全 文 ：露水草加工粒径和其 β-蜕皮激素释放的关系
朱国栋，张易祥* ，叶金云，吴成龙，于 岚，杨 霞 (湖州师范学院生命科学学院，浙江湖州 313000)
摘要 ［目的］比较不同粒径露水草(Cyanotis arachnoidea C． B． Clarke)对所含 β-蜕皮激素释放的影响。［方法］采用 GRACE ODS C18色
谱柱(250 mm ×4． 6 mm，5 μm)，流动相甲醇∶水 =40∶ 60(V/V，%)洗脱。柱温 26 ℃，流速 1． 0 ml /min，检测波长 248 nm。［结果］相同来
源的露水草粉体(粒径 10、30和 50 μm)β-蜕皮激素含量检测值和普通细粉(粒径 180 μm)相比，粉体中蜕皮激素激素的检测值平均高 1
倍多。［结论］露水草粉体中的蜕皮激素更容易溶于甲醇，其提取率明显高于普通细粉。表明露水草经过超微粉碎后，细胞破壁率到得
明显提高，更有利于有效成分的溶出。
关键词 高效液相色谱法;露水草(Cyanotis arachnoidea C． B． Clarke);β-蜕皮激素
中图分类号 S132 文献标识码 A 文章编号 0517 －6611(2011)29 －17760 －02
Effect of Different Size of Ground Cyanotis arachnoidea Particles on the Release of β-ecdysone
ZHU Guo-dong et al (School of Life Sciences，Huzhou Teachers College，Huzhou，Zhejiang 313000)
Abstract ［Objective］The aim was to investigate the influence of different size of ground Cyanotis arachnoidea C． B． Clarke particles on the
release of β-ecdysone． ［Method］ The content of β-ecdysone extracted from Cyanotis arachnoidea powders of different sizes was detected
through HPLC，under the chromatographic conditions:GRACE ODS C18 column (250 mm × 4． 6 mm，5 μm)，mobile phase methanol∶ water
= 40∶ 60 (V /V，%)，column temperature 26 ℃，flow rate 1． 0 ml /min and detection wavelength 248 nm． ［Result］The extracted β-ecdys-
one from ultra-fine Cyanotis arachnoidea powder (particle size 10，30 and 50 μm)was as more than two fold as common powder (particle size
180 μm)． ［Conclusion］The β-ecdysone in ultra-fine powder of Cyanotis arachnoidea was more easily soluble in methanol． The extraction rate
of β-ecdysone was significantly higher than that of common powder． The result showed that the technology of ultra-fine pulverization markedly
improved the dissolution of the β-ecdysone for increasing the cell breakage rate，and then the active ingredients could be extracted more easily．
Key words HPLC;Cyanotis arachnoidea C． B． Clarke;β-ecdysone
基金项目 浙江省重大国际合作项目(2009C14019) ;农业部“948”项目
(2010-Z40) ;浙江省教育厅重大项目(ZD2009009);湖州市重大
科技专项(2010ZD1002);国家自然科学基金(20977027);浙江省
大学生科技创新计划(新苗人才计划)(2011R425009)。
作者简介 朱国栋(1990 － ) ，男，浙江上虞人，从事环境毒理研究。*
通讯作者，副教授，硕士生导师，从事环境毒理学研究，E-
mail:yxzhang@ hutc． zj． cn。
收稿日期 2011-06-24
20-羟基蜕皮甾酮(20-hydroxy ecdysterone)又称 β-蜕皮
激素(β-ecdysone) ，是一种昆虫的变态激素，可用于防治害虫
及提高蟹虾产量［1］。鸭跖草科草本植物露水草(Cyanotis
arachnoidea C． B． Clarke)是提取昆虫蜕皮激素的优良原料植
物之一，它的干燥全草中昆虫蜕皮激素的含量达 1． 2%，地下
部分含量达干重的 2． 9%［2 －4］。
超微粉碎技术可将草药加工成粒度低于 10 μm的超微
粉体。经过超微粉碎的草药粒径非常小，有效成分可不必经
过较长的路程就能释放出来，且由于微粉体小而更容易吸附
在小肠内壁，可加速有效物质在小肠内的吸收［5］。
该研究通过超微粉碎技术将露水草制成不同粒径的粉
体，利用高效液相色谱法检测不同粒径露水草粉体 β-蜕皮激
素含量，以此来研究超微粉碎技术对露水草蜕皮激素释放的
影响，为露水草粉体的应用提供支持。
1 材料与方法
1． 1 仪器、试剂和样品 电了天平;索式提取器;旋转蒸发
器;高效液相色谱系统(Waters Alliance 2695)配二极管阵列
检测器(Waters 2996)。β-蜕皮激素标准品(Sigm -Aldrich公
司) ;甲醇(分析纯，色谱纯)。露水草购于云南，由清华大学
盖国胜教授鉴定为鸭跖草科露水草(Cyanotis arachnoidea C．
B． Clarke)干燥根部，其粉体样品及普通细粉样品由浙江长
兴清华粉体及新材料工程中心加工。
1． 2 提取方案［1］
1． 2． 1 蜕皮激素提取。称取粒径 10、30和 50 μm露水草粉
体 1 g，加入 100 ml甲醇，采用索式提取器提取 4 h。将上述
所得提取液进行抽滤后经旋转蒸发仪减压浓缩至干，残渣用
甲醇溶解并定容至 10 ml。经 0． 45 μm微孔滤膜过滤后上机
测定。对照样品为粒径 180 μm的普通粉末。
1． 2． 2 标准溶液配制。精密称取0． 020 0 g β-蜕皮激素标准
品，加入甲醇制成含 β-蜕皮激素 0． 80 mg /ml的标准储备液。
使用时用甲醇稀释成不同浓度的标准工作液。
1． 2． 3 标准曲线建立。精密吸取配制的蜕皮激素标准储备
液 0． 1、0． 2、0． 3、0． 4、0． 5、0． 6、0． 7 和 0． 8 ml 至容量瓶中，甲
醇稀释定容至刻度，得浓度分别为 0． 1、0． 2、0． 3、0． 4、0. 5、
0. 6、0． 7和 0． 8 mg /ml 的系列标准工作液，在高效液相色谱
系统上依次进样 10 μl。
1． 2． 4 色谱条件。GRACE ODS C18色谱柱(250 mm × 4． 6
mm，5 μm) ;柱温 26 ℃;流动相为甲醇∶水 =40∶ 60(V /V，%) ;
流速 1． 0 ml /min;检测波长 248 nm。
2 结果与分析
2． 1 线性关系 以蜕皮激素峰面积为纵坐标，其浓度为横
坐标，计算出线性方程为 Y =20 555X +279． 55，R2 = 0． 999 8。
结果表明，蜕皮激素在 0． 1 ～ 0． 8 mg /ml 范围内与其峰面积
积分值呈现出良好线性关系(图 1)。
2． 2 样品测定结果 由图 2 可见，在该色谱条件下，β-蜕皮
激素峰形良好。试验测得粒径为 10、30 和 50 μm的露水草
粉体 β-蜕皮激素含量分别为 0. 739 4%、0. 658 3% 和
0. 739 4%，而对照的含量为 0. 326 7%。由此可见，粉体中的
β-蜕皮激素用甲醇更容易提取，和普通细粉相比，粉体中蜕
皮激素激素的含量平均高 1倍多。
3 结论与讨论
超微粉碎是近 20 年迅速发展起来的一项高新技术，能
把原材料加工成微米级甚至纳米级的微粉，它是粉体工程中
的一项重要内容，包括对粉体原料的超微粉碎、高精度的分
责任编辑 朱琼琼 责任校对 傅真治安徽农业科学，Journal of Anhui Agri． Sci． 2011，39(29):17760 － 17761
DOI:10.13989/j.cnki.0517-6611.2011.29.166
图 1 蜕皮激素浓度与其峰面积积分值线性关系
Fig． 1 The linear relationship between β-ecdysone content and
its peak area integral value
级和表面活性改变等内容。采用传统的工艺方法，很难将固
形物料粉碎到如此的细度。固形物质经过超微粉碎后，使其
处于微米甚至纳米尺寸时，该粉体的物理、化学特性都会发
生极大的变化［5］。大黄［6］、甘草［7］、六味地黄［8］、蒲公英［9］、
三七［10］等经过超微粉碎后，其有效成分的溶出量、浸出率都
得到了明显的提高，而且粉碎粒度对甘草酸的溶出有显著影
响，粒度越细，有效成分越易溶出，动物吸收效果也明显好于
细粉。该试验对不同粒径的露水草粉体(10、30和 50 μm)及
普通细粉(180 μm)β-蜕皮激素含量测定结果表明，露水草粉
体中的蜕皮激素更容易溶于甲醇，其提取率明显高于普通细
粉。说明露水草经过超微粉碎后，细胞破壁率到得明显提高，
更有利于有效成分的溶出，为生物利用创造了更好的条件。
注:A．标准品;B．样品(10 μm)。
Note:A． Standard preparation;B． Sample(10 μm)．
图 2 β-蜕皮激素标准品与样品的 HPLC检测结果
Fig． 2 HPLC detection results of β-ecdysone standard and the sample
该试验所用露水草产自云南，制作粉体时使用的是其根
部，其蜕皮激素含量明显低于聂瑞麟等［4］报道的 2． 9%，这可
能和露水草的产地、采收及运输、储存等有关。
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