全 文 ：磨盘草不同营养器官中总黄酮和总酚含量测定
张 燕 ,张洪斌 ,陈忠荫 ,林伟 ,陈光宙　(琼州学院生命科学系 ,海南五指山 572200)
摘要　分别以芦丁和没食子酸为对照品 ,测定了磨盘草不同营养器官(根 、茎、叶)中总黄酮和总酚的含量。结果表明 ,磨盘草叶 、茎、根
中总黄酮含量分别为 1.96%、1.20%、0.78%,总酚含量分别为 8.61%、6.03%、4.31%。
关键词　磨盘草;总黄酮;总酚
中图分类号　S567.23+9　　文献标识码　A　　文章编号　0517-6611(2009)35-17487-02
DeterminationonContentsofTotalFlavonoidsandTotalPhenolsinDifferentVegetativeOrgansofAbutilonindicum(L.)Sweet
ZHANGYanetal　(LifeScienceDepartmentofQiongzhouColege, Wuzhishan, Hainan572200)
Abstract　Withrutinandgalicacidasthereferencesubstancesresp., thecontentsoftotalflavonoidsandtotalphenolsindiferentvegeta-
tiveorgans(root, stemandleaf)ofAbutilonindicum(L.)sweetweredetermined.Theresultsshowedthatthecontentsoftotalflavonoidsand
totalphenolsinleaf, stemandrootofAbutilonindicum(L.)sweetwere1.96%, 1.20%, 0.78% and8.61%, 6.03%, 4.31% resp.
Keywords　Abutilonindicum(L.)sweet;Totalflavonoids;Totalphenols
基金项目　海南省自然科学基金项目(808170)。
作者简介　张燕(1968-),女 ,甘肃西和人 ,硕士 , 副教授 ,从事资源植
物化学方面的教学与科研工作。
收稿日期　 2009-08-17
　　磨盘草 [ Abutilonindicum(L.)Sweet]为锦葵科苘麻属
植物 [ 1] ,属一年生或多年生亚灌木状草本 ,生于砂地 、旷野或
路旁 ,分布于广西 、广东 、海南 、贵州 、云南 、福建 、台湾等地 。
全草入药 ,甘淡平 ,疏风清热 、益气通窍 、祛痰 、利尿 ,可用于
治疗感冒 、久热不退 、流行性腮腺炎 、耳鸣 、耳聋 、肺结核 、小
便不利。磨盘草全草含有萜类 、甾类 、酚类 、黄酮苷 、氨基酸 、
有机酸和糖等 [ 2] 。目前有关磨盘草的研究主要集中在生药
学 、部分化学成分等方面 [ 3-4] ,而对其次生代谢产物的研究
较少 。笔者对磨盘草不同营养器官中总黄酮和总酚的含量
进行了测定 ,以期为磨盘草药材质量控制及其次生代谢产物
的进一步研究和合理开发提供参考 。
1　材料与方法
1.1　材料
1.1.1　磨盘草。供试磨盘草采自海南五指山市文化村(由
琼州学院生命科学系林伟教授鉴定为磨盘草 Abutilonindi-
cum(L.)Sweet全草),将其洗净后分成根 、茎 、叶 3部分 , 60
℃烘干至恒重 ,粉碎 ,过 40目筛 ,放于干燥器中备用。
1.1.2　主要仪器。UV-2100双光束紫外可见分光光度计
(北京瑞利分析仪器公司);SSY-电热恒温水浴锅(上海跃进
医疗器械厂);RE52CS旋转蒸发器(上海亚荣生化仪器厂);
BS224S电子天平(上海天平仪器厂)。
1.1.3　试剂。芦丁对照品(中国药品生物制品检定所 ,批
号:100080-200707);没食子酸对照品(中国药品生物制品检
定所 ,批号:110831-200302);所用试剂均为分析纯。
1.2 　方法
1.2.1　总黄酮含量测定。
1.2.1.1　对照品溶液的制备。精密称取 120 ℃干燥至恒重
的芦丁 10 mg,加 30%乙醇适量 ,置水浴中加热溶解 ,冷却后
用 30%乙醇定容至 50 ml,摇匀备用 ,配制成 0.2 mg/ml的对
照品溶液。
1.2.1.2　供试品溶液的制备 。分别精确称取磨盘草的根 、
茎 、叶粉末各 0.6g,分别加 95%乙醇液在 70 ℃水浴中热回
流 2.5、2.0h,抽滤 ,分别将 2次滤液合并减压浓缩至浸膏 ,浸
膏加 60 ℃热水搅拌溶解 ,水溶液用等量石油醚萃取 3次 ,石
油醚层减压浓缩 ,回收石油醚 ,水层部分再用等量正丁醇萃
取 3次 ,合并正丁醇萃取液减压浓缩至浸膏 ,分别用 30%乙
醇将浸膏溶解并定容至 100 ml的容量瓶中。
1.2.1.3　最大吸收波长的确定。取芦丁对照品溶液 3 ml
置 10ml容量瓶中 ,加 30%乙醇至 5 ml,再精确加入 5%
NaNO2溶液 0.3 ml,摇匀 ,放置 6 min,加 10%Al(NO3)3溶液
0.3ml,摇匀 ,静置 6 min,加 1 mol/LNaOH溶液 4 ml,加水
0.4ml,摇匀 ,放置 15min,随行试剂做空白 ,于 300 ～ 700 nm
波长范围内全程扫描 ,确定最大吸收波长。
1.2.1.4　标准曲线的绘制 。精密吸取 0.2 mg/ml芦丁标准
液 0.0、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0 ml置于 6只标号的 10 ml容量
瓶中 ,各加 30%乙醇至 5 ml。分别加入 5%NaNO2溶液 0.3
ml,摇匀 ,放置 6 min,加 10%Al(NO3)3溶液 0.3 ml,摇匀 ,静
置 6min,加 1 mol/LNaOH溶液 4ml,加水 0.4ml,摇匀 ,放置
15 min,于最大吸收波长处测定吸光度。以吸光度对标样浓
度作图 ,得标准曲线的回归方程:Y=14.168X+0.012 1(R=
0.999 8, Y表示吸光度 , X表示芦丁浓度)。芦丁含量在
0.01 ～ 0.08mg/ml范围内与吸光度呈良好线性关系。
1.2.1.5　精密度试验。精密吸取供试品液 1 ml, 按
“1.2.1.4”进行操作 ,重复 5次 ,测定其吸光度。
1.2.1.6　重现性试验 。精密吸取同一供试品液 5份各 2
ml,按 “1.2.1.4”进行操作 ,测定其吸光度。
1.2.1.7　稳定性试验。精密吸取供试品液 1 ml,按 “1.2.1.
4”进行操作 ,在 0、5、10、15、20、30、40 min时测定吸光度。
1.2.1.8　回收率试验。取已知含量的同一样品 5份 ,分别
精密添加一定量的芦丁对照品 ,按上述供试品溶液制备方法
制备加样回收供试品溶液。再按 “1.2.1.4”方法测定吸光
度 ,计算总黄酮含量及回收率。
1.2.1.9　供试品溶液中总黄酮含量测定。分别精密吸取磨
盘草的根 、茎 、叶样液 1.0、2.0、3.0 ml于对应标号的容量瓶
中 ,各加 30%乙醇至 5 ml。方法同 “1.2.1.4”,按标准曲线测
定方法测样液的吸光度值 ,然后根据回归方程求出样液中总
黄酮的含量 ,据此计算出样品中总黄酮的含量 。
1.2.2　总酚含量测定 。
安徽农业科学 , JournalofAnhuiAgri.Sci.2009, 37(35):17487-17488, 17495 责任编辑　常俊香　责任校对　卢瑶
1.2.2.1　福林试剂的配制 [ 5] 。称取 20g钨酸钠和 5g钼酸
钠于圆底烧瓶中 ,用 140 ml蒸馏水溶解 ,加入 85%的磷酸溶
液 10ml和浓盐酸 20 ml,文火回流 10h,然后加入 3g硫酸锂
及 15 ml双氧水 ,加热沸腾 15 min至亮黄色 ,不得带微蓝和
绿色。冷却后 ,移入 250 ml容量瓶中 ,定容 ,贮于棕色瓶中。
1.2.2.2　对照品溶液的制备。精确称取干燥至恒重的没食
子酸对照品 5 mg,用蒸馏水溶解并定容于 25 ml棕色容量瓶
中 ,得浓度为 0.2mg/ml的对照品溶液。
1.2.2.3　供试品溶液的制备 。分别精确称取磨盘草的根 、
茎 、叶粉末各 2.0g,置于 100 ml带塞锥形瓶中 ,加入 90%乙
醇溶液 50 ml,静置 2h后抽滤 ,用少量 90%的乙醇溶液洗涤
滤渣 ,合并滤液置于 100 ml棕色容量瓶中 ,用 90%乙醇溶液
定容至刻度。
1.2.2.4　最大吸收波长的确定。精密量取对照品溶液 1
ml,置于 10 ml棕色容量瓶中 ,加入 6 ml蒸馏水 ,然后加入
0.5 ml福林试剂 ,充分摇匀 ,然后加入 1.5 ml20%碳酸钠溶
液 ,用水定容至刻度 , 75 ℃水浴 10min,冷却。随行试剂做空
白 ,于 490 ～ 800 nm波长范围内全程扫描 ,确定其最大吸收
波长。
1.2.2.5　标准曲线的绘制。精密量取对照品溶液 0.0、0.1、
0.2、0.3、0.4、0.5 ml置于 6个 10 ml棕色容量瓶中 ,各加入 6
ml蒸馏水和 0.5 ml福林试剂 ,充分摇匀 ,然后加入 1.5 ml
20%碳酸钠溶液 ,用蒸馏水定容至刻度 , 75 ℃水浴 10 min,冷
却 。得没食子酸浓度分别为 0.000、0.002、0.004、0.006、
0.008、0.010 mg/ml的对照品溶液。于最大吸收波长处测定
各溶液的吸光度。以吸光度对没食子酸浓度作图 ,得标准曲
线的回归方程:Y=0.115 2+0.137 7X(R=0.999 6),其中 Y
为吸光度 , X为没食子酸浓度(mg/ml)。结果表明 ,没食子酸
在 0.002 ～ 0.010 mg/ml范围内与吸光度呈良好线性关系。
1.2.2.6　精密度试验。精密吸取供试品液 1 ml,按 “1.2.2.
5”进行操作 ,重复 5次 ,测定其吸光度。
1.2.2.7　重现性试验 。精密吸取同一供试品液 5份各 3
ml,按 “1.2.2.5”进行操作 ,测定其吸光度。
1.2.2.8　稳定性试验。精密吸取供试品液 1 ml,按 “1.2.2.
5”进行操作 ,在 0、0.5、1、1.5、2、2.5、3 h时测定吸光度。
1.2.2.9　回收率试验。取已知含量的同一样品 5份 ,分别
精密添加一定量的没食子酸对照品 ,按上述供试品溶液制备
方法制备加样回收供试品溶液。再按 “1.2.2.5”的方法测定
其吸光度 ,计算总酚含量及回收率 。
1.2.2.10　供试品溶液中总酚含量测定。分别精确吸取磨
盘草的根 、茎 、叶样液 1ml置于 10ml棕色容量瓶中 ,各加入
6ml蒸馏水和 0.5 ml福林试剂 ,方法同 “1.2.2.5” ,按标准曲
线测定方法测样液的吸光度值 ,然后根据回归方程求出样液
中总酚的含量 ,据此计算出样品中总酚的含量 。
2　结果与分析
2.1　最大吸收波长　经测定 ,磨盘草中总黄酮的最大吸收
波长为 510nm,总酚的最大吸收波长为 765 nm,空白对照无
干扰。
2.2　精密度试验结果　5次重复总黄酮吸光度的 RSD=
0.34%,总酚吸光度的 RSD=0.75%,说明方法的精密度良好。
2.3　重现性试验结果　5份样品总黄酮吸光度的 RSD=
0.62%,总酚吸光度的 RSD=2.43%,说明方法的重现性较好。
2.4　稳定性试验结果　0 ～ 40 min内 ,总黄酮吸光度的 RSD
=2.23%,说明总黄酮在 40 min内较稳定;0 ～ 3h内 ,总酚吸
光度的 RSD=1.65%,说明总酚在 3 h内较稳定。
2.5　回收率试验结果　总黄酮的加样回收率如表 1所示 ,
总酚的加样回收率如表 2所示 。由表 1、表 2可知 ,总黄酮和
总酚的加样回收率分别为 97.72%和 98.47%。
表 1　总黄酮加样回收率试验结果
Table1　Therecoverytestresultsoftotalflavonoids
测定次数Determinationtimes
样品中总黄酮含量∥mgTotalflavonoidcontentinsamples
加入芦丁对照品的量∥mgAddingamountofrutinreferencesubstance
测得总黄酮含量∥mgMeasuredcontentoftotalflavonoid
回收率∥%Recoveryrate
平均值∥%Mean RSD%
1 1.18 0.55 1.72 98.18
2 1.18 0.55 1.71 96.36
3 1.18 0.65 1.81 96.92 97.72 1.02
4 1.18 0.65 1.82 98.46
5 1.18 0.75 1.92 98.67
表 2　总酚加样回收率试验结果
Table2　 Theadditionrecoverytestresultsoftotalphenols
测定次数Determinationtimes
样品中总酚含量∥mgTotalphenolscontentinsamples
加入没食子酸对照品的量∥mgAddingamountofgalicacidreferencesubstance
测得总酚含量∥mgMeasuredamountoftotalphenols
回收率∥%Recoveryrate
平均值∥%Mean RSD%
1 4.28 1.24 5.48 96.77
2 4.28 1.24 5.50 98.39
3 4.28 1.34 5.60 98.51 98.47 1.47
4 4.28 1.34 5.63 100.75
5 4.28 1.44 5.69 97.92
2.6　供试品测定结果　供试品溶液中总黄酮含量如表 3所
示 ,总酚含量如表 4所示。由表 3、表 4可知 ,磨盘草叶中总
黄酮和总酚含量最高 ,分别为 1.96%和 8.61%。
(下转第 17495页)
17488 　　　　　　　　　　安徽农业科学　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　2009年
(g/m2)+0.040x3 (cm)+0.019 (r=0.999 9＊＊), y1(g/个)=
140.777-0.187x5 (个 /m2)(r= -0.993＊＊),其中 ,块茎数与
块茎鲜重具有极显著的负相关。
2.2.2.4　块茎个体干重与乌天麻块茎性状 -产量 -品质的
变化规律在乌天麻块茎发育个体干重 0.06 ～ 34.20 g范围
内 ,与块茎干重 y1 相关的主要因素有鲜块茎系数 y6 (r=
0.997＊＊)、天麻素含量 z1 (r=0.982＊ ),其回归方程为:y2
(g/个)=11.358 0z1 (mg/g)-20.227(r=0.982＊), y2 (g/个)
=2.694y6(g/cm)-1.699(r=0.997＊＊)。
2.2.2.5　块茎干物质积累率与乌天麻块茎性状 -产量 -品
质的变化规律。在乌天麻块茎发育个体折干率 17.89 ～
25.64%范围内 ,与块茎折干率 y3相关的主要因素有鲜块茎
周长 x2 (r=0.990＊＊)、天麻素积累量 z2(r=0.981＊ ),其回归
方程为:y3 (%)=0.584x2 (cm)+17.757(r=0.990＊＊), y3
(%)=22.408z2(g/m2 )+15.313(r=0.981＊)。
2.2.2.6　鲜块茎长度与乌天麻块茎性状 -产量 -品质的变
化规律。在乌天麻块茎发育个体长度 1.08 ～ 10.08 cm范围
内 ,与鲜块茎长度 x1 相关的主要因素有块茎鲜重 y1 (r=
0.997)、天麻素积累量 z2(r=0.985),其回归方程为:x1 (cm)
=0.067y1(g/个)+0.530z2 (g/m2)+0.237(r=0.999 9＊＊)。
3　小结
该研究以有性繁殖乌天麻优良品系的不同块茎类型为
试验材料 ,采用 SPSS17.0统计软件对乌天麻块茎性状 -产量
-天麻素的相关性规律及其主要影响因素进行了分析。结
果表明 ,天麻块茎发育不同时间和空间的差异性是导致商品
天麻产量 、规格等级与品质不稳定的重要因素之一。该试验
研究了天麻块茎的发育特性及其变化规律 ,可为天麻的质量
控制及实现其优质高产提供科学依据。
参考文献
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(上接第 17488页)
表 3　磨盘草不同营养器官中总黄酮的含量
Table3　Thecontentoftotalflavonoidindiferentvegetativeorgansof
Abutilonindicum(L.)Sweet %
样品号
No.ofsamples
叶
Leaves
茎
Stem
根
Root
1 2.02 1.18 0.81
2 1.94 1.19 0.77
3 1.92 1.23 0.76
平均值∥% 1.96 1.20 0.78
RSD∥% 2.70 2.21 3.39
表 4　磨盘草不同营养器官中总酚的含量
Table4　Thecontentoftotalphenolsindiferentvegetativeorgansof
Abutilonindicum(L.)Sweet %
样品号
No.ofsamples
叶
Leaves
茎
Stem
根
Root
1 8.74 6.16 4.42
2 8.52 5.92 4.29
3 8.57 6.01 4.22
平均值∥% 8.61 6.03 4.31
RSD∥% 1.34 2.01 2.35
3　结论与讨论
该研究以芦丁为对照品 ,以 NaNO2-Al(NO3 )3 -NaOH为
显色剂 ,采用紫外可见分光光度法在 510 nm波长处测定了
磨盘草不同营养器官中总黄酮的含量 ,结果表明 ,磨盘草叶
中总黄酮含量最高 ,为 1.96%,其次为茎(1.20%),根中总黄
酮含量最低 ,为 0.78%;试验以没食子酸为对照品 ,通过 Fo-
lin-Ciocalteu比色法 ,采用紫外可见分光光度法在 765 nm波
长处测定了磨盘草不同营养器官中总酚的含量 ,结果表明 ,
磨盘草叶中总酚含量最高 ,为 8.61%,其次为茎(6.03%),根
中总酚含量最低 ,为 4.31%。可见 ,磨盘草不同营养器官中
总黄酮 、总酚的含量存在显著差异 。
该试验结果表明 ,所用 2种方法均具有操作简便 ,效率
和精密度高 ,稳定性和重现性好 ,测定结果可靠等优点 ,适用
于磨盘草中总黄酮 、总酚的定量分析。
参考文献
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