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利用LC/MS/MS方法检测人参芦头中人参皂苷Rg1和Re的含量



全 文 :【方药研究】
利用 LC /MS /MS方法检测人参芦头中
人参皂苷 Rg1 和 Re的含量

吴睿凡1,赵松岩2,刘运嘉3,吴晓霞4,彭 娟4,
闫 寒4,聂颖兰4,郭 娜 4,范 斌4△
(1. 新疆医科大学,乌鲁木齐 830011;2. 沈阳药科大学,沈阳 110016;3. 沈阳市药品不良反应和
医疗器械不良事件监测中心,沈阳 110013;4. 中国中医科学院医学实验中心,北京 100700)
摘要:目的:建立检测人参芦头中人参皂苷 Rg1 和 Re 的 LC /MS /MS 方法。方法:应用液质联用、C18 色谱柱系统,采用梯度
洗脱方法,建立人参芦头中人参皂苷 Rg1 和 Re 的含量测定方法并进行方法学考察。结果:建立了同时检测人参芦头中人参皂苷
Rg1 和 Re 的含量测定方法。结论:该方法准确、简便、快速,可用于人参芦头的质量控制。
关键词:人参芦头;含量测定;人参皂苷 Rg1;人参皂苷 Re
中图分类号:R285. 5 文献标识码:B 文章编号:1006-3250(2012)10-1136-01
Methodological Study on Simultaneous Quantitation of Rg1 and Re
in“The Rhizoma of Panax ginseng”by LC /MS /MS
WU Rui-fan1,ZHAO Song-yan2,LIU Yun-jia3,WU Xiao-xia4,PENG Juan4,
YAN Han4,NIE Ying-lan4,GUO Na4,FAN Bin4△
(1. Xinjiang Medical University,Xinjiang 830011,China;2. Shenyang Parmaceutical University,Shenyang 110016,China;
3 . Shenyang Monitoring Center for Adeverse Drug Reaction and Medical Device Adeverse Event,Shenyang 110013,China;
4 . China Academy of Chinese Medical Sciences Experimental Research Center,Beijing 100700,China)
Abstract:Objective:To develop a method to determine the contents of ginsengnoside Rg1 and Re in the rhizoma of
Panax ginseng by using HPLC /MS /MS. Methods:We use the system including HPLC /MS /MS,C18 HPLC column and a
gradient elution program to develop a HPLC /MS /MS method. Results:We develop HPLC /MS /MS of simultaneous
quantitation of ginsengnoside Rg1 and Re in the rhizoma of Panax ginseng. Conclusion:the accurate,convenient and rapid
method has been applied for quality control of the rhizoma of Panax ginseng.
Key words:
基金项目:国家自然科学基金青年基金项目(81001597) ;中国中
医科学院医学实验中心自主课题项目(zz2007002)
作者简介:吴睿凡,女,医学硕士,从事中药质量控制研究。
△通讯作者:范 斌,Tel:010-64014411-3324,E-mail:binf@
163. net
人参为五加科植物,人参 Panax ginseng C. A.
Mey. 的干燥根和根茎,性甘微苦、微温,归脾、肺、
心、肾经,有大补元气、复脉固脱、补脾益肺、生津养
血、安神益智之功效。临床多用于体虚欲脱、肢冷脉
微、脾虚食少、气血亏虚、久病虚赢等病证的治
疗[1]。人参中的人参皂苷为重要的活性成分,现代
对人参皂苷的含量测定有许多方法,主要采用高效
液相色谱法、高效液相色谱 - 蒸发光散射检测
等[2 ~ 5],但人参皂苷 Rg1 和 Re 较难完全分离。其
次,目前对于人参芦头成分含量的研究较少。本文
建立的检测人参芦头中人参皂苷 Rg1 和 Re 含量的
LC /MS /MS 方法,在 2 min 内 2 种皂苷全部出峰,方
法快速灵敏。
1 材料
1. 1 药物及试剂
Re、Rg1均购于中国药品生物制品检定所,人参
产地吉林(批号 0090410) ,由中国中医科学院中药
研究所何希荣主任医师鉴定为五加科植物人参
Panax ginseng C. A. Mey. 的干燥根。正丁醇(分析
纯)、乙腈(色谱纯)、甲酸(色谱纯)均购于北京迪科
马科技有限公司。
1. 2 仪器
Agilent 6410 QQQLC-MS 分析系统(美国 Agilent
RRLC 液相色谱仪;Agilent 6410 QQQ 三重四级杆质
谱 检 测 器; Masshunter 工 作 站 ) ,赛 多 利 斯
arium61316 /611VF 超纯水处理器、赛多利斯 BT25S
分析天平和多功能提取罐。
2 人参芦头中人参皂苷 Rg1 和 Re 的测定方
法学考察及含量测定
2. 1 色谱条件
液相条件:Agilent ZORBAX C18 SB (2. 1 ×
50mm 1. 8-Micron) ;流动相:A:水(0. 05% FA) ,B:
乙腈;A∶ B = 70 ∶ 30(V /V) ,梯度洗脱:0min ~ 2 min,
B:60%;2min ~ 3 min,B:100%,流速为 0. 35 mL·
min - 1;柱温:40 ℃。
质谱条件:正离子模式,MRM,Re m / z 969. 6→
789. 5,Rg1 m / z 823. 5→643. 5。利用以上色谱条件
分析得到 Re 和 Rg1 的混合对照品的总离子流图
(TIC) (图 1)和各自的提取离子流图(EIC) (图 2)
及各成分在人参芦头中的 TIC 图(图 3)。
2. 2 供试品溶液的制备
(下转第 1139 页)
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中国中医基础医学杂志
Chinese Journal of Basic Medicine in Traditional Chinese Medicine
2012 年 10 月第 18 卷第 10 期
October 2012 Vol. 18. No. 10
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以及记忆和处理数据的能力直接影响到从体表收集
信息的能力,因而只能做出定性的判断,很难做出定
量的判断。信息获取的首要环节是信息的感知,即
感知事物运动的状态及其变化的方式,或者说是通
过事物的相互作用把事物的本体论信息转变为认识
论信息[2]。中医药信息的获取长期以来一直依靠
人体感觉器官,收集人体功能及整体变化的信息,通
过中医理论和积累的经验进行处理,从而获得干预
人体变化信息规律性的认识和知识。虽然人的感觉
器官在感知外部事物的信息方面具有十分精巧的工
作机制,但同时也存在一些天然的缺陷,主要表现在
敏感域有限、敏感度有限和分辨力不高等方面[2]。
而现有的信息获取方式,无法全面获取中医药信息,
抹杀了中医药信息的特征,不适用于中医药信息的
获取和处理。因此要基于中医药信息的特征,扩展
和完善人类感知信息的能力,改进信息获取手段,提
高中医药信息的信息获取、转化与共享能力。
参考文献:
[1] 崔蒙,谢琪,李海燕,等 . 中医药信息学的内涵及原理研究
[J].浙江中医药大学学报,2009,33(5) :638-641.
[2] 钟义信 . 信息科学原理[M]. 3 版 . 北京:北京邮电大学出版
社,2002.
[3] 许国志主编 .系统科学大辞典[M]. 云南:云南科技出版社,
1994.
[4] 于光远主编 .自然辨证法百科全书[M]. 北京:中国大百科全
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[5] 胡伟 . 关于现象与本质的辩证关系思考[J]. 学理论,2011,
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医药大学学报(社会科学版) ,2003,4(1) :10-12.
收稿日期:2012-03-15
(上接第 1136 页)
图 1 人参 Re 和 Rg1 对照品的 TIC 和 EIC 图
图 2 人参芦头样品中 Re 和 Rg1 的 TIC 和 EIC 图
取本品粉末 0. 1 g 过 40 目筛精密称定,精密加
入水饱和的正丁醇 5ml 密塞,放置过夜,超声(功率
250W,频率 50kHz)处理 30min,2 次合并滤液,精密
量取滤液 0. 5ml,氮气吹干,残渣加甲醇 1ml 超声
溶解,0. 22um 微孔滤膜,即得。
2. 3 线性关系
精密称取 Re 和 Rg1 对照品,Re 的浓度依次为
1. 5、3. 0、6. 0、12. 0、24、48ng /mL;Rg1 的浓度分别为
3. 5、7. 0、14、28、56、112ng /mL,按 2. 1 的色谱条件
进样分析。以峰面积 Y 对浓度 X 进行回归处理得
到 Re 和 Rg1 的回归方程分别为 Y = 55. 2216X -
50. 6413 (r = 0. 9996)和 Y = 91. 3617X + 17. 8616 (r
= 0. 9992) ,说明 Re 和 Rg1 分别在 1. 5 ~ 48 ng /mL
和 3. 5 ~ 112 ng /mL 范围内线性关系良好。
2. 4 精密度
按 2. 3 制得的对照品溶液连续进样 6 次,记录
各组分的峰面积,计算 6 次的标准偏差(RSD) ,得到
人参皂苷 Re 和人参皂苷 Rg1 峰面积的 RSD 分别为
4. 1%和 3. 9%。
2. 5 方法的重复性
按 2. 2 平行制备 6 份样品,按 2. 1 的色谱条件
进样分析,记录人参皂苷 Re 和人参皂苷 Rg1 的峰面
积,计算 6 份平行样品间的相对标准偏差(RSD)分
别为 4. 9%和 4. 2%,表明方法重复性良好。
2. 6 加样回收率
取上述已测知含量的样品粉末 6 分,各约 0. 1 g
精密称定,精密加入混合对照品溶液,按 2. 2 项制备
样品,2. 1 项的液质条件进样分析。计算加样回收
率,公式为加样回收率 = (加样后测定值 - 原样测
定值)/加样量 × 100%,并求得标准偏差。求得回
收率平均值(n = 6)分别为 95. 8%、96. 7%,RSD 分
别为 4. 9%和 4. 2%。
2. 7 样品稳定性
将制备好的供试品溶液于 0、2、4、6、8、10、12、
24 h 进样分析,考察供试品溶液的稳定性,考察表
明供试品溶液在 24 h 内稳定。
2. 8 含量测定
按 2. 2 项下制备样品,测得人参芦头中人参皂
苷 Re 和人参皂苷 Rg1 的含量分别为 0. 68 mg / g 和
0. 70 mg / g。
3 讨论
本方法利用 LC-MS /MS 方法对人参芦头中人
参皂苷 Re 和人参皂苷 Rg1 进行了含量测定,比传
统方法快速、准确且灵敏。
参考文献:
[1] 国家药典委员会编 .中华人民共和国药典一部 .[S]. 北京:中
国医药科技出版社,2010:8.
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收稿日期:2012-04-17
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2012 年 10 月第 18 卷第 10 期
October 2012 Vol. 18. No. 10
中国中医基础医学杂志
Chinese Journal of Basic Medicine in Traditional Chinese Medicine
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