全 文 :第 14 卷 第 4 期 衡水学院学报 Vol. 14, No. 4
2012 年 8 月 Journal of Hengshui University Aug. 2012
HPLC 法测定覆盆子中 VE 含量的研究
孙 金 旭
(衡水学院 生命科学学院,河北 衡水 053000)
摘 要:建立了 HPLC 测定覆盆子浆果中 VE含量方法,确定测定波长为 295 nm,最大标准偏差 5.53 %,峰面积与 VE标准
品线性关系良好,标准方程 Y = 6 587.35 x,相关系数 0.999 2,加标回收率在 96.55 % ~ 98.43 %之间,此方法用于测定覆盆
子浆果 VE含量准确、可行,经测定覆盆子浆果中 VE含量为 0.093 5 mg/g.
关键词:覆盆子;VE;HPLC
中图分类号:TS255 文献标识码:A 文章编号:1673-2065(2012)04-0122-04
覆盆子(raspberry)、大号角公,蔷薇科悬钩子属浆果植物.因其糖类、有机酸、VC、VB、矿物质,花青
素、黄酮及挥发油、萜类、酚酸等有效成分含量丰富.覆盆子浆果中黄酮、糖、有机酸、VB、VC与造血化合
物协调结合,因此,覆盆子为防病、治病的保健果品,也称之为“第三代黄金水果”[1-2].
覆盆子浆果中SOD、VE含量具各种水果之首,它能清除体内部分阴离子自由基,在预防衰老、抗辐射损
伤、抗氧化等方面起重要作用,因此,覆盆子被欧美誉为“癌症克星”[3-5].有关覆盆子的研究较少,其浆果
中成分含量测定的研究报道几乎没有,本研究旨在建立HPLC测定覆盆子浆果中VE含量的方法,为后续覆盆子
相关成分测定及研究奠定基础.
1 材料与方法
1.1 材料
覆盆子浆果(市售);VE 标准品(购于国家标准物质网,纯度 ≥ 97 %);焦性没食子酸 (上海展云化工有限
公司);石油醚,氢氧化钾,无水乙醇,碳酸钠均为分析纯;甲醇(色谱纯,液相色谱用).
1.2 仪器
高效液相色谱 Agilent 110(大连三杰科技发展有限公司)配紫外检测器;组织捣碎机 XA-1(金坛市开发区吉
特实验仪器厂);分光光度计 UV-250(日本岛津) .
1.3 方法
1.3.1 VE标样配制
准确称取 VE标准品使其浓度为 1 mg,甲醇定容至 100 mL,其标准品质量浓度为 10 mg/L,以此溶液为基
础,分别稀释配制质量浓度分别为 0.5, 1, 1.5, 2.0, 2.5, 3 mg/L 的标准溶液待用.
1.3.2 HPLC 色谱测定条件
色谱柱:C18柱(安捷伦 C18标准柱);柱温:30 ℃;流动相:V(甲醇)︰V(双蒸水) = 9︰1;流速:1 mL/min;
柱压:48 Pa;进样量:10 μL.
1.3.3 样品处理
准确称取一定量的覆盆子浆果,组织捣碎机捣碎后按文献[6]进行样品处理.
1.3.4 相对标准偏差计算
相对标准偏差计算公式如(1)、(2)、(3)所示.
1 2 3 4 5
5
x x x x x x
X
n
(1)
(2)
2
1
x X x
S
n
收稿日期:2012-01-05
基金项目:2011 年河北省科技厅科学技术研究与发展计划项目(11215645); 衡水市科学技术研究与发展计划项目(09058z)
作者简介:孙金旭(1975-),男,河北景县人,衡水学院生命科学学院副教授,工学博士.
第 4 期 孙金旭 HPLC 法测定覆盆子中 VE 含量的研究 123
(3) 1RS 00%SD
X
1.3.5 回收率计算
回收率计算公式如下:
(4)
W Z EA
W Z
式中,A:回收率;W:原覆盆子浆果提取液中测定 VE含量 mg/g;Z:加标量 mg;E:加标后测定混合液
中 VE含量 mg/g.
2 结果与讨论
2.1 测定波长选择
为确定覆盆子浆果提取液中 VE 的高效液相色谱测定波长,以 VE 标准品为待测液,紫外分光光度法进行
200 ~ 500 nm 下的全波长扫描,扫描结果如图 1 所示.
如图 1 所示,VE标准品在 200 ~ 500 nm 下紫外扫描后,在 295 nm 处有唯一最大吸收峰,与报道 VE紫外
的最大吸收波长 290 nm 相差不大,表明 VE紫外测定的最适波长为 295 nm.
2.2 VE标品 HPLC 色谱图
VE标准品 HPLC 色谱测定条件为:测定波长 295 nm;柱温:30 ℃;流动相:V(甲醇)︰V(双蒸水) = 9︰1 ;
流速:1 mL/min;柱压:48 Pa;进样量:10 μL.测定结果如图 2 所示.
由图 2 可知,VE标准品在设定的测定条件下,在 9.252 min 处有单一峰,表明该测定条件适宜于 VE的测定.
图 2 VE标品 HPLC 色谱图 图 1 VE标品紫外全波长扫描结果
2.3 绘制标准曲线
分别取浓度为 0, 0.1, 0.2, 0.4, 0.6, 0.8, 1 mg/L 的 VE标液,按上述 HPLC 测定条件进样测定,以峰面积为横
坐标,VE标准品质量浓度(mg/L)为纵坐标绘制标准曲线,如图 3 所示.
如图 3 所示,VE峰面积与浓度对应的标准曲线方程为 Y = 658 7.35 x,线性范围在 0 ~ 1.0 mg/L 之间,相关
系数 R 为 0.999 2.
2.4 精密度实验
将覆盆子浆果提取液分装于 5 个样品瓶内,经微孔过滤器过滤后,重复测定 5 次,计算每次 VE出峰位置
的峰面积,出峰时间,根据计算公式(1)、(2)、(3)、(4)计算得出 RSD 值,结果如表 1 所示.
表 1 峰面积及出峰时间表
1 2 3 4 5
峰面积 0.000 142 3 0.000 141 6 0.000 142 2 0.000 142 4 0.000 141 8
出峰时间/min 9.248 9.193 9.256 9.263 9.238
由表 1 可知,根据 5 次测定时的出峰时间及出峰面积计算得出峰面积 RSD 为 0.000 034 %,出峰时间 RSD
为 5.53 %,表明此高效液相色谱条件精密度良好,设计合理,较为适宜于测定覆盆子中的 VE含量.
2.5 回收率实验
取覆盆子浆果提取液 30 mL,平均分成 3 份,分别测定提取液中 VE含量,分别取质量浓度为 1 mg/L 的 VE
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标准品 1, 2, 3 mL, 分别添加入提取液中,经过滤膜过滤后分别测定 VE含量计算回收率,结果如表 2 所示.
表 2 样品回收率表
名称 1 2 3
样品 VE含量/(mg/g) 0.093 5 0.093 5 0.093 5
加标量/(mg/g) 0.01 0.02 0.03
混合样 VE含量/(mg/g) 0.101 8 0.109 6 0.118 6
平均回收率/% 98.43 96.55 96.08
由图 2 可知,经加标后,VE标品的回收率在 96.08 % ~ 98.43 %之间,表明标品回收良好,此方法适宜于
覆盆子浆提取液中 VE含量的测定.
2.6 样品分析与测定
2.6.1 覆盆子浆果提取液 HPLC 色谱图
根据设定色谱条件,将覆盆子浆果提取液进行 HPLC 色谱分离,分离结果如图 4 所示.
0.0000 0.0002 0.0004 0.0006 0.0008 0.0010 0.0012 0.0014 0.0016
0.0
0.2
0.4
0.6
0.8
1.0
Th
e
co
nc
en
tra
tio
n
of
V
E
(m
g/
L)
The peak area
y=6587.35x
Equatio y = a
Adj. R-S 0.999
Value Standar
B Interc 7.563 0.00102
B Slope 656.8 1.10448
图 3 标准曲线图 图 4 覆盆子浆果提取物液相色谱图
由图 4 可知,在设定的色谱条件下,覆盆子浆果提取液分离效果较好,色谱峰之间的分离度较大,和 VE
标准品 HPLC 相对照,该 HPLC 图谱在 9.193 min 处有较大吸收峰,表明该出峰位置为 VE,说明该方法能成功
的将覆盆子浆果提取液中的成分分开,该 HPLC 条件适宜于覆盆子浆果提取液中 VE含量的测定分析.
2.6.2 覆盆子浆果中 VE含量测定
将覆盆子浆果 3 份按 1.3.3 进行相同处理,按已建立的 HPLC 法分别测定 VE含量,结果如表 3 所示.
表 3 覆盆子浆果中 VE含量的测定
次数 1 2 3
VE含量/(mg/g) 0.093 5 0.093 6 0.093 5
由表 3 可知,经 3 次测定,覆盆子浆果中 VE含量为 0.093 5 mg/g,3 次测定结果相差不大.
3 结论
覆盆子浆果风味芳香,口感细腻,营养丰富,据分析,覆盆子浆果中 SOD、VE 含量具各种水果之首,它能
清除体内部分阴离子自由基,在预防衰老、抗辐射损伤、抗氧化等方面起重要作用,因此,覆盆子被欧美誉为
“癌症克星”.本研究建立了 HPLC 测定覆盆子浆果中 VE含量方法,色谱条件:C18标准柱;柱温:30 ℃;流动
相:V(甲醇)︰V(双蒸水) = 9︰1;流速:1 mL/min;柱压:48 Pa;进样量:10 μL,测定波长 295 nm,此方法测定
VE含量最大标准偏差 5.53 %,峰面积与 VE标准品线性关系良好,标准方程 Y = 6 587.35 x,相关系数 0.999 2,加
标回收率在 96.55 % ~ 98.43 %之间,此方法用于测定覆盆子浆果中 VE含量准确、可行,经测定覆盆子浆果 VE含
量为 0.093 5 mg/g.
第 4 期 孙金旭 HPLC 法测定覆盆子中 VE 含量的研究 125
参考文献:
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[3] ZHOU X H, KASAI R, OHTANI K, et al. Oleanane and ursane glucosides from Rubus species[J]. Phytochemistry,1992,31(10):
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[4] GUO Q L,YANG J S. Studies on the chemical constituents in fruits of Rubus chingii[J].China J Chin Mater Med,2005,30(3):198-
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The Determination Study for VE in Raspberry Fruit by HPLC
SUN Jin-xu
(College of Life Science, Hengshui University, Hengshui, Hebei 053000, China)
Abstract: This paper analyzes the problems in determination study of VE content in raspberry fruit by HPLC. The study
indicates that the suitable determination wavelength is 295 nm and the maximum standard deviation by using this way to
determinate the content of VE is 5.53 %. VE content displays an excellent linear relationship with the peak area; the standard
curve equation is Y = 6 587.35 x, with a correlation coefficient of 0.999 2. The spike recovery for VE is 96.55 % to 98.43 %.
The method is feasible and accurate for determining VE content in raspberry fruit. The content of VE in raspberry fruit is
0.093 5 mg/g.
Key words: raspberry; VE; HPLC
(责任编校:李建明 英文校对:李玉玲)
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7 结束语
自动喷水灭火局部应用系统是一种新型的简易湿式自动喷水灭火系统,它既具有湿式系统的自动灭火功
能,又具有投资少、施工方便等优势,在提高高层住宅楼自防自救能力上能够起到事半功倍的效果.
参考文献:
[1] 王炯,李风,刘立国,等.高层民用建筑设计防火规范[S].北京:中国计划出版社,2005:30-35.
[2] 韩占先,何以申,王万钢,等.自动喷水灭火系统设计规范[S].北京:中国计划出版社,2005:12-40.
Automatic Sprinkler Local Applications in High-rise Residential Buildings
CAO Wen-hua, DONG Xi-fang
(Police Fire Brigade in Cangzhou City, Cangzhou, Hebei 061001, China)
Abstract: The fire risk in high-rise residential buildings and the shortcomings of the indoor fire hydrant system include not
working properly and being difficult to operate due to the delayed maintenance. Sprinkler Local Application System can be set
in high-rise residential buildings to improve the self-help capabilities. In the design of the system, the following should be
considered: the location of system in high-rise residential buildings, the selection of system model, the way of water supply
and the design being reasonable.
Key words: system of automatic sprinkler local application; building evacuation facilities; fire hydrant water supply system;
living water supply system
(责任编校:李建明 英文校对:李玉玲)