全 文 ：JTCVM
年第 5 期2014
马蹄草提取液对标准菌株抑菌效果初探
翟少钦，付文贵，曹国文
（重庆市畜牧科学院，重庆 402460）
摘 要：用常规水煎剂、微波辅助提取、超声辅助提取 3种方法对马蹄草进行单因素提取，比较不同提取
方法所得提取液对大肠杆菌、沙门氏菌的抑菌效果。结果表明，超声波辅助提取法所得马蹄草提取液具有较好
的抑菌效果，通过二倍稀释法测得马蹄草提取液对大肠杆菌的最小抑菌浓度为 1∶8，最小杀菌浓度为 1∶4。
关键词：马蹄草提取液；大肠杆菌；沙门氏菌
中图分类号：S853.74 文献标志码：A 文章编号：1000-6354（2014）05-0051-02
DOI:10.13823/j.cnki.jtcvm.2014.05.018
收稿日期：2014-06-11
基金项目：基本科研业务项目（12609）；公益性行业科研专项(13203-1）
作者简介：翟少钦（1973-），女，副研究员，主要从事新兽药研发及
动物疫病防控。
通讯作者：曹国文，高级兽医师，主要从事新兽药开发研究。
马蹄草为多年生匍匐草本植物，常卷缩成团状，其茎
细长，结节生根，喜生于湿润的河岸、沼泽、草地。因其叶
子酷似马蹄状或半个铜钱，故称“马蹄草”、“连钱草”，《中
国兽药典》通用名为积雪草 [1]。传统医学认为马蹄草性味
苦，辛、寒，具有清热利湿、消肿解毒之功效，临床上用于
治疗腹痛、暑泻、痢疾、湿热黄疸、疔痈肿毒、跌打损伤等
疾病 [2]。在民间常有用马蹄草鲜草捣碎，开水冲调，口服治
疗小儿腹泻久治不愈，2-3 次即可，效果显著。
仔猪腹泻为仔猪常见病之一，造成仔猪存活率降低，生
长缓慢，虽然用抗生素也能有效地控制，但是由于兽医临床
抗生素的大量使用或滥用造成了细菌的耐药性增加。因此，
笔者等考察了马蹄草提取物的抗菌效果，以期从传统中草药
中寻找有效控制仔猪腹泻、又不会造成细菌耐药性产生的治
疗药物，并为马蹄草制剂的开发利用提供依据。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 试验药物 采集马蹄草鲜品，晒干、剪短，阴凉干
燥处保存备用。
1.1.2 试验菌种 大肠杆菌、沙门氏菌，由西南大学预防
兽医系惠赠。
1.1.3 试验器材 高压灭菌锅、无菌操作台、恒温振荡培
养箱、刻度试管、玻璃培养皿、移液管等。
1.2 方法
1.2.1 马蹄草提取液的制备
1.2.1.1 常规水煎剂 取马蹄草 200 g，加 10 倍蒸馏水浸
泡 30 min，电炉上煮沸后微火煎煮 15 min，纱布过滤，收
集滤液，残渣用同样的方法再煎煮 2 次，合并 3 次滤液，浓
缩至每毫升含生药 1 g。分装，100 ℃蒸汽流通灭菌 30 min，
冷却后 4 ℃冰箱保存备用。标记为 A。
1.2.1.2 微波辅助提取 取马蹄草 200 g，加 10 倍蒸馏水
浸泡 30 min，微波处理 3 min，纱布过滤，收集滤液，残渣
用同样的方法再处理 2 次，合并 3 次滤液，浓缩至每毫升
含生药 1 g。分装，100 ℃蒸汽流通灭菌 30 min，冷却后 4 ℃
冰箱保存备用。标记为 B。
1.2.1.3 超声辅助提取 取马蹄草 200 g，加 10 倍蒸馏水
浸泡 15 h，超声处理 60 min，纱布过滤，收集滤液，残渣用
同样的方法再煎煮 2 次，合并 3 次滤液，浓缩至每毫升含
生药 1 g。分装，100 ℃蒸汽流通灭菌 30 min，冷却后 4 ℃
冰箱保存备用。标记为 C。
1.2.2 马蹄草提取液抑菌试验 [3]
1.2.2.1 菌悬液的制备 大肠杆菌菌悬液制备：挑取单个
大肠杆菌菌落，接种于普通营养肉汤中，37 ℃恒温振摇培
养 8-12 h，取出，作 10 倍梯度稀释至 10-4，与浊度 5 号比
色管一致，作为试验用菌液浓度。
沙门氏菌菌悬液制备：挑取单个沙门氏菌菌落，接种
于普通营养肉汤中，37℃恒温振摇培养 12-16 h，取出，作
10 倍梯度稀释至 10-3，与浊度 5 号比色管一致，作为试验
用菌液浓度。
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SOD in groupⅠ(treated with Chinese herbal compound and vitamin ) and groupⅡ(only treated with Chinese herbal compound)
was significantly increased (P<0.01), while the level of MDA in the two groups was significantly decreased (P<0.01 or P<0.05). It
is concluded that Chinese herbal compound infusion could repair liver cells of chickens damaged by thermal stress, improve the
heat tolerance level and antioxidant function of the body cells, so as to protect the body from stress and peroxidation.
Key words: broilers; heat stress; cell repair; antioxidant effect; Chinese herbal compound
实
验
技
术
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Inhibitory effect of Herba Centellae extracting solution on standard strain of bacteria
ZHAI Shao-qin, FU Wen-gui, CAO Guo-wen
(Chongqing Academy of Animal Science, Chongqing 402460, China)
Abstract：Water decocting method, microwave-assisted extraction and ultrasonic extraction were used to obtained extracts
from Herba Centellae. Then antibacterial effects of different extracts were evaluated. The results showed that ultrasonic
extracts present good antibacterial effect with MIC of 1∶8 and MBC of 1∶4 against E.coli measured by double dilution method.
Key words：extracting solution from Herba Centellae; Escherichia coli; Salmonella
1.2.2.2 马蹄草提取液抑菌试验——打孔法 普通营养
琼脂平板，分别加入 200 μL 稀释好的大肠杆菌菌液或沙
门氏菌菌液，用灭菌 L 棒均匀涂布整个平板，然后用打孔
器在平板上呈“三角形”打孔，向各孔加入 A、B、C 三种药
液，液面一定要平，加完后平衡 10-15 min，置 37 ℃恒温
培养箱中培养，12-16 h 后观察结果，测定抑菌圈大小。每
种药液设 3 个重复。
1.2.2.3 马蹄草提取液抑菌试验——二倍稀释法 取 10
支灭菌刻度试管，编号 1-10，分别向 1-9 支试管加营养肉
汤 5 mL，10 号试管加入药液 5 mL；然后取 C 药液 5 mL
加入第 1 支试管，充分混匀后取 5 mL 加入第 2 支试管，
以此类推，直到 8 号试管，混匀后取 5 mL 弃去；最后除药
液管外，每管加入 0.5 mL 大肠杆菌菌液，混匀后置 37 ℃
恒温培养箱培养 14-16 h，取出观察细菌生长情况。取出
未变混浊的试管，每管划线接种 3 个普通营养琼脂平板，
置 37 ℃恒温培养箱中培养 24 h，观察是否有细菌生长。
1.3 抑菌效果判定
抑菌圈直径小于 10 mm为无抑菌效果（-）；10.1-15 mm
为中度敏感(+)；15.1-20 mm 为高度敏感(++)。
2 结果
2.1 马蹄草提取液抑菌试验结果——打孔法
结果见表 1。由表 1 可知，马蹄草提取液 A、B 对大肠
杆菌和沙门氏菌无抑菌作用；而马蹄草提取液 C 对大肠
杆菌和沙门氏菌具有良好的抑菌作用，根据抑菌圈直径大
小判定为高度敏感。
表 1 马蹄草提取液抑菌试验结果（打孔法）/mm
Table 1 Antibacterial effect of Herba Centellae extract
determined by punch method/mm
2.2 马蹄草提取液抑菌试验结果——二倍稀释法
结果见表 2。将 1-3号试管接种划线普通琼脂平板，置
37 ℃恒温培养箱中培养 24 h，划线 1号试管的平板无菌落生
长，划线 2号试管的平板上有菌落生长，但是小于 10个菌
落，故可以判定马蹄草提取液的最小杀菌浓度为 1∶4，划线 3
号试管的平板上有大量菌落生长，故最小抑菌浓度为 1∶8。
表 2 马蹄草提取液抑菌试验结果（二倍稀释法）/mL
Table 2 Antibacterial effect of Herba Centellae extract
determined by double dilution method/mL
3 结论
3.1 马蹄草提取液 C 对大肠杆菌和沙门氏菌标准菌株具
有良好的抑菌作用。这可能是因为马蹄草有些成分能够改
变大肠杆菌、沙门氏菌的细胞壁结构，增加细胞壁的通透
性，从而导致细菌死亡。
3.2 马蹄草提取液 C 对大肠杆菌的最小杀菌浓度为 1∶4，
最小抑菌浓度为 1∶8。
3.3 从抑菌效果来看，3 种提取方法中，超声提取方法效
果最好。这可能是因为超声波使细胞膜产生空穴作用而使
细胞破碎，马蹄草中的有效成分能充分地释放出来，从而
使马蹄草中对大肠杆菌、沙门氏菌有效的成分如积雪草苷
的提取率提高。这一结果与相关文献报道 [4-6]一致。
参考文献：
[1] 中国兽药典委员会 . 中国华人民共和国兽药典·二部
[M].北京：中国农业出版社，2010：392.
[2] 徐 皓，李新生，吴三桥．积雪草药理作用的研究[J].氨
基酸和生物源，2005，27(2)：17-20.
[3] 张胜华，余兰香，甑瑞贤，等.积雪草苷的抗菌作用及对
小鼠实验性泌尿系统感染的治疗作用[J].中国新药杂志，
2006，15（20）：1747-1749.
[4] 侯文砚，沈 宁，高仁孝.积雪草提取工艺的研究[J].应
用化工，2011，40（4）：679-681,686.
[5] 陈 瑶，韩 婷，秦路平，等.正交设计法优选积雪草总
苷的提取工艺[J].中药材，2003，26（3）：204-205.
[6] 张 炜.积雪草总苷提取工艺和含量测定研究[J].泸州
医学院学报，2008，31（5）:498-500.
大肠杆菌 沙门氏菌
A
B
C
0
0
19
0
0
19
药液
管号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
肉汤
药液
菌液
结果
5.0
5.0
0.5
±
5.0
5.0
0.5
－
5.0
5.0
0.5
－
5.0
5.0
0.5
+
5.0
5.0
0.5
+
5.0
5.0
0.5
+
5.0
5.0
0.5
－
5.0
0.5
+
5.0
5.0弃 5.0
0.5
+
5.0
－
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