全 文 ：“2． 1”项下色谱条件进样 10 μl，测定峰面积。结果表明，绿
原酸的平均加样回收率为97． 60%，ＲSD = 1． 32%(n = 6)。
2． 10 样品含量测定
取 21 批次不同采收期的忍冬藤和金银花样品，按“2． 3”
项下方法制备，按“2． 1”项下色谱条件进样测定，按外标法
(峰面积)计算样品中绿原酸的含量，结果见表 2 和图 2。
图 2 三种忍冬藤中不同采收期的绿原酸含量变化
3 讨论
3． 1 采用 HPLC 法测定忍冬藤和金银花中绿原酸的含量，
收集了忍冬藤 7 ～ 12 月共 18 个样品，测定结果表明，三种不
同来源的忍冬藤中绿原酸的含量 9、10 月份普遍较高。
3． 2 在 6 个不同采收期中，测定了忍冬藤、无毛淡红忍冬
藤、红腺忍冬藤三种忍冬藤的含量，其中无毛淡红忍冬藤中
绿原酸的含量最高。
3． 3 本研究只针对忍冬藤和金银花中绿原酸的含量进行了
测定，而未对其他成分进行研究，从检测结果来看，金银花中
绿原酸的含量普遍高于忍冬藤。
3． 4 试验结果表明，以上 21 批次忍冬藤和金银花样品的绿
原酸含量均符合现行《中国药典》的有关规定。本文为十堰
的忍冬藤采收开发和金银花质量控制提供了参考依据。
参 考 文 献
1 中国药典［S］． 2010 年版．一部． 179，205
2 卓廉士．本草纲目博物大典［M］． 长春:吉林文史出版社，2010．
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3 王睿林．常用中药 500 味效用便览［M］． 北京:人民卫生出版社，
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4 李建志，刘旭红，杨丽珍，等． 11 种中草药抗菌作用实验研究
［J］． 中医药信息，2009，26(3) :82-83
5 陈叶青． ＲP-HPLC法测定盆炎净胶囊中绿原酸的含量［J］． 中国
药师，2010，13(8) :32-34
(2014-08-25 收稿 2015-01-04 修回)
通讯作者:吴旭珍 Tel:(0578)6818208 E-Mail:7621895@ qq． com
华东覆盆子根中没食子酸的提取工艺优选及含量测定
吴旭珍 (青田县中医医院 浙江青田 323900)
摘 要 目的:优选华东覆盆子根中没食子酸的提取工艺，并建立其含量测定方法。方法:采用高效液相色谱法测定华东覆
盆子根中没食子酸的的含量。通过正交设计试验考察料液比、提取时间和盐酸浓度对没食子酸得率的影响。结果:没食子酸
在4． 082 ～ 40． 815 μg·ml －1(r = 0． 999 9)范围内呈良好的线性关系;平均加样回收率为101． 28%，ＲSD = 1． 08%(n = 6)。最佳
提取工艺为料液比 1∶ 15，加热回流2． 5 h，盐酸浓度4． 2%。结论:优选出的提取工艺简单可行，建立的含量测定方法稳定可
靠，可用于提取和测定华东覆盆子根中的没食子酸。
关键词 华东覆盆子根;没食子酸;提取工艺;含量测定;高效液相色谱法
中图分类号:Ｒ284． 2 文献标识码:A 文章编号:1008-049X(2015)04-0684-03
Extraction Technology Optimization and Content Determination of Gallic Acid in the Ｒoots of Ｒubus Chin-
gii Hu from Eastern China
Wu Xuzhen(Qingtian Hospital of Traditional Chinese Medicine，Zhejiang Qingtian 323900，China)
ABSTＲACT Objective:To optimize the extraction technology of gallic acid in the roots of Ｒubus chingii Hu from eastern China and
establish an assay method． Methods:The content of gallic acid was determined by HPLC． Orthogonal design was used to investigate
the influence of solid / liquid ratio，extraction time and concentration of hydrochloric acid on the yield of gallic acid． Ｒesults:A good
linearity of gallic acid was within the range of 4． 082-40． 815 μg·ml －1(r = 0． 999 9) ，and the average recovery was 101． 28% (ＲSD
=1． 08%，n = 6)． The optimal technology was as follows:extracted with heating circumfluence in 4． 2% hydrochloric acid solution
with solid / liquid ratio of 1∶ 15 for 2． 5h． Conclusion:The optimal extraction technology is simple and feasible，and the assay method is
stable and reliable，which can be used in the extraction and determination of gallic acid in the roots of Ｒubus chingii Hu from eastern
China．
KEY WOＲDS Ｒoots of Ｒubus chingii Hu from eastern China;Gallic acid;Extraction technology;Assay;HPLC
华东覆盆子(Ｒubus chingii Hu)为蔷薇科悬钩子属植物， 其未成熟果实和根均可入药［1］，主要分布于中国辽宁、吉林、
486
www． zgys． org 研究简报
内蒙古、福建、浙江、江苏、安徽、江西等地区，日本、北美和欧
洲等也有分布，多生长于山地杂木林边、灌丛或荒野，海拔
500 ～ 2 000 米。《中药大辞典》记载华东覆盆子根具有清热
利湿的功效，可治疗丝虫病、淋巴管炎、风湿关节痛、痢疾、白
带等症［2］。畲医以华东覆盆子根入药，名为“搁公扭根”，认
为其可祛风止痛、明目退翳、和胃止呕，主要用于结核性瘘
管，结核病所致的脊柱压迫症等，在畲药中应用较为广
泛［3，4］。经研究发现华东覆盆子根中含有大量的没食子酸，
现代药理研究表明，没食子酸具有抗菌、清除自由基、促进血
小板凝集、诱导细胞凋亡等功能［5］。本文以没食子酸含量为
指标，通过正交试验探讨了提取时间、料液比和盐酸浓度对
华东覆盆子根中没食子酸提取含量的影响，优选了最佳提取
工艺，为该药材中没食子酸的提取提供科学依据。
1 仪器与试药
1． 1 仪器
Agilent 1260 高效液相色谱仪(美国安捷伦公司) ;
G4212B 二极管阵列检测器 (美国安捷伦公司) ;电子天平
(XS105DU，瑞士梅特勒公司) ，水浴锅(上海梅香仪器公
司)。
1． 2 试药
液相所用乙腈和磷酸均为色谱纯，水为纯化水，盐酸
(36% ～38%)为分析纯。实验用华东覆盆子根样品于 2013
年采自浙江省各地区，经丽水市食品药品检验所王建伟副主
任中药师鉴定为华东覆盆子(Ｒubus chingii Hu)的根，见表
1。没食子酸对照品(批号:110831-200803，含量:90． 1%，使
用前无需处理)购自中国食品药品检定研究院。
表 1 华东覆盆子根药材一览
编号 采集地 采集时间 水分(%)
1 丽水市景宁县 2013 年 9 月 9． 3
2 丽水市松阳县 2013 年 10 月 7． 0
3 金华市武义县 2013 年 11 月 7． 8
4 衢州市江山市 2013 年 10 月 10． 2
5 温州市文成县 2013 年 10 月 6． 0
2 方法与结果
2． 1 对照品溶液的制备
精密称取没食子酸对照品适量，置 100 ml 量瓶中，加甲
醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制成没食子酸浓度为81． 631μg
·ml －1(折算后)的溶液，作为贮备液。
2． 2 供试品溶液的制备
称取华东覆盆子根干燥药材粉末(过 2 号筛)0． 5 g，精
密称定，加入4． 2%盐酸溶液 25 ml，加热回流提取 2 h，取出
放冷，以4． 2%盐酸溶液补足减失的重量，滤过，精密量取续
滤液 5 ml 置 10 ml 量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，用
0． 45 μm微孔滤膜滤过，取续滤液即得。
2． 3 系统适用性试验
色谱柱:Agilent Zorbax SB-C18 色谱柱 (250 mm ×
4． 6 mm，5 μm) ，柱温:30℃;流动相:甲醇-0． 4%磷酸水溶液
(5∶ 95) ;流速:1． 0 ml·min －1;检测波长:273 nm;进样量:5
μl。分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液进样，记录色谱
图，见图 1。可见在该色谱条件下，没食子酸与其他成分可
达到基线分离，保留时间约为9． 2 min，理论塔板数在 5 000
以上，分离效能较好。
A．对照品 B．供试品 1．没食子酸
图 1 HPLC色谱图
2． 4 方法学考察
2． 4． 1 线性关系考察 分别精密吸取上述贮备液 1，2，4，6，
8，10 ml置 20 ml 量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，制成不
同浓度的对照品溶液，并按“2． 3”项下色谱条件进样测定，
以峰面积(Y)对浓度(X，μg·ml －1)进行线性回归，回归方
程为:Y = 17． 565 0X － 4． 513 5(r = 0． 999 9) ，表明没食子酸
在4． 082 ～ 40． 815 μg·ml －1范围内与峰面积呈良好的线性
关系。
2． 4． 2 精密度试验 精密吸取同一对照品溶液 5 μl，按
“2． 3”项下色谱条件连续进样 6 次，测得没食子酸的峰面积
ＲSD为1． 21%(n = 6) ，结果表明仪器精密度良好。
2． 4． 3 重复性试验 精密称取同一批华东覆盆子根干燥药
材粉末(编号:1，过二号筛)6 份，每份0． 5 g，按“2． 2”项下方
法制备供试品溶液，按“2． 3”项下色谱条件进行测定，记录
没食子酸的峰面积并计算其含量，其含量为0． 54%，ＲSD 为
0． 56%(n = 6) ，结果表明本法重复性良好。
2． 4． 4 稳定性试验 精密吸取“2． 4． 2”项下同一供试品溶
液 5 μl，分别于 0，2，4，8，12，24 h进样，按“2． 3”项下色谱条
件进行测定，测得没食子酸的峰面积 ＲSD 为1． 04%，表明供
试品在室温下 24 h内稳定性良好。
2． 4． 5 加样回收率试验 称取同一批华东覆盆子根干燥药
材粉末(编号:1，过 2 号筛)6 份，每份0． 25 g，精密称定，分别
精密加入与药材中含量等量的没食子酸对照品，按“2． 2”项
下方法制备回收率试液，按“2． 3”项下色谱条件进行测定，
计算回收率。结果没食子酸的平均回收率为101． 28%，ＲSD
为1． 08%(n = 6)。结果表明该方法准确可靠。
2． 5 提取工艺筛选
2． 5． 1 正交试验设计 在选择加热回流法作为提取方法的
基础上，根据单因素初筛结果，本试验选定料液比 (A)、提
取时间 (B)、盐酸浓度(C)作为考察的三个因素，每个因素
各取三个水平，选用 L9(3
4)正交试验表安排试验，因素与水
平设计见表 2。
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中国药师 2015 年第 18 卷第 4 期 China Pharmacist 2015，Vol． 18 No． 4
表 2 正交试验因素水平表
水平
因素
A
料液比(倍)
B
提取时间(h)
C
盐酸浓度(%)
1 5 2． 5 4． 2
2 10 3． 5 6． 4
3 15 4． 5 8． 5
2． 5． 2 正交试验结果 称取华东覆盆子根干燥药材粉末
(编号:1，过二号筛)9 份，每份5． 0 g，精密称定，按 L9(3
4)正
交试验表中规定的条件加热回流，取出放冷，以相应盐酸浓
度的溶剂补足减失的重量，滤过，精密量取续滤液 1 ml置 20
ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，用0． 45 μm微孔滤膜滤
过，取续滤液作为供试品溶液。结果见表 3。
表 3 提取工艺正交试验结果表
序
号
因素
A B C D(空白)
没食子酸得
率(mg·g － 1)
1 1 1 1 1 4． 6771
2 1 2 2 2 4． 4134
3 1 3 3 3 3． 4352
4 2 1 2 3 5． 1166
5 2 2 3 1 4． 4776
6 2 3 1 2 5． 4558
7 3 1 3 2 4． 9038
8 3 2 1 3 5． 8422
9 3 3 2 1 5． 2771
K1 12． 5258 14． 6976 15． 9752 14． 4318
K2 15． 0501 14． 7333 14． 8071 14． 7731
K3 16． 0231 14． 1681 12． 8166 14． 3941
Ｒ 3． 4973 0． 5651 3． 1585 0． 3790
2． 5． 3 结果分析 用实验误差对各个因素作用的显著性进
行检验，对实验数据进行方差分析，结果见表 4。表 3 极差
值显示，各因素对提取含量影响的大小排序为 A ＞ C ＞ B，
即提取过程中料液比对没食子酸的含量影响最大，盐酸浓度
次之，提取时间的影响则最小。表 3 方差分析显示料液比和
盐酸浓度对结果的影响有显著性(P ＜ 0． 05) ，提取时间对结
果无显著影响(P ＞ 0． 1)。从 K1、K2、K3 的数值比较来看，A3
＞ A2 ＞ A1，B2 ＞ B1 ＞ B3，C1 ＞ C2 ＞ C3，理论最佳工艺为:
A3B2C1，由于提取时间2． 5 h和3． 5 h结果差别不大，故优选
工艺为:料液比 1∶ 15，回流提取2． 5 h，盐酸浓度4． 2%。
表 4 方差分析结果表
因素 偏差平方和 自由度 F比 F临界值 P
A 2． 172 2 74． 897 19． 000 ＜ 0． 05
B 0． 067 2 2． 310 19． 000 ＞ 0． 1
C 1． 700 2 58． 621 19． 000 ＜ 0． 05
D 0． 03 2
注:F0． 1(2，2)= 9，F0． 05(2，2)= 19，F0． 01(2，2)= 99。
2． 6 验证试验
精密称定华东覆盆子根药材粉末，按以上试验得出的最
佳工艺条件提取 5 批药材，每批平行制备 3 份，按“2． 3”项下
色谱条件进行测定，记录没食子酸的峰面积并计算含量，结
果见表 5。各批次测定结果差异较小，表明该工艺稳定可
行。
表 5 华东覆盆子根中没食子酸的含量
测定结果(%，n =3)
编号 没食子酸 编号 没食子酸
1 0． 58 4 1． 45
2 0． 76 5 1． 00
3 1． 01
3 讨论
3． 1 提取方法的考察
本文考察了超声和加热回流两种提取方法，发现回流提
取得到的没食子酸含量较高，故本文采用加热回流提取法。
3． 2 提取溶剂的考察
本试验在加热回流的基础上，考察了 50%乙醇、70%乙
醇、乙醇和 4． 2%盐酸溶液等溶剂对没食子酸的提取能力，
结果显示4． 2%盐酸溶液提出的没食子酸含量最高。
3． 3 盐酸浓度的考察
本文在选取盐酸溶液为提取溶剂的基础上，对2． 1%、
6． 4%、10． 6%盐酸溶液进行初步考察，发现6． 4%盐酸溶液
用于提取没食子酸含量最高，2． 1%和10． 6%盐酸溶液的提
取结果相近，在此基础上设定正交表中盐酸的浓度。
3． 4 小结
本文通过正交试验，优选了华东覆盆子根中没食子酸的
最佳提取工艺。极差分析和方差分析结果表明最佳工艺为:
料液比 1∶ 15，回流提取2． 5 h，盐酸浓度4． 2%。该工艺简单
可行，经验证其结果稳定可靠，可为华东覆盆子根中没食子
酸的提取提供参考。
参 考 文 献
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(2014-10-28 收稿 2014-12-31 修回)
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