全 文 ：HPLC测定覆盆子中椴树苷的含量
柴伟 ,王祝举＊ ,唐力英 , 付梅红
(中国中医科学院中药研究所 ,北京 100700)
[摘要 ] 目的:建立高效液相色谱法测定覆盆子中椴树苷含量的测定方法 , 考察不同地区市售覆盆子中椴树苷的含量。
方法:采用 DiamonsilC18柱 ,以甲醇-1%冰醋酸(55∶45)为流动相 ,流速 1 mL· min-1 ,检测波长 315 nm。结果:18个地区市售
覆盆子中椴树苷的含量相差较大 ,在 0.070 0% ～ 0.033 8%, 高低相差可达 1倍多。结论:建立的分析方法简便 、准确 、灵敏 ,
为覆盆子的质量控制提供了参考依据。
[关键词 ] 覆盆子;椴树苷;高效液相色谱法
[收稿日期 ] 2009-01-01
[通信作者 ] ＊王祝举 , Tel:(010)64014411-2975
覆盆子为蔷薇科悬钩子属植物华东覆盆子 Ru-
buschingiHu的干燥未成熟果实 ,具有益肾 ,固精 ,
缩尿等作用 。药理实验表明其具有改善学习记忆能
力 、抗诱变 、延缓衰老 、促进淋巴细胞增殖 、温肾助阳
等作用 [ 1] 。临床上用于肾虚遗尿 ,小便频数 ,阳痿
早泄 ,遗精 ,滑精等。目前药典对覆盆子药材的质量
控制方法尚不完善 , 还没有定量检测方法和指
标 [ 2] 。覆盆子的主要成分为黄酮 、三萜和甾醇等 ,
其中椴树苷为其黄酮中的主要成分之一 ,药理实验
表明其具有抗炎 、强心 、利尿等作用 [ 3] 。本文以椴
树苷为指标性成分 ,建立了 HPLC测定其含量的方
法 ,并对全国 18个不同地区市售样品进行了含量测
定 ,为覆盆子的质量评价和控制提供了科学依据。
1 仪器与试剂
Waster1515型单元液相色谱系统 , 2487型紫外
检测器 , Empower2色谱工作站 ,甲醇为色谱纯(天津
四友公司),水为重蒸水 ,其余试剂均为分析纯(北
京化学试剂公司),椴树苷对照品由本实验室自制 ,
其结构经波谱鉴定 , HPLC检测纯度大于 99.5%;覆
盆子药材分别购于河北 、海南 、陕西等 18个省市区 ,
经河南中医学院陈随清教授鉴定为蔷薇科悬钩子属
植物华东覆盆子 R.chingi的干燥未成熟果实。
2 方法与结果
2.1 色谱条件 DiamonsilC18色谱柱 (4.6 mm×
250mm, 5 μm);流动相为甲醇 -1%冰醋酸 (55∶
45),流速 1 mL· min-1;检测波长 315 nm;柱温 30
℃。在此色谱条件下 ,椴树苷色谱峰能与其他非被
测物质色谱峰达到基线分离 ,结果见图 1。
A.对照品;B.样品;1.椴树苷。
图 1 椴树苷对照品和覆盆子样品 HPLC图
2.2 对照品溶液的制备 精密称取椴树苷 1.02
mg,置 10mL量瓶中 ,加甲醇溶解后稀释至刻度即
为储备液 。精密吸取储备液 1 mL,置 10 mL量瓶
中 ,加甲醇稀释至刻度 ,即得 。
2.3 供试品溶液的制备 取本品粉末 (过 60目
筛)0.5g,精密称定 ,准确加入 70%甲醇 25 mL,称
重 ,加热回流 1h,取出 ,放至室温后 ,再称定质量 ,用
70%甲醇补足失重 ,摇匀 ,过滤。准确量取续滤液
10mL,挥干溶剂 ,残渣用 10mL蒸馏水溶解 ,用正丁
醇萃取 3次 ,每次 10 mL,合并萃取液 ,减压蒸干 ,残
渣用甲醇溶解并定容于 10 mL量瓶 , 0.45 μm滤膜
过滤 ,即得 。
2.4 线性关系考察 精密吸取椴树苷对照品溶液
(0.010 2 g· L-1)3, 6 , 9, 12, 15, 18 μL分别进样分
析 ,在上述色谱条件下测定峰面积 ,以进样量 (μg)
为横坐标 X,峰面积为纵坐标 Y作图 ,计算其回归方
程为 Y=2.97×106X-735.5(r=0.999 8)。结果表
明椴树苷在 0.030 6 ～ 0.183 6 μg,进样量与峰面积
线性关系良好 。
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第 34卷第 19期
2009年 10月
Vol.34, Issue 19
October, 2009
2.5 精密度试验 精密吸取对照品溶液 10 μL进
样 ,连续测定 6次 ,记录峰面积 ,计算其 RSD1.1%,
表明精密度良好 。
2.6 重复性试验 精密称取本品 6份 ,按供试品溶
液制备方法制备样品 ,测定 ,计算椴树苷的平均质量
分数 0.038 8%, RSD1.4%,说明该方法的重复性良
好 。
2.7 稳定性试验 准确吸取 10 μL椴树苷对照品
溶液 ,分别于制备后 0, 1 , 2, 3 , 4, 8, 12, 24 h进样 ,测
定 ,记录峰面积 ,计算其 RSD1.9%,表明对照品溶
液在 24h内稳定 。
精密吸取供试品溶液 10 μL,分别于制备后 0,
1, 2, 4, 8, 12 , 24 h进样 ,测定 ,记录峰面积 ,计算其
RSD1.2%,表明供试品溶液在 24 h内稳定。
2.8 加样回收率试验 精密称取已知含量的覆盆
子粉末 6份(含椴树苷 0.388 mg· g-1),分别加入
0.182 mg椴树苷对照品 ,按供试品溶液的制备方法
制备样品 ,测定 ,回收率计算结果见表 1。
表 1 椴树苷加样回收率
称样量 /g 样品中量 /mg 测得量 /mg 回收率 /% 平均值 /% RSD/%
0.499 6 0.194 0.380 102.20
0.498 9 0.194 0.384 104.40
0.499 8 0.194 0.379 101.65
102.66 1.1
0.501 7 0.195 0.384 103.85
0.500 3 0.194 0.379 101.65
0.499 3 0.194 0.380 102.20
注:加入量均为 0.182g。
2.9 样品测定 按 “供试品溶液的制备”项下制备
样品 ,在所选色谱条件下测定 ,全国不同地区 18个
市售覆盆子样品中椴树苷的含量测定 ,结果见表 2。
表 2 不同地方市售覆盆子中椴树苷的质量分数(n=3)
来源 质量分数 /%
海南 0.047 3
江西 0.066 0
宁夏 0.063 3
湖北 0.044 6
内蒙 0.047 5
陕西 0.041 7
浙江 0.066 6
河南 0.058 6
黑龙江 0.046 1
天津 0.070 0
山东 0.033 8
湖南 0.049 3
福建 0.055 7
山西 0.040 4
甘肃 0.057 8
安徽 0.059 1
上海 0.037 1
辽宁 0.037 7
3 小结与讨论
建立了高效液相色谱法测定覆盆子样品中椴树
苷含量的方法 ,方法学考察表明 ,该法准确 、灵敏 、简
单 、快速 ,为中药覆盆子质量控制提供了科学依据 。
考察了超声 1h,回流 1h,冷浸过夜 3种提取方
式以及 30%, 50%, 70%, 90%甲醇及甲醇 5个不同
醇浓度对椴树苷提取率的影响 ,结果回流 1 h较超
声 1 h和冷浸过夜效果好 ,加热条件下提取率明显
升高 ,所以采用加热回流提取 。 70%甲醇对椴树苷
的提取率最高 ,故选用 70%甲醇作为提取溶剂。另
外 ,进行了 70%甲醇加热回流 0.5, 1, 1.5, 2, 2.5 h
的比较 ,结果 1 h即可以完全提取 ,所以确定样品的
提取时间为 1h。
本研究采用 HPLC测定了购于河北 、海南 、陕西
等 18个省市的覆盆子药材中的椴树苷的含量 ,结果
表明各个地区市售覆盆子中椴树苷的含量相差较
大 ,其中以天津的含量最高 ,几乎比含量最低者高出
1倍。
[参考文献 ]
[ 1] 苗菊茹 ,谢一辉 ,刘红宁 ,等.覆盆子的研究进展 [ J].江西中
医药 , 2004, 1(1):55
[ 2] 中国药典.一部 [ S] .2005:265.
[ 3] 陈惠芳.植物活性成分辞典.第 2册 [ J].北京:中国医药科
技出版社 , 2001:1040.
[责任编辑 王亚君 ]
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