全 文 ：露水草提取物质量标准的研究
谭 梅 ,李 良 ,杨建鸣 ,张俊升 ,王 琼
(云南省兽药饲料检测所 ,昆明　 650021)
[收稿日期 ] 2008-12-02　[文献标识码 ] A　[文章编号 ] 1002-1280(2009)08 -0028-03　[中图分类号 ] R286
[摘　要 ] 　建立了露水草提取物的质量标准 。用薄层色谱法对其主要成分 β -蜕皮激素进行鉴
别;以高效液相色谱法对露水草提取物中 β -蜕皮激素进行定量分析 ,流动相为乙腈 -甲醇 -水
(1∶2∶4),流速为 1 mL/min,检测波长为 243 nm。结果薄层色谱无干扰 ,专属性强;β -蜕皮激素质
量浓度在 0.6 ～ 4.2 mg/mL范围内与峰面积线性关系良好 , r=0.999 97(n=7),加样回收率为
99.7%, RSD为 0.6%(n=6)。所用方法简便 、准确 、重现性好 ,可用于露水草提取物的质量控制。
[关键词 ] 　露水草提取物;β -蜕皮激素;高效液相色谱法;质量标准
作者简介:谭 梅(1970年 -), 女,高级兽医师 ,主要从事中兽药研究及兽药管理等相关工作。E-mail:tanmei@ivdc.gov.cn
QualityStandardforExtractumCyanotisVagaSiccus
TANMei, LILiang, YANGJian-ming, ZHANGJun-sheng, WANGQing
(YunnanInstituteofVeterinaryDrugControl, Kunming, 650021;China)
Abstract:ThequalitystandardforExtractumCyanotisVagasiccuswasestablishedwithaTLCmethodfor
indentifiedbeta-hydroxyecdysoneinExtractumCyanotisVagasiccusandaHPLCmethodfordetermining
simultaneouslybeta-hydroxyecdysoneinExtractumCyanotisVagasiccus.Themobilephasawasmadeupof
acetonitrile-methanol-water(1 ∶2 ∶4), theflowratewas1 mL/min, andtheultravioletdetectionwassetat
243 nm.Thequantitativeevaluationofbeta-hydroxyecdysonehadthelinearrangeof0.6 ～ 4.2 mg/mL(r=
0.999 97, n=7), theaveragerecoverywas99.7%(RSD=0.6%, n=6).Thismethodissimpleandaccurate
withhighspecificityandgoodrepeatability.ItissuitableforqualitycontrolofExtractumCyanotisVagasiccus.
Keywords:ExtractumCyanotisVagasiccus;beta-hydroxyecdysone;HPLC;qualitystandard
　　露水草提取物为鸭跖草科植物露水草 Cyanotis
arachnoidsC.B.Clarke提取的产物 , 主要成分为
20 -羟基蜕皮甾酮 (β -蜕皮激素)(C27H44O7)。
其主要作用为促进细胞生长 、刺激真皮细胞分裂 ,
对人体也有促进蛋白质合成的作用 。兽医临床广
泛用于桑蚕养殖中调节家蚕的生长发育 ,促使桑
蚕上簇整齐;在水产养殖中也用于促进虾 、蟹脱
壳 ,以达到高产的目的 。为有效控制其质量 ,笔者
对其质量标准进行了研究 ,用分光光度法 、薄层色
谱法对其中主要成分 β -蜕皮激素进行鉴别 ,用
HPLC法测定提取物中 β -蜕皮激素的含量 ,现报
道如下 。
1　仪器与试药
600型 HPLC仪 ,美国 Waters公司;CARY300
型紫外分光光度仪 ,美国瓦里安公司;AX-205型
电子分析天平 ,瑞士梅特勒公司;Reprostar3型薄
层摄像系统 ,瑞士 CAMAG公司;β -蜕皮激素对照
品 ,批号 MFCD00079355,含量 95%, AlfaAesar公
司提供;露水草提取物 ,批号 20080322、20080325、
20080327,云南恒大药业有限公司;硅胶 G薄层板 ,
瑞士 CAMAG公司预制板;甲醇 、乙腈为色谱纯;其
他化学试剂为分析纯。
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2　方法与结果
2.1　定性鉴别
2.1.1　取本品 40 mg,加乙醇 20 mL使溶解 ,取 10
滴于白色滴板上 ,加 1 ～ 2滴 0.1%香草醛硫酸溶
液 ,即显蓝绿色。
2.1.2　取本品适量 ,加乙醇制成每 1 mL含 10 mg
的溶液 ,作为供试品溶液 。另取 β -蜕皮激素对照
品 ,加乙醇制成每 1 mL含 5 mg的溶液 ,作为对照
品溶液 。吸取上述两种溶液各 5 μL,分别点于同一
以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶 G薄层板上 ,以
三氯甲烷 -乙醇 (4 ∶1)为展开剂 ,展开 ,取出 ,晾
干 ,喷以 1%香草醛硫酸乙醇(4※ 5)溶液(临用新
制),在 105 ℃加热至斑点显色清晰 。供试品色谱
中 ,在与对照品色谱相应的位置上 ,显相同颜色的
斑点。结果见图 1。
1-3.供试品溶液;4.对照品溶液
图 1　薄层色谱图
2.2　含量测定
2.2.1　测定波长确定　准确称取 105 ℃下干燥至
恒重的 β -蜕皮激素对照品及露水草提取物样品 ,
用甲醇分别溶解并稀释成每 1 mL含 0.02 mg的溶
液 ,以甲醇为空白 ,在 200 nm～ 400 nm波长范围内
扫描 ,结果见图 2。β -蜕皮激素及露水草提取物
A-对照品溶液;B-供试品溶液
图 2　紫外吸收光谱图
在 243.3 nm波长处有最大吸收 ,且无干扰。故选
择 243 nm为检测波长 。
2.2.2　色谱条件　色谱柱为 XTeraRP18柱(250
mm×4.6 mm, 5 μm);流动相为乙腈 -甲醇 -水
(1∶2 ∶4);流速 1 mL/min;检测波长 243 nm;柱温
35 ℃;柱压 <2 500 psi。理论塔板数不低于 2 500。
2.2.3　溶液制备　精密称取 β -蜕皮激素约 30
mg,用甲醇溶解并定容至 100 mL,作为对照品溶液 。
取露水草提取物 ,精密称取约 30 mg,置 50 mL量瓶
中 ,用甲醇溶解并稀释至刻度 ,作为供试品溶液。
2.2.4　方法学考察
2.2.4.1　专属性试验　精密吸取对照品溶液与供
试品溶液 10 μL,分别注入液相色谱仪 ,记录峰面
积 ,按外标法以峰面积计算含量即可。在本色谱条
件下 ,供试品溶液色谱图中具有与 β -蜕皮激素对
照品保留时间一致的色谱峰 ,且无其他成分的色谱
峰干扰(图 3)。
A-对照品溶液;B-供试品溶液
图 3　高效液相色谱图
2.2.4.2　线性关系考察　精密取 β -蜕皮激素对
照品溶液 2、4、6、8、10、12、14 μL,以质量浓度为横
坐标(x),峰面积为纵坐标(y)绘制标准曲线 ,得回
归方程 y=1.25e+007x-8.10e+004(r=0.999 97,
n=7)。结果表明 , β -蜕皮激素质量浓度在 0.6 ～
4.2 mg/mL范围内与峰面积线性关系良好。
2.2.4.3　精密度试验　精密吸取同一对照品溶液
10 μL,连续进样 6次 ,记录峰面积。结果 β -蜕皮
激素峰面积的 RSD为 0.2%(n=6)。
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2.2.4.4　重现性试验　取同一批样品 ,精密称取 6
份 ,按样品含量测定项下的方法测定含量 。结果
β -蜕皮激素的平均含量为 0.386 mg/mL, RSD为
0.6%(n=6)。
2.2.4.5　稳定性试验　精密吸取同一份供试品溶
液 ,分别在 0、2、4、6、8 h分别进样 5次 ,依法测定峰
面积。结果 8 h内 RSD为 0.6%(n=5),表明供试
品溶液在 8 h内稳定 。
2.2.4.6　加样回收试验　精密称取已知含量的露
水草提取物(β -蜕皮激素含量为 0.386 mg/mL)适
量 ,共 6份 ,分别精密加入低 、中 、高 3种不同质量
浓度的 β -蜕皮激素对照品溶液适量 ,照供试品溶
液的制备方法操作 ,得回收率试验溶液 ,依法测定 ,
结果见表 1。
表 1　β -蜕皮激素加样回收试验(n=6)
样品含量 /
(mg·mL-1)
加入量 /
(mg·mL-1)
测得量 /
(mg·mL-1)
回收
率 /%
平均回
收率 /%
RSD
/%
0.300 0.315 0.607 98.70
0.296 0.315 0.608 99.51
0.275 0.394 0.667 99.70 99.50 0.5
0.280 0.394 0.668 99.11
0.321 0.473 0.792 99.75
0.318 0.473 0.793 100.25
2.2.5　样品含量测定　取 3个批次的露水草提取
物 ,分别按供试品溶液的制备方法制备供试品溶
液。分别取 10 μL注入液相色谱仪进行测定。结
果 3批样品中 β -蜕皮激素的质量分数分别为
56.9%、62.0%、55.5%(n=3)。
3讨 论
β -蜕皮激素为露水草提取物中药理作用明
确 ,含量较高的成分 。以 β -蜕皮激素为指标可有
效控制该提取物质量。提供对该提取物紫外吸收
及 TLC鉴别 ,用 HPLC法建立药效成分 β -蜕皮激
素的含量测定 ,多批次的检验表明 ,所用方法简便
易行 ,结果稳定 ,重现性良好 ,可作为该提取物的质
量控制方法。综合考虑提取工艺及临床药效 ,制定
该提取物含量测定限度为含 β -蜕皮激素
(C27H44O7)不低于 50.0%。
参考文献:
[ 1] 　云南省卫生局.云南省药品标准 [ S] .1974年版.
[ 2] 　杨爱静.两种仪器分析方法测定 β -蜕皮激素含量的比较
[ J] .兽药与饲料添加剂 , 2005, 10(4):24-25.
[ 3] 　惠玉虎 ,张 立 , 李 健.RP-HPLC法测定珍珠露水草提取物
中蜕皮激素的含量 [ J].中草药 , 2002, 33(5):426-427.
动物药品学分会关于 2009年有关学术活动的通知
尊敬的理事会各位领导 、常务理事 、理事 、理事单位 、团体会员单位 、会员:
根据中国畜牧兽医学会和中国兽医药品监察所的安排 , 2009年我分会参加协办中国畜牧兽医学会石家庄 2009学术年
会和参加协办中国兽医药品监察所南京 2009年第二届中国兽药大会 , 故今年我分会不再单独举办大型学术交流活动。现
将有关情况通知如下 ,欢迎积极参加 , 参加者请直接同会议联系。
一 、关于第二届中国兽药大会
中国兽医药品监察所定于 2009年 9月 14日至 16日在南京举办第二届中国兽药大会 , 根据大会安排 , 我分会与中国畜
牧兽医学会生物制品学分会 、中国微生物学会兽医微生物学专业委员会负责共同主办学术论坛。具体内容详见网址:
htp://www.ivdc.gov.cn/tz/200906/t20090617 32452.htm
二 、关于中国畜牧兽医学会 2009年学术年会
中国畜牧兽医学会定于 2009年 10月 11-14日在石家庄市 ,举办以 “动物源性食品安全:畜牧兽医科技工作者面临的新
挑战”为主题的 2009年学术年会 ,我分会将与中国畜牧兽医学会生物制品学分会共同主办 “兽药安全学术论坛” ,我分会拟
安排如下报告:①中国兽医药品监察所徐士新研究员 /主任 /博士 , 兽药安全评价和评审;②中国农业大学沈建忠教授 /副院
长 /博士 ,兽药与畜产品安全;③中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所张继瑜研究员 /副所长 /博士 , 抗寄生虫药研究的进
展。其他具体内容详见网址:htp://www.bj-fm.com/caav/cn/index.asp? actionId=1
特此通知
中国畜牧兽医学会动物药品学分会　　
2009年 8月 2日　　　　　　
摘自中国兽药信息网:http://www.ivdc.gov.cn/tz/200908/t20090803 32689.htm[ 2009-08-10]
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