全 文 ：　2009年 10 月　　　　　　　　　　　　　　　　　　　湘南学院学报　 Oct., 2009　第 30卷第 5 期　　　　　　　　　　　　　　　Journal of Xiangnan University　 Vol.30 No.5
收稿日期:2009-06-23
基金项目:湖南省大学生研究性学习和创新性试验计划(〔2008〕No.271)
作者简介:吴永兰(1953-),女 ,湖南郴州人 ,湘南学院化学与生命科学系教授.研究方向:天然产物开发.
提取条件对苦瓜叶中总黄酮提取率的影响
吴永兰 , 雷日华 , 文耀智 , 卞杰松 , 李广利 , 曾少林 , 廖志勇 , 胡仁利
(湘南学院 化学与生命科学系 , 湖南 郴州　432000)
摘　要:采用不同的浓度乙醇提取苦瓜叶中的黄酮 , 以芦丁为标准品 , 采用NaNO2-Al(NO3)3 比色法 ,测定提取液中的
黄酮含量.结果表明 , 四种因数对提取率的影响分别是:乙醇浓度 、料液比 、提取时间 、提取温度.乙醇提取法最优工艺
为:乙醇浓度 65%,提取时间 4h , 料液比 1∶20 ,提取温度为 80℃.
关键词:苦瓜叶;总黄酮;乙醇回流法;比色法
中图分类号:O621.29　　　　　　文献标识码:A　　　　　　　文章编号:1672-8173(2009)05-0064-03
0　引
苦瓜(Momordica charantiap)为葫芦科 ,苦瓜属一年生攀援草本苦瓜的果实.叶互生 ,掌状 5-7深裂.花小 ,
单性 ,雌雄同株 ,黄色.果实纺锤形 ,有瘤状凸起 ,成熟时橙黄色 ,味苦 ,瓤鲜红色 ,味甜.中国各地均有栽培.其
果实和叶中富含黄酮.黄酮有多种作用 ,是一种强抗氧化剂 ,可以清除自由基抗衰老[ 1] 改善血液循环 ,可以降
低胆固醇含量 ,因此可以用来治疗心脑血管疾病[ 2] ,也作为食品甜味剂和食用色素[ 3] ,还可以抑制炎性生物酶
渗出 ,可以增进伤口愈合和止痛等功效[ 4] .虽然现在对黄铜研究已取得不少进展 ,而且研究的方法也较多比如
微波法 ,高效液相色谱法等 ,并对很多植物中的黄铜也有不少的研究 ,但到目前为止 ,对苦瓜叶中黄酮的研究
还未看见 ,所以我们实验组通过乙醇提取回流法来对其中的黄酮含量和种类进行研究.
1　材料和方法
1.1　材料
原料:新鲜苦瓜叶 ,于 2008年 8月 20日采自湖南永州道县 ,选摘同一品种变黄的叶片苦瓜叶 ,在太阳下晒
干后用恒温鼓风干燥箱 80℃干燥至恒重 ,用手磨碎 ,后再用研钵磨碎 ,过孔径为 60目钢筛 ,之后用报纸包裹起
来 ,放入干燥箱中备用.
试剂:芦丁对照品 ,无水乙醇(AR),亚硝酸钠(AR),硝酸铝(AR),氢氧化钠(AR).
1.2　仪器设备
分析天平 ,H.H.S6型电热数字显示恒温水浴锅(上海浦东跃欣科学仪器厂),722型分光光度计(上海天翔
光学仪器有限公司),101A-1型电热鼓风干燥箱(上海浦东跃欣科学仪器厂)等.
1.3　方法
1.3.1　标准曲线的制备
准确称取 19.80mg 芦丁对照品 ,用 35%乙醇溶解 ,并完全移入 100mL 容量瓶中 ,用 35%乙醇定容.分别取
上述芦丁标准品溶液0 , 2 ,4 ,6 ,8 ,10mL容量瓶中 ,用 35%乙醇补足至 25mL ,加入5%亚硝酸钠1.4mL ,摇匀 ,放
置5min后加入 10%硝酸铝 1.4mL ,6min后加入 4%氢氧化钠 10mL ,混匀 ,用 35%乙醇稀释至刻度 ,10min后于
510nm波长处比色测定.标准曲线如下:
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芦丁标准曲线
Y=0.00424+0.00635＊X
R=0.999
1.3.2　苦瓜叶中黄酮类化合物的提取 、测定
称取 10g 苦瓜叶粉 ,用一定浓度乙醇 ,一定料液比 ,在一定温
度下浸泡(圆底瓶口装上冷疑回流装置),浸提一定时间 ,取部分
浸提液定容 ,后再取部分定量测定和分析 ,然后计算提取率.
提取液中总黄酮含量的测定:取一定提取液 ,离心 ,后取 5mL
上清液移至 50mL容量瓶中 ,按上述染色法染色 ,测定在 510nm 处
的ε值.总黄酮提取率(%)=(黄酮类化合物的质量 干物料质量)
2　结果与分析
2.1　乙醇浓度对提取率的影响
分别用 20%,35%,50%,65%,80%,95%,100%(实际用 99.
7%)的乙醇按照料液比 1:20(g mL)的比例浸泡 10g 样品在 65℃
恒温水浴浸提 4h ,测定提取液中总黄酮含量如表 1.
表 1　乙醇浓度对提取率的影响
Tab1　Effect of ethanol concentration on extraction rat
浓度(%) 20 35 50 65 80 95 100
总黄酮提取率(%) 2.01 2.31 2.50 3.26 3.27 2.29 3.26
　　实验结果表明 ,乙醇浓度在65%时 ,提取液的总黄酮提取率最大 ,低于65%时总黄酮的提取率随浓度的增
大而增大 ,高于 65%时 ,总黄酮的提取率随浓度的增大上升幅度趋于平缓并稍有增大.从节约原料的角度考虑
以65%的乙醇浓度为最佳.
2.2　提取时间对提取率的影响
在料液比 1:20 ,乙醇浓度65%的条件下 ,每隔 1h测定一次提取液的总黄酮含量 ,结果见表 2
表 2　提取时间对提取率的影响
Tab2　Effect of time on extraction rat
提取时间(h) 1 2 3 4 5 6
总黄酮提取率(%) 2.94 2.95 3.15 3.24 2.71 2.75
　　实验结果:表明 ,随着提取时间的延长 ,总黄酮提取率提高 ,但是提取时间超过 4h ,提取幅度反而减小了 ,
估计原因是因为时间越长苦瓜叶的黄酮化学物质分解了 ,或者是因为时间的延长导致了化学反应的产生 ,黄
酮转化为了其他的化学物质 ,也可能是操作上的失误 ,有待进一步考证探索.但是 4h的提取率明显高 ,综合以
上数据苦瓜叶的最佳提取时间为 4h.
2.1.3　料液比对提取率的影响
用65%乙醇对样品进行浸泡 ,对不同料液比进行实验 ,料液比分别为 1:5 ,1:10 , 1:20 ,1:30 , 1:40 ,1:50 ,提
取时间为 4h ,结果见表 3.
表 3　料液比对提取率的影响
Tab3　Effect of soild-liquid on extraction rat
料液比(g mL) 1:5 1:10 1:20 1:30 1:40 1:50
总黄酮提取率(%) 1.34 2.58 3.22 3.19 3.00 3.02
　　实验结果表明 ,料液比 1:20时 ,提取液的总黄酮提取率最大 ,在料液比低于 1:20之前 ,总黄酮的提取率随
料液比的增大而增大;而料液比在 1:20之后 ,总黄酮的提取率随料液比的增大反而减小 ,故料液比 1:20最佳.
2.1.4　提取温度对提取率的影响
料液比1:20 ,称取一定量样品在 40℃,50℃,60℃,70℃,80℃,90℃保温 4h ,结果见表 4.
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表 4　提取温度对提取率的影响
Tab4　Effect of temperature extraction rat
温度(℃) 40 50 60 70 80 90
总黄酮提取率(%) 2.86 2.87 3.24 3.32 3.58 3.17
　　有实验结果表明 ,从 40℃到 70℃,温度升高 ,总黄酮提取率增大 ,但是 80℃后 ,温度升高 ,提取率反而降
低.温度升高 ,有利于样品中的黄酮化合物扩散到溶剂中 ,所以温度升高提取率升高 ,温度高于 80℃,以超过乙
醇的沸点 ,大部分乙醇以气态存在 ,溶解黄铜的能力下降 ,也可能是因为但温度达到一定时黄酮发生分解或异
构变成其它物质 ,最终导致总黄酮提取率下降 ,综合考虑最佳提取温度应在 80℃左右.
3　结束语
通过以上实验 ,苦瓜叶总黄酮乙醇回流法的提取最佳条件应在 ,乙醇浓度 65%,提取时间 4h ,料液比 1:20 ,提
取温度为 80℃时.
接下来 ,拟通过正交实验来微调以确定苦瓜叶总黄酮乙醇提取法的最佳工艺 ,并进行实验验证.用高速液
相 、红外光谱等确定其中的黄酮的种类.
参考文献:
[ 1] 魏朝良 ,于德红 , 安利佳.黄酮类化合物及清除自由基机制的探究[ J] .中成药 , 2005 , 27(2):239-241.
[ 2] 杨　波.黄酮类化合物对心管系统的作用岭南心血管病杂志[ J] .2004 , 10(2):144-145.
[ 3] 肖崇厚.中药化学[ M] .上海:上海科学技术出版社 , 1997 , 256-274.
[ 4] 吴立军.天然产物化学(第 4版)[M] .北京:人民卫生出版社 , 2003.
The Influence of General Flavone Extraction Yield in
Balsampear Leaf under Extraction Condition
WU Yong-lan , LEI Ri-hua , WEN Yao-zhi , BIAN Jie-song ,
LI Guang-li , ZENGShao-lin , LIAO Zhi-yong , HU Ren-li
(Department of Chemistry and Life Science , Xiangnan University , Chenzhou ,423000 , China)
Abstract:Adopting different consistency ethanol to extract flavone in balsampear leaf.Taking rutin as standard ,
adopting NaNO2-Al(NO3)3 colorimetry to determine the flavone contents in extraction liquid.The result shows
that the four factors influence the extraction accordingly:ethanol consistency , liquid ratio , extraction time , ex-
traction temperature.The best method of ethanol extraction technics:ethanol consistency 65%, liquid ratio 1:20 ,
extraction time 4h , extraction temperature 80℃.
Key words:balsampear leaf;general flavone;ethanol circumfluence;colorimetry
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