全 文 ：藤 三 七 核 酸 含 量 分 析
王 丽兰 杨凤和 王春霖 张穗莉 姜言功
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能看到大部分细胞 已经破裂时为止 。 该液即
为实验用的 “ 匀浆溶液 ” 。
为落 ;拜斗肉质小藤本植物 , 为了解藤三七核
酸含量情况 , 特作如下分析 : 2
. 核酸的提取
“ 匀浆亏容液” 的制备
精确称取 叹0 9 新鲜藤三七荃叶混合样 ,
将其 切成小段 , 置入装 有 1 20 m l 冷 的碱性
E D T A溶液的组织捣切器中 , 高速研磨 2 0
分钟 ; 再加冷的硷性 E T D A 溶液 , 使粗匀
浆 J忿量 达到 20 om l , 混匀 , 取 50 m l于玻璃
匀浆器中 , 研 磨 1 5分钟 , 直到用显微镜观察
取上述匀浆溶液 5 : : : 1力「l人称有 2 0二 1 1 0%
冷的高氯酸的离心管中 , 充分混合 , 将离心
管浸于冰盐洛内冷却使其维持 4 C , 10 分钟
后 , 4 0 0 0转 / 分离心 20 分钟 , 弃去 上清液 ,
把沉淀物再重新泡在 1。。 1 10 % 的 高氯 酸
中 , 弃除上清液 , 把离心管倾倒在滤纸 _七,
除去多余的酸 。 将 l m l 与%高氯酸加到沉渣
中 , 用一根细玻璃棒搅动 , 使离心管内的沉
叶面喷洒弱毒后再喷洒强毒也表现有预防作
! }J (血清滴度未升高 ) , 而对照的血清滴度
达 5 12 0倍 。
对强毒 T M V 的浸染有预防效果 。 这和北京
微生物研究所张秀华等人所做的实验结果是
一致的 。
讨 论
一 、 使用玻片微量沉淀法检查长春 市郊
区三处种植的番茄 , 证 明番茄受 T M v 侵染
还是很严重 的 。 实践证明 , 使用玻片微量沉
淀法大面积普查香茄受 T M V 的侵染是一种
快速 、 简单、 可靠的诊断方法 。
二 、 通过血清学方法证明 , T M v 经 亚
硝酸诱变后得到的弱毒 T M V 一 N , 4 的抗原
性有所改变 , 改变的原因 , 除了弱毒比强毒
的病毒含量低之外 , 弱毒在某些理化连质上
也产生了不日应的变化 。
三 、 通过我们研制得到的两种血清不同
滴度 l’勺比较 , 间接证 明了番茄经弱毒接种后
参 考 文 献
1
。 大岛信行 、 小饼昭二 、 后藤忠则 : 北农试
汇报 8 5 : 2 3一 3 3 , 1 9 6 5
2
。 小饼昭二 、 后藤忠则 , 大岛信行 : 日植病
报 3 2 : 2 2 1一 2 2 6 , 1 9 6 6
3
。 大岛信行 , 后藤忠则 、 小讲昭二 : 日植病
报 3 0 : 9 0一 9 3 , 1 9 6 5
4
. 大岛信行 、 小饼昭二 、 后藤忠则 : 日植病
报 2 8 : 3 0 6 , 1 9 6 3
5
。 张秀华 、 田波等 , 植物病理学报 , 1 9 8 0年
第 1 0卷第 i 期页 , 4 9一 5 3
6
. 张秀华等 ,中国农业科学 , 1 981 年第 6 期 ,
78一 8 0页
·
2 5 一
渣破裂成很小的片断 , 沿离心管壁缓慢加人
5 %高氯酸 4m l , 混匀 , 置 70 ℃水洛锅内加
热 20 分钟 , 冷却后 4 0 0。转 / 分离心 20 分钟 ,
小心收集上清液 。 再将 5 %高氯酸 5m l加人
离心管中 , 充分混合 , 于 4 0 0 0转 /分离心 20 分
钟 , 小心收集上清液 , 合拼上述两次收集的
上清液作为测定核酸的 “ 样品溶液” 。
液 R N A 的含量 , 以此计算出藤三七干品中
R N A 的含量 , _ E述实验均分为三份 , 重新
测定三次 。
5
. 测定结果
见表
藤三七的核酸含量
3
.
D N A 的测定
1
1到侧,`尸翻百.l
取样品溶液 2m l , 加 5 %高氯酸 3m l , 1 . 5%
二苯胺试剂 5 m l , 1 . 6 %乙醛 o . s m l , 充分混
合后 , 于 2 5 ~ 3 0℃ 保温 1 5一 1 7小时 。 用 7 5 1
型分光光度计测 O D 。 。 。值 , 以 5 % 高 氯酸
作为空 白对照 , 用 D N A 标准品制备一条标
准曲线 。 从标准曲线上查 出待测样品溶液中
D N A 的含量 , 以此计算出藤三七干样品中
D N A的含量 。 上述实验均分三份 , 重复测
定 三次 。
4
.
R N A 的测定
取 2m l的 样 品 溶 液 用 蒸 馏 水 稀释 到
l o m l
, 取 l m l 稀:释的样品溶液 , 加入 1%高氯
酸 4 m l ,再加入 0 . 1% 5 一 甲基 苯 二 酚 试 剂
( 0
.
1 9 5 一 甲基酚和 o . z g F e C I : · 6 H 2 0溶于
S Om l浓盐酸和 Z Om l浓硫酸 ,始终用新配制的 )
混 合后置于沸水浴 45 分钟 , 冷 却 后 , 用 7 51
型 分光光度计测 O D 6 65 值 , 以空 白 测 定 为
对照 。 以 R N A标准品 (上海药用辅料厂生
产 ) 制 备 标准曲线 , 从标准曲线查得样品溶
、 品…· 份卜黑掣愕器叠蔽朴;…。一…2一卜一
6
。 结论
藤三七核酸的含量测定结果为 : R N A
占基本千重的 2 . 5 % , D N A 占 0 . 98 % , 核
酸总量为 3 . 56 % 。
参 考 文 献
i
。
E u r o p e a n J
。
A P P I
。
M i
e r o b z o ]
。
B i o t e e h n o l
。
( 1 9 5 2 ) 1 5: 2 3 7一 2 4 0
2
.
T
.
S a s a k e t a l : C h e m l P h a r m
.
B u l l 1 9 ( 4 ) 8 2 1一 8 2 6 。 1 9 7 1
3
.
U a u i e t a l: C a r b o il y d r
.
R e 、 -
9 2 ( 1 ) 1 0 9 2 0 1 9 8 1
4
. 江苏新医学院 、 中药大辞典 , 上海出版
社 , 19 7 7 : 2 6 9 6
一 2 6 一