全 文 ：覆盆子中有效成分椴树苷的波谱学研究
孟祥云1 ,邢海燕 1 ,杨　永 2
(1.安徽省合肥市第二人民医院 ,安徽 合肥　230011;2.合肥健宇医药科技有限公司 , 安徽 合肥　230031)
摘要:目的　确证覆盆子中有效成分椴树苷的波谱归属。方法　采用硅胶柱色谱和凝胶柱色谱 SephadexLH-20进行分离纯化 ,
通过理化方法和波谱数据进行结构鉴定。结果　利用一维 、二维核磁共振 ,解析椴树苷的结构。 结论　确定了椴树苷的 1H-
NMR、13C-NMR的归属。
关键词:覆盆子 ,椴树苷 , 核磁共振 ,结构解析
SpectroscopyoftilirosideinRubusChingiHu.
MENGXiang-yun1 , XINGHai-yan1 , YANGYong2
(1.TheSecondPeople sHospital, Hefei, Anhui230011;
2.JianyuMedicineandTechnologyLtd.Company, Hefei, Anhui230031)
Abstract:Aim　TostudyspectroscopicanalysisofTilirosideinRubuschingiHu.Method　Compoundswereisolatedandpurifiedwithsilica
gelandSephadexLH-20columnchromatography, andtheirstructuresweredeterminedbyusingspectroscopicanalysisincludingMSandNMR.
Result　Tilirosidewasidentifiedby1D-NMR, 2D-NMR.Conclusion　The1H-NMRand13C-NMRoftilirosidehasbeenassigned.
Keywords:Rubuschingiihu.;tiliroside;nuclearmagneticresonancespectroscopy;structureanalysis
　　覆盆子(RubusChingiHu)为蔷薇科(Rosaceae)悬钩子属
植物 , 覆盆子因叶裂如掌也称掌叶覆盆子 , 又因其分布区仅在
华东地区故为华东覆盆子。 《中华人民共和国药典 》(2005
年)一部收载的覆盆子品种是蔷薇科植物华东覆盆子 Rubus
chingiiHu的果实 , 果味甜 , 可食 , 制糖及酿酒喝 , 入药则具补
肝肾 , 固精 ,缩尿的功效 , 临床上用来治疗肾虚遗尿 , 小便频
数 , 阳痿早泄 ,遗精滑精等症 [ 1] , 我省资源丰富 [ 2] 。
覆盆子的现代药理学研究并不多见 ,顾利红等人采用了
庆大霉素所致肾损伤模型 ,以尿素氮(BUN)、血清肌肝(Scr)、
肾系数(KI)、尿蛋白(Upr)、胆固醇(Chol)为指标 , 并取部分
大鼠的肾皮质进行透射电镜检查 , 观察了覆盆子对大鼠急性
肾小管损伤的影响 , 结果显示覆盆子干浸膏在剂量 1 g· kg-1
和 0.5 g· kg-1时对庆大霉素所致急性肾损伤有显著保护作
用。上述各组指标均较病理模型组有明显改善 ,并呈现较明
显的量效关系 , 证明椴树苷为覆盆子的有效成分 [ 3] 。
但我们在对覆盆子化学成分研究过程中 , 发现以往文献
对椴树苷 1H-NMR、13C-NMR的数据归属有误 , 本论文利用
一维 、二维核磁共振 ,解析椴树苷的结构 , 试图给出正确归属 ,
现以本文报道之。
1　仪器和材料
NMR用 BrukerAM-400和 BrukerDRX-500, 以 TMS为内
标;MS用 VGAutospec-3000;紫外用 UV757CRT紫外光谱测
定仪;熔点仪为 XRC-1型显微镜熔点仪 , 温度计未校正 ,四川
大学科仪厂出品;薄层硅胶及柱色谱硅胶均由青岛海洋化工
厂生产。其余试剂均为分析纯。
　　覆盆子样品 2003年购于安徽省亳州市中药材市场 , 由安
徽中医学院中药教研室方成武副教授鉴定 。
3　讨论
雌激素属第二类辐射防护剂 ,其辐射防护作用国内外早
有报道 [ 1, 2] 。但由于具有雌活性 , 雌激素在应用时有一定的
毒副作用。张丽龙 [ 3]等对经结构改构和修饰的一系列新型
异黄酮及甾体类化合物进行体外抗细胞增殖试验 ,发现部分
化合物体外抗肿瘤细胞增殖活性强于 Genistein, 提示该类化
合物有进一步研究的潜在价值。本实验将三种化合物加入辐
射敏感的 IEC-6及 Dami细胞培养体系 , 观察到加入不同浓度
F2、F12化合物的细胞存活率比较对照组有显著提高。在此
基础上 , 我们进行了在体实验 , 结果显示:F2、F12和 Genistein
处理组动物精神 、饮食等一般情况好于对照组 , 无动物死亡。
外周血象显示用药组下降峰值推后 , 下降趋势没有对照组明
显。病理形态学观察显示 8Gy和 12Gy照射后 , 单纯照射组骨
髓和脾脏有核细胞明显减少 ,骨髓内仅残留红细胞;脾包膜下
部分细胞变性 、有局灶样变性坏死;肠上皮细胞变性 、坏死脱
落 , 绒毛枯萎 、裸露 , 隐窝细胞坏死明显。雌二醇组和 F2组骨
髓和脾脏有核细胞数量增加 ,肠上皮细胞绒毛高度增加 , 隐窝
变长 , 而且 F2对小鼠子宫内膜 、卵巢无明显促进增殖的作用。
F12和 Genistein组对小鼠辐射防护作用不明显。综合结果显
示 F2和雌二醇对辐射损伤小鼠有较好的辐射保护作用 , 同时
F2无明显的雌激素作用 , 提示 F2有可能是较为理想的辐射
防护候选药物。这也为下一步研究该类化合物在肿瘤放疗中
的辅助效应研究提供思路。而该类化合物对受照细胞的辐射
损伤保护机制值得我们进一步探讨。
参考文献:
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增殖活性的初步筛选 [ J] .第三军医大学学报 , 2006, 28(13):
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(收稿日期:2009-09-03)
·1477·安 徽 医 药　AnhuiMedicalandPharmaceuticalJournal　2009 Dec;13(12)
2　提取和分离
4.8kg覆盆子粉碎后 , 80%乙醇回流提取 ,回收乙醇至无
醇味 , 过滤 ,滤液上 D-101树脂柱 , 依次用 H2O和不同浓度乙
醇洗脱 ,每 1000ml为一流份 , 在 60%乙醇洗脱部分 , 流份 29,
30, 31合并浓缩 ,得浸膏 14 g, 硅胶拌样干法上柱分离 , 依次
用 CHCl3-MeOH(5∶1至 1∶1 )梯度洗脱 , 最后纯甲醇冲洗 , 收
集洗脱液 , 每 100ml为一个流份 , 在 CHCl3-MeOH(5∶1)洗脱
部分 , 流份 6至 12合并浓缩放置 ,析出固体 ,甲醇重结晶 , 得
化合物椴树苷(20 mg)。
3　鉴定
黄色粉末(甲醇), mp214-216℃,盐酸 -镁粉和 Molish反
应均呈阳性 , 紫外光下呈黄色荧光 , UVλnm:348, 266为典型
的黄酮类化合物的紫外吸收;酸水解 , 通过 TLC检查 ,与对照
品对照表明有葡萄糖;1H-NMR、13C-NMR与文献对照表明有
山柰酚存在 [ 4 , 5] , 1H-NMR谱中有一组 AB偶合系统:7.31(1
H, d, J=15.9 Hz), 6.11(1 H, d, J=15.9 Hz), 2组 A2B2系
统:7.98(2 H, d, J=8.8 Hz), 6.85(2 H, d, J=8.8 Hz), 7.36
(2 H, d, J=8.6 Hz), 6.78(2 H, d, J=8.6 Hz)和间位偶合系
统:6.37(1 H, d, J=1.7 Hz), 6.15(1 H, d, J=1.7 Hz)。13C-
NMR谱中有组化学位移相同的信号:115.0(×2), 130.0(×
2), 130.7(×2)和一个酯碳基信号 δ166.1, HSQC示 δ6.11(1
H, d, J=15.6Hz)与 113.1(C-7 )相关 , 7.31(1 H, d, J=15.6
Hz)与(C-8 )相关 , HMBC示 δ6.11(1 H, d, J=15.6 Hz)与
166.0(C-9)相关 , 7.31(1 H, d, J=15.6 Hz)与 113.1(C-7 ),
166.0(C-9 )相关 , 124.9, 130.8, 115.7, 160.5为苯环 , EI-MS
中有一 147碎片 ,与上述片断相比较多一个 17单位 , 结合 1H-
NMR、13C-NMR, 进一步证明了分子内有对羟基桂皮酸的存
在 , 286为苷元 , 121为 A环碎片。13C-NMR(DEPT)表明 , 该化
合物中含有糖的信号 δ100.6, 74.2, 76.2, 70.0, 74.1, 62.9, 值
得注意 δ100.6(5.44, 1 H, d, J=7.3 Hz)示 β -D-葡萄糖。
由 HMBC表明:δ5.44(1 H, d, J=7.1 Hz)与 133(C-3)相关 ,
示葡萄糖与 C-3位相连。在 HBMC谱中可以看到 166.0(C-9
)与糖的 C-6″亚甲基 4.02(1H, d, J=12.0Hz), 和 4.26(1H,
d, J=12.0Hz)相关 , 另外 , roesy谱中也显示 H-1″与H-2″, 6″有
关 , 因此化合物为椴树苷。1H-NMR、13C-NMR及 HMBC数据
归属见表 1。
4　讨论
在椴树苷结构鉴定中 ,以往把碳谱中 130.1(ppm)归属为
C2′, 6′, 而把 130.8(ppm)归属为 C2 , 6 [ 6 , 7] , 但结合 2D-
NMR中 1H-1HCOSY及 HMBC和 HSQC,我们有理由把 130.8
(ppm)归属为 C2′, 6′, 130.1(ppm)归属为 C2″, 6″, 也只有这
样波谱之间的矛盾才能消除 ,恰好在张朝凤的文章得到佐证 ,
遗憾的是其氢谱归属出现了错误 , 她把氢谱中 7.98(ppm)归
属为(H-2″, 6″), 7.36(ppm)归属为(H-2′, 6′), 但通过
HSQC应该是 7.98 (ppm)归属为(H-2′, 6′), 7.36(ppm)归
属为(H-2 , 6 )。
表 1　化合物Ⅲ(DMSO)1H-NMR、13C-NMR和 HMBC光谱数据
δ(C)(DEPT) δ(H)
1H, 1H-COSY
(selected)
HMBC
(selected)
C(2)156.3
C(3)133.1
C(4)177.4
C(5)161.1
H-C(6) 98.7 6.15(1H, d, J=1.7HZ) H-C(8) C(8), C(10)
C(7)164.1
H-C(8) 93.6 6.38(1H, d, J=1.7HZ) H-C(6) C(6), C(10)
C(9)156.3
C(10)103.9
C(1′)120.8
H-C(2′)130.8 7.98(1H, d, J=8.8HZ)H-C(3′, 6′)C(2), C(4′),C(6′)
H-C(3′)115.0 6.85(1H, d, J=8.8HZ)H-C(2′, 5′)C(1′), C(5′)
C(4′)159.9
H-C(5′)115.0 6.85(1H, d, J=8.8HZ)H-C(3′, 6′)C(1′), C(3′)
H-C(6′)130.8 7.98(1H, d, J=8.8HZ)H-C(2′, 5′)C(2), C(2′),C(4′)
H-C(1″)101.0 5.45(1H, d, J=7.1HZ) C(3)
H-C(2″) 74.2
H-C(3″) 76.2
H-C(4″) 70.1
H-C(5″) 74.1 4.27(1H, d, J=12HZ) C(9)
CH2(6″) 63.0 4.04(1H, dd, J=6.4, 12HZ) C(9 )
C(1 )124.9
H-C(2 )130.1 7.36(1H, d, J=8.6HZ)H-C(3 , 6 )C(4 ), C(7 )
H-C(3 )115.7 6.78(1H, d, J=8.6HZ)H-C(2 , 5 )C(1 ), C(5 )
C(4 )160.0
H-C(5 )115.7 6.78(1H, d, J=8.6HZ)H-C(3 , 6 )C(1 ), C(3 )
H-C(6 )130.1 7.36(1H, d, J=8.6HZ)H-C(2 , 5 )C(4 ), C(7 )
H-C(7 )144.5 7.31(1H, d, J=15.6HZ) H-C(8 ) C(1 ), C(9 )
H-C(8 )113.1 6.11(1H, d, J=15.6HZ) H-C(7 ) C(1 )
H-C(9 )166.0
参考文献:
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