全 文 ：樱桃叶多糖的提取、鉴别及定量测定
刘德胜，颜 玲，韩景田* (滨州医学院药学院，山东烟台 264003)
摘要 ［目的］提取樱桃叶多糖，并对其进行定性鉴别和含量测定。［方法］先将樱桃叶经石油醚和乙醇脱脂、脱杂后，再采用水提醇沉
法提取樱桃叶粗多糖(PPP)，然后以 Sevag法除去粗多糖中的蛋白，并用 Molish试验(α-萘酚试验)、葸酮 －硫酸法试验、Fehling试验与
红外光谱分析、淀粉的碘试验对其进行定性鉴定;以硫酸 －蒽酮法测定樱桃叶多糖的含量。［结果］经过鉴别可知，所提灰白色物质为多
糖;经测定，其含量为 29． 7 mg /g。［结论］该方法简单，灵敏度高，重现性好，结果准确。
关键词 樱桃叶;多糖;提取;鉴定;硫酸 －蒽酮法
中图分类号 S662． 5;R284． 2 文献标识码 B 文章编号 0517 －6611(2012)21 －10861 －02
Extraction，Identification and Content Determination of Polysaccharides from the Leaves of Prunus pseudocerasus Lindl．
LIU De-sheng et al (College of Pharmacy，Binzhou Medical College，Yantai，Shandong 264003)
Abstract ［Objective］To study the extraction，qualitative identification and quantitative assay of polysaccharides from the leaves of Prunus
pseudocerasus Lindl． (PPP)，so as to provide reference for its comprehensive application． ［Method］Polysaccharides were extracted with the
method of water exaction and alcohol precipitation after the leaves were defatted with 95% EtOH and petroleum ether． Then，the protein in
PPP was removed by Sevag method． A series of experiments were used to identify the PPP，including Molish test (α-naphthol test)，anthrone-
sulfuric acid method test，fehling test，fourier transform infrared spectrometry (FT-IR)，and iodine test． The content of PPP was determined
by anthrone-sulphuric acid colrimetry method． ［Results］P． pseudocerasus polysaccharides were grey white in color． The content of polysac-
charides in P． pseudocerasus leaves was 29． 7 mg /g． ［Conclusion］The method is simple，sensitive，reproducible，and reliable．
Key words Prunus pseudocerasus Lindl．;Polysaccharides;Extraction;Identification;Anthrone-sulfuric acid method
作者简介 刘德胜(1979 －) ，男，山东莱阳人，讲师，硕士，从事天然药
物化学及中药药效物质基础研究，E-mail:desh eng_liu@ si-
na． com。* 通讯作者，教授，硕士生导师，博士，从事药物化
学研究，E-mail:hanjingtian002@ 163． com。
收稿日期 2012-03-26
樱桃叶收录于《中华本草》，为蔷薇科(Rosaceae)植物樱
桃(Cerasus pseudocerasus)的干燥叶片。其味辛苦、性温、无
毒，具有温胃、健脾、止血和解毒的功效，能治胃寒食积、腹
泻、吐血和疮毒等［1］。研究表明，樱桃叶提取物具有降血压
作用［2］。目前已有对其黄酮类［3 －4］和挥发油类［5 －6］化学成分
的研究，但关于樱桃叶中生物活性成分多糖的研究鲜有报
道。笔者以樱桃叶为原料，对其多糖成分进行提取、分离和
定性鉴定，并测定了其中多糖的含量，以期为樱桃叶活性成
分的进一步研究与资源应用提供理论依据。
1 材料与方法
1． 1 材料
1． 1． 1 研究对象。樱桃叶，采自山东烟台，由滨州医学院中
西医结合学院刘孟安教授鉴定为蔷薇科植物大红灯樱桃的
干燥叶片。
1． 1． 2 主要仪器。TU-1901双光束紫外可见分光光度计，购
自北京普析通用仪器责任有限公司;WQF-510 傅立叶交换
可见光分光光度计，购自北京瑞利分析仪器公司;FA1604s电
子天平，KQ-400DB型数控超声清洗器，均购自昆山市超声仪
器有限公司;Phg-9246 型电热恒温鼓风干燥箱，购自上海精
宏实验设备有限公司;数显恒温水浴锅，购自上海逸龙科技
有限公司;Biofuge Primo台式高速冷冻离心机，HY-0413高速
粉碎机，均购自环亚天元机械技术有限公司。
1． 1． 3 主要试剂。D-无水葡萄糖，购自中国药品生物制品
鉴定所;蒽酮，购自上海科丰试剂有限公司;水为哇哈哈牌纯
净水，硫酸、乙醇、石油醚(30 ～ 60 ℃)、丙酮、乙醚及其余试
剂均为分析纯，市售。
1． 2 方法
1． 2． 1 樱桃叶的预处理。将樱桃叶粉碎，分别加入一定体
积的石油醚脱脂和一定体积的无水乙醇进行除杂，各回流 2
h，间隙搅拌，回流完毕后过滤，去滤渣，重复多次，直至滤液
呈无色为止。滤渣风干，备用。
1． 2． 2 樱桃叶粗多糖的制备［7 －9］。准确称取 20． 00 g 预处
理过的樱桃叶粉末，置于 500 ml 锥形瓶中，按超声波提取设
定条件进行超声波恒温水浸提取，再在相同温度下水浸提取
达到 1 h。将提取液离心取滤渣，按上述条件再次进行提取，
离心取上清液，合并 2 次上清液，用旋转蒸发仪浓缩至体积
的 1 /3，然后用氯仿 －正丁醇(4∶ 1，V /V)萃取 3 次(即 Sevag
法) ，除去蛋白质，再按料液比 1∶ 4(g /ml)加入浓度 95%的乙
醇，于 4 ℃冰箱中醇沉 12 h。抽滤，滤渣依次用乙醚、无水乙
醇和丙酮洗涤，即得樱桃叶粗多糖。
1． 2． 3 樱桃叶多糖的鉴别［8 －9］。
1． 2． 3． 1 溶解性。称取 5 份粗多糖各 0． 500 g，每份分别加
水、无水甲醇、无水乙醇、丙酮和乙醚各 3 ml，常温下搅拌，观
察其溶解性。
1． 2． 3． 2 颜色反应。①Molish试验。取 1． 0 ml检品的水溶
液，加入浓度 5%的萘酚数滴振摇后，沿管壁加入 5 ～ 6 滴浓
硫酸，使成 2层溶液，待 2 ～3 min后观察 2界面间环的颜色。
②蒽酮 －硫酸试验。取 1． 0 ml 检品的水溶液，加入 2 ml 蒽
酮试剂，摇匀，观察颜色变化。③Fehling试验。取 1． 0 ml 检
品的水溶液，加入 1． 0 ml Fehling试剂，置于沸水浴中观察颜
色变化，同时作硫酸水解后的对照。④淀粉的反应。将检品
配成浓度 5%的溶液，滴加 0． 2 ml碘液，水浴加热，观察颜色
是否有变化，同时作淀粉的对照试验。
安徽农业科学，Journal of Anhui Agri． Sci． 2012，40(21):10861 － 10862，10872 责任编辑 石金友 责任校对 李岩
DOI:10.13989/j.cnki.0517-6611.2012.21.130
1． 2． 3． 3 紫外光谱扫描。取一定浓度检品溶液，以水为空
白对照，于 200 ～800 nm波长扫描，观察。
1． 2． 3． 4 红外光谱扫描。取一定量樱桃叶多糖粉末，按照
红外光谱样品制作要求制备样品，进行红外光谱扫描。
1． 2． 4 多糖含量的测定［8，10］。
1． 2． 4． 1 对照品溶液的制备。准确称取 25． 2 mg在 105 ℃
下干燥至恒重的标准葡萄糖，置于 100 ml 容量瓶中，加水配
制成浓度为 252． 0 μg /ml的葡糖糖储备液。
1． 2． 4． 2 蒽酮溶液的制备。精密称定 0． 20 g 蒽酮，于 100
ml容量瓶中，用浓硫酸溶解定容至刻度，摇匀，即得(现用
现配)。
1． 2． 4． 3 方法学考察。①标准曲线的制备。从已配制的标
准葡萄糖溶液中，分别吸取 0、0． 1、0． 2、0． 4、0． 6、0． 8 和 1． 0
ml置于 5 ml容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得。分别
精取 2 ml上述溶液于 10 ml具塞试管中，均加入 4 ml蒽酮溶
液，摇匀，室温放置 30 min，以第 1 管为空白对照，在最大吸
收波长处(625 nm，紫外扫描光谱图见图 1)测定吸光度。以
葡萄糖溶液浓度 C为横轴，吸光度 A为纵轴，进行线性回归，
计算标准曲线回归方程。②换算因子的确定。准确称取
10. 0 mg多糖，溶于 100 ml容量瓶中，稀释至刻度，摇匀，准确
吸取 1． 0 ml此溶液，置于具塞试管中，按试验方法处理样品
并按照“①”项下方法测定吸光度，根据回归方程计算多糖溶
液中葡萄糖的浓度，按下式计算出换算因子:
f =W/(C·D)
式中，W为多糖质量(mg) ;C为多糖浓度(μg /ml) ;D为稀释
倍数。③稳定性试验。取同一样品溶液，分别放置 0、15、30、
60和90 min，按照“①”项下方法显色，测定吸光度，考察供试
品的稳定性。④精密度试验。精密度试验另取样品 6 份，按
试验方法处理样品并按照“①”项下方法显色，测定吸光度，
考察方法精密度。⑤重复性试验。取同一批样品 6份，按试
验方法处理样品并按照“①”项下方法显色，测定吸光度，考
察方法重复性。⑥加样回收率试验。精密称取 6 份空白基
质各 5． 000 g，分别加入精制多糖 10． 0 mg，按供试品溶液的
方法制备和“①”项方法操作，测定吸光度，计算平均加样回
收率和 RSD。
注:1 ～3 不同浓度葡萄糖标准溶液经显色后的紫外扫描图谱。
图 1 紫外光谱扫描图谱
1． 2． 4． 4 多糖含量的测定。精密称取樱桃叶提取物 10 mg，
加水适量使溶解，用水定容至 100 ml 容量瓶中，搅匀。精密
吸取 2 ml，按“①”项下方法操作，测定吸光度值，计算多糖的
得率。
2 结果与分析
2． 1 樱桃叶多糖的鉴别
2． 1． 1 溶解性。试验结果表明，提取物可以在水中溶解，在
无水甲醇、无水乙醇、丙酮和乙醚中均不溶解。
2． 1． 2 颜色反应。如表 1所示。
表 1 樱桃叶多糖的颜色反应结果及分析
试验名称 反应现象 分析
Molish试验 两界面间呈紫色环 有糖类化合物
蒽酮 －硫酸试验 呈蓝绿色 有糖类化合物
Fehling试验 硫酸水解后呈棕红色沉淀 不是单糖
淀粉反应 遇碘不变色 不是淀粉
2． 1． 3 紫外光谱扫描。图 2 表明，在紫外光谱扫描中，供试
品溶液在 206 nm波长处有明显吸收，说明有多糖存在［9］。
图 2 樱桃叶多糖紫外全波长扫描图谱
2． 1． 4 红外光谱扫描。图 3 表明，在提取物的红外光谱图
中，出现在 3 300 cm －1处的宽峰是 O-H的伸缩振动;在 3 000
～2 800 cm －1处的较弱的吸收峰是 C-H 吸收峰;在 1 600 ～
1 700 cm －1处的强而较尖锐的峰是 C = O 吸收峰;1 400 ～ 1
200 cm －1处的吸收峰是 C-H键的变角振动;1 000 cm －1左右
处的吸收峰是 C-O-C的伸缩振动产生的。综合结果表明，樱
桃叶所提取的灰白色物质中存在多糖化合物。
图 3 樱桃叶多糖红外光谱图谱
2． 2 方法学考察 ①标准曲线的制备。计算得标准曲线回
归方程为:Y =102． 634 55X －18． 107 13，R2 = 0． 993 7，说明多
糖浓度在 5． 04 ～50． 4 μg /ml 范围内与吸光度呈良好的线性
关系。②换算因子的确定。测得樱桃叶多糖的换算因子分
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用，抑制作用随药物浓度的增大而增强，并且其对 SGC7901
和 K562细胞的半数抑制浓度均小于或者接近 50 μg /ml，但
对 HL60细胞的半数抑制浓度较大，说明三叶悬钩子氯仿提
取物和石油醚提取物对 SGC7901和 K562细胞具有较强的细
胞毒活性，但对 HL60细胞的细胞毒活性相对较弱，提示三叶
悬钩子在治疗胃癌及红细胞白血病方面具有潜在的价值。
随着中医学的发展，人们逐渐认识到中医药在干预肿瘤
的发生发展及提高患者的生存质量方面有着独特的优势，而
且探讨中医药抗肿瘤作用的分子机制也逐渐成为了研究的
热点。例如，Zhang等报道了 BGT2(B细胞易位基因 2)在很
大程度上能够抑制胃癌细胞的生长和增殖［18］;Li 等报道了
HL60细胞的增殖与 Notch 信号通路有关［19］;Wu 等报道了
AE1蛋白对胃癌细胞以及 K562 细胞的影响［20］。因此，在三
叶悬钩子体外抗 SGC7901、K562及 HL60细胞生长研究的基础
上，参考国内外文献，可以进一步探讨其抗癌细胞生长的作用
机制，为三叶悬钩子的开发及应用提供科学的理论依据。
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－1996．
(上接第 10862 页)
别为 3． 58。③稳定性试验。计算得吸光度的 RSD为 1． 5%，
表明样品在1． 5 h内吸光度基本无变化。④精密度试验。计
算得吸光度的 RSD为 0． 8%，表明试验精密度良好。⑤重复
性试验。计算得吸光度的 RSD 为 1． 4%，表明重复性良好。
⑥加样回收率试验。计算得平均回收率为 100． 4%，RSD 为
1． 8%，表明该方法准确可靠，可用于樱桃叶中多糖的含量
测定。
2． 3 樱桃叶多糖的含量测定 计算得樱桃叶中多糖的平均
含量为 29． 7 mg /g。
3 结论
樱桃是烟台地区特产，樱桃叶来源廉价而广泛，樱桃叶
有着广泛的药理作用，从中提取多糖可为深入研究其药理作
用、有效部位等奠定基础。
根据文献所述［10］，采用 Sevag法、3 次除多糖(多糖处理
次数增加会造成多糖的损失) ，经过化学方法和紫外光谱全
波长扫描，鉴定为多糖化合物。该方法简单，灵敏度高，重现
性好，结果准确，可为樱桃叶的继续开发和应用提供参考
依据。
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