全 文 ：樱桃叶多糖的抗氧化活性研究
刘德胜1，2，刘为忠1，颜 玲1
(1．滨州医学院 药学院，山东 烟台 264003;2．中国海洋大学，山东 青岛 266003)
摘 要:目的 评价樱桃叶多糖(PPP)的体外抗氧化活性。方法 以抗坏血酸(Vc)作为对照，体外实验研究
PPP的总还原能力及其对羟自由基、超氧负离子自由基和有机自由基(DPPH)的清除作用以及对大鼠肝脏自发性
和 H2O2 诱导的丙二醛抑制率。结果 PPP对羟自由基、超氧负离子自由基、有机自由基的 IC50依次为 100． 5，991． 4
和 135． 1 μg /mL;对大鼠肝脏自发性和由 H2O2 诱导的产生的脂质过氧化均有较好的保护作用。结论 PPP 有着较
强的体外抗氧化活性，和同等浓度下的 Vc相比，其抗氧化能力效果稍弱，具有一定的开发价值。
关键词:多糖;樱桃叶;抗氧化
中图分类号:R285． 5 文献标识码:A 文章编号:1005-1678(2012)05-0571-04
Antioxidative effect of Prunus pseudocerasus Lindl． polysaccharide in vitro
LIU De-sheng1，2，LIU Wei-zhong1，YAN Ling1
(1． School of Pharmacy，Binzhou Medical College，Yantai 264003，China;2． School of Medicine
and Pharmacy，Ocean University of China，Qingdao 266003，China)
Abstract:Purpose To study the antioxidative effect of Prunus pseudocerasus Lindl． polysaccharide
(PPP)in vitro．Methods The total reducing power of PPP was measured by in vitro chemical simulated
system． The hydroxyl radical，aoxide anion and organic free radicals scavenging activity of PPP were detec-
ted by the methods of pyrogallol autoxidation，Fenton system and DPPH·，respectively and compared with
that of acorbic acid． The content of MDA in tissue of liver was measured by TBA assay in vitro．
Results The total reducing power of PPP was far lower than that of the same concentration of ascorbic
acid． PPP had a strong scavenging activity on hydroxyl radical and aoxide anion with IC50 of 100． 5 and
991． 4 μg /mL，respectively，but had lower effect on DPPH． PPP showed a significant protecting-liver effect
on lipid peroxodation of rat liver homogenate． Conclusion PPP showed a significant antioxidant activity in
experiments in vitro，it can be used as drug or beverage and so was worth exploitation．
Key words:polysaccharide;Prunus pseudocerasus Lindl．;antioxidative effect
收稿日期:2011-09-27
基金项目:山东省高校科技计划项目资助(J10LF73)
作者简介:刘德胜，男，讲师，博士研究生，从事天然药物化学及
药物代谢研究工作，Tel:0535-6913409，E-mail:desheng _ liu@ sina．
com。
樱桃叶，收录于《中华本草》，为蔷薇科植物樱
桃(Prunus pseudocerasus Lindl．)的叶片，味辛苦、性
温、无毒，具有温胃、健脾、止血、解毒的功效，还能降
压、治胃寒食积、腹泻、吐血、疮毒等［1］。樱桃叶中
含有黄酮［2］、挥发油［3］等。目前对樱桃叶多糖
(PPP)的药理作用方面的研究尚未见报道。在前期
研究中，我们对樱桃叶中的多糖进行了定性鉴别和
含量测定。本文对樱桃叶提取水溶性多糖的体外抗
氧化活性进行了研究。
1 材 料
樱桃叶采自山东烟台，经滨州医学院中西医结
合学院刘孟安教授鉴定为蔷薇科植物、品种为大红
灯樱桃的叶片。
丙二醛(MDA)测试盒和总蛋白定量测试盒
(BCA法) ，南京建成生物工程研究所;1，1-二苯基-
2-三硝基苯肼(纯度 ＞ 96%) ，阿拉丁试剂公司。
TU-1901 双光束紫外可见分光光度计，北京普
析通用仪器责任有限公司;RE-52-05 旋转蒸发仪，
上海亚荣生化仪器厂;台式高速冷冻离心机，Biofuge
Primo。
SD大鼠，雄性，220 g 左右，山东绿叶制药有限
175中国生化药物杂志 Chinese Journal of Biochemical Pharmaceutics 2012 年第 33 卷第 5 期
公司提供，动物合格证号:SYXK(鲁)20030020。
2 方法与结果
2． 1 PPP的制备与含量测定
樱桃叶烘干粉碎后，用石油醚和乙醇脱色、脱杂
后，风干，粉末用水(1∶40)加热浸提，静置离心，浓缩
至原体积 30%，浓缩液加入 4 倍体积的 95%乙醇沉
淀，沉淀物依次用无水乙醇、丙酮及乙醚洗涤，用水
复溶，透析，Sevag 法除蛋白，真空干燥灰白色 PPP;
用硫酸-蒽酮法测定多糖含量为 53． 7%。
2． 2 总还原能力的测定
将 PPP 配成多糖浓度为 40． 0，80． 0，120． 0，
160． 0，200． 0 μg /mL 的溶液，同时采用相同浓度的
Vc作为对照。采用文献方法［4］，准确吸取不同浓度
的样品液 1． 0 mL，加入 0． 2 mol /L 磷酸盐缓冲液
(pH 6． 6)2． 5 mL，1． 0% K3［Fe(CN)6］溶液 2． 5
mL，50 ℃水浴 30 min，急速冷却后加入 10． 0%三氯
醋酸 2． 5 mL，混合后加入 0． 3% FeCl3 溶液 0． 5 mL，
混匀后，于 700 nm 波长处测吸光度(A)值，每个浓
度平行做 3 管，取平均值。观察在实验浓度范围内，
PPP浓度和 A 值之间的关系。一般情况下，物质的
还原能力越强，其抗氧化活性也越高。根据本方法，
各个样品反应后的生成物在 700 nm 处的 A 值大小
即反映了其抗氧化能力的大小。随着 PPP 浓度的
增加，A 值也随之增大，说明在实验浓度范围内，
PPP总还原能力随着浓度的增大而增大;与 Vc 相
比，PPP的总还原能力稍弱。结果见图 1。
-◆-． PPP;-■-． Vc
图 1 樱桃叶多糖总还原能力测定图(λ = 700 nm)
Fig． 1 Total reducing power of PPP(λ = 700 nm)
2． 3 对羟自由基(·OH)的清除作用
采用 Fenton 法［5］测定 PPP 对·OH 的清除作
用。在 10 mL 试管中加入 9． 0 mmol /L FeSO4 溶液
1 mL、9． 0 mmol /L 水杨酸乙醇溶液 1 mL、不同浓度
(40． 0，80． 0，120． 0，160． 0，200． 0 μg /mL)的 PPP 溶
液 1 mL，最后加入 8． 8 mol /L H2O2 1 mL启动反应;
以水作为空白对照，在波长 510 nm处测定各浓度样
品的 A值。每个浓度的样品重复测定 3 次取平均
值。随着 PPP浓度的增大，其清除·OH 的能力随
之增强，PPP浓度为 200． 0 μg /mL时，清除率能达到
77． 6%;PPP 对·OH 的 IC50值为 100． 5 μg /mL，相
同条件下 Vc 对·OH 的 IC50值为 41． 9 μg /mL。说
明 PPP对·OH 的清除能力较强，但弱于同等浓度
下的 Vc。结果见图 2。
-◆-． PPP;-■-． Vc
图 2 樱桃叶多糖清除·OH能力图
Fig． 2 Scavenging effects of PPP on ·OH free radicals at dif-
ferent concentrations
2． 4 对超氧负离子(O·
－
2 )的清除能力
采用邻苯三酚自氧化法［6］测定 PPP对 O·
－
2 的清
除能力。加 0． 05 mol /L Tris-HCl溶液(pH 8． 2)4． 5
mL于试管中，置 25 ℃水浴 20 min。加入不同浓度
(40． 0，80． 0，120． 0，160． 0，200． 0 μg /mL)的 PPP 溶
液或者 Vc 溶液 0． 4 mL 和 25 ℃的邻苯三酚溶液
(10 mmol /L HCl 溶液配制)80 μL，加入后快速摇
匀，测定在 325 nm 波长处的 A 值，每隔 0． 5 min 记
录 1 次，连续记录 4 min，计算各管的氧化速率及对
O·
－
2 的清除率。实验浓度范围内，随着 PPP 浓度的
增大，其清除 O·
－
2 的能力也随之增高，PPP 浓度为
200． 0 μg /mL时，清除率达到 23． 5%;PPP对 O·
－
2 的
IC50为 991． 4 μg /mL，同等条件下 Vc的 IC50为 281． 9
μg /mL;说明 PPP对 O·
－
2 的清除能力较强，但弱于同
等浓度下的 Vc清除能力。结果见图 3。
-◆-． PPP;-■-． Vc
图 3 樱桃叶多糖对 O·
－
2 的清除能力
Fig． 3 Scavenging effects of PPP on O·－2 free radicals at differ-
ent concentrations
2． 5 对有机自由基(DPPH·)的清除能力
用无水乙醇作为溶剂，将 DPPH 配制成浓度为
40 μg /mL的溶液，PPP 配制成浓度为 50． 0，100． 0，
275 中国生化药物杂志 Chinese Journal of Biochemical Pharmaceutics 2012 年第 33 卷第 5 期
200． 0，250． 0 和 300． 0 μg /mL 的系列溶液，用相同
浓度的 Vc作为对照。每次取待测溶液 2 mL 与预
先配制好的 40 μg /mL DPPH 溶液 2 mL 在 25 ℃下
反应 30 min后，测定其 525 nm波长处的 A值［7］。
实验浓度范围内，随着 PPP 浓度的增大，其清
除 DPPH·的能力也随之增高，浓度为 300． 0 μg /mL
时，清除率能达到 74． 4%;PPP 对 DPPH·的 IC50值
为 135． 1 μg /mL，同等条件下 Vc的 IC50为 20． 9 μg /
mL;低浓度下清除能力远小于同等浓度下的 Vc 清
除能力，在高浓度下和 Vc 清除能力相差不大。结
果见图 4。
-◆-． PPP;-■-． Vc
图 4 樱桃叶多糖对有机自由基的清除能力图
Fig． 4 Scavenging effects of PPP on DPPHo free radicals at dif-
ferent concentrations
2． 6 PPP对大鼠肝自发性脂质过氧化的影响［8］
在 0 ～ 4 ℃下，SD大鼠脱颈椎处死，于肝门静脉
注射生理盐水至肝脏变为土黄色，迅速取肝脏，匀浆
后，3 000 r /min离心 10 min，取上清液备用，使用蛋
白测定试剂盒测定蛋白浓度。用生理盐水制成 100
g /L的组织匀浆。PPP 及 Vc 浓度分别为 1． 0，1． 5，
2． 0，2． 5 和 3． 0 mg /mL。每个浓度平行 3 管，每管
加组织匀浆 0． 5 mL，不同浓度 PPP溶液 0． 1 mL，混
匀。37 ℃温育 2 h，按照试剂盒要求及说明操作，测
定 MDA含量，并计算抑制率。
结果(图 5)表明，随着 PPP浓度增大，其抑制大
鼠肝脏自发性脂质过氧化所产生的 MDA 能力也随
之增强，PPP 浓度为 3． 0 mg /mL 时，抑制率能达到
90． 4%;PPP该作用的 IC50值为 1． 5 mg /mL，相同条
件下 Vc的 IC50为 0． 9 mg /mL;与相同浓度的 Vc 相
比，其抑制能力稍弱。
2． 7 PPP 对 H2O2 诱导大鼠肝脂质过氧化的影
响［8］
同 2． 6 项下制备 100 g /L 的大鼠肝脏组织匀
浆。先在各管中加入 100 g /L 肝匀浆 0． 5 mL，各浓
度(1． 0，1． 5，2． 0，2． 5，3． 0 mg /mL)PPP 或 Vc 溶液
0． 1 mL，37 ℃温育振荡反应 15 min，再向各管中加
入 100 mmol /L H2O2 0． 1 mL，继续温育反应 30 min，
-◆-． PPP;-■-． Vc
图 5 樱桃叶多糖对大鼠肝匀浆自发性脂质过氧化的影响
Fig． 5 Effect of PPP on MDA generation spontaneously in liver
of rats
各管中加入 200 g /L三氯乙酸 1． 5 mL终止反应，以
10 000 r /min 离心 10 min，取上清液，加入 617 g /L
2-硫代巴比妥酸溶液 1． 5 mL，并置沸水中 15 min。
同 2． 6 项下测定 MDA含量，并计算抑制率。
结果(图 6)表明，随着 PPP浓度的增大，其抑制
大鼠由 H2O2 诱导的肝脏脂质过氧化能力也随之增
强，PPP浓度为 3． 0 mg /mL 时，抑制率达到86． 5%，
PPP该作用的 IC50值为 0． 9 mg /mL，相同条件下 Vc
的 IC50值为 0． 5 mg /mL;和同等浓度的 Vc 相比，其
抑制大鼠肝脏由 H2O2 诱导产生的 MDA效果稍弱。
-◆-． PPP;-■-． Vc
图 6 樱桃叶多糖对大鼠肝匀浆诱导性脂质过氧化的影响
Fig． 6 Effect of PPP on MDA generation induced by H2O2 in
liver of rats
3 讨 论
植物来源的多糖类化合物拥有免疫调节、抗肿
瘤活性以及降血糖、降血脂活性和抗氧化等的独特
功能，而且大多数毒性较小，在预防疾病上优于其他
化合物，因此其应用具有广阔的前景［9］。本研究了
PPP的体外抗氧化活性，结果表明，PPP 对自由基的
清除能力依次为·OH ＞ DPPH·，并远远超过对 O·
－
2
的清除率，对大鼠肝脏自发性和由 H2O2 诱导的产
生的 MAD也均有较强抑制能力;但弱于同等浓度
下的 Vc抗氧化能力，说明 PPP 对不同类型自由基
的清除能力不同。樱桃是烟台地区特产，樱桃叶来
源廉价而广泛，本实验研究结果可为进一步开发、应
用樱桃叶这一传统中药提供依据。
参考文献:
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黄芩苷对 H2 O2诱导的 SH-SY5Y细胞损伤的保护作用
及其对 Trx表达的影响
颜 明1，3，刘洁婷2，李洪志2，马恩龙1，吴宜艳2，郭艳芹2，赵冰海2，袁晓环2
(1．沈阳药科大学 生命科学与生物制药学院，辽宁 沈阳 110016;2．牡丹江医学院
黑龙江省抗纤维化生物治疗重点实验室，黑龙江 牡丹江 157011;
3．牡丹江市食品药品检验检测中心，黑龙江 牡丹江 157011)
摘 要:目的 探讨黄芩苷对 H2O2 诱导的 SH-SY5Y细胞损伤的保护作用及其作用机制。方法 采用体外培养
细胞的方法，建立 SH-SY5Y细胞 H2O2 损伤模型。分设药物组(50，100，200 μmol /L)、H2O2 损伤组、阴性对照组。
采用 MTT法检测细胞活力，采用实时荧光定量 PCR法检测各组细胞的 Trx 表达的变化。结果 同 H2O2 损伤组比
较，黄芩苷能明显减轻 H2O2 引起的 SH-SY5Y细胞的损伤，同时 Trx 表达升高。结论 黄芩苷对 H2O2 诱导的 SH-
SY5Y细胞损伤具有明显的保护作用，其作用机制可能是黄芩苷通过上调 Trx 表达，起到抗氧化作用，继而起到抗
凋亡的作用。
关键词:黄芩苷;SH-SY5Y细胞;H2O2;Trx
中图分类号:R963 文献标识码:A 文章编号:1005-1678(2012)05-0574-04
Effect of baicalin on H2O2-induced SH-SY5Y cell injury and its influence on
Trx expression
YAN Ming1，3，LIU Jie-ting2，LI Hong-zhi2，MA En-long1，WU Yi-yan2，GUO Yan-qing2，
ZHAO Bing-hai2，YUAN Xiao-huan2
(1． Institute of Life Sciences and Biological Pharmacy，Shenyang Pharmaceutical University，Shenyang
110016，China;2． Heilongjiang Key Laboratory of Anti-fibrosis Biotherapy，Mudanjiang Medical College，
Mudanjiang 157011，China;3． Mudanjiang Institute for Food and Drug Control，Mudanjiang 157011，China)
收稿日期:2011-08-02
基金项目:黑龙江省研究生创新科研项目资金(YJSCX2011-
295HLJ) ;黑龙江省教育厅重点项目(11551z017) ;黑龙江省自然科
学基金(D2007-100)
作者简介:颜 明，女，从事药理学研究;袁晓环，女，通信作
者，教授，从事天然药物开发研究工作，Tel:0453-6582647，Email:
yuanxiaohuan1969@ 163． com。
475 中国生化药物杂志 Chinese Journal of Biochemical Pharmaceutics 2012 年第 33 卷第 5 期