全 文 ：200
牛雅萍1，汪河滨2，李炳奇1，刘 红1，*
(1.石河子大学化学化工学院，新疆石河子 832000;
2.新疆生产建设兵团塔里木盆地生物资源保护利用重点实验室，新疆阿拉尔市 843300)
摘 要:以大叶白蜡叶为实验材料，采用滤纸片法，探讨大叶白蜡叶鞣质对三种食品中常见污染菌(大肠杆菌、金黄色
葡萄球菌、绿脓杆菌)的抑菌活性。并采用梯度稀释法测定大叶白蜡叶鞣质对这三种菌的最小抑菌浓度。结果表明:
大叶白蜡叶鞣质对三种供试菌均有抑制作用。鞣质浓度在 1g /mL时，对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌的抑菌
圈直径分别为:15.37、13.24、13.18mm。最低抑菌浓度分别为:4.06、8.125、8.125mg /mL。
关键词:大叶白蜡叶，鞣质，抑菌活性，防腐
Study on the antimicrobial activity of tannin in Fraxinus rhynchophylla
NIU Ya－ping1，WANG He－bin2，LI Bing－qi1，LIU Hong1，*
(1.College of Chemistry and Chemical Engineering，Shihezi University，Shihezi 832000，China;
2.Xinjiang Prodution ＆ Construction Group Key Laboratory of Protection and
Utilization of Biological Resources in Tarim Basin，Alar 843300，China)
Abstract:With Fraxinus rhynchophylla leaves as tested object，the antimicrobial activities of tannin in Fraxinus
rhynchophylla leaves on the food’s three common bacterials (Staphylococcus aureus，Escherichia coli，
Pseudomonas aeruginosa)were discussed with filter paper slice method.The gradient dilution method was used to
determine the minimum inhibitory concentration of tannin on those bacterias.The results indcated that tannin in
Fraxinus rhynchophylla leaves could inhibit growth of three tested bacteria above.When the concentration of tannin
was 1.0g /mL，the bacteriostatic ring were 15.37，13.24 and 13.18mm respectively. The minimum inhibitory
concentrations of tannin in Fraxinus rhynchophylla leaves for three bacterias were 4.06，8.125，8.125mg /mL。
Key words:Fraxinus rhynchophylla;tannin;antimicrobial activity;corrosion protectio
中图分类号:TS201.2 文献标识码:A 文 章 编 号:1002－0306(2012)04－0200－03
收稿日期:2011－04－19 * 通讯联系人
作者简介:牛雅萍(1984－) ，女，在读硕士，研究方向:天然产物研究与
开发。
基金项目:新疆生产建设兵团塔里木盆地生物资源保护利用重点实验
室项目(BRYB1103)。
大叶白蜡(Fraxinus rhynchophylla) ，木犀科白蜡
属，在维吾尔药典中又名亚生［1］。由于其能抗病驱
虫，对环境适应能力强，被作为我国北方城市的绿化
树种广泛种植，资源丰富。但是，除了作为行道树和
中药秦皮的来源外，大叶白蜡在其他领域鲜有问津。
据报道［2］，鞣质是大叶白蜡中活性成分之一。鞣质又
称单宁(tannin) ，具有凝聚蛋白质、抑菌、抗氧化等活
性［3－5］。在绿色食品呼声日益高涨的今天，开发植物
源防腐剂替代化学防腐剂，已成为食品工业领域的
研究热点。防腐剂中抑菌物的主要作用是使病原菌
粒子的蛋白凝聚和蛋白合成受阻，导致病原菌不能
繁殖［6］。鞣质［7］对酶活性的抑制作用以及能与蛋白
质结合的活性，使得鞣质在抑菌研究领域受到很大
关注。老鹳草、石榴皮和大黄中的鞣质已有抑菌的
报道［8－10］，而对大叶白蜡的鞣质研究还是空白。为
此，本文以大叶白蜡叶为研究对象，初步研究大叶白
蜡叶鞣质对食品中常见的三种微生物的抑制作用，
为天然防腐剂的研究开发提供一定的理论基础。
1 材料与方法
1.1 材料与仪器
大叶白蜡叶 采自新疆石河子市;金黄色葡萄
球菌(staphyotcocs uauersu)、绿脓杆菌(Pseudomonas
aeruginosa)、大肠杆菌(Escherichia coli) 石河子大
学生命科学学院微生物实验室提供。
KQ－250DE 超声波提取器 上海之信仪器公
司;RE52－05 旋转蒸发器 上海亚荣生化仪器厂;
Hitachi U－1900 紫外可见分光光度 天美科技公司;
Z36HK冷冻离心机 德国 Hermle公司
1.2 实验方法
1.2.1 大叶白蜡叶提取物的制备［11］ 称取大叶白蜡
叶粉末，按料液比 1∶25 加入 50%乙醇，超声 2 次，每
次 30min。过滤，合并滤液，减压蒸出乙醇，水溶液加
4%明胶溶液沉淀，抽滤，明胶沉淀用 50%丙酮水溶
液溶解，高速冷冻离心(8000r /min，20min，4℃) ，弃
DOI:10.13386/j.issn1002-0306.2012.04.019
201
表 2 大叶白蜡叶鞣质的最小抑菌浓度(mg /mL)
Table 2 The minimum inhibitory concentrations of tannins in Fraxinus rhynchophylla leaves(mg /mL)
菌种 1.01 2.03 4.06 8.125 16.25 32.50 65 130 260
金葡萄球菌 + + － － － － － － － －
大肠杆菌 + + + － － － － － － －
绿脓杆菌 + + + － － － － － － －
注:+，表示菌苔、菌落呈分散生长;+ －，表示只有很少菌落生长;－，表示没有细菌生长。
去沉淀，丙酮溶液减压浓缩，所得胶状物用水溶解，
再用醋酸乙酯萃取，醋酸乙酯层减压浓缩至胶状，加
适量水溶解，滤去不溶物，清液冷冻干燥得鞣质粉
末，储藏在冰箱中备用。
1.2.2 标准曲线的绘制 采用没食子酸生化试剂作
为标准物，用磷钼钨酸－干酪素比色法，绘制标准曲
线，得方程为:A =0.0098C + 0.0679，没食子酸浓度在
2.225～89.0μg /mL范围内，线性关系良好，r = 0.9998。
1.2.3 培养基配制［12］ 固体培养基(g) :准确称取蛋
白胨 10，牛肉膏 3，氯化钠 5，蒸馏水 1000mL。将各
组分混合，溶解后调节 pH为 7.2，高压灭菌，备用。
液体培养基(g) :准确称取牛肉膏 3，蛋白胨 10，
氯化钠 5，加适量水溶解，加入 15g 琼脂，用蒸馏水稀
释至 1000mL，调节 pH为 7.2，高压灭菌，备用。
1.2.4 最适浓度菌液选择 用接种环将供试的三种
菌株接种于液体培养基中，充分混匀，制成菌悬液。
于 37℃下培养 24h 后，按 10 倍稀释制备成菌落数为
10 －3、10 －4、10 －5、10 －6的菌悬液。在每个平皿中倒入
约 20mL融化的固体培养基，制成平板培养基。分别
吸取 0.1mL菌悬液，均匀涂布后于 37℃下培养 24h，
观察并记录结果，选取正好长满平皿的浓度为最适
浓度菌液。
1.2.5 含药滤纸片法 用直径为 6mm 的打孔器，打
出若干滤纸片，装在干燥、洁净的培养皿里，高压灭
菌后烘干，放入药液中浸泡 5h。吸取 0.2mL 最适浓
度的菌悬液接种于平板上，用涂布棒迅速将菌液涂
抹均匀，制成含菌平板。用无菌镊子从药液中取出
滤纸片，稍微风干后迅速、准确地将滤纸片平贴在含
菌平板上，每皿放 3 片且间距均匀而适度，放下后不
再移动。每组 3 个平行实验，置于 37℃下培养 24h，
同时用浸有生理盐水的滤纸片作空白对照。测量滤
纸片周围的抑菌圈直径，比较抑菌效果。
1.2.6 最小抑菌浓度的测定 用无菌水将提取物稀
释成一系列浓度，在各培养皿内分别加 2mL 不同浓
度的提取液，每个浓度三个重复，并设空白对照。然
后倒入 18mL培养基，充分混匀，冷却凝固后，取每种
菌株的最适浓度菌液 0.2mL 滴入不同浓度梯度的含
药平板中，用涂布棒均匀涂布后，于 37℃下培养 24h，
观察菌落的生长情况，以培养基中完全无菌生长的
最低浓度作为最低抑菌浓度(MIC)。
2 结果与讨论
2.1 大叶白蜡叶提取物的抑菌作用
将超声法所得提取液用无菌水稀释成鞣质浓度
为 2000、1000、500 和 250mg /mL，采用滤纸片法测定
以上浓度对三种病原菌的抑菌圈直径，结果如表 1
所示。
表 1 超声提取的大叶白蜡叶鞣质的抑菌圈直径(mm)
Table 1 The bacteriostatic ring of tannins extracted with
ultrasonic in Fraxinus rhynchophylla leaves(mm)
菌种
浓度(mg /mL)
250 500 1000 2000 对照组
金黄色葡萄球菌 10.21 12.46 15.37 18.92 6.00
大肠杆菌 8.92 11.03 13.24 16.17 6.00
绿脓杆菌 8.87 10.96 13.18 16.09 6.00
注:表中的抑菌圈直径包含滤纸片的直径。
由表 1 可知，大叶白蜡叶鞣质对金黄色葡萄球
菌、大肠杆菌和绿脓杆菌具有一定程度的抑制作用，
且随着鞣质浓度的增加，所试菌种的受抑菌能力增
强，表明鞣质具有抑菌活性。但是大叶白蜡叶鞣质
对三种细菌的抑菌能力不同，其中对金黄色葡萄球
菌的抑制作用最好，对大肠杆菌和绿脓杆菌的抑菌
作用相差不明显。
2.2 大叶白蜡叶鞣质的最小抑菌浓度
为了深入研究大叶白蜡叶鞣质的抑菌能力，本
部分进行最小抑菌浓度的实验。将用超声法得到的
提取物分别用无菌水依次配制成 260、130、65、32.5、
16.25、8.125、4.06、2.03 和 1.01mg /mL 九个质量浓度
的稀释液，测定大叶白蜡叶鞣质对大肠杆菌、金黄色
葡萄球菌、绿脓杆菌的最小抑菌浓度，结果见表 2。
由表 2 可知，大叶白蜡叶鞣质对三种供试菌的
最小抑菌浓度大小依次是绿脓杆菌 =大肠杆菌 ＞金
黄色葡萄球菌。最低抑菌浓度是衡量一种物质抑菌
能力的很重要的指标之一，最低抑菌浓度越小，说明
此物质的抑菌能力越大［13］。实验表明，大叶白蜡叶
鞣质对金黄色葡萄球菌的抑菌能力最强，最小抑菌
浓度为 4.06mg /mL，对绿脓杆菌的抑制能力最弱，但
是和大肠杆菌的差别不大，最小抑菌浓度均是
8.125mg /mL。另外，由于金黄色葡萄球菌是革兰氏
阳性菌，大肠杆菌和绿脓杆菌是革兰氏阴性菌［14］，说
明大叶白蜡叶鞣质具有一定的广谱抗药性，与上述
使用滤纸片法研究的定性实验结果相吻合。
3 结论
由于大叶白蜡叶鞣质粗提物中含有大量的糖、
蛋白质、脂类等杂质，加上鞣质本身是许多复杂结构
和理化性质十分接近的混合物，需进一步分离纯化。
本实验首先利用 4%明胶溶液沉淀鞣质，再用丙酮溶
解，最后乙酸乙酯萃取鞣质，保证了提取液的纯度，
排除了其他杂质对鞣质的抑菌活性的干扰。
本文发现，大叶白蜡叶鞣质对金黄色葡萄球菌
的最小抑菌浓度为 4.06mg /mL，对大肠杆菌和绿脓杆
菌的最小抑菌浓度均为 8.125mg /mL。大叶白蜡叶鞣
(下转第 204 页)
204
图 5 不同金属离子对脂肪酶酶活的影晌
Fig.5 Effect of different metal ions on
activity of lipase from Pine Pollen
Pb2 +、Ba2 +和 K +对脂肪酶具有抑制作用。所以在加
工和贮运以松花粉为原辅料的食品时，为防止酸价
升高现象的发生，应当尽量避免上述的反应条件。
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72－75.
(上接第 201 页)
质能抑制革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌的生长，具
有广谱抗药性。并且由本实验的数据可以推测，大
叶白蜡叶鞣质对革兰氏阳性菌的抑制能力大于对革
兰氏阴性菌的抑制能力，对于这个结论，有待于进一
步地深入研究。
目前，从植物中寻找抑菌活性物质在开发新兴
防腐剂方面具有广阔的研究前景。新疆大叶白蜡分
布广泛，长期以来将白蜡叶作为废弃物，造成资源的
极大浪费。本研究对开发新型植物防腐剂和对大叶
白蜡资源的充分利用都具有重要意义。
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