免费文献传递   相关文献

榕树叶黄酮含量及其抗氧化活性



全 文 : [收稿日期] 2011-10-26;2012-02-16修回
 [作者简介] 许丽丽(1982-),女,实验师,硕士,从事分离科学与技术研究工作。E-mail:lilyncu@hstc.edu.cn
[文章编号]1001-3601(2012)03-0118-0059-03
榕树叶黄酮含量及其抗氧化活性
许丽丽,刘裕彬
(韩山师范学院 化学系,广东 潮州521041)
  [摘 要]为弄清榕树叶黄酮的含量及其抗氧化性,为其药用和食用功能开发提供依据,采用超声波法,
以乙醇-水为溶剂从榕树叶中提取黄酮类物质,以分光光度法测定榕树叶中黄酮的含量,然后采用羟基自由
基体系、超氧阴离子自由基体系和还原能力对榕树叶中黄酮的抗氧化活性进行了研究。结果表明:榕树叶黄
酮的含量为29.12mg/g,其抗氧化活性与其质量浓度呈线性相关,榕树叶黄酮对羟基自由基的清除能力
(IC50=8.61μg/mL)总体上强于VC 水溶液,对超氧阴离子自由基的清除能力(IC50=89.24μg/mL)以及还
原能力均弱于VC 水溶液。
[关键词]榕树叶;黄酮;抗氧化活性
[中图分类号]S687.9 [文献标识码]A
Content of Flavonoid in Banyan Leaves and Its Antioxidant Activitiy
XU Li-li,LIU Yu-bin
(Department of Chemistry,Hanshan Normal University,Chaozhou,Guangdong521041,China)
  Abstract:In order to know flavonoid content in banyan leaves and its antioxidant activities,and to
provide a reference for development of its medicinal and edible functions.The flavonoid in banyan leaves
were extracted by the ultrasonic method,using alcohol-water as solvent.The content of flavonoid was
determined by spectrophotometer.Then,the antioxidant activities of flavonoid in banyan leaves were
studied using the hydroxyl free radical system,superoxide free radical system and reducing power.The
results showed that the content of flavonoid in banyan leaves was 29.12mg/g and its antioxidant activities
appeared a good linear correlation.In general,the activity of scavenging hydroxyl free radical(IC50=8.61
μg/mL)was stronger than VCsolution,but scavenging activities to superoxide free radical system(IC50=
89.24μg/mL)and reducing power were weaker than VCsolution.
Key words:banyan leaves;flavonoid;antioxidant activity
  榕树(Ficus microcarpaL.f)为桑科榕属无花
果类植物,原产于亚洲热带。目前全世界已知有
800多种,我国榕属植物约100种[1]。榕树四季常
青、姿态优美,具有园林绿化、药用、食用等多种用
途,广栽于我国南方各地。榕树叶是榕树药用部位
之一,具有抗炎、抑菌、清热、解表、化湿等功效,已经
研发入药,用于咳嗽、疟疾、支气管炎、急性肠炎、细
菌性痢疾和哮喘等疾病的防治[2-3]。黄酮类是榕树
叶药效的主要有效成分之一,但目前榕树叶中黄酮
抗氧化活性的相关报道很少。笔者等主要从还原
力、清除羟基自由基和清除超氧阴离子自由基三方
面对榕树叶黄酮进行抗氧化性研究,以期更加全面
地评价榕树叶黄酮的抗氧化性能,为其药用和食用
功能提供理论依据。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 榕树叶 榕树叶为小叶榕,采于韩山师范
学院东丽湖畔,60℃烘干,粉碎过60目筛。
1.1.2 试剂 芦丁(纯度≥98%),西安旭煌生物
技术有限公司;抗坏血酸(纯度≥99.7%),天津市永
大化学试剂开发中心;无水乙醇、硝酸铝、亚硝酸钠、
硫酸亚铁、过氧化氢、邻苯三酚、铁氰化钾和氯化铁
等,均为国产分析纯。
1.2 方法
1.2.1 榕树叶中黄酮含量的测定
1)榕树叶中黄酮成分提取。参考文献[1]的方
法。先将干样用石油醚脱脂至抽提液无色,烘干。
准确称取脱酯后的榕树叶干样10g,然后加入60%
乙醇溶液 250mL,在超声波 清 洗 器 中 (59Hz,
100%,即250W)提取20min,然后抽滤,滤液定容
到250mL。平行制备3份提取液,等体积混合后作
为最终样品提取液,用于黄酮含量和抗氧化性测定。
2)标准曲线的绘制。参考文献[4]和[5]的方
法。用60%乙醇准确配置0.205mg/mL芦丁贮备
液100mL,分别取0mL、0.5mL、1.0mL、1.5mL、
2.0mL、2.5mL、3.0mL、3.5mL、4.0mL、4.5mL、
5mL、5.5mL、6.0mL和8.0mL,置于25mL比色
管中,用60%乙醇溶液补充至12mL,摇匀后加入
5%NaNO21.0mL,摇匀放置5min,加入10%Al
 贵州农业科学 2012,40(3):59~61
 Guizhou Agricultural Sciences
(NO3)31.0mL,摇匀放置5min,再加入4%NaOH
10mL,最后用60%乙醇溶液稀释至25mL,摇匀,
避光放置15min,于510nm处测定吸光度,吸光度
为y轴,芦丁质量浓度为x轴绘制标准曲线。
3)样品中黄酮含量的测定。取样品提取液
1.0mL于25mL比色管中,同上操作,测定吸光度,
由标准曲线计算出总黄酮含量。
1.2.2 抗氧化活性的测定
1)羟基自由基(·OH)的清除试验。参考文
献[6]~[8]的方法。取7.5mmol/L 邻二氮菲
1.0mL,加 pH 7.4 的 0.2mol/L 磷 酸 缓 冲 液
2.0mL,充分摇匀混合,加入7.5mmol/L的FeSO4
溶液1.0mL,再加1.0mL不同质量浓度的提取物
稀释液,混匀后加入0.1%的 H2O21.0mL,最后以
蒸馏水补充至50.0mL,37℃保温1h,在510nm处
测定吸光度(A2)。损伤管 A1为不加提取物稀释
液,未损伤管A0为不加 H2O2和提取物稀释液。以
系列相似质量浓度的VC 水溶液代替提取物稀释液
相同试验为对照。计算清除率:
·OH清除率=[(A2-A1)/(A0-A1)]×100%
式中:A0为未损伤管的吸光度,A1为损伤管的
吸光度,A2为加样品后的吸光度。
2)超氧阴离子自由基(O-2 ·)清除试验。参考
文献[9]~[10]的方法。取 pH 8.2、50mmol/L
Tris-HCl缓冲液11.25mL ,8mL蒸馏水,2.5mL
不同质量浓度的提取物稀释液(空白管用蒸馏水代
替)。混匀后在25℃水浴中恒温20min,取出后立
即加入25℃预热过的3mmol/L邻苯三酚0.75mL
(邻苯三酚溶液用10mmol/L HCl配制,空白管用
10mmol/L HCl代替),蒸馏水定容至25mL,迅速
摇匀后倒入比色皿,325nm下每隔30s测吸光度,
共测4min,推迟30s。把所得的数据以时间为横坐
标、A325值为纵坐标进行线性回归,得到的直线斜率
为反应速率A0、A1。以系列相似质量浓度的VC 水
溶液代替提取物稀释液的相同试验为对照。
样品的O-2 ·清除能力:
O-2 ·清除率=[(A0-A1)/A0]×100%
  式中,A0为邻苯三酚的自氧化速率,A1为加入
样品后邻苯三酚的自氧化速率。
3)还原能力的测定。参考文献[5]的方法。在
pH 6.6、0.2mol/L磷酸盐缓冲液2.5mL中加入不
同质量浓度的提取物稀释液2mL,1%的铁氰化钾
溶液2.5mL,混合物在50℃恒温2min后,再加入
10%的三氯乙酸溶液2.mL,定容至10mL。然后以
3 000r/min离心分离10min,取上层清液1mL和
0.1%FeCl3溶液0.2mL,加蒸馏水定容至10mL。在
700nm处测定吸光度。以系列相似质量浓度的 VC
水溶液代替提取物稀释液的相同试验为对照。
2 结果与分析
2.1 样品的黄酮含量
采用Al(NO3)3-NaNO2比色法,以芦丁为标准,
得标准曲线方程y=9.988 5x-0.001 4,R2 =
0.999 3,由此可知,标准液质量浓度在0.004 1~
0.065 6mg/mL范围内与吸光度值存在良好的线性关
系(图1)。试验测得样品提取液平均吸光度为0.464,
代入标准曲线,求出反应体系中黄酮质量浓度为
0.046 6mg/mL,即 样 品 液 中 黄 酮 质 量 浓 度 为
1.165mg/mL,即 1g 榕 树 叶 干 样 可 提 取 总 黄
酮29.12mg。




Ab
so
rb
an
ce
%v
al
ue
0.8
0.6
0.4
0.2
0.0
0.00%%%%%%%%%%%%%%%%%0.02%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%0.04%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%0.06%%%%%%%%%%%%%%0.08
Rutin%concentration
芦丁浓度 /(mg/mL)
图1 芦丁标准曲线
Fig.1 Standard curve of rutin
2.2 榕树叶黄酮的抗氧化活性
2.2.1 对羟基自由基(·OH)的清除作用 Fe2+
与邻二氮菲生成红色络合物在510nm处有特征吸
收,H2O2与Fe2+能发生Fenton反应生成·OH,向
体系中加入自由基清除剂后,·OH 优先与清除剂
作用,自由基链式反应终止,从而使体系吸光度发生
变化[11]。取不同质量浓度的榕树叶提取液和VC 添
加到体系中,从图2A 可见,在试验质量浓度范围
内,榕树叶提取物对·OH具有很强的清除能力(总
体要比VC 水溶液强)。而且,随着试样中黄酮质量
浓度的增加,其对·OH的清除率递增,比VC 呈现
出更明显的线性变化趋势。试样回归方程为
y=4.093 4x+14.763 7,R2 =0.938 7,IC50 =
8.61μg/mL。
2.2.2 对超氧阴离子自由基(O-2 ·)的抑制作用
碱性环境中邻苯三酚会发生自氧化反应,生成超
O-2 ·和中间产物(在325nm处有特征吸收),自由
基清除剂(如黄酮和VC 水溶液)能抑制超氧阴离子
自由基的生成,阻断自氧化的链式反应,从而使
325nm处的吸收减弱[12]。从图2B可知,在试验质
量浓度范围内,榕树叶黄酮质量浓度对 O-2 ·的抑

作 用 几 乎 呈 现 线 性 递 增 关 系 ,回 归 方 程 为
y=0.439 7x+10.762 4,R2 =0.989 1,IC50 =
89.24μg/mL。对比VC水溶液对O-2·的抑制作
·06·
                                        贵 州 农 业 科 学
                                   Guizhou Agricultural Sciences



/%
Cl
ea
ra
nc
e%
ra
te



/%
Cl
ea
ra
nc
e%
ra
te
100
试样 VC
浓度 /(μg/mL)
0%%%%%%%%%%%%%%%%%%%5%%%%%%%%%%%%%%%%%%%10%%%%%%%%%%%%%%%%%15%%%%%%%%%%%%%%%%%20%%%%%%%%%%%%%%%%%25
Concentration
浓度 /(μg/mL)
Concentration
0%%%%%%%%%%%%%%%%%%20%%%%%%%%%%%%%%%%%40%%%%%%%%%%%%%%%%%%60%%%%%%%%%%%%%%%%%%80%%%%%%%%%%%%%100
80
60
40
20
0
100
80
60
40
20
0
A
B
 注:图中质量浓度均为反应物在最终反应体系中的质量浓度(下同)。
 Note:The concentrations in the figures were al the final
concentrations of reaction system.The same below.
图2 榕树叶黄酮对羟基自由基(·OH)的清除作用(A)及
对超氧阴离子自由基(O-2 ·)的抑制作用(B)
  Fig.2 Hydroxyl free radical scavenging activities
and superoxide free radical scavenging
activities of flavonoid in banyan leaves




Ab
so
rb
an
ce
%v
al
ue
1.2
1.0
0.8
0.6
0.0
浓度 /(μg/mL)
5%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%10%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%15%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%20%%%%%%%%%%%%%%%%%%25
Concentration
0.4
0.2
试样 VC
图3 榕树叶黄酮的还原力
Fig.3 Reducing power of flavonoid in banyan leaves
用,榕树叶黄酮的抑制作用稍弱一些,但呈现更好的
线性变化趋势。
2.2.3 榕树叶黄酮的还原力 还原性物质能将铁
氰化钾还原成亚铁氰化钾,在酸性条件下,亚铁氰化
钾继续与Fe3+反应生成普鲁士蓝(在700nm处有
最大吸收),产物质量浓度越大,吸光度越高,说明还
原性物质的还原能力越强[12]。从图3看出,在试验
质量浓度范围内榕树叶黄酮和VC 水溶液都随质量
浓度增大而吸光度递增,说明质量浓度越高还原能
力越强。榕树叶黄酮的还原力与其质量浓度呈直线
相关,其回归方程y=0.029 13x-0.125,R2 =
0.984 6。与VC 水溶液相比,榕树叶黄酮的吸光度
随质量浓度增加而增大的趋势要小,总体还原力小
于 VC 水 溶 液。 榕 树 叶 黄 酮 质 量 浓 度 为
17.48μg/mL时,其还原力与10μg/mL的VC 水溶液
相当,吸光度数值达0.413。可见,榕树叶中黄酮具
有较强的还原力。
3 结论
试验结果表明,榕树叶提取液中黄酮质量浓度
为1.165mg/mL,即每1g榕树叶干样可提取总黄
酮为29.12mg。榕树叶黄酮具有较强的清除自由
基的能力和还原力,其抗氧化活性与质量浓度呈良
好的线性关系。特别是清除羟基自由基的能力总体
上强于VC 水溶液,其IC50为8.61μg/mL。另外,提
取液中可能含有类似邻苯三酚的自氧化结构,从而
对超氧阴离子自由基的抑制率有所影响,导致其
IC50较高,为89.24μg/mL。榕树叶黄酮质量浓度
为17.48μg/mL时,吸光度数值达0.413,相当于
10μg/mLVC 水溶液。总之,榕树叶具有较好的抗
氧化活性,作为一种具有广泛药用和食用功能的植
物,值得进一步研究开发。
[参 考 文 献]
[1] 王立升,刘力恒,黄仁彬,等.超声波提取小叶榕叶总
黄酮工艺研究[J].食品研究与开发,2007,28(12):
91-95.
[2] 蓝鸣生,陈 路,缪佩凤.榕树叶药材质量标准研究
[J].中药材,2008,31(9):1433-1435.
[3] 国家中医药局《中华本草》编委会.中华本草(第二册)
[M].上海:上海科技出版社,1999:495-497.
[4] 吴 娜,张瑞巧,孙智达,等.艾蒿中黄酮类化合物的
提取工艺研究[J].食品工业科技,2008,29(1):230-
232.
[5] 马利华,贺菊萍,秦卫东,等.槐花提取物抗氧化性能
研究[J].食品科学,2007,28(9):75-77.
[6] 钦传光,周 军,赵 文,等.泥鳅多糖清除活性氧和
保护DNA链的作用[J].生物化学与生物物理学报,
2001,33(2):215-218.
[7] 郭丽萍,卢家炯,仇宏伟.香蕉皮多酚清除自由基作用
的初步研究[J].食品科技,2007(6):131-134.
[8] 金 鸣,蔡亚欣,李金荣,等.邻二氮菲-Fe2+氧化法检
测 H2O2/Fe2+产生的羟自由基[J].生物化学与生物
物理进展,1996,23(6):553-555.
[9] 陈留勇,孟宪军,贾 薇,等.黄桃水溶性多糖的抗肿
瘤作用及清除自由基、提高免疫活性研究[J].食品科
学,2004,25(1):167-170.
[10] 郭雪峰,岳永德,汤 锋,等.用清除超氧阴离子自由
基法评价竹叶提取物抗氧化能力[J].光谱学与光谱
分析,2008,28(8):1823-1826.
[11] 韩志萍,曹艳萍.桑椹提取物抗氧化性及其协同效应
的研究[J].中国油脂,2005,30(8):46-49.
[12] 张 欣,赵新淮.几种多酚化合物抗氧化性的不同化学
评价及相关性分析[J].食品科学,2008,29(10):85-89.
(责任编辑:杨 林)
·16·
 许丽丽 等 榕树叶黄酮含量及其抗氧化活性
 XU Li-li et al Content of Flavonoid in Banyan Leaves and Its Antioxidant Activitiy