其中 80%为缺血性卒中[1],所以缺血
性卒中是一种主要的死亡和残疾原因[2]。但针对急性缺血
性卒中的治疗方法目前还十分有限,我科现选用阿加曲班联
合凯利康(尤瑞克林)治疗急性缺血性脑卒中,临床观察 220
例,效果理想,现将结果报道如下。
1 资料与方法
1. 1 一般资料
选取 2013 年 1 月 ~ 2014 年 12 月期间患急性脑梗死的
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