全 文 ：温度为(40±2)℃, 湿度为(75±5)%的恒温恒湿箱中 , 分别于
0, 1, 2, 3, 6个月取样 , 按 “ 2.8”和 “ 2.9”项方法测定含量与有关
物质。结果甲磺酸帕珠沙星含量和有关物质均未发生明显变
化 , 质量稳定 ,见表 2。
2.10.2　长期留样稳定性　取三批甲磺酸帕珠沙星原料样本 ,
置于温度为(25±2)℃,湿度为(75±5)%的恒温恒湿箱中 , 分
别于 0, 3, 6, 9, 12 个月取样。 含量和有关物质测定方法同
“ 2.10.1”。结果甲磺酸帕珠沙星含量和有关物质均未发生明
显变化 ,质量稳定。见表 3。
　表 1　样品中的原料及有关物质含量测定结果　 %, x±s, n=10
批号 含量 有关物质
041001 99.90±0.20 0.54±0.07
041002 99.80±0.23 0.51±0.08
041003 99.70±0.19 0.49±0.09
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　表 2　加速稳定性实验结果　 %
批号 含量
0个月 1个月 2个月 3个月 6个月
有关物质
0个月 1个月 2个月 3个月 6个月
041001 99.6 99.8 99.5 99.7 99.8 0.54 0.52 0.56 0.55 0.63
041002 99.5 99.7 99.6 99.5 99.4 0.51 0.53 0.50 0.52 0.53
041003 99.7 99.6 99.8 99.5 99.7 0.49 0.51 0.52 0.48 0.50
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　表 3　长期留样稳定性实验结果　 %
批号 含量
0个月 1个月 2个月 3个月 6个月
有关物质
0个月 1个月 2个月 3个月 6个月
041001 99.4 99.7 99.5 99.6 99.7 0.55 0.51 0.53 0.54 0.56
041002 99.7 99.6 99.5 99.4 99.6 0.53 0.52 0.51 0.53 0.54
041003 99.5 99.7 99.6 99.5 99.6 0.50 0.51 0.53 0.48 0.53
3　讨论　
3.1　测定波长的选择　甲磺酸帕珠沙星流动相溶液在 200 ～
400nm波长范围内进行紫外光谱扫描 , 结果在 243和 332 nm波
长处均有最大吸收峰 , 考虑到 332nm波长吸收太弱而末端吸收
干扰较大 , 因此 ,选择 243 nm波长作为检测波长。
3.2　流动相选择　按国外资料 [ 1] , 0.1%磷酸(加 0.16 g磷酸
氯二钾)-乙腈(90：10)为流动相 ,结果保留时为 19.828 min, 甲
磺酸帕珠沙星色谱峰与有关物质及中间体分离度良好 , 但保留
时间过长 , 所以调整磷酸氢二钾的加入量及乙腈比例 , 以 0.1%
磷酸(加 0.080 5 g磷酸氢二钾)-乙腈(85：15)为流动相 ,结果
甲磺酸帕珠沙星的保留时间为 7.012 min,主峰与有关物质及中
间体很好分离 , 分离度 >1.5, 所以确定此流动相为样品测定用
流动相。该测定方法甲磺酸帕珠沙星原料及其制剂的日内 、日
间精密度 RSD均 <1.0%, 适合样品测定。
在参考国外资料的基础上 , 笔者建立了测定甲磺酸帕珠沙
星含量的高效液相色谱法 , 该方法能够将甲磺酸帕珠沙星与有
关物质 、中间体及酸 、碱 、氧化破坏降解产物有效分离 ,可用于甲
磺酸帕珠沙星制剂的质量控制。 该方法最小检测量低
(0.2ng), 也适用于该药的血药浓度及药动学研究。
[ DOI] 　10.3870/yydb.2009.11.047
[参考文献 ]
[ 1] 　石田裕一郎 ,早川大善 ,杉原杉树 ,他.抗菌劑 T-3761血中濃度研
究 [ J] .日本化法法學會雜誌 , 2000, 48(18):645.
薜荔果药材中黄酮类成分指纹图谱研究
张恩景 1 ,张晓燕 2 ,李宏亮 2 ,李　洋 2
(1.武汉市东西湖区人民医院药剂科 , 430065;2.湖北省十堰市人民医院药剂科 , 442000)
[摘　要 ] 　目的　应用高效液相(HPLC)法对不同产地薜荔果药材中黄酮类成分进行指纹图谱研究。方法　
PhenomenexGeminiC18柱(250 mm×4.6 mm, 5μm),乙腈-0.5%冰醋酸溶液二元梯度洗脱 ,体积流量为 1 mL· min-1;检
测波长为 254 nm;柱温:40℃。结果　根据选择的色谱条件建立不同产地薜荔果药材中黄酮类成分指纹图谱。结论　
该方法操作简便 、稳定 、重复性好 , 可用于控制薜荔果药材的内在质量。
[关键词 ] 　薜荔果;黄酮类成分;色谱法 , 高效液相;指纹图谱
[中图分类号 ] 　R282.71;R927.11　　　[文献标识码 ] 　A　　　[文章编号 ] 　1004-0781(2009)11-1507-03
　　薜荔果为桑科植物(FicuspumilaL)的干燥花絮托 [ 1] , 现
主要野生于山坡树林间或是残墙断壁 、古木大树之上。广泛分
[收稿日期 ] 　2008-12-02
[作者简介 ] 　张恩景(1975-),女 ,湖北恩施人 ,药师 ,硕士 ,主要
从事医院药学工作。 E-mail:enjing2006@ 126.com。
布于广西 、江西 、湖北 、福建 、安徽 、四川等地区 , 具有祛湿利尿 、
固肾填精 、活血通络 、清热解毒和促进泌乳等功效。 但迄今为
止 ,我国不同主要产地薜荔果药材指纹图谱及其相似度的研究
很少 ,笔者未见报道。笔者采用高效液相色谱(HPLC)法对薜
荔果中黄酮指纹图谱进行研究 , 为薜荔果药材鉴别和质量控制
·1507·医药导报 2009年 11月第 28卷第 11期
提供实验依据。
1　仪器与试药　
1.1　仪器　SHIMADZULC-20A型高效液相色谱仪(包括 LC-
20AD泵 、SPD-M20A检测器 、LCsolution色谱工作站);KQ-250
型超声波清洗仪(昆山市超声仪器有限公司);2004年 A版 “中
药色谱指纹图谱相似度评价系统”(国家药典委员会)。
1.2　试药与药材　乙腈 、甲醇(色谱纯), 实验用水为重蒸水 ,
其他试剂均为分析纯。 芦丁对照品(中国药品生物制品检定
所 , 批号:0080-9706),薜荔果药材共 10批 , 经湖北中医学院陈
科力教授鉴定为桑科薜荔(FicuspumilaL)的干燥果实。
2　方法与结果　
2.1　色谱分析条件 　色谱柱:PhenomenexGeminiC18柱
(250 mm×4.6 mm, 5 μm);流动相:乙腈-0.5%冰醋酸溶液梯度
洗脱 , 见 表 1;检 测 波 长:254 nm;柱 温:40 ℃;流 速:
1.0 mL· min-1;进样量 20 μL;记录时间 110 min, 滞留时间
1.2 min。
表 1　流动相梯度洗脱情况　
时间 /min 乙腈 /% 0.5%冰醋酸 /%
0～ 17 5 95
17～ 32 5 ～ 25 95～ 75
32～ 57 25 ～ 35 75～ 65
57～ 80 35 ～ 65 65～ 35
80～ 110 65 35
2.2　溶液的制备　
2.2.1　对照品溶液的制备　精密称取芦丁对照品适量 , 加甲
醇制成每毫升含 0.05mg的溶液 ,摇匀即得对照品溶液。
2.2.2　供试品溶液的制备　精密称取薜荔果药材粉末(过二
号筛)4.0 g, 置于索氏提取器中 , 加石油醚(沸程 60 ～ 90 ℃)
150mL,加热回流 2 h, 至提取液无色 , 弃取石油醚 , 取出 , 将药
渣挥干后 , 移入烧瓶中 ,精密加入 50 mL甲醇 ,称定质量。回流
提取 3 h, 放冷 , 称质量 , 用甲醇补足质量。精密量取续滤液
40 mL, 置蒸发皿中蒸干 ,残渣用甲醇溶解并转移置 10 mL量瓶
中 , 用甲醇定容 ,摇匀 , 过滤 , 分析前用孔径 0.45 μm微孔滤膜
过滤即得供试品溶液。
2.3　测定方法　精密吸取供试品溶液 20 μL,注入高效液相色
谱仪 , 记录 110 min的色谱图。选择与芦丁保留时间一致的峰
(通过对照品的保留时间确定)为参照峰 , 此峰为所有样品所共
有 , 指定色谱峰的保留时间和峰面积积分值为 1, 计算其他特征
峰相对保留时间和相对峰面积的比值。
2.4　稳定性实验　取同一供试品溶液(编号 2), 24 h内进样 6
次 , 记录各共有色谱峰保留时间 , 供试品溶液通过 HPLC分析 ,
24 h内共有峰的相对保留时间相当一致 , RSD<3%,结果表明
供试品溶液在 24h内保持稳定。
2.5　精密度实验　取同一供试品溶液(编号 2), 连续进样 6
次 , 共有峰的相对保留时间一致 , RSD<3%,表明进样的精密度
良好。
2.6　重复性实验　取同一供试品溶液 6份 , 按上述方法制备
供试品溶液并进行检测 ,考察各色谱峰相对保留时间比值的一
致性 , 结果共有峰的相对保留时间具有较好的重复性 , 其RSD<
3%。
2.7　指纹图谱特征峰的标定　根据 10批共试品 HPLC图谱所
给的相关系数 ,薜荔果药材的化学成分的色谱峰在 110 min之
内全部出现。找出其相对稳定的共有峰 , 以芦丁为参照峰(13
号峰), 共标定 19个共有指纹峰 。相对保留时间(特征峰号):
0.06(1), 0.07(2), 0.07(3), 0.08(4), 0.08(5), 0.09(6), 0.11
(7), 0.37(8), 0.83(9), 0.89(10), 0.90(11), 0.95(12), 1.00
(S, 13), 1.03(14), 1.04(15), 1.25(16), 1.34(17), 2.01(18),
2.04(19)。相对峰面积均值(特征峰号):0.23(1), 0.48(2),
0.22(3), 0.92(4), 3.32(5), 1.35(6), 15.88(7), 3.42(8),
0.51(9), 0.91(10), 0.32(11), 1.03(12), 1.00(S, 13), 0.20
(14), 1.58(15), 0.25(16), 0.15(17), 0.08(18), 0.06(19)。
不同产地的薜荔药材指纹图谱极为相似。
2.8　特征指纹峰相对保留时间及相对峰面积　进行 10批样品
分析 ,以 13号峰作为参照峰 , 各指纹峰的面积及相对峰面积 、
保留时间及相对保留时间均具有较好的重复性。
2.9　10批不同产地薜荔果药材指纹图谱相似度评价　记录 10
批不同产地薜荔果药材的指纹图谱 , 并进行数据分析 , 建立薜
荔果药材的共有模式(均值),取共有模式作为这批样品的对照
谱 ,进行相似性分析 , 结果见表 2。 可见 , 不同产地薜荔果药材
的指纹图谱相似度较高 , 均 >0.90。
表 2　 10批薜荔果药材相似度计算结果　
编号 产地 相似度 编号 产地 相似度
1 湖北十堰 0.994 6 江苏射阳 0.968
2 湖北蕲春 0.993 7 安徽亳州 0.987
3 广西玉林 0.998 8 安徽淮北 0.958
4 广西南宁 0.991 9 四川达州 0.975
5 福建福州 0.989 10 四川成都 0.979
3　讨论　
3.1　提取溶剂及提取方法　为了使薜荔果中的黄酮类成分提
取完全 [ 2] ,除去影响测定的干扰性成分 , 采用索氏提取器, 石油
醚回流除去脂溶性较大的成分 ,然后将提取物以甲醇回流 3h,效
果较好。该法所得色谱图峰数较超声提取多, 操作相对简单。
3.2　流动相的选择　薜荔果药材的成分复杂 , 选择单一流动
相无法达到很好分离 ,故选用梯度洗脱 ,对比不同的流动相:甲
醇-水 、甲醇-乙腈-水 、乙腈-水等多种流动相体系 , 其中以乙腈-
0.5%冰醋酸 [ 3]进行线性梯度洗脱即能使各成分得到较好的分
离 ,故选用乙腈-0.5%冰醋酸水溶液为流动相系统 ,实验中又考
察流动相不同的洗脱梯度 , 最终采用本实验的色谱条件。
3.3　波长的选择　考察不同波长下的指纹图谱 , 发现在
254 nm处出峰数量多 ,分离度较好 , 故选择 254 nm作为指纹图
谱的检测波长。
3.4　指纹图谱相似度评价　本实验建立了薜荔果药材中黄酮
类成分的指纹图谱研究方法 , 标定了 19个共有峰 , 其相似度均
>0.90。总体来说 , 各地薜荔果药材化学成分相对稳定且差别
不大。本研究建立的指纹图谱方法重复性 、稳定性与精密度均
较好 ,有助于薜荔果药材的标准化种植及薜荔果道地药材的质
量控制 ,同时为薜荔果的鉴别提供新的思路 [ 4 ～ 8] 。
[ DOI] 　10.3870/yydb.2009.11.048
·1508· HeraldofMedicineVol.28No.11 November2009
[参考文献 ]
[ 1] 　江苏新医学院.中药大辞典 [ M] .上海:上海科学技术出版社 ,
1986:2651.
[ 2] 　卢金清,陈　黎 , 肖　波 ,等.绞股蓝药材黄酮类成分 HPLC指纹
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质性问题的探讨(一)[ J] .世界科学技术———中药现代化 , 2001, 3
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[ 8] 　国家药品监督管理局.中药注射剂指纹图谱研究的技术要求(暂
行)[ J].中成药 , 2000, 22(10):671-675.
反相高效液相色谱法测定
硫酸羟基氯喹的含量与有关物质
易　琼 1 ,蔡　莉 2 ,谭　芳 1 ,向　一 1
(1.华中科技大学同济医学院药学院 ,武汉　430030;2.武汉武药制药有限公司 , 430035)
[摘　要 ] 　目的　建立反相高效液相色谱法测定硫酸羟基氯喹的含量与有关物质。方法　采用 AglientZorbax
XDB-C
8
色谱柱 (4.6 mm×150 mm, 5 μm), 以 0.02 mol· L-1磷酸二氢钾溶液-甲醇为流动相 , 梯度洗脱 , 流速
1.0mL· min-1 , 检测波长 254nm。结果　硫酸羟基氯喹在 5 ～ 600 μg· mL-1浓度范围内线性关系良好(r=0.999 7, n=
7),平均回收率为 101.5%(RSD=2.0%), 最低检测限为 0.2ng。结论　该方法专属性强 ,准确 , 可以有效控制硫酸羟基
氯喹原料药的质量。
[关键词 ] 　羟基氯喹 , 硫酸;有关物质;色谱法 , 高效液相 , 反相;含量测定
[中图分类号 ] 　　　　[文献标识码 ] 　A　　　[文章编号 ] 　1004-0781(2009)11-1509-02
　 　硫酸羟 基氯 喹 (hydroxychloroquinesulfate), 商品 名
Plaquenil。硫酸羟基氯喹为抗疟药 ,也可用于红斑狼疮 、类风湿
关节炎 、关节僵硬 、关节炎 、口腔扁平苔藓的治疗。性状为白色
或类白色结晶性粉末 ,无嗅或近乎无嗅。硫酸羟基氯喹在《中
华人民共和国药典》上未见收载 , 《美国药典》(USP)和《英国药
典》(BP)均有收录 [ 1 , 2] , 其含量测定 USP采用紫外-分光光度
法 , BP采用非水滴定法;有关物质的检测方法均为薄层色谱法 ,
USP采用乙醇-水-氨水(80：16：4)为展开剂 , 在 254 nm波长
下检测 , BP也采用同样的展开体系 , 但比例有所不同(72：25
：3)。笔者采用反相高效液相色谱(RP-HPLC)法检测其含量
及有关物质 , 简便 , 准确 , 专属性好 , 能满足该原料成品的出口
要求 [ 3, 4] 。
1　仪器与试药　
1.1　仪器　岛津高效液相色谱仪(日本岛津), LC-10ATvp泵 ,
SPD-10Vvp紫外检测器;CS-Light工作站。
1.2　试药　硫酸羟基氯喹对照品(USP, 批号:JOB297);LC45-
1对照品(天津炜杰凯华科技有限公司 , 批号:20070104, 含量
99.4%);硫酸羟基氯喹原料(武汉武药制药有限公司 , 批号:
070402, 070403, 070404);甲醇(色谱纯 , Sigma公司);其他为分
析纯。
[收稿日期 ] 　2008-11-15
[作者简介 ] 　易　琼(1972-),女 ,湖北武汉人 ,硕士 ,主要从事药
物分析工作。电话:027-83822517, E-mail:yiq1001@163.com。
2　方法与结果　
2.1　色谱条件　色谱柱:AglientZorbaxXDB-C8(4.6 mm×
150 mm, 5 μm), 流动相如下 , A相:取 0.02 mol· L-1磷酸二氢
钾(取磷酸二氢钾 2.72 g置 1 000 mL水中),加三乙胺 2mL,用
1 mol· L-1氢氧化钾调节 pH值至(8.0±0.05), B相:甲醇。梯
度洗脱 , 0 min:A相-B相 (53： 47);20※ 32 min:A相-B相
(33：67)。流速:1.0 mL· min-1 , 检测波长:254 nm, 进样量:
20 μL, 采集时间:运行至梯度洗脱结束。稀释剂:A相-B相(53
：47)。
2.2　溶液的配制 [ 3 , 4]　
2.2.1　对照品溶液　精密称取硫酸羟基氯喹对照品 25 mg,置
于 25 mL量瓶中 , 加稀释剂溶解并稀释至刻度 , 摇匀 ,作为储备
液。精密量取 5 mL, 置于 10 mL量瓶中 , 加稀释剂溶解并稀释
至刻度 ,摇匀 , 作为对照品溶液。
2.2.2　供试品溶液　精密称取硫酸羟基氯喹样品 25 mg, 置于
50 mL量瓶中 , 加稀释剂溶解并稀释至刻度 ,摇匀 , 即得。
2.3　专属性实验　取已知杂质 LC45-1对照品 , 硫酸羟基氯喹
对照品适量 ,配成混合溶液进样 , LC45-1与硫酸羟基氯喹分离
度为 17.6。同时对硫酸羟基氯喹进行降解实验 ,硫酸羟基氯喹
在酸 、热的条件下比较稳定 , 在弱碱的条件下放置 24 h较稳定。
硫酸羟基氯喹经氧化破坏后 , 产生降解杂质 ,与主峰分离较好。
2.4　线性关系及最低检测限　精密量取 “ 2.2.1” 项下储备液
适量 ,用稀释剂配制成 5, 25, 50, 100, 250, 500, 600 μg· mL-1的
·1509·医药导报 2009年 11月第 28卷第 11期