全 文 :2006年6月 下半月号 畜禽业总第200期 试验研究
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EpidermalGrowthFactor(EGF)andInsulin-
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cretionsoftheGoatduringEnd-Pregnancy
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[31]SuH-Y,ChengW TK,Increasedmilk
yieldintransgenicmiceexpressinginsulin-
likegrowthfactor1.AnimBio,2004(1):9~19
我国天然草原面积约3.5亿hm2。
这些草原一方面支撑着民族地区畜
牧业的发展,另一方面也是我国西部
生态建设的主要组成部分。目前我国
天然草原迅速退化,造成草原退化的
五大因素当中,毒草化是继荒漠化后
第二大严重危害草原的因素。毒草主
要分布在我国的内蒙、新疆、宁夏、青
海、西藏、甘肃、四川和云南等省区,
危害面积达到0.3亿多hm2。醉马草、
草原棘豆、狼毒等有毒植物在各类草
地上的分布和大量滋生蔓延,使草场
中优良牧草大量减少,直接影响了草
场质量和载畜量,牲畜因误食毒草造
成中毒也带来巨大损失。清除毒草,
恢复草原原生生态,成为草原地区政
府和人民的迫切要求。长期以来,由
于对草原毒害草危害未引起足够的
重视,加之缺少有效的治理技术和成
熟的配套措施,致使毒草危害日益严
重,天然草原生态环境进一步恶化,
影响草地畜牧业的持续发展和农牧
民的增产增收。
醉马草[1](Achnatheruminebrians)
是一种常见的草原杂草,属禾本科芨
草属。别名药草,多年生草本植物。一
般在早春萌生,7至 10月份开花,株
高60cm左右,叶狭长。分布于内蒙
古、宁夏、甘肃、新疆、青海、四川及西
藏。醉马草具有药用价值,药用全草
及根,一般外用。醉马草含具有毒性的
生物碱,家畜在饥不择食的情况下或
在与其它青草混杂后误食,均可发生
中毒。如果牲畜误食鲜草达体重1%,
在 30~60min后即可出现中毒症状:
精神沉郁,食欲减退或废绝,四肢不
灵活,步态不稳,如醉酒状,有时表现
狂躁,知觉过敏,口吐白沫,头耳下
垂,起卧不安,体温多升高,有时倒地
不能起立,呈现昏睡状态,严重者出
现气喘,旋转不已,若防治不及时或
不合理,常引起死亡,有时还可以引
起怀孕牲畜流产[2]。醉马草对牲畜有
很大的危害,醉马草生物碱的成分分
析的研究至今是薄弱环节,本文对醉
马草的生物碱进行了分析,对于防治
牲畜中毒及醉马草的深度开发有十
分重要的应用价值。
1 实验部分
收稿日期:2006-02-23
的分析研究
醉马草 毒性成分
桑 明 1 张 继 2 姚 健 2 杨永利 2 黄爱仑 2
曾凡龙 1 卫荣华 1 王 燕 1 魏丕芳 3
(1.郧阳医学院基础医学院生物学教研室,湖北 十堰 442000;
2.西北师范大学生命科学学院;3.山东莱芜职业技术学院)
中图分类号:S812.6 文献标识码:A 文章编号:1008-0414(2006)06(下)-0009-03
摘 要 对常见的草原杂草醉马草(Achnatheruminebrians)茎、叶中的生
物碱成分进行了分析研究。从颜色反应及质谱分析来看醉马草生物碱主要为有
机胺类,总含量为0.1396%。所得单体进行质谱分析,确定出11种化合物,其中
生物碱类7种,含有少量吡唑啉类、酚类及含硫、含磷的杂环化合物。此类化合
物毒性都比较强,因此牲畜误食会出现中毒。此结果为防治牲畜中毒及醉马草
的深度开发提供了依据和参考。
关建词 醉马草 毒性成分 分析
AbstractionAndAnalysisofPoisonousComponentsof
Achnatherumninebrians
SANGMing1,ZHANGJi2,YAOJian2,YANGYong-li2,HUANGAi-lun2,ZENG
Fan-long1,WEIRong-hua1,WANGYan1,WeiPi-fang3
(1.BiologyDepartment,YunyangMedicalColege,Shiyan,Hubei,442000,China;
2.ColegeofLifeScience,NorthwestNormalUniversity;3.LaiwuVocational
TechnologyColege)
Abstract:AnalyzingthecomponentsofalkaloidofAchnatheruminebriansstem,
leafandrootthestudyshows:thealkaloidisinorganicamine,andthetotalcontentis
0.1396%.Usingmassspectrographitinclude7alkaloidof11compounds,which
contain hydroxybenzene,sulphur,phosphorous and heterocyclic radicle.which
preventingandcuringpoisonedcatleandfurtherdevelopmentofAchnatherumn
inebrians.
KeyWords:Achnatherumninebrians;Poisonouscomponents;Analysis
9· ·
LIVESTOCKAND POULTRYINDUSTRYNO.200
1.1 材料与试剂
实验材料采自甘肃天祝金强河
岸。所用试剂均为分析纯。
1.2 总碱的制备[3,4,5]
将醉马草全草的干品以 95%的
乙醇为溶剂于索氏提取器中提取,工
艺流程图见图1。
1.3 总生物碱的性质评价
用 Frohde试剂、Marquis试剂、浓
硝酸、浓硫酸、浓盐酸等进行总碱(2%
盐酸液)颜色反应,颜色分别为棕绿
色、黄棕色、浅黄色、深棕色、淡黄色。
1.4 总碱含量的测定(容量法)
分别取总碱液 (氯仿液)5mL、10
mL、20mL在水浴上蒸干,残渣加少量
中性乙醇溶解,再行蒸干,使氨充分除
尽,残渣加 5mL乙醚溶解,然后分别
加入15mL、20mL、30mL0.02N硫酸
标准溶液,在水浴上小心赶去乙醚,加
入 15mL的蒸馏水,以 0.02N氢氧化
钠标准溶液回滴,用甲基红指示终点。
结果以 100g样品中总生物碱所消耗
的毫克当量数表示。测得醉马草生物
碱含量为0.1396%。
1.5 总碱薄层层析
层析板用硅胶 G和 0.5%CMC
(3∶1)湿法铺板,室温干燥后,在烘
箱内 105~120℃活化 30min,置干
燥器中保存。玻板规格(4×20)cm。
展开剂:用正丁醇、醋酸、甲
醇、己烷、氯仿、苯、乙酸乙酯、二乙
胺、丙酮等有机溶剂进行配比试
验,结果表明氯仿:甲醇:二乙胺(9∶
1.5∶0.2)是较为合适的展开剂。
显色剂为:碘化铋钾、碘-碘化
钾、碘蒸汽、紫外灯。
在板边缘 1.5cm处用微量进
样器进行点样,斑点直径 0.4cm点
样 5uL上行展开,紫外灯下观察斑
点,碘化铋钾显色结果见图2。
1.6 总碱质谱分析[6,7,8,9]
所得单体用 Hp6890/5973型 MS
仪(美国 Hewlet-Packark公司)进行
质谱分析。进行解谱得到11种化合物
分子式及命名。部分质谱数据及结果
如下:
(1)Cyclohexanone(C6H10O)
(m/e)/相对强度:26/24,27/45,28/
40,29/11,31/3,35/3,37/6,38/14,39/63,
40/14,41/45,42/89,43/11,44/3,45/3,
47/1,50/7,51/8,52/4,53/11,55/100,
56/16,57/3,60/3,62/3,63/3,67/3,69/
34,70/29,79/3,80/6,83/15,84/2,85/3,
98/61
(2)4-Methyl-2,6-di-tert-butyl-
phenol(C15H24O)
(m/e)/相对强度:57/7,81/3,115/
4,128/4,133/8,145/6,161/3,177/7,
205/100,206/16,220/28,221/8
(3)Thiazole,5-ethoxy(C5H7ON)
(m/e)/相对强度:27/11,29/13,42/
5,43/9,45/8,55/13,56/8,73/16,74/
8,75/8,76/8,101/100,102/14,128/13,
129/57
(4)1,3-Dioxolane,4,5-dimethyl-
2-pentadecyl(C20H4OO2)
(m/e)/相 对 强 度:27/8,29/8,43/
5,45/20,55/10,56/5,73/18,74/10,77/
3,101/100,101/7,105/5,128/18
(5)Phosphorin,2,6-ditert-butyl-
4-phenyl(C19H25P)
(m/e)/相对强度:41/13,43/13,55/
18,57/15,69/18,70/13,73/18,88/77,
89/16,101/51,149/36,158/18,239/47,
241/60,255/24,284/100
(6)4H-1,3-Thiazin-2-amine,N-
(2,6-dimethylphenyl)-5,6-dihydro-
(C12H16N2S)
(m/e)/相 对 强 度 :84/52 91/12
105/10133/16145/13205/100206/
18220/31
(7) 2,4 -Dioxabicyclo [3,2,1]
octane,6,7-dimethyl-3-(4-nitrophenyl)
(C14H17O4N)
图1 制备生物碱流程图
氯仿 总碱
醉马草(1kg)
以95%的乙醇浸泡后减压过滤
药渣 乙醇液
加入95%乙醇60回流8h
药渣 乙醇液
加入95%乙醇60回流8h
药渣 乙醇液
减压浓缩
浓缩液 乙醇
2%盐酸浸提,乙醚萃取
乙醚液 酸水液
减压浓缩 加氨水至pH=10,氯仿萃取
残 渣 乙醚 碱水液 氯仿液
减压浓缩
0.61
0.57
0.44
0.31
图2 醉马草总碱薄层色谱及Rf值示意图
试验研究10· ·
2006年6月 下半月号 畜禽业总第200期
(m/e)/相对强度:40/31,55/52,67/
91,68/36,69/51,77/23,79/62,80/34,
81/100,83/39,84/49,88/31,91/25,95/
67,96/47,97/38,263/77
(8)Bicyclohept-2-ene,1-(acety-
lamino)-6-benzoyloxy-(C16H17O3N)
(m/e)/相对强度:43/33,79/13,91/
13,95/14,96/6,123/100,124/13,193/
20
(9)4-(p-Methoxybenzyl)-3-cin-
nolinol(C16H14O2N2)
(m/e)/相对强度:43/26,55/20,59/
17,60/16,73/28,75/10,88/14,89/8,
91/17,93/13,95/15,97/13,105/18,
109/11,111/17,119/16,121/9,132/33,
133/17,221/26,166/100
(10)1,3-Diphenyl-2-pyrazoline
(C15H14N2)
(m/e)/相 对 强 度:43/5,63/3,77/
11,89/13,95/5,101/5,105/11,117/11,
133/10,134/13,135/8,137/6,145/21,
149/42,150/29,177/37,194/13,222/
100,223/17
(11)2-Naphthylamine,N-phenyl
(C16H13N)
(m/e)/相 对 强 度:77/5,89/3,96/
3,102/3,108/6,109/4,115/8,126/5,
127/4,189/5,191/5,216/8,217/50,
218/51,219/100,220/20
2 结果及讨论
用容量法测得醉马草生物碱含量
为0.14%。所得总碱通过TLC系列展
开剂的比较试验,经碘化铋钾、碘-碘
化钾、碘蒸气、紫外灯显色,可以看出
氯仿:甲醇:二乙胺(9∶1.5∶0.2)为较合适
的展开剂,喷洒改良碘化铋钾溶液、紫
外灯检测是较理想的显色方法。
所得单体进行质谱分析,确定出
11种化合物,其中生物碱类 7种。从
颜色反应及质谱分析来看醉马草生物
碱主要为有机胺类,还含有少量吡唑
啉类、酚类及含硫、含磷的杂环化合
物。此类化合物毒性都比较强,因此牲
畜误食会出现中毒。这些化合物中的几
种有杀虫、抑菌的作用。可以充分利用
丰富的醉马草资源进一步研究开发天
然农药、抗菌药物,这样对于保护草场
及保护生态平衡有十分重要的意义[10]。
醉马草、狼毒等植物中含有对动
物有巨大毒副作用的生物碱。但这种
“毒草”正是“绿金产业”的基石,其所
含的有毒生物碱是极宝贵的生物制药
高级原料,提取出来后制成天然药品,
有巨大的市场,经济效益极为可观;而
剔除生物碱后的料草又可成为粗脂
肪、粗蛋白含量较高的优质饲料,用于
发展后续的畜牧业。进一步开展毒草
杀灭后牧草生态群落变化研究,提出
以毒草治理技术为主导,以草原围栏
休牧、牧草补播、草原施肥、人工种草
和牧草青贮等技术为辅助的生态恢复
与重建一整套技术,提高草原恢复与
治理的力度。优化植物种群,提高产草
量,增加植被盖度,改善生态环境;提
高载畜量,有利于民族地区农牧民的
增收,改善生活水平,增强民族团结和
社会稳定;有利于调整产业结构,促进
农村劳动力的转移。本研究成果丰富
家畜有毒植物中毒的资料库,为我国
毒草防治,草原管理决策,维护草原生
态平衡,发展畜牧业提供了一定的理
论基础和实践依据。
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安全的对策.草业学报,2000(3):66~73
试验研究
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