全 文 ：腺梗豨莶抗风湿化学成分研究
赵凯华，刘　珂，赵　烽
（烟台大学 药学院，山东 烟台２６４００５）
摘　要：目的：研究腺梗豨莶中的抗风湿活性成分。方法：采用硅胶柱色谱等技术分离化合物，根据化合
物的理化性质和运用波谱技术鉴定结构。结果：从石油醚部位分离得到４个化合物，分别为二十四碳酸
（１）、β－谷甾醇（２）、熊果酸（３）、Ｎ－（Ｎ－苯甲酰基－Ｌ－苯丙胺酰基）－Ｏ－乙酰基－Ｌ－苯丙氨醇（４）。化合物１～３
对ＬＰＳ诱导巨噬细胞释放ＮＯ具有明显的抑制活性，ＩＣ５０分别为１３．１μｇ／ｍＬ，１３．９μｇ／ｍＬ，５．９μｇ／ｍＬ，
优于阳性药物氢化可的松。熊果酸还对巨噬细胞释放ＴＮＦ－α具有明显的抑制作用，ＩＣ５０为１．６μｇ／ｍＬ。
结论：化合物３为首次从该属植物中分离得到。
关键词：豨莶；化学成分；抗风湿
中图分类号：Ｒ２８４．１　　　文献标识码：Ａ　　　文章编号：１６７３－２１９７（２０１２）０２－００４０－０３
收稿日期：２０１１－１１－１９
基金项目：山东省自然科学基金项目（ＺＲ２００９ＣＭ０２９）
作者简介：赵凯华（１９８３－），女，烟台大学硕士研究生，研究方向为天然产物活性成分；赵烽（１９７４－），女，博士，烟台大学教
授，研究方向为天然产物活性成分。
Ａｃｔｉｖｅ　Ｃｏｎｓｔｉｔｕｅｎｔｓ　ｆｒｏｍ　Ｓｉｅｇｅｓｂｅｃｋｉａ　Ｐｕｂｅｓｃｅｎｓ
Ｚｈａｏ　Ｋａｉｈｕａ，Ｌｉｕ　Ｋｅｍ，Ｚｈａｏ　Ｆｅｎｇ
（Ｓｃｈｏｏｌ　ｏｆ　Ｐｈａｒｍａｃｙ，Ｙａｎｔａｉ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｓｈａｎｄｏｎｇ　２６４００５，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏ　ｓｔｕｄｙ　ｔｈｅ　ｃｏｎｓｔｉｔｕｅｎｔｓ　ｏｆ　Ｓｉｅｇｅｓｂｅｃｋｉａ　ｐｕｂｅｓｃｅｎｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ　ｗｅｒｅ　ｉｓｏｌａｔｅｄ　ｂｙ　ｓｉｌｉｃａ　ｇｅｌ　ｃｈｒｏ－
ｍａｔｏｇｒａｐｈｙ　ａｎｄ　ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ　ｂｙ　ｐｈｙｓｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ　ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ　ａｎｄ　ｓｐｅｃｔｒａ　ｄａｔａ．Ｒｅｓｕｌｔｓ：Ｆｏｕｒ　ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ　ｗｅｒｅ　ｉｓｏｌａｔｅｄ　ｆｒｏｍ　ｔｈｅ　ｐｅｔｒｏｌ　ｅ－
ｔｈｅｒ　ｆｒａｃｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ　ｔｏ　ｂｅ　ｔｅｔｒａｃｏｓａ－ｃａｒｂｏｎｉｃ　ａｃｉｄ（１），β－ｓｉｔｏｓｔｅｒｏｌ（２），ｕｒｓｏｌｉｃ　ａｃｉｄ（３），（Ｎ－（Ｎ－ｂｅｎｚｏｙｌ－Ｌ－ｐｈｅｎｙｌａｌａｎｙｌ）－Ｏ－
ａｃｔｙｌ－Ｌ－ｐｈｅｎｙｌａｌａｎｏｌ（４）．１－３ｉｎｈｉｂｉｔｅｄ　ｔｈｅ　ＮＯ　ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ　ｉｎｄｕｃｅｄ　ｂｙ　ＬＰＳ，ｗｉｔｈ　ＩＣ５０ｏｆ　１３．１μｇ／ｍＬ，１３．９μｇ／ｍＬ，５．９μｇ／ｍＬ，ｒｅ－
ｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．３ａｌｓｏ　ｉｎｈｉｂｉｔｅｄ　ｔｈｅ　ｒｅｌｅａｓｅ　ｏｆ　ＴＮＦ－αｗｉｔｈ　ＩＣ５０ｏｆ　１．６μｇ／ｍＬ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：３ｗａｓ　ｆｉｒｓｔｌｙ　ｉｓｏｌａｔｅｄ　ｆｒｏｍ　ｔｈｉｓ　ｇｅｎｕｓ．
Ｋｅｙ　Ｗｏｒｄｓ：Ｓｉｅｇｅｓｂｅｃｋｉａ　Ｐｕｂｅｓｃｅｎｓ；Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ；Ｆｉｇｈｔｓ　Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ
　　豨莶草为菊科豨莶属一年生草本植物，主要功效为：祛
风湿，利筋骨，治风湿顽痹；消炎止痛。２００５年版药典中记
载：豨莶丸可清热祛湿，散风止痛［１］。笔者前期以抑制ＬＰＳ
诱导小鼠巨噬细胞释放ＮＯ及ＴＮＦ－α为活性指标，明确了
石油醚层为其抗风湿的主要活性部位［２］。为进一步阐明其
抗风湿的作用物质基础，进一步从石油醚层提取分离得到４
个单体化合物，通过理化常数测定、化学反应及波谱分析等
手段鉴定了结构。活性测试结果表明，化合物１～３对ＬＰＳ
诱导巨噬细胞释放 ＮＯ具有明显的抑制活性，ＩＣ５０分别为
１３．１μｇ／ｍＬ，１３．９μｇ／ｍＬ，５．９μｇ／ｍＬ，优于阳性药物氢化可
的松。化合物３还对巨噬细胞释放ＴＮＦ－α具有明显的抑制
作用，ＩＣ５０为１．６μｇ／ｍＬ。
１　材料与方法
１．１　药材与试剂
腺梗豨莶购自药材市场，由沈阳药科大学生药教研室
孙启时教授鉴定为腺梗豨莶Ｓｉｅｇｅｓｂｅｃｋｉａ　ｐｕｂｅｓｃｅｎｓ　Ｍａｋｉ－
ｎｏ；小鼠单核巨噬细胞ＲＡＷ　２６４．７为烟台大学药学院自行
保种（ＡＴＣＣ　ＴＩＢ－７１）；ＲＰＭＩ　１６４０、胎牛血清购自 Ｈｙｃｌｏｎｅ
公司；青霉素－链霉素双抗溶液、胰酶消化液、小鼠 ＴＮＦ－α
ＥＬＩＳＡ试剂盒为烟台赛尔斯生物技术有限公司产品。
１．２　细胞培养
ＲＡＷ　２６４．７细胞用含１０％胎牛血清的ＲＰＭＩ　１６４０培
养液常规培养，隔天传代。
１．３　对ＬＰＳ诱导巨噬细胞释放ＮＯ的抑制活性测定
按照文献［２］描述的方法进行。
１．４　ＥＬＩＳＡ法测定ＴＮＦ－α
按照文献［３］描述的方法进行。
２　结果
２．１　提取分离
腺梗豨莶１０ｋｇ粉碎，甲醇渗漉２天，重复３次，减压回
收甲醇得浸膏５９５．８ｇ。分散至水中，分别用等体积石油醚、
—０４—
乙酸乙酯、正丁醇进行萃取，浓缩干燥得石油醚浸膏
１２３．３ｇ，乙酸乙酯浸膏１１４．９ｇ，正丁醇浸膏１００．８ｇ，水层
１６５．３ｇ。石油醚部位用硅胶色谱柱，以正己烷－乙酸乙酯不
同梯度混合溶剂反复柱层析，薄层层析监控，相同组分合
并，共得到１６个子馏分。将活性较好的６个馏分（９～１１，１３
～１５）继续反复柱层析，薄层层析监控，并结合制备薄层和
柱层析得到化合物１～４。
２．３　结构鉴定
化合物１：白色粘状固体，ｍ．ｐ．７０℃～７０．５℃，易溶于
氯仿，乙醚，难溶于水。１３　Ｃ－ＮＭＲ谱中δ１８０．１处碳信号表
明该化合物存在羧基，１　Ｈ－ＮＭＲ谱中芳香区无任何信号，因
此化合物可能为饱和脂肪酸类，结合１　Ｈ－ＮＭＲ、１３Ｃ－ＮＭＲ谱
确定分子式为Ｃ２４Ｈ４８Ｏ２。其理化性质及波谱数据与文献［４］
报道的二十四碳酸（ｔｅｔｒａｃｏｓａ－ｃａｒｂｏｎｉｃ　ａｃｉｄ）一致。
化合物２：白色片状结晶，ｍ．ｐ．１３７℃～１３９℃。与β－谷
甾醇标准品混合物熔点不下降，在硅胶薄层色谱上１０％硫
酸显紫红色，并且与β－谷甾醇标准品共薄层Ｒｆ值一致。其
理化性质及波谱数据与文献［４］报道的β－谷甾醇（β－ｓｉｔｏｓｔｅｒ－
ｏｌ）一致。
化合物３：白色针状晶体，ｍ．ｐ．２９８℃～３０３℃。ＤＥＰＴ
谱中显示该化合物中有７个伯碳，９个仲碳，７个叔碳，７个
季碳。结合碳谱可推断其分子式可能为 Ｃ３０Ｈ４８Ｏ３。１　Ｈ－
ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，Ｃ５Ｄ５Ｎ）谱中，在δ０．６２～１．５０的高场间，共
出现了５个甲基单峰信号０．８９，１．０２，１．０６，１．２３，１．２５，说
明该化合物有可能是三萜类，所对应的碳信号分别为：
１５．６，１７．５，１６．５，２３．９，２８．８。同时还有２个甲基双峰信号
０．９６和１．００，分别对应的碳信号为２１．４和１７．４，提示该三
萜化合物为乌苏烷型三萜。氢谱在δ５．４９处有一三峰，可
能是一双键氢信号，从 ＨＳＱＣ中可以知道其所对应的碳信
号为１２５．６，同时低场区１３９．２处还有一季碳信号，可以推
断该化合物中存在－ＣＨ２－ＣＨ＝Ｃ－结构。１７９．９处碳信号表
明该化合物中可能存在羧基基团。氢谱中３．４７（１Ｈ，ｔ）所
对应的碳信号为７８．１，说明该碳可能与氧相连，其结构片段
可能为－ＣＨ２－ＣＨ－ＯＨ。综上所述，推断该化合物中含有单
羟基取代的１２－烯－２８－酸结构单元。谱图数据见表１，综合
其理化性质及波谱数据与文献［６］报道的熊果酸（ｕｒｓｏｌｉｃ
ａｃｉｄ）一致。
化合物４：羽毛状结晶，ｍ．ｐ．１８６℃～１８７℃。１　Ｈ－ＮＭＲ
（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）谱中，芳香区有１５个氢信号，可能存在三
个单取代苯环，分别为：７．７１（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ），７．５２（１Ｈ，
ｔｔ，Ｊ＝８．０Ｈｚ），７．４４（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝８．０Ｈｚ），７．２９（２Ｈ，ｍ），７．
２４（３Ｈ，ｍ），７．１５（３Ｈ，ｍ），７．０７（２Ｈ，ｍ），由 ＨＳＱＣ谱可
知道，所对应的碳信号分别为：１２７．０，１３１．９，１２８．６，１２８．７，
１２９．３和１２７．１，１２８．５和１２６．７，１２９．１。低场区１３６．７，１３６．
６，１３３．７为三个苯环上的季碳信号。氢谱中６．７８（１Ｈ，ｄ，
Ｊ＝７．６Ｈｚ），６．０２ （１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ）两 个 氢
信号没有与之相对应的碳信号，说明该化合物中存在两个
ＮＨ结构。３．９２（１Ｈ，ｄｄ），３．８１（１Ｈ，ｄｄ）对应６４．７一个
碳信号，说明该仲碳可能与手性碳相连。３．２３（１Ｈ，ｄｄ），
３．０６（１Ｈ，ｄｄ）与３８．４相对应，同样是一个与手性碳相连的
仲碳。２．０３处为一个与羰基相连的甲基信号。１３　Ｃ－ＮＭＲ
（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）谱中，１７０．７，１７０．２，１６７．１为三个酯羰
基或酰羰基信号。结合 ＨＭＢＣ谱，确定该化合物结构，波
谱数据见表２，与已知文献［７］报道的Ｎ－（Ｎ－苯甲酰基－Ｌ－苯丙
胺酰基）－Ｏ－乙酰基－Ｌ－苯丙氨醇（Ｎ－（Ｎ－ｂｅｎ－ｚｏｙｌ－Ｌ－ｐｈｅｎｙ－
ｌａｌａｎｙｌ）－Ｏ－ａｃｔｙｌ－Ｌ－ｐｈｅｎｙｌａｌａｎｏｌ）基本一致。但如下图所示：
从其ＨＭＢＣ谱中可以看到Ｈ－７’（δ：７．１３）与Ｃ－６’（δ：１２８．７）
远程相关，Ｈ－５’（δ：７．０７）与Ｃ－７’（δ：１２６．７）远程相关，所以
文献中Ｃ－７’的化学位移应由１２８．５改为１２６．７。同样：Ｈ－
４”（δ：７．４４）与Ｃ－３”（δ：１２７．０），Ｃ－２”（δ：１３３．７）远程相关，文
献中Ｃ－４”的化学位移应由１２６．７改为１２８．６。
表１　化合物３中的１　Ｈ－ＮＭＲ　ａｎｄ　１３Ｃ－ＮＭＲ
　　　　　　　　谱图数据（Ｃ５Ｄ５Ｎ）
ｐｏｓｉｔｉｏｎ　１　Ｈ－ＮＭＲ　 １３Ｃ－ＮＭＲＤＥＰＴ　ＨＭＢＣ（Ｈ　ｔｏ　Ｃ）ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ［５］
１　 ３９．１ ＣＨ２ ３８．９
２　 ２８．１ ＣＨ２ ２８．０
３　 ３．４７（１Ｈ，ｔ） ７８．１ ＣＨ　 Ｃ－４，Ｃ－２３，Ｃ－２４　 ７８．０
４　 ３９．３ Ｃ ３９．２
５　 ５５．８ ＣＨ　 ５５．７
６　 １８．８ ＣＨ２ １８．６
７　 ３３．６ ＣＨ２ ３３．４
８　 ４０．０ Ｃ ３９．８
９　 ４８．０ ＣＨ　 Ｃ－１０　 ４７．９
１０　 ３７．３ Ｃ ３７．１
１１　 ２３．６ ＣＨ２ ２４．８
１２　 ５．４９（１Ｈ，ｔ） １２５．６ ＣＨ
Ｃ－９，Ｃ－１１，Ｃ－１４，
Ｃ－１８
１２５．５
１３　 １３９．２ Ｃ １３９．１
１４　 ４２．５ Ｃ ４２．４
１５　 ２８．７ ＣＨ２ ２８．５
１６　 ２４．９ ＣＨ２ Ｃ－２８　 ２３．５
１７　 ４８．０ Ｃ Ｃ－１９　 ４７．３
１８
２．６３（１Ｈ，ｄ，
Ｊ＝１１．３）
５３．５ ＣＨ
Ｃ－１２，Ｃ－１３，Ｃ－１４，
Ｃ－１６，Ｃ－１７，Ｃ－１９，
Ｃ－２８，Ｃ－２９
５３．４
１９　 ３９．５ ＣＨ　 ３９．３
２０　 ３９．４ ＣＨ　 Ｃ－１９，Ｃ－２１， ３９．２
２１　 ３１．１ ＣＨ２ ３０．９
２２　 ３７．４ ＣＨ２ ３７．３
２３　 １．２５（３Ｈ，ｓ） ２８．８ ＣＨ３ Ｃ－３，Ｃ－４，Ｃ－５， ２８．６
２４　 １．０２（３Ｈ，ｓ） １６．５ ＣＨ３ Ｃ－３，Ｃ－４，Ｃ－５，Ｃ－２３， １６．４
２５　 ０．８９（３Ｈ，ｓ） １５．７ ＣＨ３ Ｃ－１，Ｃ－５，Ｃ－９，Ｃ－１０　 １５．５
２６　 １．０６（３Ｈ，ｓ） １７．５ ＣＨ３ Ｃ－７，Ｃ－８，Ｃ－９，Ｃ－１４　 １７．３
２７　 １．２０（３Ｈ，ｓ） ２３．９ ＣＨ３
Ｃ－８，Ｃ－１３，Ｃ－１４，
Ｃ－１５，
２３．８
２８　 １７９．９ Ｃ １７９．７
２９　 １．００（３Ｈ，ｄ） １７．４ ＣＨ３ Ｃ－１８，Ｃ－１９　 １７．３
３０　 ０．９５（３Ｈ，ｄ） ２１．４ ＣＨ３ Ｃ－２１　 ２１．２
—１４—
表２　 化合物４中１　Ｈ－ＮＭＲ　ａｎｄ　１３Ｃ－ＮＭＲ谱图数据（ＣＤＣｌ３）
ｐｏｓｉｔｉｏｎ　 １　Ｈ－ＮＭＲ　 １３Ｃ－ＮＭＲ　ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ［６］
１　 １７０．２　 １７０．８
２　 ４．７８（１Ｈ，ｍ） ５５．０　 ５４．９
３　 ３．２３（１Ｈ，ｄｄ），３．０６（１Ｈ，ｄｄ） ３８．４　 ３８．４
４　 １３６．６　 １３６．７
５ａｎｄ　９　 ７．２４（２Ｈ，ｍ） １２９．３　 １２８．７
６ａｎｄ　８　 ７．２７（２Ｈ，ｍ） １２８．５　 １２９．３
７　 ７．２３（１Ｈ．ｍ） １２７．１　 １２７．１
１’ ３．９３（１Ｈ，ｄｄ），３．８１（１Ｈ，ｄｄ） ６４．７　 ６４．６
２’ ４．３５（１Ｈ，ｍ） ４９．４　 ４９．４
３’ ２．７４（２Ｈ，ｍ） ３７．４　 ３７．４
４’ １３６．７　 １３６．６
５’ａｎｄ　９’ ７．０７（２Ｈ，ｍ） １２９．１　 １２８．６
６’ａｎｄ　８’ ７．２９（２Ｈ，ｍ） １２８．７　 １２９．１
７’ ７．２４（１Ｈ，ｍ） １２６．７　 １２８．６
１” １６７．１　 １６７．１
２” １３３．７　 １３３．６
３”ａｎｄ　７” ７．７１（２Ｈ，ｄ） １２７．０　 １２７．０
４”ａｎｄ　６” ７．４４（２Ｈ，ｔ） １２８．６　 １２６．７
５” ７．５２（１Ｈ，ｔｔ） １３１．９　 １３１．９
１－ＮＨ　 ６．０１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ）
１”－ＮＨ　 ６．７８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ）
ＣＨ３Ｃ＝Ｏ　 ２．０３（３Ｈ，ｓ） １７０．７　 １７０．２
２０．８　 ２０．８
图１　
２．３　化合物１～４对巨噬细胞释放ＮＯ和ＴＮＦ－α的抑制
表３　化合物１～４对巨噬细胞释放ＮＯ和ＴＮＦ－α
　　　　　　　　　　的抑制活性结果
Ｇｒｏｕｐ
ＩＣ５０（μｇ／ｍＬ）
ＮＯ　 ＴＮＦ－α
１　 １３．１ ＞１００
２　 １３．９ ＞１００
３　 ５．９　 １．６
４　 ７３．６　 ２．９
Ｈｙｄｒｏｃｏｒｔｉｓｏｎｅ　 ２３．３　 ３１．０
３　讨论
笔者从腺梗豨莶抗风湿的主要活性部位分离鉴定了４
个单体化合物，１－３对ＬＰＳ诱导巨噬细胞释放ＮＯ具有明显
的抑制活性，ＩＣ５０分别为１３．１μｇ／ｍＬ，１３．９μｇ／ｍＬ，５．９μｇ／
ｍＬ。化合物３还对巨噬细胞释放ＴＮＦ－α具有明显的抑制
作用，ＩＣ５０为１．６μｇ／ｍＬ，优于阳性药物氢化可的松，以上结
果为阐明腺梗豨莶抗风湿的作用物质基础提供了实验依
据。
参考文献：
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京：化学工业出版社，２００５．
［２］　赵凯华，赵烽，刘珂．腺梗豨莶提取物对脂多糖活化巨噬细胞
释放一氧化氮的抑制作用［Ｊ］．烟台大学学报，２００９，２２（２）：
１３７－１４０．
［３］　ＺＨＡＯ　Ｆ，ＸＵ　Ｈ，ＷＡＮＧ　Ｌ，ｅｔ　ａｌ．Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ　ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｓｅｓ－
ｑｕｉｔｅｒｐｅｎｅｓ　ｆｒｏｍ　Ｓａｕｓｓｕｒｅａ　ｌａｐｐａ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｏｖｅｒｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｎｉ－
ｔｒｉｃ　ｏｘｉｄｅ　ａｎｄ　ＴＮＦ－αｒｅｌｅａｓｅ　ｉｎ　ＬＰＳ－ａｃｔｉｖａｔｅｄ　ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ
［Ｊ］．Ｊ　Ａｓｉａｎ　Ｎａｔ　Ｐｒｏｄ　Ｒｅｓ，２００８，１０（１１）：１０４５－５３．
［４］　高辉，李平亚，李德坤，等．腺梗豨莶的化学成分研究［Ｊ］．中
草药，２００３，３４（７）：５９７－５９８．
［５］　李清华，张连龙，吴宗好．安徽贝母二萜成分的研究［Ｊ］．中国
中药杂志，１９９０，１５（２）：１７０．
［６］　王永学，陈正跃，邱培勇，等．大叶香茶菜中的三萜化学成分
分析［Ｊ］．新乡医学院学报，２００８，２６（６）：５５０－５５２．
［７］　邹澄，张荣平，赵碧涛，等．紫菀活性酰胺研究［Ｊ］．云南植物
研究，１９９９，２１（１）：１２１－１２４．
（责任编辑：姜付平）
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