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美丽马醉木毒性成分提取及初步定性的研究



全 文 :张尔亮 !,官米佳 !,董 亮 !,严 平 !,阿都阿且 ,马吉古机 ,曲木都伍 ,的木达
(!#西昌农业高等专科学校,四川 西昌 $!%&!’;#四川省美姑县畜牧局,四川 美姑 $!$(%&)
摘要:通过多种溶剂的提取试验证实,美丽马醉木的有毒
成分是水溶性且不结晶的物质,在多种溶剂中,以乙醇和热水
的提取效果最好。经柱沉析、纸沉析和薄层沉析等方法分离出
的有毒成分,用化学法检查,初步认为是两种甙类物质,即酚甙
和黄酮甙。
关键词:美丽马醉木;毒性成分;提取
! 材料和方法
!#! 试验材料 美丽马醉木干粉,采自美姑县特口乡,鲜叶阴
干制成。
!# 试验动物 健康小白鼠 %& 只,平均体重为 ’#%)#*+,试
验前临床检查结果一切正常。在试验中,每种提取方法和主要
提取步骤后均用小白鼠作指示动物,用以检查提取物的正确
性,即用提取物注射小白鼠,并观察中毒症状及死亡情况。
!#’ 预试验 分别用甲醇、乙醇和水作有毒成分的提取溶剂,
其滤液做化学成分的预试。
!#’#! 甲醇提取法:称取通过 & 目筛的美丽马醉木干粉 !&+,
加入 ,&-. 甲醇,在水浴上回流 !&-/0,趁热过滤,其滤液用于
做盐酸1镁粉试验、醋酸镁试验、’,%1二硝基苯甲酸试验、重氮
化试验和冰醋酸1浓硫酸试验,以检查黄酮甙、蒽醌甙、强心甙、
内酯、甾醇和三萜成分。并用浓缩液稀释后的 &#!-. (相当于
%&-+ 干粉)注射小白鼠。
!#’# 乙醇提取法:称取通过 & 目筛的美丽马醉木干粉 !&+,
加入 ,&-.&#%2盐酸乙醇,在水浴上回流 !&-/0,趁热过滤,其滤
液用于做三氯化铁试验、异羟肟酸铁试验、硅钨酸试验、碘化铋
钾试验,以测定酚类和生物碱。并用浓缩液稀释后的 & #!-.(相
当于 %&-+ 干粉)注射小白鼠。
!#’#’ 水提取法:称取通过 & 目筛的美丽马醉木干粉 !&+,加
入 !&&-. 水,在室温下浸泡过夜,其滤液用于做茚三酮试验和
双缩脲试验,以测定氨基酸、多肽和蛋白质检查。剩余药渣及浸
液煮沸后过滤,其滤液用于做 !1萘酚试验,以检查多糖和甙类。
并用浓缩液的 &#!-.(相当于 %&-+ 干粉)注射小白鼠。
!#( 美丽马醉木有毒成分提取法试验 根据预试结果,重点提
取以下三种成分。
!#(#! 生物碱:称取通过 & 目筛的美丽马醉木干粉 !&&+,用
&#!2盐酸乙醇渗漉,共 *&&-.,*&3减压回收乙醇,浓缩液加
2盐酸过夜,离心去除杂质,酸性水液用碳酸钠将 45 值调至
67!&,用氯仿提取,回收氯仿后的残渣做碘化铋钾试验为强阳
性,并用稀释后的 &#!-.(相当于 %&-.干粉)注射小白鼠。
!#(# 酚甙:称取通过 & 目筛的美丽马醉木干粉 !&&+,加入
!&&&-. 蒸馏水,煮沸 &-/0,过滤后加热浓缩至 &-.,加入醋
酸铅沉淀,弃其杂质,余液稀释后,用 &#!-.(相当于 %&-+ 干粉)
注射小白鼠,并做三氯化铁试验为强阳性。
!#(#’ 黄酮甙:称取通过 & 目筛的美丽马醉干粉 !&&+,加入
!&&&-.,&2的乙醇,回流 (&-/0,过滤,滤液减压回收乙醇,加入
饱和醋酸铅溶液,将沉淀物混悬于乙醇中,脱铅处理后,过滤,滤
液减压回收乙醇,浓缩液稀释后,用 &#!-.(相当于 %&-+ 干粉)
注射小白鼠,并做盐酸1镁粉试验为强阳性。
结果及讨论
#! 预试结果
#!#! 甲醇提取液做盐酸1镁粉试验为强阳性,重氮化试验为
弱阳性,醋酸镁试验、’,%1二硝基苯甲酸试验和冰醋酸1浓硫酸
试验均为阴性,说明提取液中黄酮甙是主要成分之一,并含有一
些内酯,不含蒽醌甙、强心甙、甾醇和三萜等成分。用其浓缩液注
射小白鼠后,(-/0 内出现症状,并很快死亡。
#!# 乙醇提取液做三氯化铁试验为强阳性,异羟肟酸铁试验
为阴性,硅钨酸试验和碘化铋钾试验均为阳性,说明提取液中含
有大量酚类和生物碱,不含内酯和香豆精等。其浓缩液注射小白
鼠后 ’-/0 出现症状,并很快死亡。
#!#’ 水提取液做茚三酮试验和双缩脲试验为阴性,!1萘酚试
验为阳性,说明提取液中含有大量糖和甙类,不含氨基酸、多肽
和蛋白质。其浓缩液注射小白鼠后也于 (-/0 内出现症状,并很
快死亡。
# 毒性成分的分离提纯 经过反复摸索,提出以下有毒成分
提取步骤。
收稿日期:&&&1!1!!
作者简介:张尔亮(!6%61),男,硕士研究生毕业,副教授,长期从事畜牧
兽医的教学与科研工作8发表论文 ’& 余篇,曾获四川省政府科技进步奖
和优秀教学成果奖各 ! 项。
中图分类号:9(% 文献标识码:: 文章编号:!&&!1*6$((&&!)&$1&&!*1&
美丽马醉木毒性成分提取及初步定性的研究
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(下转第 & 页)
!# $# %&&’()*# %+, -./ ’%01
试验研究
-234.56 762/5* 8 )9:9;265;< -329639=
本栏编辑:钱 亮!
!
!!# 酚甙类:美丽马醉木干粉$%&’乙醇回
流!减压回收乙醇!浓缩液$#& 倍量蒸馏水!(&&&) * +,- 离心
除去沉淀!做氧化铝或聚酰胺柱沉析!./’乙醇洗脱!减压回
收乙醇!余液加入等量乙醚!弃去附着于瓶底及壁上的胶状
物(无毒性)!回收乙醚!再次用氧化铝过柱(./’乙醇洗脱)!
减压回收乙醇!用硅胶 0 做薄层沉析(三氯化锑氯仿饱和液作
显色剂)!./’乙醇洗脱(重结晶试验为不结晶的白色粉末)。
!!! 黄酮甙类:美丽马醉木干粉$%&’乙醇回流!减压回收乙
醇!浓缩液$#& 倍量蒸馏水!(&&&) * +,- 离心除去沉淀!加入
饱和醋酸铅液!沉淀悬于乙醇中!脱铅过滤!减压回收乙
醇!浓缩液做聚酰胺柱沉析!./’乙醇洗脱!减压回收乙醇!
余液加入等量乙醚!弃去附着于瓶底及壁上的胶状物 (无毒
性)!回收乙醚!浓缩液用硅胶 0 做薄层沉析 (三氯化锑氯仿
饱和液作显色剂)!./’乙醇洗脱(重结晶试验为不结晶的白色
粉末)。
!1 美丽马醉木的有毒成分是水溶性物质,在多种溶剂中,以
乙醇和热水的提取效果最好,其毒性成分是不结晶的白色粉
末。
!( 美丽马醉木的有毒成分可能是酚甙和黄酮甙,因为按酚类
和黄酮类提取的毒性成分分别注射小白鼠后均引起明显的症
状,并很快死亡,但症状有一些差异,其中,酚甙引起典型的呼
吸症状和频繁的排尿动作,而黄酮甙则主要引起共济失调和后
肢麻痹等神经症状,而按生物碱提取的成份,注射小白鼠后不
引起明显症状,也不造成死亡。
!/ 柱沉析时,常会出现 #21 个色段,各段成份引起小白鼠的
症状也基本相同,可能各段的成分大致相同。
!3 薄层沉析时,正丁醇4丙酮4乙醇5!4#/4#/ 作展层剂,只出
现一个色点,675&%%!。纸沉析时,乙醇作展层剂,其 675&8(3。
!% 有关美丽马醉木毒性成分的分子式和结构式等尚需进一
步研究。
参考文献:
9#: 董 亮,张尔亮,官米佳,等美丽马醉木中毒的毒理学研究;美丽马醉木的毒
性9<:中国兽医科技,#..#(8)
9!: 张尔亮,董 亮,官米佳,等美丽马醉木中毒的毒理学研究;中毒机理初探9<:
中国兽医科技,#..#(#!)
91: 董 亮,张尔亮,官米佳,等美丽马醉木对心脏的毒性作用9<:中国兽医科技,
#..!(#!)
9(: 官米佳,张尔亮,董 亮,等美丽马醉木亚急性中毒的毒理学研究9<:四川畜牧
兽医,#..((#)
9/: 董 亮,张尔亮,官米佳,等美丽马醉木中毒机理的研究报告9<:中国兽医杂
志,#..((##)
93: 李祚煌家畜中毒及毒物检验9=:北京:农业出版社,#..(
9%: 邱行正实用畜禽中毒手册9=:成都:四川大学出版社,#..3
!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!
(上接第 #8 页)
表 ! 妊娠增重及繁殖性能表
表 1 测定结果
配种体

妊娠天
数 妊娠总增重
妊 娠 增 重 中
产仔数 活产仔数 初生个体重
母体增重 比例 初生窝重 比例 胎衣重 比例 羊水重 比例
第一批 #&!#3>##13 ##&>! /3.!>88# 13(/>.#1 3(& #&8.>!8( #.# !11>&%. (# %!/>!&% #!% #&1#>1&# .3.>1#% #&3>
第二批 ##&18>#&8/ ##1># /!##>/(# 13%/>(88 %&/ #&&3>##8 #.1 !#/>&/% (# 1#(>#.8 3& #&&&>!&& .!/>!#8 #&#>&&3
育种场 8#>!&3 #&3>#.! .%>#8# &%3
#—8(? 8/?—临产 妊娠全期
第一批 第二批 第一批 第二批 第一批 第二批
日采食风干物 !(!>&!1 !!&>&# !18>&1 !/(>&/ !(#>&! !!.>&#/
日采食 @A &1&(>!. &!%%>. &!..>18 &11#>!( &1&1>!/ &!.#>#3
日摄入 BC 1&/.>!.1 !3/#>&.! 1&&8>18. 1!1#>!1( 1&(%>!/# !8&&>##1
平均妊娠重 ##883>#1#& #!/##>##3/ #(%1!>#3!8 #/#!>!1( #1&3!>#(1. #13(1>#!/3
日维持需要 BC #3/3 #%!# #.(/ #.8( #%%% #81&
用于增重 BC #(&1 .1& #&31 #!(% #!%& .3(
妊娠增重 1118>311 !.(3>(#. !1/1>%(% !!3/>13# /3.!>88# /!##>/(#
日增重 &1.% &1/& &.&/ &%8# &/#8 &(3#
每 #DE 增重耗 BC 1/1( !3/% ##%/ #/.% !(/! !&.#
从表 ! 可见,在第二批试验中对母猪采用前低后高的阶段
饲养方式,妊娠前期日供消化能 BC!3/#=<、粗蛋白 @A!%%E,后
期 日 供 BC1!1#=<、@A11#E, 全 期 平 均 日 供 BC!8&&=<、
@A!.#E,母猪产仔数、活仔数与育种场的指标相近,而仔猪初生
窝重和初生个体重都有所提高,试验结果表明:上述营养水平
完全能够满足四川白猪!系初产母猪(妊娠体重 #1&DE 左右)冬
季妊娠需要。母猪妊娠期除维持需要外,平均每 #DE 增重消耗消
化能 !&.#=<。F6@(#..8)建议母猪妊娠期总增重应为 (/DE,按
公式可计算妊娠母猪每日需要的消化能为:
BC(=<)5&(3GH
&%/
$!..#I (/DE##!?(妊娠天数)
1 讨论与结论
母猪妊娠期的能量需要受品种、胎次、气温、妊娠与哺乳等
诸多因素的影响。对母猪妊娠期营养需要的研究国内外有很多
试验报导,美国 F6@(#..8)建议母猪维持能量需要量为 &(3=<
BC * DEGH&%/,聂光达(#.8()提出枫泾母猪冬季妊娠的维持需要
BC 为 &(3 2&/&=< * DEGH&%/,妊娠期每 #DE 增重耗消化能
!/#&2!313 兆焦。张国范等人(#.8()提出三江白猪初产母猪除
维持需要外,每 #DE 增重耗消化能 !8./=<。魏述芳等人(#..()
提出新荣系母猪 (四胎)妊娠期每 #DE 增重耗消化能 !/3( 兆
焦。本项研究提出四川白猪!系 (初产)每 #DE 增重耗消化能
!&.#2!(/! 兆焦,略低于上述研究结果。国外报道(CJKJLMN#.%1O
P6@N#.8#)妊娠母猪每天摄入能量高于 !/# 兆焦代谢能,将增
加母猪体重,但对分娩时窝产仔数无显著影响。HQ,RRL+S)L 等
(#.8()报道连续五胎母猪妊娠期饲料采食量在 #%2!1DE * ? 之
间,对总产仔数无明显影响。张国范等人(#.8()连续三年对三
江白猪初产及二胎母猪进行试验的结果表明:妊娠母猪在高水
平(BC(!!% 兆焦、可消化 @A13&E)和低水平(BC!1.% 兆焦、可
消化 @A!!&E)营养条件下其产仔数、活仔数、断奶窝重都无显著
影响,仅表现妊娠母猪增重和仔猪初生窝重有显著影响。本项
研究结果表明:四川白猪!系初产母猪在冬季妊娠时平均每日
采食消化能(!8&&21&(% 兆焦)其母体净增重、产仔数、活仔数、
初生窝重、初生个体重均无显著差异(AT&&/)。
根据以上的试验结果,并参考国内外试验资料N提出四川白
猪!系初产妊娠母猪冬季妊娠能量需要参数。维持需要
BC&(3=< * DEGH&%/N每 #DE 增重耗 BC!&.#2!(/=<,平均妊娠活
重 #1&DE 左右初产妊娠母猪每日需要 BC!821&(%=<。
参考文献:
9#: 谯仕彦,等 N译 猪营养需要(F6@)9 = : 北京:中国农业大学出版社,
#..8
9!: 聂光达太湖猪营养需要量的研究;枫泾母猪能量需要一些参数的探讨 9@:我
国动物营养研究进展,#.8(:88;.!
91: 张国范,等三江白猪的营养需要9@:我国动物营养研究进展,#.8(:.1;.8
9(: 林小伟,等四川瘦肉猪专门化母系!系种猪繁殖特性的研究96:四川瘦肉猪
专门化母系!系选育及配套利用,#../
9/: 魏述芳,等荣昌猪瘦肉型品系能量需要观察96:#..(
93: S7 L-L)EM )L]W,)L+L-R9<:注:妊娠总增重5临产前体重;配种时体重
母体净增重5产后体重;配种时体重
羊水重5临产前体重;产后体重;初生仔猪窝重;胎衣重
a 平均妊娠体重5配种体重$# * ! 妊娠增重
单位:DE、?、’、头
单位:DE、=<
!# $# %&&’()*# %+, -./ ’%01-234.56 762/5* 8 )9:9;265;< -329639=
!
试验研究
本栏编辑:钱 亮
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