全 文 ：北方园艺２０１５（１６）：１３１～１３４ ·贮藏保鲜加工·
第一作者简介：乐薇（１９７９－），女，硕士，副教授，现主要从事生物分
析等研究工作。Ｅ－ｍａｉｌ：ｙｕｅｗｅｉ１１＠１２６．ｃｏｍ．
基金项目：湖北省自然科学基金资助项目（２０１３Ｃ１１１）。
收稿日期：２０１５－０５－１９
ＤＯＩ：１０．１１９３７／ｂｆｙｙ．２０１５１６０３１
箬叶总黄酮提取工艺优化及比较
乐 薇，杨 文 婷，吴 格 格，辛 巧 春
（武汉工商学院 环境与生物工程学院，湖北 武汉４３００６５）
摘 要：以阔叶箬竹叶为试材，采用单因素和正交实验，研究了回流法和超声法中乙醇浓度、
料液比、提取时间等对箬叶总黄酮得率的影响，并优化了提取工艺。结果表明：回流法最佳工艺
是提取溶剂８５％乙醇溶液、料液比１∶２０ｇ／ｍＬ、提取回流时间５０ｍｉｎ；超声法的最佳提取工艺条
件是提取溶剂８０％乙醇溶液、料液比１∶３０ｇ／ｍＬ、提取时间３５ｍｉｎ；优化条件下，回流法的箬叶
总黄酮的提取率达到２．６６％；超声法的提取率为１．５９％，回流法比超声法更适合于箬叶总黄酮的
提取。
关键词：箬叶总黄酮；回流法；超声法
中图分类号：Ｓ ５６７．２３＋９；Ｓ ９４６ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００１－０００９（２０１５）１６－０１３１－０４
箬叶为禾本科竹亚科箬竹属植物叶的总称，主要分
布于我国长江以南各省，自古以来就是端午节标志食
物－粽子的包装物［１］。现代药理分析发现，箬叶具有杀
菌、防腐、抗癌等多种显著作用，可广泛应用于医药、食
品及日化用品等［２－５］。竹叶黄酮是一类具有多种生物活
性的天然产物［６－８］，安全无毒，从构效关系上看，竹叶黄酮
的生理活性超过了银杏叶黄酮［９］。研究证明，箬叶中黄
酮含量较丰富，占箬叶总质量的２％左右［１０］。箬叶总黄
酮作为具有开发价值的生物黄酮资源已越来越受到学
者的关注，因此有必要对适用于工业化生产的箬叶总黄
酮的提取方法进行研究。该试验优化了回流法和超声
法提取阔叶箬竹叶总黄酮的工艺条件，以期对箬叶的综
合开发利用提供参考。
１ 材料与方法
１．１ 试验材料
阔叶箬竹叶采自湖北恩施州，洗净后于５０℃烘干
５ｈ，粉碎后过１８目筛，用石油醚（３０～６０℃）脱色脱脂，
自然干燥后放入塑料瓶中备用。
芦丁标准品，由中国药品生物制品检定所提供；无
水乙醇、亚硝酸钠、硝酸铝、氢氧化钠等均为分析纯。
Ｂ－２２０型恒温水浴锅、ＲＥ５２ＣＳ型旋转蒸发仪，上海
亚荣生化仪器厂；７５２型紫外可见分光光度计，上海光谱
仪器有限公司；ＫＱ－１００Ｅ超声波清洗器，上海精密仪器
仪表有效公司。
１．２ 试验方法
１．２．１ 箬竹叶总黄酮质量浓度测定 准确称取干燥至
恒定质量的芦丁标准品０．０７５ ２ｇ，用３０％乙醇溶液微热
溶解并定容至２５０ｍＬ，得０．３００ ８ｍｇ／ｍＬ的芦丁对照溶
液。精密移取０、１．００、２．００、３．００、４．００、５．００ｍＬ芦丁对
照溶液至６个１０ｍＬ比色管中，添加３０％乙醇溶液至
５ｍＬ；然后加入５％ＮａＮＯ２ 溶液０．３０ｍＬ，摇匀后放置
５ｍｉｎ；加入１０％Ａｌ（ＮＯ３）３ 溶液０．３０ｍＬ，摇匀后放置
６ｍｉｎ；加入４％ＮａＯＨ溶液２．００ｍＬ，再用３０％乙醇溶
液稀释至１０ｍＬ，摇匀后放置１０ｍｉｎ。以空白试剂为参
比，于５１０ｎｍ处测定吸光度。以芦丁质量浓度ｃ为横坐
标，吸光度Ａ为纵坐标绘制标准曲线为Ａ＝１０．５１８ｃ＋
０．００５ ７，Ｒ２＝０．９９９ １［１１］。取适量箬叶黄酮提取液按上
述绘制标准曲线的方法进行测定。
１．２．２ 箬叶总黄酮的提取 精确称取１ｇ箬叶样品于
圆底烧瓶中，加入一定浓度的乙醇，分别用回流法和超
声法提取一段时间，其中回流法的水浴温度为８５℃，超
声提取在室温下进行，趁热过滤，滤液定容后测定提取
液中总黄酮的含量。
１．２．３ 单因素试验 乙醇浓度的影响：在料液比为１∶
２０ｇ／ｍＬ的情况下，考察不同乙醇浓度对箬叶总黄酮的
提取率影响，回流法的时间为５０ｍｉｎ，超声法的提取时
间为３０ｍｉｎ。提取时间的影响：在料液比为１∶
２０ｇ／ｍＬ，乙醇浓度为８５％的情况下，考察提取时间对箬
叶总黄酮提取率的影响。料液比的影响：在乙醇浓度为
８５％的情况下，考察不同料液比对箬叶总黄酮的提取率
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影响，回流法提取时间为５０ｍｉｎ，超声法提取时间为
３０ｍｉｎ。
１．２．４ 正交实验 在单因素试验结果的基础上，对影响
箬叶中总黄酮提取率的主要因素乙醇浓度、提取时间、
料液比等进行Ｌ９（３４）正交实验，以确定箬叶中总黄酮类
化合物提取的最佳工艺条件。回流法的正交实验因素
与水平见表１，超声法正交实验因素与水平见表２。
表１ 回流法正交实验设计因素与水平
水平
因素
Ａ料液比／（ｇ·ｍＬ－１） Ｂ提取时间／ｍｉｎ Ｃ乙醇浓度／％
１ １∶１５ ５０ ７５
２ １∶２０ ７０ ８５
３ １∶２５ ９０ ９５
表２ 超声法正交实验设计因素与水平
水平
因素
Ａ乙醇浓度／％ Ｂ提取时间／ｍｉｎ Ｃ料液比／（ｇ·ｍＬ－１）
１ ８０ ２５ １∶２０
２ ８５ ３０ １∶２５
３ ９０ ３５ １∶３０
２ 结果与分析
２．１ 单因素试验
分别考察了乙醇浓度、提取时间、料液比对回流法
和超声法提取箬叶总黄酮的影响。由于回流法中采用
的是乙醇水溶液能回流的温度，超声法中温度对提取影
响较小［１２］，因此该试验未考虑提取温度的影响。
２．１．１ 乙醇浓度的影响 由图１可知，回流法和超声法
中，随乙醇浓度升高箬叶总黄酮提取率都逐渐升高，当
乙醇浓度为８５％时提取率均达到最高，而后随着乙醇浓
度升高总黄酮提取率逐渐降低。同时也发现，在试验范
围内，同浓度的乙醇下，回流法比超声法的提取效果好。
图１ 乙醇浓度对箬叶总黄酮提取率的影响
２．１．２ 提取时间的影响 由图２、３可知，随着提取时间
的延长，回流法和超声法中的总黄酮提取率都呈现先上
升后下降的趋势。回流法中，由于长时间处于高温中，
可能使有效成分受到破坏造成损失，提取时间以５０ｍｉｎ
较合适。超声法中，随着提取时间延长提取液的温度逐
步上升，也可能造成有效成分的破坏，提取时间以３０ｍｉｎ
较合适。
图２ 超声时间对总黄酮提取率的影响
图３ 回流提取时间对总黄酮提取率的影响
２．１．３ 料液比的影响 由图４可知，随着提取溶剂的增
大，总黄酮提取率先提高后减小。回流法中最佳料液比
是１∶２０ｇ／ｍＬ，超声的最佳料液比是１∶２５ｇ／ｍＬ。
图４ 料液比对总黄酮提取率的影响
２．２ 正交实验
２．２．１ 回流法的正交实验 由表３、４可知，回流法中料
液比对箬叶总黄酮提取率的影响达到显著水平，各因素
影响大小顺序为料液比＞乙醇浓度＞提取时间，且最佳
工艺条件应为Ａ２Ｂ１Ｃ２，因此提取箬叶中总黄酮类化合物
的最佳条件分别为料液比１∶２０ｇ／ｍＬ、提取回流时间为
５０ｍｉｎ、乙醇质量分数为８５％。
２．２．２ 超声法的正交实验 从表５、６可知，超声法中各
因素对箬叶总黄酮提取率的影响均未达到显著水平，各
因素影响大小顺序为提取时间＞乙醇浓度＞料液比，最
佳工艺条件应为Ａ１Ｂ３Ｃ３，因此提取箬叶中总黄酮类化合
物的优化条件分别为料液比１∶３０ｇ／ｍＬ、乙醇质量分数
为８０％、提取时间为３５ｍｉｎ。
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北方园艺２０１５（１６）：１３１～１３４ ·贮藏保鲜加工·
表３ 回流法的正交实验结果
试验号 Ａ Ｂ Ｃ Ｄ（空白） 总黄酮提取率／％
１ １ １ １ １ ２．６３
２ １ ２ ２ ２ ２．７８
３ １ ３ ３ ３ ２．３８
４ ２ １ ２ ３ ２．７４
５ ２ ２ ３ １ ２．７１
６ ２ ３ １ ２ ２．４６
７ ３ １ ３ ２ ２．０７
８ ３ ２ １ ３ １．７３
９ ３ ３ ２ １ ２．０３
ｋ１ ７．７９ ７．４４ ６．８２ ７．３７
ｋ２ ７．９１ ７．２２ ７．５５ ７．３１
ｋ３ ５．８３ ６．８７ ７．１６ ６．８５
Ｒ ２．０８ ０．５７ ０．７３ ０．５２
表４ 回流法正交实验的方差分析结果
方差来源 Ａ Ｂ Ｃ 误差Ｅ
离差平方和 ０．９０９ ０．０５５ ０．０８９ ０．０５
自由度 ２ ２ ２ ２
Ｆ值 １６．８３ １．０１９ １．６４８
Ｆ临界值 Ｆ０．１（２，２）＝９ Ｆ０．０５（２，２）＝１９
表５ 超声法正交实验结果
试验号 Ａ Ｂ Ｃ Ｄ 总黄酮提取率／％
１ １ １ １ １ ０．９６
２ １ ２ ２ ２ １．１６
３ １ ３ ３ ３ １．３６
４ ２ １ ２ ３ １．１１
５ ２ ２ ３ １ １．１２
６ ２ ３ １ ２ １．２０
７ ３ １ ３ ２ ０．９２
８ ３ ２ １ ３ ０．９８
９ ３ ３ ２ １ １．１２
Ｋ１ ３．４８ ２．９９ ３．１４ ３．２１
Ｋ２ ３．４３ ３．２６ ３．３９ ３．２８
Ｋ３ ３．０２ ３．６８ ３．４０ ３．４５
Ｒ ０．４５ ０．７０ ０．２６ ０．２４
表６ 回流法正交实验的方差分析结果
方差来源 Ａ Ｂ Ｃ 误差Ｅ
离差平方和 ０．０４２ ０．０８１ ０．０１４ ０．０１
自由度 ２ ２ ２ ２
Ｆ值 ３．８１８ ７．３６４ １．２７３
Ｆ临界值 Ｆ０．１（２，２）＝９ Ｆ０．０５（２，２）＝１９
２．２．３ 优化工艺的验证 在优化的试验条件下，分别采
用回流法和超声法对箬叶总黄酮进行提取，结果见表７。
可见２种提取法的重复性较好，方法稳定可行。回流法
的总黄酮提取率比超声法高出１．０９％，差异较大。这与
有关文献报道有差别，如文献［１２］报道超声方法优于水
浴方法。这可能与箬叶产地和提取的具体条件有关。
文献［１２］提取的是湖南株洲的阔叶箬竹叶，且回流法提
取时间高达３ｈ，该文提取的是湖北恩施的阔叶箬竹叶，
回流时间仅为５０ｍｉｎ。
表７ 重复性试验结果
试验号 １ ２ ３ 平均提取率 ＲＳＤ／％
回流法总黄酮提取率／％ ２．７０ ２．６３ ２．６４ ２．６６ １．４２
超声法总黄酮提取率／％ １．５２ １．６０ １．６６ １．５９ ４．４１
３ 结论
回流法提取箬叶总黄酮的优化工艺为：提取溶剂
８５％乙醇溶液，料液比１∶２０ｇ／ｍＬ、提取回流时间
５０ｍｉｎ；超声法的最佳提取工艺条件是：提取溶剂８０％
乙醇溶液，料液比１∶３０ｇ／ｍＬ，提取时间３５ｍｉｎ。回流
法获得的箬叶总黄酮得率明显高于超声法的得率，且超
声法会造成噪声污染，因此实际工业生产中，回流法比
超声法更适合于箬叶总黄酮的提取。
参考文献
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ＹＵＥ Ｗｅｉ，ＹＡＮＧ Ｗｅｎｔｉｎｇ，ＷＵ Ｇｅｇｅ，ＸＩＮ Ｑｉａｏｃｈｕｎ
（Ｃｏｌｅｇｅ ｏｆ Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ ａｎｄ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｗｕｈａｎ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｂｕｓｉｎｅｓｓ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｗｕｈａｎ，Ｈｕｂｅｉ ４３００６５）
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·食用菌· 北方园艺２０１５（１６）：１３４～１３９
第一作者简介：李红玉（１９８９－），女，河南信阳人，硕士研究生，研究
方向为农药学。
责任作者：刘斌（１９６６－），男，广西上林人，博士，教授，现主要从事
食用菌等研究工作。Ｅ－ｍａｉｌ：ｌｉｕｂｉｎ＠ｇｘｕ．ｅｄｕ．ｃｎ．
基金项目：广西科学研究与技术开发计划资助项目（桂科攻
１２２２０１２－１Ｂ）；国家现代农业产业技术体系广西创新团队（食用菌）
建设专项资助项目。
收稿日期：２０１５－０５－２５
ＤＯＩ：１０．１１９３７／ｂｆｙｙ．２０１５１６０３２
四种农药对平菇菌丝和子实体性状的影响
李 红 玉，李 蝶，邵 凡 旭，李 子 玲，刘 斌
（广西大学 食用菌研究所，广西 南宁５３０００５）
摘 要：以平菇菌丝为试材，采用菌丝生长速率法、菌丝干重法和拌料法测定４种杀虫剂对
平菇生长的影响，为其在平菇生产上的应用提供参考依据。结果表明：４种杀虫剂对平菇菌丝生
长的抑制率从高到低依次为印楝素＞高效氯氰菊酯＞除虫脲＞灭蝇胺。印楝素对平菇子实体产
量和农艺性状的负面影响最大，其余３种杀虫剂影响较小。高效氯氰菊酯、灭蝇胺和除虫脲可用
于拌料栽培平菇，建议施用剂量范围分别为：５．６３～１１．２５、８０～１６０、１５～６０ｍｇ／Ｌ，印楝素对平菇
生长抑制较大，生产中应慎重使用。
关键词：农药；糙皮侧耳；抑制；子实体
中图分类号：Ｓ ６４６．１＋４ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００１－０００９（２０１５）１６－０１３４－０６
随着我国农业产业结构的调整，食用菌种植业得到
了迅猛发展，其产值在农业生产中已位居第六位［１］，但
随着食用菌栽培技术的推广，栽培面积的不断扩大和场
地的重复利用，食用菌害虫的危害也在逐年上升，其中
以双翅目、眼蕈蚊科的害虫最为突出，是国际上公认的
重要食用菌害虫之一［２］。其幼虫取食为害菌丝和子实
体，并常引起病害和螨害的发生，从而导致食用菌品质
和产量下降，减产２０％～７０％，已成为制约食用菌产业
发展的重要因素［３－４］。
目前在我国，化学防治仍是防治食用菌害虫的主要
方法［５－７］，由于食用菌对杀虫剂普遍比较敏感，获准登记
的杀虫剂极少，因此我国不少学者仍致力于筛选防效
好、对食用菌生长影响小的药剂。如王升厚等［８］研究发
现高效氯氰菊酯和低浓度绿晶（主要成分：印楝素）对果
蝇杀灭效果明显，并对平菇菌丝生长抑制作用小。李怡
萍等［９］研究证明高效氯氰菊酯不仅对黑粪蚊具有良好
的防效而且对平菇菌丝生长的影响甚微。杨东霞等［１０］
报道在０．１％浓度下，高效氯氰菊酯和印楝素对鸡腿菇
菌丝生长抑制小且对菇蝇的杀灭效果明显。曲绍轩
等［１１］研究了灭蝇胺和除虫脲拌料处理防治古田山多菌
蚊的效果，证明２种药剂均可达到很高的防效，且残留
量均符合每日最低残留量标准。曲绍轩等［１２］研究
０．６％印楝素乳油在５０ｍｇ／Ｌ的处理下对异迟眼蕈蚊的
防效，认为可达到８０％以上。邹华娇［１３］研究发现灭蝇
胺对食用菌眼蕈蚊有较好的控制效果，并表现良好的持
效性。由于食用菌对许多杀虫剂极为敏感，药害现象时
有发生，陆晓民等［１４］研究表明，高效氯氰菊酯不仅杀虫
效果好，而且对食用菌影响小。赵晓娜等［１５］研究表明氯
虫苯甲酰胺对香菇菌丝生长无抑制作用；乙虫腈浓度
为５０μｇ／ｍＬ时对２种食用菌菌丝生长表现显著的抑制
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔａｋｉｎｇ ｌｅａｖｅｓ ｏｆ Ｉｎｄｏｃａｌａｍｕｓ ｌａｔｉｆｏｌｉｕｓ ａｓ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｍａｔｅｒｉａｌ，ｔｈｅ ｅｆｅｃｔ ｏｆ ｔｈｅ ｅｔｈａｎｏｌ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ，ｓｏｌｉｄ－ｌｉｑｕｉｄ
ｒａｔｉｏ，ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｔｉｍｅ ｏｎ ｔｈｅ ｙｉｅｌｄ ｏｆ ｔｏｔａｌ ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ ｗｅｒｅ ｓｔｕｄｉｅｄ ｂｙ ｔｈｅ ｓｉｎｇｌｅ ｆａｃｔｏｒ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓ ａｎｄ ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ
ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓ，ａｎｄ ｔｈｅ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ｗａｓ ｏｐｔｉｍｉｚｅｄ．Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｏｐｔｉｍｉｚｅｄ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｐｒｏｃｅｓｓ ｏｆ
ｅｔｈａｎｏｌ ｒｅｆｌｕｘｉｎｇ ｍｅｔｈｏｄ，ｔｈｅ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｓｏｌｖｅｎｔ ｗａｓ ８５％ｅｔｈａｎｏｌ，ｍａｔｅｒｉａｌ／ｌｉｑｕｉｄ ｒａｔｉｏ ｗａｓ １∶２０ｇ／ｍＬ，ｅｘｔｒａｃｔｉｎｇ ｔｉｍｅ
ｗａｓ ５０ｍｉｎ．Ｔｈｅ ｏｐｔｉｍｉｚｅｄ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｐｒｏｃｅｓｓ ｏｆ ｅｔｈａｎｏｌ ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃ ｍｅｔｈｏｄ：ｔｈｅ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｓｏｌｖｅｎｔ ｗａｓ ８５％ｅｔｈａｎｏｌ，
ｍａｔｅｒｉａｌ／ｌｉｑｕｉｄ ｒａｔｉｏ ｗａｓ １∶３０ｇ／ｍＬ，ｅｘｔｒａｃｔｉｎｇ ｔｉｍｅ ｗａｓ ３５ｍｉｎ．Ｕｎｄｅｒ ｔｈｅ ｏｐｔｉｍｕｍ ｐｒｏｃｅｓｓ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ，ｔｈｅ ｙｉｅｌｄ ｏｆ
ｔｏｔａｌ ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ ｆｒｏｍ ｌｅａｖｅｓ ｏｆ ｉｎｄｏｃａｌａｍｕｓ ｂｙ ｅｔｈａｎｏｌ ｒｅｆｌｕｘｉｎｇ ｍｅｔｈｏｄ ｗａｓ ２．６６％，ｔｈｅ ｙｉｅｌｄ ｂｙ ｅｔｈａｎｏｌ ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃ
ｍｅｔｈｏｄ ｗａｓ １．５９％，ｔｈｅ ｅｔｈａｎｏｌ ｒｅｆｌｕｘｉｎｇ ｍｅｔｈｏｄ ｗａｓ ｍｏｒｅ ｓｕｉｔａｂｌｅ ｆｏｒ ｔｈｅ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｏｆ ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ．
Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ ｆｒｏｍ ｌｅａｖｅｓ ｏｆ ｉｎｄｏｃａｌａｍｕｓ；ｅｔｈａｎｏｌ ｒｅｆｌｕｘｉｎｇ ｍｅｔｈｏｄ；ｅｔｈａｎｏｌ ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃ ｍｅｔｈｏｄ
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