全 文 ：画 Ｓ技ｌ科技文苑
人参花多糖抗氧化活性研究
Ｈ□ 万茜淋 焦丽丽 马 林 刘淑莹 长春中医药大学吉林省人参科学研究院
刘淑莹 中 国科学院长春应用化学研究所
摘 要 ： 采用热 水浸提法从人参 花 中提取 的人参花粗 多 糖 ， 经过分 离 纯化获
＾１＾得人参花精制 多 糖 。 通过对二笨代苦味酰基 自 由 基清除率 、 清除羟 自 由基活性 、 金
属 离 子螯合能 力 以 及铁 离 子还原 能 力 測 定一系 列体外抗氧化 实验 ， 评价人参花 多
糖 的体外抗氧化能 力 。 试验结 果表明 ： 人参花 多 糖清除对二 苯代苦味酰基 自 由 基
能 力和羟基 自 由基能 力随着 多 糖浓度 的增加而提高 ， 人参花 多 糖浓度在 ０ ． ５ｍｇ／ｍＬ
时 ， 对二 苯代苦味跣 基 自 由 基清除率 高达 ６８ ． ３６％ ， 浓度在 １ ５ｍｇ／ｍＬ 时 ， 对羟基
自 由 基的清除率达到 ５５ ． ５９％ 。 同 时 ， 当人参花 多 糖浓度 为 ７ ． ５ｍｇ／ｍＬ 时 ， 金属 离
子螯合能 力 高达 ６ ８ ． ３２％ ， 还原 能 力測 定 １ｍｇ 人参花 多 糖 的抗氧化能 力 与 ５ ． ５ｍｍｏｌ
的硫酸亚铁溶液相 当 。 由此得 出 结论 ， 人参花 多 糖具有较强 的体外抗氧化 能 力 。
关键词 ： 人参花 ； 多 糖 ； 抗氧化活性
人参 （ Ｐａｎａ ｘＧ ｉｎｓｅｎ ｇＣ．Ａ ． Ｍｅｙｅ ｒ ）１ 材料与方法１ ．３ ．２ 二苯代苦味酰基 － 自 由基的
是五加科人参属植物 ， 是一种 药用价１ ． １ 材料与试剂 清除作用测定
值极高并且应 用甚广的传统名贵 中草人参花采集于 中 国吉林省 白 山市在二苯代苦味酰基 － 自 由基 中 加
药 ， 具有补气镇静等功效。 多糖是人 抚松县人参种植基地 （ 经长春 中医 药 入无水乙醇 ， 配置成 〇 ， １ｍｍｏ ｌ／Ｌ 的 二
参 中 的主要有效成分之一 ， 水溶性多 大学王淑敏教授鉴定 为五加科棺物 苯代苦味酰基 ＿ 自 由 基溶液 ， 避光保
糖在人参 中 占 １ ０％ ？ １ ５％。 多糖广泛 人参 Ｐａｎ ａｘＧ ｉｎｓｅｎｇ＾干燥花蕾 ） ， 实 存备 用 。
存在于 自然界 ， 近年来 ， 植物 多糖引 验室 自 制人参花多糖干燥品。１ ． ５ｍＬ 二苯代苦味酰基 － 自 由基
起人们的关注 ， 多糖在抗氧化 、 抗肿瘤 、９５％ 乙醇 、 无水乙醇 、 ＮａＣ ｌ 、 ＫＣ １ 、溶准 ＋４ ． ５ｍＬＧＦＰ 溶液 ， 混合物避光
抗病毒 、 降血糖和提 局免疫力方面都Ｎａ ２Ｈ Ｐ０４ 、 ＫＨ２Ｐ〇 ４、 Ｈ２〇２ 和 ＦｅＳ０４ 购 于北 反应 ｍ ｉｎ 后 ， 利用紫外分光光度计
具有一定的生物活性。 人参多糖逐渐 京化工厂 ． 三氯乙酸购于天津市光复 在 ５ １ ７ｎｍ 波长处检测吸光值。 反应物
被学者们研究 ， 药理学研究发现人参 精细化工研究所 ； 硫代巴 比妥酸购于 的吸光值越低 ， 表示样品对二苯代苦
多糖具有抗肿瘤 、 降血糖等作用 。国药集 团化学试剂 有限公司 ； 去氧核 味醜基 ＿ 自 由基清除的能力越好。
人参花是人参的花序 ， 采集于每 糖 、 乙腈 、 二苯代苦味酰基购于 Ｓ ｉｇｍａ用蒸溜水作为 空 白 对 照 ， Ｖｃ作为
年 ６ 月 。 经研究发现 ， 人参花 中具有 公司 ； ＥＤＴＡ－Ｎａ２、 Ｖｃ 购 于北京鼎 国 昌 阳性对照 ， 清除二苯代苦味酰基 － 自
和人参根中 相似的成分 ， 同样含有 多 盛生物技术有限责任公司 ； 菲洛曝 、 由基的能力计算公式为 ：
糖成分 ， 但是 多糖 成分 比例稍有 不 三 三 ｕｙ嗪 （ ＴＰＴＺ ） 购于东 京化成一苯代苦味酰基 － 清除率
同 。 目前 ， 对于人参花 多糖 （ Ｇ ｉｎ ｓｅｎｇ工业株式会社。＝ （ １ － 样品吸光度 ／对照品吸光度 ）
Ｆ ｌｏｗｅｒＰｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ ，ＧＦＰ） 的 研究１ ２仪器与设备 ｘ１ ００％（ １ ）
较少 ， 对人参花多糖的羟 自 由基等抗＋ １ ． ３．３ 羟基 自 由基的清除作用测定
氧化作 用的研究在国内外 尚未见报道。 反应缓 冲 液 ： ０ ．２Ｍ 磷酸 缓冲 液
本课题组采 用热水浸提法 ， 获得人参 寺 声 、＋ 十士：丄 、ａ 田付 哭 （ ｐＨ＝７ ．４ ） ， ２． ６７ｍＭ 去氧核糖 ， ０． １ ３花粗多糖 ， 进－步分离纯化处理 ， 获 啲 瞧。
得人参花精制 多糖 。 对样品进行体外右 ＲＢ 八＝！Ｆ＾反应溶液 ： ０． １ｍ ＬＧＦＰ样 品溶液
抗氧化能 力检测 ， 测定 ＧＦＰ 对二苯代ｒ：：古 ５二 ； 、 ＋０－ ６ｍ Ｌ反应缓冲液 ＋ ０．２ｍＬ〇．４ 咖硫
苦味酰基 自 由基清除率 、 清除羟 自 由 八胃
问，Ｌ＇ ：酸亚铁盐 ＋０ ．０５ｍＬ１２ｍ ＭＶｃ作为 阳性
基活性 、 金属离子螯合能 力 以及铁离
彳 ３
—＝Ａ° °对照 ＋０ ．０５ｍ Ｌ２０ｍＭＨＡ ， 混合制成。
子还原能力 ， 评价人参花 多糖的体外ｉ ｎ ｉｔ＂
＾混合物 ： 反应溶液 ３７ 弋水 浴 １ ５
抗氧化活性。 本研究对揭示人参花的 １ －３ ． １ ｍ ｉｎ＋ １ｍ Ｌ１ ％ 硫代 巴 比 妥 酸 ＋ １ｍＬ
药用价值和抗氧化机理尤为重要 ， 为
、 ｆ花粉碎— ９５％ 乙＾回 －ｊ：离 ２． ０％ 的三氯醋酸 ， 将此混合物沸水浴
人参花的功能成分研究以及进一步开 心— ？沉淀
ｚ
干燥—水提—醇沉—沉淀复 １ ５ｍ ｉｎ ， 冰水冷却 ， 用紫外分光光度
发利用提供理论依据 。 计在 ５３２ｎ ｍ 波长下检测吸光值。 反应
１ ４６ 食品安全导刊 ２〇１阵６月
DOI 牶牨牥牣牨牰牥牬牫牤j牣cnki牣cf s牣牪牥牨牰牣牨牳牣牨牥牬
科技文苑 Ｉ
物 的吸光值越低 ， 表示样品对羟基 自 子团 ， 它们是机体正常代谢的 产物 ，的诱发与抑制 、 肌肉收缩 、 神经传导 、
由基的清除能 力越好。在体 内 有很强 的氧化反应能力 ， 易 对 细胞吸附 、 基 因表达有着密切的关 系 。
用 蒸馏水作为空 白 对照 ， 清除羟 蛋 白 质 、 脂质和核酸等产生伤害 ， 从 自 由 基 中 以氧 自 由基堆积体的危害最
基 自 由基的能 力计算公式为 ：而造成机体损伤。 因此 ， 对 Ｇ ＦＰ 的 二 大 ， 例如超氧 自 由基和羟基自 由基 。
羟基的百分抑制率 苯代苦味酰基 － 自 由基和羟基 自 由 基羟基 自 由基是＿种氧化性很强 的
＝
（ １
－样品吸光度 ／对照品吸光度 ） 清除作用进行 了考察 ， 并测定其金属自 由基 ， 可以引 发不饱和脂肪酸发生
ｘ ｌ ＯＯ ％（ ２ ）离子螯合能力和还原能力 。脂质过氧化反应 ， 使糖类 、 蛋 白 质 、
１ ． ３． ４ 金属离子螯合能力 的测定２ ． １ＧＦＰ 对＝苯代苦味酰基 － 自由基的 核酸及脂类等发生氧化损伤 。 研究表
１ｍ ＬＧＦＰ 溶液 ＋３＿ ７ｍ Ｌ 甲醇 ＋０ ． １清除彳乍用明 ， 肿瘤 、 心血管 、 衰老等许多疾病
ｍ Ｌ２ｍＭＦｅＣＶ４Ｈ２〇＋０ ＿２ｍＬ５ｍ Ｍ 菲 味ｆｔ某 － 自 由 甚 曰 很转 与 自 由 基相 关 。 因 此 ， 羟基 自 由 基常洛嗪 ， 摇句混合液 ， 静置 １ ０ｍ ｉｎ ， 用 ，上之 作为检测物质抗氧化能力 的重要指标。
紫外分光光度计在 ５６２ｎｍ 波长下检测ｎ＾目前 ， 常见的检测方法有分光光度法 、
吸光值。 反应物 的吸光值越低 ， 表示 競法 、 化学发光 法等 。 本研究賴
样品螯合亚铁离子的能力越强 。
、
紫 外分光光度法 ， 对 Ｇ ＦＰ 样品 的经基
用 蒸馏水作为 空 白 对照 ， 金属离
—某二某 〇＊麻其 ＇本 中 自 由基清除作用进行评价 。
子螯合能力计算公式为 ：＾ ＿ ２ 可 知 ， 羟基 自 由 基清除率
金属离子螯合能力 田 少 与溶液浓度 呈 剂量依赖性 。 从 ｇｆ ｐ 与
＝
（ １ — 样品吸光度 ／对照品吸光度 ） ＝ｖｃ 对ｇ基自 由基清除率 的对比可知 ，
ｘ腦（ ３ Ｇ ＦＰ 浓度范 围在 ⑶ ￣９ ． 〇－ Ｌ 时 ，
１ ．３ ． ５ 铁离子还原能力 的测定够性 、束 二＝於■ 对轻基 自 由基的清除效果比 Ｖｃ 更好。采 用 ＦＲＡＰ 法测定人参花多糖样品 ＿  ＇浓度高于 ２． ５＿Ｌ 时 ， 对轻基
的还原能力 。 首先 ， 绘制 Ｆｅ Ｓ０４ 标准 曲 ＾自 由麵清除率达到■ 以上 。 其 中 ，
线 ： 配制 ８＿〇 １ ／ＬＦｅ ＳＭ示准溶液 ， 当 浓度为 １ ５＿ Ｌ 时 ， 缝 自 由基的由 图 １ 可 知 ， 从 Ｖｒ 与 ＧＦＰ 对＿苯依次配成 ７ ．２ 、 ６ ．４ 、 ５ ．６ 、 ４ ． ８ 、 ４ ＿０ 、 ３ ．２ 、 ＾ 清除率高达 ５ ５ ． ５９％ ， 自 由基清除作用
０， ，ｃｎ ｏ丨 丑货 冰 片人 代苦味酿基 － 自 由基清除率的对比情ｄ ｔ ？ 。 口Ｂ
）兄看来 ， 二 苯代苦味酰基 － 自 由翻
Ｉ
平 ｔｒ试验 ’１ｉ ｊｆｒ＇ 清除率与溶液浓度呈 剂量依赖性 ， 而 ？ 一准 曲线 ０—＋且 当 ＧＦＰ 浓度范 围在 ０． １￣１ ．０ｍｇ／ｍＬ？ ——一＿＾二二一 ？０ ．３ｍＬＧＦ Ｐ 溶液 ＋２ ．７ｍＬＦＲＡ Ｐ 工＾甘，
〇 －， 〇〇＼ ４＾ ＾ 、日Ａ ｔ时 ， 对一本代古味酰基 ＿ 自 由基清除３５ ｙ ＇作液 （ 提刖预热 ３ ７弋 ） ， 摇匀混合液 ， ｔ ＨＭ＿ｎ＾ ，
＿ ？ｍ 此 从 八 、 丨， 立 、丄 ＋率最 咼达到 ６０％ 以上。 如图 １ 所不 ， Ｓ ３０ ．？一 －Ｖ静置 １ ０ｍ ｉ ｎ ， 用 紫外 分光光度计 在 业 ｍ 、＋ 总 土ｎ 「 ／■ｄ―普化＊Ｉ － ．－ ｖｃ
、山 丨 ， 上人 … ”一 此 ■ 丄ａ” 丨， 当 Ｇ ＦＰ 浓度为 ０ ． ５ｍｇ／ｍＬ 时 ， —苯代苦ｆ …／— ｇｆ ｐ
５９ ３ｎｍ 波长下检测吸光值 。 根据吸光 吐紙甘 甘 、主 丨 丨 曰 田－ ？
ｃｎ味酰基 — 自 由基清除率达到最好效果 ， ／值 ， 在标准曲线中获得相应 ＦｅＳ０ ４ 的浓４ｍ ０ ．７０ｏ〇 ． ％ ５〇／ 〇〇度 ， 定义为ＦＲＡ Ｐ值 ， 该值越大说明还 ｒ－，
？２０２ ４ （Ｉ ８１ ０） ２１ ４１ ０原能力越强。 ７ ＜＞ ＊
］
Ｃｏｎ ｃｅｎｔｆａ ｔｉ ｃ？ｎｍｇ ／ｍ ｌ
用蒸馏水 中加入 Ｆ ＲＡ Ｐ 工作液作为＾ ？图 ２ＧＦ Ｐ 对羟基 自 由基清除率
无还原能 力的空白 对照 。广一２ ． ３ＧＦＰ 的金属离子螯合能力
１ ．４
｜
， ． － Ｉ 螯合作 用是具有两个或两个 以上
采 用 统计学软件 ＳＰＳＳ１ ３ ．０ 对实ｆ Ｍ ：！ ／： ：：＾配位原子的多齿配体与 同一个金属离
验数据进行处理 ， 计算平行样品 的吸’Ｘ７＼ 子形成螯合环的化学反应 。 虽然生物
光 度平 均值 ， 得 到 回 归方程 。 使 用：
丨 体生长发育过程 中 需要金属元素 ， 但
Ｏｒ ｉｇ ｉｎ７ ５软件绘图 ， 得到最终的数据 ： ° ２＂＇ ＊是过多金属离子的存在会有一定危险 ，
图表 。图 １ＧＦＰ对二苯代苦味酰基清除率 金属离子是导致脂质过氧化作用 的重
２ 结果与讨论２ ． ２ＧＦＰ 对羟基自由基的清除作用要 因 素之＿ ， 二价铁离子 （ Ｆｅ ２ ＜） 是脂
自 由 基 ’ 也称为 游离基 ’ 是娜＇活性氧参与 了许多 重 要的生命ａ 质过氧化过程 中 重要的助氧化 别 ’ 促些游离存在 的 ， 含有 １ 个或 １ 个 以上 碎 进脂质过氧化过程的 发生 。 因此 ， 考
不配对 电子的分子、 离子 、 原子親 程 ’ 与 细胞增殖 、 分化＇ 壯、 ＿ 察 了ＧＦ Ｐ 对 二价铁离子 的金属离子螯
Ｊｕｎ ．２０ １ ６ＣＨ ＩＮＡＦＯＯＤＳＡＦＥＴＹ ］ ４７
＿科技文苑
合能力 。是通过 自 身 的还原作 用 ， 给出 电子而 的形态功能产生影 响 ， 从而 引 起机体
由图 ３可知 ， Ｇ Ｆ Ｐ 的金属离子螯合 清除 自 由基的 ， 某种物质的还原能力 疾病 ， 甚至死亡 。 肝肾炎症及损伤 、 冠
能 力 与 ＧＦ Ｐ 浓度呈正相关 ， 螯合能 力 越强 ， 其抗氧化性越强 。 因 此 ， 本研 心病 、 高血脂症等都与 自 由基失 衡有
随着 ＧＦＰ 溶液浓度的增加而增强。 在 究采用 Ｆ ＲＡＰ 法检测 Ｇ ＦＰ 样品 的还原能 关 。 因 此 ， 寻找 自 由基清除 剂和抗氧
ＧＦＰ 浓度为 ２ ．５ｍ ｇ／ｍ Ｌ 时 ， 螯合能力达 力 ， 以 此证明 ＧＦ Ｐ 的抗氧化活性 。 实 化剂对于疾病的预防和治疗意义重大 。
到 ５０％ 以 上 ， 为 ５４ ． ５５％ 。 当 ＧＦＰ 浓度 验检测 到样品 的吸光值越大 ， ＦＲＡＰ 的近年来 ， 植物 多 糖在研究 中 表现
为 ７ ． ５ｍｇ／ｍＬ 时 ， 金属离子螯合能 力高？就越大 ， 说明样品的抗氧化活性越高。 出 了 较强 的抗氧化活性 ， 这很可能作
达 ６８ ． ３２％ 。 因此 ， 本实验结果证实 ，配 制 一定 浓度 的 硫 酸 亚铁 溶液 为 植物 多糖抗衰老 、 抗肿瘤 、 降血脂
ＧＦ Ｐ 具有很好的金属离子螯合能力 。 （ Ｆｅ Ｓ ０４ ） 标 准溶 液 ， 每 个 浓 度进行 以及抗 炎症等功 效研究的 重 要 突破
３ 次平行试验 ， 相 同浓度取平均值绘 点 。 ＾ 是 目 前研究 中公认的抗氧化活
图 ， 获得 Ｆｅ Ｓ０ ４ 标准 曲 线 ， 如 图 ４ 所 性较强 的物质 ， 因此 ， Ｖｃ 常作为 抗氧
＿示。 得 出 方 程 ｙ＝０ ．０８５ ２ｘ＿０ ．０ １ ６ ４ ，化研究 中 的对照品 ， 但是其易在空气
■
ｚ— １ １ ＇＇Ｒ２＝０ ．９ ９９５。 实验 结 果 显 示 ， １ｍｇ 人 中氧化 。
＾ 参花多糖的抗氧化能力与 ５ ．５ｍｍ ｏ ｌ 的根据上述实验结果 ， 人参花 多糖
１？一… ＾ Ｆｅ Ｓ０４ 溶液相 当 。 由此可见 ， ＧＦＰ 具有 的抗氧化活性作 用 明显 ， 在二苯代苦
｜
Ｊ ０
；ｌ ／ 极强的还原能力 （ 抗氧化活性 ） 。味酰基 － 自 由基清除作用研究中 ， 人
Ｉ
…〇 ． ７ １参花多糖与 Ｖｃ 的抗氧化活性相差无几 ；
－ ０ ６－ ｙ＝〇 ．〇８５Ｚ ｘ － ０ ． ０ １ ６４在对羟基 自 由基 的清除作用研究 中 ，
ｓ０ ５ ＂Ｒ＂ ０ ９ ９９ ５ 人参花多糖的清除能 力甚至高于 Ｖｃ 的Ｃ ｃｍｃ ｅｏ ｉｒ ａｔ ｉｅｏｍｇ ／ｍｉ５ Ｃ ｉ ４． －
ｓ ＇ ／活性 ； 人参花 多糖还具有较好的金属
＜０． ３ －
图 ３ＧＦ Ｐ 的金属离子螯合 能力ａ２ ＿， 离子螯合能 力和较高的还原能力 。 因
２ ．４ＧＦ Ｐ 的铁离子还原能力测定 ａ ｉ＾ 此 ， 需要深入研究人参花 多糖的抗氧
ＦＲＡＰ 法是基于氧化还原反应的 比〇丨 ，￣￣ 化活性作用机理 ， 为人参花 多糖功能
色法 。 在低 ｐＨ 值溶液中 ， 抗氧化剂还 ａ２４６８的深入研究以及人参花 多糖的产品开
原 Ｆ ｅ３＋－ＴＰＴＺ 复合物 ， 形成蓝色 Ｆｅ２＋－Ｃｏｎ ｃｅｎｔｒａｔ ｉｏｎ ｏ ｆ ＦｅＳＯ，ｍｍｏ ｌ／Ｌ发奠定理论基础。
ＴＰＴＺ 溶液 ， 用紫外分光光度计检测 ，图 ４ＦｅＳ０ ４ 标准 曲线 基 金项 目 ： 国 家 自 然科学基金面
在 ５９３ｎ ｍ 处有最大吸光度 ， 增加的吸３ 结论上 项 目 （ 编 号 ： ０ ２ ０ ９ ０ １ ０ ６ ） ； 吉 林
光度与总的抗氧化剂能力成正 比 。在机体 内 环境平衡的状态 下 ， 自 省科技发展计 划 项 目 （ 编 号 ： ２ ０ １ ３ ０
ＦＲＡ Ｐ 法最初 用 于 测 量血浆 的 活 由基在抗菌 、 消炎和 抑制 肿瘤等方面２ ０ ６ ０ ５ ９ ＹＹ ） ．
性 ， 后来逐渐 用于测定生物体液、食品 、 具有重要作用 和意义 。 一旦平衡被打作者简介 ： 万茜淋 （ １ ９ ８ ７－ ） ， 女 ，
植物提取物等的抗氧化活性。 该方法 破 ， 如机体受 到疾病或某些外源性药 吉林吉林人 ， 硕 士 ， 助理 实验师 。 研
操作简单快速 ， 重复性好 ， 准确度高 ，物和 毒物的侵害 ， 自 由基便会产生强 究方 向 ： 生物化学 、 分子生物学 。
易于标准化。 利 用 紫 外分光光度计或 大 的伤害作用 ， 造成生物膜的脂质过通讯联系人 ： 刘淑 莹 （ １ ９ ４ ３－ ） ，
酶标仪 ， 仅在半小时内 即可完成样品 氧化损伤 ， 引 起酶 、 氨基酸 、 蛋 白 质 吉林长春人 ， 博士 ， 研究 员 。 研究方向 ：
的还原能力 测定。 抗氧化剂 （ 还原剂 ） 的氧化破坏 ， 对 内 脏器官 、 免疫系 统 中 药化学分析 。
１ ４ ８ 食品安全导刊 ２０ １ ６年６月