免费文献传递   相关文献

人参花与黄芪、麦冬配伍的研究



全 文 :* 通讯作者 Tel:(0431)86045467;E - mail:yuehao@ sohu. com
人参花与黄芪、麦冬配伍的研究
宋莉1,王洋2,张竹1,孙一2,于擎2,越皓2*
(1.长春市食品药品检验所,长春 130012;2.长春中医药大学 吉林省人参科学研究院,长春 130117)
摘要 目的:研究人参花与黄芪、麦冬配伍后的主要化学成分变化和免疫力活性实验。方法:建立快速、灵敏的液相色谱方
法,定量分析人参花中的人参皂苷 Rd和 Re。通过药理学方法考察人参花配伍前后对免疫力的影响。结果:人参花与黄芪、麦
冬配伍后,人参皂苷 Rd和 Re的含量增加,与人参相关配伍趋势相似,但皂苷含量远高于人参根。人参花配伍后具有提高免
疫力作用,优于人参根配伍。结论:建立的液相色谱方法可用于含有人参皂苷的药材和方剂定量分析。人参花与黄芪、麦冬
配伍具有提高免疫力的功能。
关键词:人参花;黄芪;麦冬;配伍药理;提高免疫力;药理学作用;人参皂苷 Rd;人参皂苷 Re;定量分析;高效液相色谱
中图分类号:R917 文献标识码:A 文章编号:0254 - 1793(2013)12 - 2114 - 05
Study on compatibility of ginseng flower with astragalus and liriope
SONG Li1,WANG Yang2,ZHANG Zhu1,SUN Yi2,YU Qing2,YUE Hao2*
(1. Changchun Institute for Food and Drug Control,Changchun 130012,China;
2. Changchun University of Chinese Medicine,Changchun 130117,China)
Abstract Objective:To study the main chemical composition change and the effect of immunity activity improve-
ment after the compatibility of ginseng flower with astragalus and liriope. Methods:A rapid and sensitive liquid
chromatographic method was established for quantitative analysis of ginseng saponins,Rd and Re,of ginseng flower.
The function of improving immunity was investigated with pharmacologic methods before and after the compatibility
of ginseng flower. Results:After the compatibility of ginseng flower with astragalus and liriope,the content of Rd and
Re increased,which was similar to the trend of ginseng compatibility;however,the content of ginseng saponins was
much higher than that in ginseng root. The effect of enhancing immunity by the compatibility of ginseng flower was
superior to that of ginseng root. Conclusion:The established method of liquid phase can be used for quantitative a-
nalysis of herbs and prescriptions containing ginseng saponins. Compatibility of ginseng flower with astragalus and
liriope has the function of improving immunity.
Key words:ginseng flower;astragalus;liriope;compatibility of pharmacological;immunity enhancement;pharmaco-
logical effects;ginseng saponin Rd;ginseng saponion Re;quantiative analysis;high performance liquid chromatogra-
phy(HPLC)
人参为五加科植物 Panax ginseng C. A. Mey.的
干燥根,味甘、微苦,性温,归心、肺、脾经。能够补脾
益肺,生津、安神。人参与黄芪均为补气药,配伍具
有强大的补气助阳作用,补元气生精血,阴阳兼顾,
彻里彻外,同补无泻[1 - 2]。临床应用久病虚弱诸证,
及中气不足、脾胃虚弱等症。人参与麦冬配伍能够
益气生津、补气救脱、清热安神,临床用于神疲乏力、
失眠健忘等症。
人参的根、茎、叶、花、果皆可入药,研究证实人
参花蕾的药用价值远高于人参根。人参花系采集生
长 4 年以上人参的花蕾,呈暗绿色,气清香、特异、味
苦[3]。人参花蕾中的人参总皂苷含量是人参根的
5. 06 倍,可提升人体免疫力,抑制癌细胞增殖的人
参皂苷 Rd含量高达 2. 77%,是人参根的 13. 85 倍;
人参花蕾中所独有的锗元素,具有提高人体抗疲劳、
抗衰老的功能[4]。但是,目前人参花的使用仅局限
—4112— 药物分析杂志 Chin J Pharm Anal 2013,33(12)
于人参花茶,未涉及配伍使用等人参传统使用方式,
远没有发挥人参花的作用。
因此,本研究遵循人参与黄芪、麦冬配伍的传统
中医药理论,通过仪器定量分析和药理实验,探讨人
参花配伍使用的可行性,为人参花的深入应用提供
研究依据。
1 仪器与试药
安捷伦液相色谱仪(1200,RRLC) ,G1314B 紫
外检测器,GR202 电子天平。
人参皂苷 Rd、Re购自吉林大学基础医学院,经
液相色谱归一化法测定纯度 > 98%。人参花、麦冬、
黄芪购自长春宏检药业,经显微鉴定均为真品。
2 人参皂苷的含量测定
2. 1 对照品溶液制备 分别精密称取对照品人参
皂苷 Rd 50 mg、人参皂苷 Re 50 mg,用甲醇定容于
25 mL量瓶中,制成 2 mg·mL -1的对照品溶液,备
用。
2. 2 供试品溶液制备 分别精密称取人参根 10 g、
人参花 10 g、人参根 -麦冬(1∶ 2)10 g、人参根 -黄
芪(1∶ 2)10 g、人参花 -麦冬(1∶ 2)10 g、人参花 -黄
芪(1∶ 2)10 g各 3 份,加 6 倍量水煎煮 2 次,第 1 次
1 h,第 2 次 0. 5 h,将 2 次水煎液合并,离心
(3500 r·min -1)10 min,合并上清液,浓缩至 30 mL
后,用 90 mL乙醚脱脂 3 次,水层用 100 mL 水饱和
正丁醇萃取 3 次,每次 30 mL,合并萃取液,常压蒸
干,残渣用甲醇定容于 10 mL量瓶中,制得供试品溶
液。
2. 3 色谱条件 Agilent SB - C18色谱柱(5 μm,
4. 6 mm × 50 mm) ,流动相为水(A)- 乙腈(B)
(20∶ 80)系统,洗脱程序为 0 ~ 5 min,20%→22%
B;5 ~ 6 min,22% →25% B;6 ~ 20 min,25% →
55% B;20 ~ 28 min,55%→63% B;28 ~ 35 min,
63%→70% B。体积流量为 1. 0 mL·min - 1,检测
波长为 203 nm,进样量为 10 μL,柱温为 30oC。色
谱图见图 1。
2. 4 方法学考察
2. 4. 1 线性关系考察 取人参皂苷 Re 对照品溶
液,分别稀释至 0. 02、0. 04、0. 2、0. 4、1、2 mg·
mL - 1,另取人参皂苷 Rd 对照品溶液,分别稀释
至 0. 01、0. 04、0. 2、0. 4、1、2 mg·mL - 1,分别进
样测定。人参皂苷 Re 及 Rd 的回归方程分别
为:
Y = 271. 8X + 12. 83 r = 0. 9999
Y = 180. 4X + 11. 76 r = 0. 9997
2. 4. 2 精密度试验 取人参皂苷 Rd 和 Re 对照品
溶液各 10 μL,连续进样 6 次。测得 RSD 分别为
0. 84%和 0. 52%。仪器精密度良好。
2. 4. 3 重复性试验 取人参花 -麦冬(1∶ 2)、人参
花 -黄芪(1 ∶ 2)供试品溶液各 10 μL,重复进样 6
次,测得 RSD 分别为 0. 92%和 1. 16%,方法重复性
良好。
2. 4. 4 加样回收率试验 精密称取人参花 10 g,分
别加入人参皂苷 Rd 和 Re 的对照品溶液 0. 1、1、5
mL,配制成人参皂苷 Rd 和 Re 浓度为 0. 02、0. 2、1
mg·mL -1的供试品溶液,每种浓度做 3 份,按“2. 2”
项下的萃取条件提取后,定容于 10 mL容量瓶中,按
“2. 3”项下的色谱条件测定。取 1 mg·mL -1的溶
液,在 1 d内重复测定 5 次,计算人参皂苷 Rd 和 Re
日内精密度,在 1 周内连续 5 d 测得日间精密度,结
果见表 1。
2. 4. 5 配伍前后测定结果 人参花中人参皂苷 Re
的含量是人参根中的 15. 4 倍,人参皂苷 Rd 的含量
是人参根中的 76. 3 倍。差距较大,可能原因是所用
人参根为生晒参无根须,人参皂苷 Re 和 Rd 含量较
少。配伍后人参皂苷含量大于配伍前,人参花与黄
芪配伍增加 15. 4%,与麦冬配伍增加 5. 5%。人参
与黄芪配伍增加 51. 9%,与麦冬配伍增加 5. 2%,说
明黄芪能够促进人参皂苷溶出,麦冬作用较差。见
图 1、表 2。
3 配伍药理作用研究
3. 1 抗疲劳试验
小鼠(体重 18 ~ 22 g) ,于 20 ℃ ±2 ℃的环境中
喂养 3 d,测试游泳能力后分组。共分为 5 组,每组
10 只。第 1 组每天灌胃给药生理盐水、第 2 组每天
灌胃给药人参 -黄芪、第 3 组每天灌胃给药人参 -
麦冬、第 4 组每天灌胃给药人参花 -黄芪、第 5 组每
天灌胃给药人参花 -麦冬,给药浓度为 0. 1125 g·
mL -1,灌胃量为 0. 2 mL·10 g -1体重。
第 15 d 灌胃给药 2 h 后,小鼠尾部负重(体重
的 10%)在 20 ℃ ±5 ℃水中游泳。不断轻轻搅动水
面使之不停游动,用秒表记录小鼠从入水至体力耗
竭时的时间(以小鼠头部沉入水中 10 s不能自行浮
出水面为准) ,即为小鼠负重游泳时间。
如表 3,人参花与黄芪配伍后,游泳存活时间高
于其他配伍组。人参花与麦冬配伍后游泳时间延长
率与人参与黄芪配伍相似,可能原因在于人参花与
麦冬配伍,人参皂苷含量较高;当人参与黄芪配伍,
人参和黄芪均可提高机体抗疲劳能力。
—5112—药物分析杂志 Chin J Pharm Anal 2013,33(12)
图 1 高效液相色谱图
Fig 1 HPLC chromatograms
A.人参根(ginseng root) B.人参花(ginseng flower) C.人参根 -黄芪(ginseng root - astragalus) D.人参花 -黄芪(ginseng flower - astragalus)
E.人参根 -麦冬(ginseng root - liriope) F.人参花 -麦冬(ginseng flower - liriope)
—6112— 药物分析杂志 Chin J Pharm Anal 2013,33(12)
表 1 平均回收率及 RSD
Tab 1 Recoveries and RSD
加样浓度
(sample concentration)
/mg·mL -1
人参皂苷 Rd(ginseng saponin Rd)
回收率
(recovery)/%
(n =3)
RSD /%(n =5)
日内
(intra - day)
日间
(inter - day)
人参皂苷 Re(ginseng saponin Re)
回收率
(recovery)/%
(n =3)
RSD /%(n =5)
日内
(intra - day)
日间
(inter - day)
0. 02 86. 7 1. 3 3. 3 88. 2 1. 1 4. 0
0. 2 88. 3 90. 5
1 92. 9 91. 6
表 2 人参根、人参花与黄芪麦冬配伍前后人参皂苷含量(%)
Tab 2 The content of ginseng saponin content before and after the compatibility
of ginseng root or ginseng flower with astragalus
成分(composition)
人参皂苷 Re
(ginseng saponin Re)
人参皂苷 Rd
(ginseng saponin Rd)
Rd + Re
人参根(ginseng root) 0. 1586 0. 0140 0. 1726
人参花(ginseng flower) 2. 4443 1. 0717 3. 516
人参根 -黄芪(ginseng root and astragalus) 0. 2432 0. 0190 0. 2622
人参花 -黄芪(ginseng flower and astragalus) 2. 9712 1. 0868 4. 058
人参根 -麦冬(ginseng root and liriope) 0. 1652 1. 0755 0. 1815
人参花 -麦冬(ginseng flower and liriope) 2. 6327 0. 1726 3. 7082
表 3 人参根、人参花配伍前后的药理作用(n =10)
Tab 3 Pharmacological effects before and after the compatibility of ginseng root or ginseng flower
组别(group)
游泳实验
(swimming test)
耐缺氧实验
(hypoxia tolerance test)
耐高温实验
(high temperature
resistance test)
耐寒实验
(cold resistance
test)
存活时间
(survival time)
/min
延长率
(prolongation rate)
/%
存活时间
(survival time)
/min
延长率
(prolongation rate)
/%
存活率
(survival rate)
/%
存活率
(survival rate)
/%
空白(blank) - 2. 02 ± 0. 78 - 47. 60 ± 11. 13 20 70
人参根 -黄芪(ginseng root and astragalus) 2. 76 ± 1. 27 36. 63 51. 69 ± 20. 32 8. 59 60 70
人参花 -黄芪(ginseng flower and astragalus) 3. 65 ± 3. 35 80. 69 55. 17 ± 10. 29 15. 90 80 80
人参根 -麦冬(ginseng root and liriope) 2. 21 ± 1. 25 9. 41 63. 20 ± 10. 78 32. 77 30 70
人参花 -麦冬(ginseng flower and liriope) 2. 79 ± 1. 49 38. 12 67. 74 ± 31. 88 42. 31 40 70
3. 2 耐缺氧实验
按照“3. 1”项下,灌胃 15 d 后小鼠,置于 250 mL
广口瓶中,每瓶只放 1 只小鼠,广口瓶中放入 15 g钠
石灰,瓶口涂抹凡士林,使之不漏气,立即计时,以呼吸
停止为指标,记录小鼠存活的时间作为耐缺氧时间。
如表 3,人参花与麦冬配伍后,耐缺氧能力高于
其他组。麦冬能够显著提高动物的耐缺氧时间。虽
然黄芪也具有提高耐缺氧能力作用,但与人参的协
同作用不如麦冬明显。
3. 3 耐高温实验
按照“3. 1”项下,灌胃 15 d 后小鼠,放入(45 ±
1)℃的恒温箱内,立即计时,并密切观察,2 h 后将
小鼠取出,以呼吸停止为指标,统计各小组小鼠存活
数,计算各组小鼠存活百分率。
如表 2,人参花与黄芪配伍后,耐高温作用好于
其他组,人参与黄芪配伍次之,说明黄芪能够使耐高
温作用提高,与文献报道一致[5]。
3. 4 耐低温实验
按照“3. 1”项下,灌胃 15 d后小鼠,将小鼠放入
(- 5 ± 1)℃冰箱内,立即计时,2 h 后将小鼠取出,
统计各小组小鼠存活数,计算各组小鼠存活百分率。
各配伍耐低温实验结果区别不明显,可能原因
—7112—药物分析杂志 Chin J Pharm Anal 2013,33(12)
在于实验所使用小鼠体力较好,因此空白组的各项
应激试验数据好于文献报道,在一定时间里造成空
白组与给药组区别较小的结果。
4 讨论
4. 1 人参花与黄芪、麦冬配伍后,人参皂苷含量增
加和提高免疫力能力增加。但与人参配伍比较,提
高免疫力强度与人参皂苷含量增加幅度无线性关
系。
4. 2 人参花配伍的化学和药理研究结果,可为人参
花产品的开发提供理论依据和数据支持。
参考文献
1 FANG Yong - shun(方永顺) ,CHU Jie(初杰). Participation in com-
patibility of radix astragali immune effect of pharmacological research
(人参与黄芪配伍免疫作用的药理研究) [J]. J Chin Med(中医药
学刊) ,2002,20 (4) :471
2 LIU Yue(刘月) ,CHU Jie(初杰). Ginseng radix astragali nature and
flavor and the influence of compatibility of prescription composition
(人参黄芪的性味与配伍对方剂构成的影响) [J]. J Liaoning Univ
Tradit Chin Med(辽宁中医药大学学报) ,2008,10 (5) :5
3 Nanjing University of Chinese Medicine(南京中医药大学). Tradi-
tional Chinese Medicine Dictionary (I) (中药大辞典(上册) ) [M].
Shanghai(上海) :Shanghai Science and Technology Press(上海科学
技术出版社) ,2006. 51
4 ZHENG Bin - shan(郑冰珊) ,LIU Xian - yun(柳献云) ,CHEN Xi-
ao - cheng(陈晓城). The research progress of ginseng flower buds
(人参花蕾的研究进展) [J]. China Pharm(中国药业) ,2008,17
(6) :60
5 HUANG Chao - pei(黄超培) ,ZHAO Peng(赵鹏) ,YANG Jun -
feng(杨俊峰) ,et al. Astragalus membranaceus anti - stress effect re-
search(黄芪抗应激作用研究) [J]. Guangxi Prev Sci(广西预防科
学) ,2000,6 (2) :72
6 CHEN Cai - xia(陈彩霞) ,ZHANG Hong - yan(张宏艳). The re-
search progress of ginseng saponins Re(人参皂甙 Re 的研究进展)
[J]. Foreign Med Sci(Pediatr) (国外医学 儿科学分册) ,2004,31
(Suppl 1) :110
7 WANG Ying(王莹) ,CAI Dong - lian(蔡东联). Advances of re-
search on anti - fatigue effects of Panax ginseng(人参抗疲劳作用研
究进展) [J]. Amino Acids Biotic Resour(氨基酸和生物资源) ,
2005,27(3) :68
8 GUAN Ming(关铭) ,XU Jing - da(徐景达). Study of the chemical
composition of Jilin ginseng root:Ginseng saponins separation and i-
dentification(吉林人参根的化学成分研究———人参皂甙分离与鉴
定) [J]. J Bethune Univ Med Sci(白求恩医科大学学报) ,1982,8
(5) :136
(本文于 2013 年 2 月 10 日收到)
—8112— 药物分析杂志 Chin J Pharm Anal 2013,33(12)