全 文 ：2016 年 4 月 云南化工 Apr． 2016
第 43 卷第 2 期 Yunnan Chemical Technology Vol． 43，No． 2
收稿:2015-12-28
作者简介:李艳春(1980 －)，女，云南寻甸人，工程师，主要从事分析测试研究。
doi:10． 3969 / j． issn． 1004-275X． 2016． 02． 008
·分析测试·
露水草提取物 β －蜕皮激素含量分析
李艳春，段 晋，杨松梅，高 波，周 静
(云南瑞宝生物科技股份有限公司，昆明 651701)
摘 要: 采用紫外分光光度法并结合 HPLC面积归一化法，测定了露水草提取物中 β －蜕皮激
素的含量。用紫外分光光度法测定的含量，乘以 HPLC面积归一化法中的面积百分比，测定了 4 个露
水草提取物中 β － 蜕皮激素样品的含量。结果表明，本方法测定得到的 4 个样品的含量分别为
45. 42%，50. 09%，63. 18%，52. 85%;与高效液相色谱法分析结果(45. 72%，50. 32%，63. 38%，
53. 11%)相比，相对误差均小于 1%。该方法分析准确，简单易行，适用于测定露水草提取物中 β －
蜕皮激素含量。
关键词: 露水草提取物;β －蜕皮激素;紫外分光光度法
中图分类号: O657 文献标识码: A 文章编号: 1004-275X(2016)02-0028-03
露水草(Cyanotis arachnoidea C. B. Clarke)为
鸭跖草科蓝耳草属多年生草本植物，主要分布在广
东、广西、云南等地［1］。露水草以根入药，味甘苦，
性寒，具有舒筋活络、除湿止痛、治虚热不退、肾炎
水肿、风湿性关节炎、四肢麻木、湿疹、发汗除湿、消
阴热等疗效［2］。研究表明，其主要活性成分 β －蜕
皮激素能促进核酸和蛋白质的合成［3］，影响糖代谢
和脂类代谢［4］，调节机体的免疫［5］，提高乙酰胆碱
酯酶的活性［6］。因此，露水草提取物中 β －蜕皮激
素的含量是影响药物质量的重要因素。
目前，文献报道的 β －蜕皮激素含量的分析
方法有紫外分光光度法和高效液相色谱法(外标
法)［7］。但对于 β －蜕皮激素含量不高的产品，
采用紫外分光光度法检测，结果偏高;采用高效液
相色谱法(外标法)每次都需要价格昂贵的标准
品。本文采用紫外分光光度法结合 HPLC 面积归
一化法测定露水草提取物中 β －蜕皮激素含量。
1 材料与方法
1. 1 主要试剂与设备
样品 A 、样品 B、样品 C、样品 D(实验室自制)。
甲醇(色谱纯)，乙腈(色谱纯)，95%乙醇(分析
纯)，水为 I 级水，β －蜕皮激素标准品(Sigma 公
司)。
Waters 600 －2487 型高效液相色谱仪，美国Wa-
ters公司的色谱工作站Empower2;SHIMANZU UV －
2550紫外可见分光光度计;超声波振荡器;FA1604
型电子天平，上海天平仪器厂。
1. 2 实验方法
1. 2. 1 紫外分光光度法
参照文献［7］，称取 0. 050 g 样品(精确至
0. 000 01 g)，置于 50 mL 容量瓶中，加乙醇溶解并
定容，摇匀。精密量取 1 mL，置另一 50 mL 容量
瓶中，用乙醇稀释至刻度，摇匀;在 200 ～ 300 nm
进行波长扫描。溶液的最大吸收波长在 242 nm
处，测定该波长下的吸光度值 A，并按照公式(1)
进行计算。
X1 =
A × f
m × 249. 6 × 100 (1)
式中:X1 为样品中 β －蜕皮激素的质量分数;A为
供试品溶液在最大吸收波长下的吸光值;m为供试
品的质量，g;f 为稀释倍数;249. 6 为 β －蜕皮激素
的吸收系数。重复测定 3次，取其算术平均值。
1. 2. 2 高效液相色谱面积归一化法
1. 2. 2. 1 色谱条件
色谱柱:C18，4. 6 × 250 mm，5 μm(大连伊利
特分析仪器有限公司);流动相:1 ∶ 2 ∶ 4 乙腈 －甲
醇 －水(体积比);进样量 20 μL;流速 1. 0 mL·
min －1;检测波长 242 nm;柱温 30 ℃。
1. 2. 2. 2 标准溶液的制备
准确称取 β －蜕皮激素标准品 25 mg(精确至
0. 01 mg)，置于 50 mL容量瓶中，用甲醇溶解并定
容，经 0. 45 μm滤膜过滤后备用。
1. 2. 2. 3 样品溶液的制备
准确称取 0. 05 g(精确至 0. 01 mg)试样于 50
mL容量瓶中，流动相溶解并定容，经 0. 45 μm 滤
膜过滤后备用。
1. 2. 2. 3 测定
按照 1. 2. 2. 1 中的色谱条件对分别蜕皮激素
的标准溶液进行测定，并记录色谱图。在相同条
件下对样品溶液进行测定，根据标准品保留时间
进行定性，记录色谱图。采用面积归一化分析蜕
皮激素的质量分数，重复测定 3 次取其平均值。
1. 2. 2. 4 样品中蜕皮激素含量的计算
根据 UV 含量与面积归一化结果按照公式
(2)进行计算。
X2 =
X1 × As
100 (2)
式中:X2 为样品中 β －蜕皮激素的质量分数，X1
为样品中 β － 蜕皮激素的 UV 法测得的质量分
数，As为样品溶液的 HPLC 色谱图中 β －蜕皮激
素面积百分比平均值。
2 结果与分析
2. 1 紫外分光光度法
用紫外分光光度法测定样品中的 β －蜕皮激
素的质量分数，结果见表 1。
表 1 紫外分光光度法测定样品中 β-蜕皮激素的含量
Tab. 1 β － ecdysone content measured by
UV spectrophotometry
样品
w(β －蜕皮激素)/%
1 2 3 平均值
A 77. 92 77. 55 78. 56 78. 01
B 70. 99 71. 59 71. 71 71. 43
C 91. 43 90. 89 90. 68 91. 00
D 91. 45 91. 03 90. 67 91. 05
2. 2 紫外分光光度法结合高效液相色谱面积归
一化法
在 1. 2. 2. 1 中的色谱条件下，分别对蜕皮激
素的标准溶液和样品溶液进行测定，所得的
HPLC色谱图见图 1 ～图 5。4 个样品的面积
归一化结果见表 2。
图 1 标准溶液的 HPLC谱图
Fig. 1 HPLC spectrogram of a standard solution
图 2 样品 A的 HPLC谱图
Fig. 2 HPLC spectra of sample A
图 3 样品 B的 HPLC谱图
Fig. 3 HPLC spectra of sample B
图 4 样品 C的 HPLC谱图
Fig. 4 HPLC spectra of Sample C
图 5 样品 D的 HPLC谱图
Fig. 5 HPLC spectra of sample D
·92·2016 年第 2 期 李艳春等:露水草提取物 β －蜕皮激素含量分析
表 2 面积归一化法测定样品中 β －蜕皮激素的含量
Tab. 2 β － ecdysone content measured by
area normalization method
样品
w(β －蜕皮激素)/%
1 2 3 平均值
A 58. 13 58. 00 58. 56 58. 23
B 70. 56 69. 91 69. 89 70. 12
C 69. 21 69. 35 69. 73 69. 43
D 57. 89 57. 78 58. 48 58. 05
2. 3 样品中蜕皮激素的质量分数
按照公式(1)、(2)计算 4 个样品中蜕皮激素
的质量分数，结果见表 3。
表 3 样品中蜕皮激素含量的分析结果
Tab. 3 Analysis results of β － ecdysone
content in the sample
样品 A B C D
w(β －蜕皮激素)/% 45. 42 50. 09 63. 18 52. 85
3 结论
仿照文献［7］，采用高效液相色谱法(外标
法)对样品中的 β －蜕皮激素含量进行测定，样品
A、B、C、D 的结果分别为 45. 72%、50. 32%、
63. 38%、53. 11%。与本文采用的方法相比，相对
误差均小于 1%，分别为 0. 66%、0. 46%、0. 32%、
0. 49%。说明本方法适用于测定露水草提取物中
β －蜕皮激素的含量。
参考文献:
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Content Determination of β － Ecdysone in Cyanotis Extract
LI Yan-chun，DUAN Jin，YANG Song-mei，GAO Bo，ZHOU Jing
(Yunnan Ｒainbow Bio － tech． Corp．，Ltd，Kunming 651701，China)
Abstract: Objective:Using combined method of ultraviolet spectrophotometry and HPLC area normali-
zation method，the β － Ecdysone content in Cyanotis extract was measured． Method:By multiplying the con-
tent measured by ultraviolet spectrophotometry with area percentage of HPLC area normalization method，the
β － Ecdysone content in Cyanotis extract were measured． Ｒesults:By this way，the contents of 4 samples
were measured as 45. 42%，50. 09%，63. 18%，52. 85% respectively，of which the relative error was less
than 1% as compared with the contents (45. 72%，50. 32%，63. 38%，53. 11%)measured by HPLC meth-
od． Conclusion:Such method of high analytical accuracy，easy to be implemented，and was suitable for meas-
uring the β － Ecdyson content in Cyanotis extract
Key words: cyanotis extract;β － ecdysone;content determination
·03· 云南化工 2016 年第 2 期