全 文 ：食用菌学报２０１２．１９（１）：１７～２１
收稿日期：２０１１－１０－１８原稿；２０１２－０１－１６修改稿
基金项目：科技基础性工作专项（编号：２００６ＦＹ１１０７０５）的部分研究内容
作者简介：马银鹏（１９８７－），男，中国农业科学院在读硕士，主要从事大型真菌研究。
＊本文通讯作者　Ｅ－ｍａｉｌ：ｓｄｈｃｙ＠ｙａｈｏｏ．ｃｏｍ．ｃｎ
文章编号：１００５－９８７３（２０１２）０１－００１７－０５
中国三省松口蘑遗传多样性分析
马银鹏，陈　强，赵梦然，邬向丽，张金霞，黄晨阳＊
（中国农业科学院农业资源与农业区划研究所，农业部农业微生物资源收集与保藏重点实验室，北京１０００８１）
摘　要：采用ＩＴＳ、ｍｔ　ＳＳＵ　ｒＤＮＡ的Ｖ４和Ｖ９区对采自西藏、吉林和云南３个省份３０个地区的５９个样本进
行物种鉴定，并运用ＩＧＳ１－ＲＦＬＰ和 ＲＡＰＤ 进行遗传多样性分析。结果表明：所有样本均为松口蘑
（Ｔｒｉｃｈｏｌｏｍａ　ｍａｔｓｕｔａｋｅ），松口蘑ＩＴＳ序列存在明显的地域性；ＩＧＳ１－ＲＦＬＰ分析表明，吉林样本属于 Ａ型，西
藏和云南样本是２种新类型；聚类分析表明，在相似系数为０．７０２水平时将供试样本分为３大类群；我国松口
蘑具有丰富的遗传多样性，并且自然种群遗传多样性地域性明显。
关键词：松口蘑；ｍｔ　ＳＳＵ；ＩＧＳ１－ＲＦＬＰ；ＲＡＰＤ；遗传多样性；地理分布
　　松口蘑（Ｔｒｉｃｈｏｌｏｍａ　ｍａｔｓｕｔａｋｅ）是重要的可
食用菌根真菌，具有较高的经济价值，广受消费
者欢迎［１］。目前松口蘑尚未实现人工栽培。由
于松口蘑宿主被线虫感染和人类砍伐导致天然
森林减少等原因，松口蘑产量逐年下降［２］。商业
的需求对松口蘑自然种群造成巨大的威胁，在中
国松口蘑被列为二级濒危保护物种。国内外学
者纷纷对松口蘑进行研究，以期对野生资源进行
有效保护与合理利用。
口蘑属（Ｔｒｉｃｈｏｌｏｍａ）有７０多个种［３］，在形
态上，容 易 混 淆；另 外，松 口 蘑 宿 主 有 栲 属
（Ｃａｓｔａｎｏｐｓｉｓ）、栎属（Ｑｕｅｒｃｕｓ）等阔叶树［４］；赤松
（Ｐｉｎｕｓ　ｄｅｎｓｉｆｌｏｒａ）、黑松（Ｐ．ｔｈｕｎｂｅｒｇｉｉ）和偃松
（Ｐ．ｐｕｍｉｌａ）等针叶树［５］，这也给形态学物种鉴
定带来不便。随着分子生物学的发展，ＩＴＳ序列
分析［６］和线粒体小亚基核糖体 ＤＮＡ（ｍｔ　ＳＳＵ
ｒＤＮＡ）Ｖ４和Ｖ９序列分析［７］成为物种鉴定的常
用方法。
遗传多样性研究是进行资源保护和利用的
前提。国内外学者已采用高度重复序列ｍａｒＹ１
和 ｍａｒＹ２Ｎ ［８，９］、ＩＧＳ１－ＲＦＬＰ ［１０－１２］、ＳＳＲ ［１３］、
ＲＡＰＤ ［１４］和ＳＲＡＰ ［１５］等多种分子标记对松口蘑
自然种群的遗传多样性进行研究。ＩＧＳ１－ＲＦＬＰ
可产生 Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ 等８种图谱类型，
且与 地 域 性 显 著 相 关［１０－１２］。采 用 ＳＳＲ ［１３］、
ＲＡＰＤ［１４］和ＳＲＡＰ ［１５］研究发现松口蘑遗传多样
性与地理来源和宿主相关，地理距离较近的样本
遗传距离较近，宿主相同的样本聚集在一起。
在中国，松口蘑主要分布在黑龙江、吉林、四
川、甘肃、贵州、云南、西藏等地［１６］。目前，仅见对
云南松口蘑遗传多样性的研究报道［１２］，尚未见西
藏、吉林松口蘑自然种群遗传多样性研究。本研
究以２０１０年８月在西藏、吉林和云南三省３０个
地区采集的５９份松口蘑为材料，应用ＩＴＳ和 ｍｔ
ＳＳＵ　ｒＤＮＡ　Ｖ４和Ｖ９进行物种鉴定，应用ＩＧＳ１－
ＲＦＬＰ和ＲＡＰＤ研究松口蘑自然种群的遗传多
样性。
１　材料与方法
１．１ 供试材料
　　供试样本５９份，其中１～２３来自西藏、２４～
３２来自吉林、３３～５９来自云南（表１）。西藏和吉
林样本为鲜品，云南样本为干品。西藏和云南样
本宿主是阔叶树，而吉林样本宿主是针叶树。样
本采集同一地点只采集一个子实体为样本。
１．２ 引物
　　ｒＤＮＡ　ＩＴＳ区扩增引物为ＩＴＳ１和ＩＴＳ４ ［６］。
Ｖ４和Ｖ９区扩增引物分别为 Ｖ４ＵＡ２／Ｖ４ＲＡ２和
Ｖ９Ｕ２／Ｖ９Ｒ２ ［１７］。ＩＧＳ１ 区 扩 增 引 物 为 ５ＳＡ／
ＣＮＬ１２［１８］。ＲＡＰＤ分析使用的５个引物分别是：
Ｌ０２（ＴＧＧＧＣＧＴＣＡＡ）、Ｌ０３（ＣＣＡＧＣＡＧＣＴＴ）、
Ｌ０５（ＡＣＧＣＡＧＧＣＡＣ）、Ｌ１７（ＡＧＣＣＴＧＡＧＣＣ）和
DOI:10.16488/j.cnki.1005-9873.2012.01.008
食　用　菌　学　报 第１９卷
表１　供试材料
Ｔａｂｌｅ　１　Ｄｅｓｉｇｎａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｏｒｉｇｉｎ　ｏｆ　Ｔ．ｍａｔｓｕｔａｋｅ　ｓｔｒａｉｎｓ
序号Ｎｏ． 样品名称Ｓｔｒａｉｎ　ｄｅｓｉｇｎａｔｉｏｎ 采集地点 Ｏｒｉｇｉｎ
１～７ 波密１～７Ｂｏｍｉ　１～７ 波密县 Ｂｏｍｉ　Ｃｏｕｎｔｙ
８～９ 小山１～２Ｘｉａｏｓｈａｎ　１～２ 林芝县八一镇 Ｂａｙｉ，Ｌｉｎｚｈｉ　Ｃｏｕｎｔｙ
１０～１２ 大柏树１～３Ｄａｂａｉｓｈｕ　１～３ 林芝县八一镇 Ｂａｙｉ，Ｌｉｎｚｈｉ　Ｃｏｕｎｔｙ
１３～１６ 巴河桥１～４Ｂａｈｅｑｉａｏ　１～４ 工布江达县巴河镇 Ｂａｈｅ，Ｇｏｎｇｂｕｊｉａｎｇｄａ　Ｃｏｕｎｔｙ
１７～２３ 米林１～７Ｍｉｌｉｎ　１～７ 米林县 Ｍｉｌｉｎ　Ｃｏｕｎｔｙ
２４～２６ 安图１～３Ａｎｔｕ　１～３ 安图县 Ａｎｔｕ　Ｃｏｕｎｔｙ
２７～２９ 春兴１～３Ｃｈｕｎｘｉｎｇ　１～３ 延吉市依兰镇 Ｙｉｌａｎ，Ｙａｎｊｉ　Ｃｉｔｙ
３０～３２ 智新１～３Ｚｈｉｘｉｎ　１～３ 龙井市智新镇 Ｚｈｉｘｉｎ，Ｌｏｎｇｊｉｎｇ　Ｃｉｔｙ
３３ 中甸１Ｚｈｏｎｇｄｉａｎ　１ 香格里拉县格咱乡 Ｇｅｚａｎ，Ｓｈａｎｇｒｉ－ｌａ　Ｃｏｕｎｔｙ
３４～３６ 中甸２～４Ｚｈｏｎｇｄｉａｎ　２～４ 香格里拉县建塘镇Ｊｉａｎｔａｎｇ，Ｓｈａｎｇｒｉ－ｌａ　Ｃｏｕｎｔｙ
３７ 中甸５Ｚｈｏｎｇｄｉａｎ　５ 香格里拉县格咱乡Ｇｅｚａｎ，Ｓｈａｎｇｒｉ－ｌａ　Ｃｏｕｎｔｙ
３８ 中甸６Ｚｈｏｎｇｄｉａｎ　６ 香格里拉县洛吉乡 Ｌｕｏｊｉ，Ｓｈａｎｇｒｉ－ｌａ　Ｃｏｕｎｔｙ
３９～４０ 中甸７～８Ｚｈｏｎｇｄｉａｎ　７～８ 香格里拉县格咱乡 Ｇｅｚａｎ，Ｓｈａｎｇｒｉ－ｌａ　Ｃｏｕｎｔｙ
４１ 中甸９Ｚｈｏｎｇｄｉａｎ　９ 香格里拉县五境乡 Ｗｕｊｉｎｇ，Ｓｈａｎｇｒｉ－ｌａ　Ｃｏｕｎｔｙ
４２ 中甸１０Ｚｈｏｎｇｄｉａｎ　１０ 香格里拉县建塘镇Ｊｉａｎｔａｎｇ，Ｓｈａｎｇｒｉ－ｌａ　Ｃｏｕｎｔｙ
４３ 中甸１１Ｚｈｏｎｇｄｉａｎ　１１ 香格里拉县尼西乡 Ｎｉｘｉ，Ｓｈａｎｇｒｉ－ｌａ　Ｃｏｕｎｔｙ
４４ 中甸－１２Ｚｈｏｎｇｄｉａｎ　１２ 香格里拉县格咱乡 Ｇｅｚａｎ，Ｓｈａｎｇｒｉ－ｌａ　Ｃｏｕｎｔｙ
４５ 中甸１３Ｚｈｏｎｇｄｉａｎ　１３ 德钦县奔子栏乡 Ｂｅｎｚｉｌａｎ，Ｄｅｑｉｎ　Ｃｏｕｎｔｙ
４６ 中甸１４Ｚｈｏｎｇｄｉａｎ　１４ 香格里拉县建塘镇Ｊｉａｎｔａｎｇ，Ｓｈａｎｇｒｉ－ｌａ　Ｃｏｕｎｔｙ
４７ 中甸１５Ｚｈｏｎｇｄｉａｎ　１５ 香格里拉县洛吉乡 Ｌｕｏｊｉ，Ｓｈａｎｇｒｉ－ｌａ　Ｃｏｕｎｔｙ
４８ 中甸１６Ｚｈｏｎｇｄｉａｎ　１６ 香格里拉县尼西乡 Ｎｉｘｉ，Ｓｈａｎｇｒｉ－ｌａ　Ｃｏｕｎｔｙ
４９ 中甸１７Ｚｈｏｎｇｄｉａｎ　１７ 德钦县拖顶乡 Ｔｕｏｄｉｎｇ，Ｄｅｑｉｎ　Ｃｏｕｎｔｙ
５０～５１ 中甸１８～１９Ｚｈｏｎｇｄｉａｎ　１８～１９ 香格里拉县小中甸镇 Ｘｉａｏｚｈｏｎｇｄｉａｎ，Ｓｈａｎｇｒｉ－ｌａ　Ｃｏｕｎｔｙ
５２ Ｂｃ－１２７ 宾川县鸡足山镇Ｊｉｚｕｓｈａｎ，Ｂｉｎｃｈｕａｎ　Ｃｏｕｎｔｙ
５３ Ｌ１０６６ 剑川县沙溪镇Ｓｈａｘｉ，Ｊｉａｎｃｈｕａｎ　Ｃｏｕｎｔｙ
５４～５５ Ｌ１１２３、Ｌ１１９９ 洱源县乔后镇 Ｑｉａｏｈｏｕ，Ｅｒｙｕａｎ　Ｃｏｕｎｔｙ
５６～５７ 五街１～２Ｗｕｊｉｅ　１～２ 南华县五街乡 Ｗｕｊｉｅ，Ｎａｎｈｕａ　Ｃｏｕｎｔｙ
５８～５９ 祥云１～２Ｘｉａｎｇｙｕｎ　１～２ 祥云县东山乡 Ｄｏｎｇｓｈａｎ，Ｘｉａｎｇｙｕｎ　Ｃｏｕｎｔｙ
Ｌ２０（ＴＧＧＴＧＧＡＣＣＡ）。引物由北京六合华大基
因科技股份有限公司合成。
１．３ＤＮＡ提取
　　分别取０．５ｇ子实体，采用植物基因组ＤＮＡ
提取试剂盒（ＤＰ３０５－０３，天根生化科技有限公司）
提取ＤＮＡ。用１．０％琼脂糖凝胶电泳检测ＤＮＡ
质量，－２０℃保存备用。
１．４ＰＣＲ扩增
　　ＩＴＳ、Ｖ４、Ｖ９和ＩＧＳ１反应体系：５μＬ１０×Ｅｘ
Ｔａｑ　Ｂｕｆｆｅｒ （Ｔａｋａｒａ， 大 连），４ μＬ　ｄＮＴＰ
（０．２　ｍｍｏｌ／Ｌ），引物各 ２μＬ（０．４μｍｏｌ／Ｌ），
１．２５　Ｕ／μＬ　ＤＮＡ 聚合酶（Ｔａｋａｒａ），１μＬ 模板
ＤＮＡ（约２０　ｎｇ　ＤＮＡ），ｄｄＨ２Ｏ补至５０μＬ。反应
程序：９４℃预变性５　ｍｉｎ；９４℃变性３０　ｓ，４２～
５５℃复性３０　ｓ，７２℃延伸３０　ｓ，３５个循环；７２℃
延伸７　ｍｉｎ，１．０％琼脂糖凝胶电泳检测。
ＲＡＰＤ反应体系：２μＬ１０×Ｅｘ　Ｔａｑ　Ｂｕｆｆｅｒ
（Ｔａｋａｒａ），２μＬ　ｄＮＴＰ（０．２　ｍｍｏｌ／Ｌ），１μＬ引物
（０．４ μｍｏｌ／Ｌ），０．５　Ｕ／μＬ　ＤＮＡ 聚 合 酶
（Ｔａｋａｒａ），１μＬ模板 ＤＮＡ，ｄｄＨ２Ｏ补至２０μＬ。
反应程序：９４℃预变性５　ｍｉｎ；９４℃变性１　ｍｉｎ，
３７℃复性１　ｍｉｎ，７２℃延伸２　ｍｉｎ，３５个循环；
７２℃延伸７　ｍｉｎ，１．０％琼脂糖凝胶电泳分析。
１．５ＰＣＲ产物测序
　　ＩＴＳ、Ｖ４、Ｖ９和ＩＧＳ１的ＰＣＲ产物双向直接
测序，直接测序异常的采用克隆后测序，委托北京
六合华大基因科技股份有限公司进行。ＰＣＲ产
物 经 ＵＮＩＱ－１０ 柱 式 ＤＮＡ 胶 回 收 试 剂 盒
（Ｓａｎｇｏｎ）纯化，纯化后连接于ｐＧＥＭ－Ｔ　Ｖｅｃｔｏｒ
（Ｔａｋａｒａ），纯化和克隆按试剂盒说明书操作。
１．６ＩＧＳ１－ＲＦＬＰ分析
　　 用 Ｃｆｒ１３Ｉ限制性内切酶 （Ｎｅｗ　Ｅｎｇｌａｎｄ
Ｂｉｏｌａｂｓ，北京）酶切ＩＧＳ１扩增产物。酶切反应体
系：１μＬ限制性内切酶Ｃｆｒ１３Ｉ（５　Ｕ／μＬ），１μＬ１０×
ＮＥ　ｂｕｆｆｅｒ　４，５μＬ扩增产物，ｄｄＨ２Ｏ补至１０μＬ。
３７ ℃ 温育 ４　ｈ。１０％ 聚丙烯酰胺凝胶电泳
８１
书第１期 马银鹏，等：中国三省松口蘑遗传多样性分析
（ＰＡＧＥ）分析。
１．７ 数据处理与分析
　　用ＢＬＡＳＴ对ＩＴＳ测序结果进行相似性比对
分析。用ＢｉｏＥｄｉｔ　７．０．９人工核对和剪切测序结
果。用 ＤＮＡＭＡＮ（Ｖｅｒｓｉｏｎ　５．２．２，Ｌｙｎｎｏｎ
Ｂｉｏｓｏｆｔ，魁北克，加拿大）比对ＩＴＳ、Ｖ４、Ｖ９和
ＩＧＳ１序列。“１”代表存在，“０”代表不存在，统计
ＲＡＰＤ条带，利用ＮＴｓｙｓ＿２．０２软件进行分析，计
算样品之间的遗传相似系数，用 ＵＰＧＭＡ法进行
聚类分析得到聚类树状图。
２　结果与分析
２．１ＩＴＳ鉴定结果
　　测序结果表明３个省份样本的ＩＴＳ大小相同，
与ＧｅｎＢａｎｋ（ＥＵ２９４３０２）中松口蘑ＩＴＳ序列相似度
为９９％～１００％，所有样本均为松口蘑；不同省份间
样本存在碱基差异，具有明显的地域性。在４７４ｂｐ
碱基处，吉林所有样本出现Ｃ／Ｔ的套峰，而云南和
西藏样本此处为Ｔ；西藏所有样本在５６３ｂｐ处都为
Ｇ，而云南和吉林样本此处为Ａ。
２．２ｍｔ　ＳＳＵ　ｒＤＮＡ　Ｖ４和Ｖ９区鉴定结果
　　对所有样本分析表明，ｍｔ　ＳＳＵ　ｒＤＮＡ　Ｖ４区
大小均为２２５ｂｐ，序列完全一致，与ＧｅｎＢａｎｋ中
松口蘑ＡＦ４６５６１７．１的Ｖ４区完全相同。所有样
本 Ｖ９ 区大小为 ２７０ｂｐ，序列完全一 致，与
ＡＦ４６５６１７．１的 Ｖ９区相比相似度为９８％，在
１４４ｂｐ处存在碱基差异，在３９、１４７、１５４、１５７ｂｐ
处分别存在１个碱基缺失。
２．３ＩＧＳ１－ＲＦＬＰ分析和ＩＧＳ１序列分析结果
　　对５９ 个松口蘑的ＩＧＳ１的 ＰＣＲ 产物经
Ｃｆｒ１３Ｉ酶切，ＰＡＧＥ检测结果表明，所有样本均
产生４条条带。利用ＤＮＡＭＡＮ对ＩＧＳ１序列进
行分析，结果表明：所有菌株存在３个Ｃｆｒ１３Ｉ识
别位点。ＩＧＳ１－ＲＦＬＰ后产生的电泳条带实际大
小如下：吉林样本产生２１５、１３３、６３、４５ｂｐ　４条条
带；西藏样本产生２１５、１３８、６３、４５ｂｐ　４条条带；
云南样本产生２１９、１３３、６３、４５ｂｐ　４条条带。按
照ＧＵＥＲＩＮ－ＬＡＧＵＥＴＴＥ等［１０］的划分，吉林样
本属于Ａ型，西藏、云南样本分别具有一特异条
带（１３８、２１９ｂｐ），为２种新类型。
对３省份的样本分别随机选取５个进行
ＩＧＳ１测序，结果表明：西藏、吉林、云南ＩＧＳ１序列
大小分别为４６１、４５６、４６０ｂｐ。ＩＧＳ１序列存在明
显的地域性，同一省份内的样本序列完全相同，省
份间的样本存在差异。与另外两个地区样本相
比，云南样本在３０２ｂｐ处有４个碱基插入，西藏
样本在３７８ｂｐ处有５个碱基插入。吉林与云南
和西藏样本相似度分别为０．９９１和０．９８９，云南
和西藏样本相似度为０．９８１。
２．４ 基于ＲＡＰＤ分析结果构建树状图
　　５条引物共产生４３条条带，其中３６条具有
多态性，多态性比例为８３．７％。ＵＰＧＭＡ聚类结
果见图１。在相似系数为０．７０２处将供试样本分
为三大类群，西藏样本的最小相似系数为０．７２０，
图１　松口蘑基于ＲＡＰＤ分析的ＵＰＧＭＡ聚类树状图
Ｆｉｇ．１　ＵＰＧＭＡ　ｃｌｕｓｔｅｒ　ｄｉａｇｒａｍ　ｏｆ　Ｔ．ｍａｔｓｕｔａｋｅ　ｂａｓｅｄ　ｏｎ　ＲＡＰＤ
９１
食　用　菌　学　报 第１９卷
云南样本的最小相似系数为０．７４０，吉林样本的
最小相似系数为０．８０４。结果表明：我国松口蘑
具有丰富的遗传多样性，西藏和云南松口蘑的遗
传多样性比吉林的高。松口蘑自然种群遗传多
样性的地域性明显。宿主同为阔叶树的西藏和
云南的样品与宿主是针叶树的吉林样品相比，关
系更为相近。
３　讨论
　　ＩＴＳ是真菌分子分类鉴定的首选标记［１９］。
本试验研究表明，吉林的松口蘑样品的ＩＴＳ存在
套峰现象。ＨＵＡＮＧ等［２０］研究表明，在白灵侧
耳（Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓ　ｎｅｂｒｏｄｅｎｓｉｓ）中ＩＴＳ存在套峰的原
因是两个细胞核的ＩＴＳ存在差异。所以，推测本
研究中松口蘑的细胞核的ＩＴＳ存在差异，这将制
约ＩＴＳ直接测序法用于松口蘑物种鉴定。ｍｔ
ＳＳＵ　ｒＤＮＡ的 Ｖ４和 Ｖ９区在种内是高度保守
的，在种间不保守，ＭＯＵＨＡＭＡＤＯＵ 等［７］研究
认为Ｖ４和Ｖ９可作为口蘑属ＤＮＡ条形码。本
研究结果表明，所有样本的ｍｔ　ＳＳＵ　ｒＤＮＡ　Ｖ４区
与 ＧｅｎＢａｎｋ中松口蘑 ＡＦ４６５６１７．１完全一致。
Ｖ９区与 ＡＦ４６５６１７．１相似度为９８％。所以，与
Ｖ９区相比，Ｖ４区更适合用于松口蘑物种鉴定。
ＩＧＳ１－ＲＦＬＰ克服了成本高和对测序公司的
依赖性等缺点，是研究遗传多样性的常用方法之
一。本研究表明，酶切产物采用ＰＡＧＥ检测，未
能将三省样本区分开；而用Ｃｆｒ１３Ｉ酶切位点分
析ＩＧＳ１测序结果，发现西藏、吉林、云南三地的
样本酶切条带存在差异。所以，ＩＧＳ１－ＲＦＬＰ酶切
产物需采用高分辨率的检测方法。
本研究结果表明，松口蘑ＩＴＳ和ＩＧＳ１序列
存在明显的地域性。在同一省份内样本ＩＴＳ和
ＩＧＳ１序列完全一致，不同省份间存在差异。因此
可利用ＩＴＳ或ＩＧＳ１序列的特异位点判别松口蘑
地理来源。吉林所有样本在４７４ｂｐ处出现Ｃ／Ｔ
的套峰，而云南和西藏样本此处为 Ｔ，这个位点
能否作为辨别宿主是阔叶树或针叶树标记，需要
更多的样品验证。
与ＧＵＥＲＩＮ－ＬＡＧＵＥＴＴＥ等［１０］对日本松口蘑
的研究结果相比，西藏和云南的松口蘑产生Ａ～Ｈ
等８种图谱之外的新类型。ＳＨＡ等［１２］研究显示
云南松口蘑属于 Ａ型。通过对ＳＨＡ等［１２］报道
ＩＧＳ序列（ＤＱ３２３０５８）比较发现，ＩＧＳ１－ＲＦＬＰ的
结果应该是２１９、１３３、６３、４５ｂｐ　４条条带，并不是
ＧＵＥＲＩＮ－ＬＡＧＵＥＴＴＥ等［１０］报道的Ａ型。
本研究结果表明：我国拥有特有的松口蘑种
质，并具有丰富的遗传多样性。
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ｍａｒＹ２Ｎ，ａ　ＬＩＮＥ－ｌｉｋｅ　ｎｏｎ－ｌｏｎｇ　ｔｅｒｍｉｎａｌ　ｒｅｐｅａｔ（ｎｏｎ－
ＬＴＲ） ｒｅｔｒｏｅｌｅｍｅｎｔ　ｆｒｏｍ　ｔｈｅ　ｅｃｔｏｍｙｃｏｒｒｈｉｚａｌ
ｈｏｍｏｂａｓｉｄｉｏｍｙｅｅｔｅ　Ｔｒｉｃｈｏｌｏｍａ　ｍａｔｓｕｔａｋｅ［Ｊ］．Ｂｉｏｓｃｉ
Ｂｉｏｔｅｃｈ　Ｂｉｏｃｈｅｍ，２００１，６５（１０）：２３０１－２３０５．
［１０］ ＧＵＥＲＩＮ－ＬＡＧＵＥＴＴＥ　Ａ， ＭＡＴＳＵＨＩＴＡ　Ｎ，
ＫＩＫＵＣＨＩ　Ｋ，ｅｔ　ａｌ．Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ａ　ｐｒｅｖａｌｅｎｔ
Ｔｒｉｃｈｏｌｏｍａ　ｍａｔｓｕｔａｋｅ　ｒｉｂｏｔｙｐｅ　ｉｎ　Ｊａｐａｎ　ｂｙ　ｒＤＮＡ
ＩＧＳ１ｓｐａｃｅｒ　ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｍｙｃｏｌ　Ｒｅｓ，２００２，
０２
第１期 马银鹏，等：中国三省松口蘑遗传多样性分析
１０６（４）：４３５－４４３．
［１１］ＭＡＴＳＵＳＨＩＴＡ　Ｎ，ＫＩＫＵＣＨＩ　Ｋ，ＳＡＳＡＫＩ　Ｙ，ｅｔ
ａｌ．Ｇｅｎｅｔｉｃ　ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ　ｏｆ　Ｔｒｉｃｈｏｌｏｍａ　ｍａｔｓｕｔａｋｅ　ａｎｄ
Ｔ．ｎａｕｓｅｏｓｕｍｆｒｏｍ　ｔｈｅ　Ｎｏｒｔｈｅｒｎ　Ｈｅｍｉｓｐｈｅｒｅ　ｂａｓｅｄ
ｏｎ　ａｎａｌｙｓｅｓ　ｏｆ　ｒｉｂｏｓｏｍａｌ　ＤＮＡ　ｓｐａｃｅｒ　ｒｅｇｉｏｎｓ［Ｊ］．
Ｍｙｃｏｓｃｉｅｎｃｅ，２００５，４６（２）：９０－９６．
［１２］ＳＨＡ　Ｔ，ＺＨＡＮＧ　Ｈ，ＤＩＮＧ　Ｈ，ｅｔ　ａｌ．Ｇｅｎｅｔｉｃ
ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　Ｔｒｉｃｈｏｌｏｍａ　ｍａｔｓｕｔａｋｅ　ｉｎ　Ｙｕｎｎａｎ
Ｐｒｏｖｉｎｃｅ［Ｊ］．Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｓｃｉ　Ｂｕｌ，２００７，５２（９）：
１２１２－１２１６．
［１３］ＬＩＡＮ　ＣＬ，ＮＡＲＩＭＡＴＳＵ　Ｍ，ＮＡＲＡ　Ｋ，ｅｔ　ａｌ．
Ｔｒｉｃｈｏｌｏｍａ　ｍａｔｓｕｔａｋｅ　ｉｎ　ａ　ｎａｔｕｒａｌ　Ｐｉｎｕｓ　ｄｅｎｓｉｆｌｏｒａ
ｆｏｒｅｓｔ：ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｅｎｃｅ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ａｂｏｖｅ－ａｎｄ　ｂｅｌｏｗ－
ｇｒｏｕｎｄ　ｇｅｎｅｔｓ，ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ　ｗｉｔｈ　ｍｕｌｔｉｐｌｅ　ｈｏｓｔ　ｔｒｅｅｓ
ａｎｄ　 ａｌｔｅｒａｔｉｏｎ　 ｏｆ　 ｅｘｉｓｔｉｎｇ　 ｅｃｔｏｍｙｃｏｒｒｈｉｚａｌ
ｃｏｍｍｕｎｉｔｉｅｓ［Ｊ］．Ｎｅｗ　Ｐｈｙｔｏｌ，２００６，１７１（４）：
８２５－８３６．
［１４］ＢＡＯ　ＤＰ，ＫＯＩＫＥ　Ａ，ＹＡＯ　ＦＪ，ｅｔ　ａｌ．Ａｎａｌｙｓｅｓ　ｏｆ
ｔｈｅ　ｇｅｎｅｔｉｃ　ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　ｍａｔｓｕｔａｋｅ　ｉｓｏｌａｔｅｓ　ｃｏｌｅｃｔｅｄ
ｆｒｏｍ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｅｃｏｌｏｇｉｃａｌ　ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔｓ　ｉｎ　Ａｓｉａ［Ｊ］．Ｊ
Ｗｏｏｄ　Ｓｃｉ，２００７，５３（４）：３４４－３５０．
［１５］ＭＡ　ＤＬ，ＹＡＮＧ　ＧＴ，ＭＵ　ＬＱ，ｅｔ　ａｌ．Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ
ＳＲＡＰ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｇｅｎｅｔｉｃ　ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　Ｔｒｉｃｈｏｌｏｍａ
ｍａｔｓｕｔａｋｅ　ｉｎ　ｎｏｒｔｈｅａｓｔｅｒｎ　Ｃｈｉｎａ ［Ｊ］． Ａｆｒ　Ｊ
Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ，２０１０，９（３８）：６２４４－６２５０．
［１６］卯 晓 岚．中 国 蕈 菌 ［Ｍ］．北 京：科 学 出 版 社，
２００９：１３８．
［１７］ＧＯＮＺＡＬＥＺ　Ｐ，ＬＡＢＡＲＥＲＥ　Ｊ．Ｓｅｑｕｅｎｃｅ　ａｎｄ
ｓｅｃｏｎｄａｒｙ　ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ　ｓｍａｌ－
ｓｕｂｕｎｉｔ　ｒＤＮＡ　Ｖ４，Ｖ６，ａｎｄ　Ｖ９ ｄｏｍａｉｎｓ　ｒｅｖｅａｌ
ｈｉｇｈｌｙ　ｓｐｅｃｉｅｓ－ｓｐｅｃｉｆｉｃ　ｖａｒｉａｔｉｏｎｓ　ｗｉｔｈｉｎ　ｔｈｅ　ｇｅｎｕｓ
Ａｇｒｏｃｙｂｅ［Ｊ］．Ａｐｐｌ　Ｅｎｖｉｒｏｎ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ，１９９８，６４
（１１）：４１４９－４１６０．
［１８］ＨＥＮＲＩＯＮ　Ｂ，ＬＥ　ＴＡＣＯＮ　Ｆ，ＭＡＲＴＩＮ　Ｆ．Ｒａｐｉｄ
ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｇｅｎｅｔｉｃ　ｖａｒｉａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｅｃｔｏｍｙｃｏｒｒｈｉｚａｌ
ｆｕｎｇｉ　ｂｙ　ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｒｉｂｏｓｏｍａｌ　ＲＮＡ　ｇｅｎｅｓ［Ｊ］．
Ｎｅｗ　Ｐｈｙｔｏｌ，１９９２，１２２：２８９－２９８．
［１９］ＢＲＯＣＫ　ＰＭ，ＤＯＲＩＮＧ　Ｈ，ＢＩＤＡＲＴＯＮＤＯ　ＭＩ．
Ｈｏｗ　ｔｏ　ｋｎｏｗ　ｕｎｋｎｏｗｎ　ｆｕｎｇｉ：ｔｈｅ　ｒｏｌｅ　ｏｆ　ａ
ｈｅｒｂａｒｉｕｍ［Ｊ］．Ｎｅｗ　Ｐｈｙｔｏｌ，２００９，１８１（３）：７１９－７２４．
［２０］ＨＵＡＮＧ　ＣＹ，ＸＵ　ＪＹ，ＧＡＯ　Ｗ，ｅｔ　ａｌ．Ａ　ｒｅａｓｏｎ　ｆｏｒ
ｏｖｅｒｌａｐ　ｐｅａｋｓ　ｉｎ　ｄｉｒｅｃｔ　ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ　ｏｆ　ｒＲＮＡ　ｇｅｎｅ　ＩＴＳ
ｉｎ　Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓ　ｎｅｂｒｏｄｅｎｓｉｓ［Ｊ］．ＦＥＭＳ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ　Ｌｅｔｔ，
２０１０，３０５（１）：１４－１７．
［本文编辑］　王瑞霞
１２
ＡＣＴＡ　ＥＤＵＬＩＳ　ＦＵＮＧＩ２０１２．１９（１）：２２～２６
Ｒｅｃｅｉｖｅｄ：Ｏｃｔ．１８，２０１１；　Ａｃｃｅｐｔｅｄ：Ｊａｎ．１６，２０１２
Ｓｕｐｐｏｒｔｅｄ　ｂｙ　ｔｈｅ　Ｓｐｅｃｉａｌ　Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ　ｏｎ　Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ　ａｎｄ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｂａｓｉｃ　Ｗｏｒｋ，Ｍｉｎｉｓｔｒｙ　ｏｆ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　ａｎｄ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ
＊Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ　ａｕｔｈｏｒ．Ｔｅｌ：＋８６－１０－８２１０８６９２　Ｅ－ｍａｉｌ：ｓｄｈｃｙ＠ｙａｈｏｏ．ｃｏｍ．ｃｎ
犌犲狀犲狋犻犮犇犻狏犲狉狊犻狋狔狅犳犆犺犻狀犲狊犲犜狉犻犮犺狅犾狅犿犪犿犪狋狊狌狋犪犽犲
犛狋狉犪犻狀狊犳狉狅犿犜犻犫犲狋，犑犻犾犻狀犪狀犱犢狌狀狀犪狀犘狉狅狏犻狀犮犲狊
ＭＡ　Ｙｉｎｐｅｎｇ，ＣＨＥＮ　Ｑｉａｎｇ，ＺＨＡＯ　Ｍｅｎｇｒａｎ，ＷＵ　Ｘｉａｎｇｌｉ，
ＺＨＡＮＧ　Ｊｉｎｘｉａ，ＨＵＡＮＧ　Ｃｈｅｎｙａｎｇ＊
（Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ　ｏｆ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ　ａｎｄ　Ｒｅｇｉｏｎａｌ　Ｐｌａｎｎｉｎｇ，Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ａｃａｄｅｍｙ　ｏｆ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ；
Ｋｅｙ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　ｏｆ　Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ　Ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ，Ｍｉｎｉｓｔｒｙ　ｏｆ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ，Ｂｅｉｊｉｎｇ　１０００８１，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｆｉｆｔｙ　ｎｉｎｅ　ｍｕｓｈｒｏｏｍ　ｓａｍｐｌｅｓ　ｗｅｒｅ　ｃｏｌｅｃｔｅｄ　ｆｒｏｍ　３０ｌｏｃａｔｉｏｎｓ　ｉｎ　Ｔｉｂｅｔ，Ｊｉｌｉｎ　ａｎｄ　Ｙｕｎｎａｎ　ａｎｄ
ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ　ａｓ　Ｔｒｉｃｈｏｌｏｍａ　ｍａｔｓｕｔａｋｅ　ｂａｓｅｄ　ｏｎ　ＩＴＳ　ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ，ａｎｄ　ｔｈｅ　Ｖ４ａｎｄ　Ｖ９ｄｏｍａｉｎｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ
ｓｍａｌ－ｓｕｂｕｎｉｔ（ＳＳＵ）．ＩＧＳ１ｍａｒｋｅｒｓ　ｗｅｒｅ　ｒｅｇｉｏｎ－ｓｐｅｃｉｆｉｃ　ｉｎ　ｔｈａｔ　ｓａｍｐｌｅｓ　ｆｒｏｍ　ａ　ｓｉｎｇｌｅ　ｐｒｏｖｉｎｃｅ　ｈａｄ　ｔｈｅ　ｓａｍｅ
ｓｅｑｕｅｎｃｅ，ｗｈｅｒｅａｓ　ｔｈｅｓｅ　ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ　ｄｉｆｆｅｒｅｄ　ｆｒｏｍ　ｔｈｅ　ＩＧＳ１ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ　ｏｆ　ｓａｍｐｌｅｓ　ｏｒｉｇｉｎａｔｉｎｇ　ｆｒｏｍ　ｔｈｅ　ｏｔｈｅｒ
ｔｗｏ　ｐｒｏｖｉｎｃｅｓ．Ａｂｕｎｄａｎｔ　ｇｅｎｅｔｉｃ　ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ　ａｍｏｎｇ　Ｔ．ｍａｔｓｕｔａｋｅ　ｓｔｒａｉｎｓ　ｉｎ　Ｃｈｉｎａ　ｗａｓ　ｒｅｖｅａｌｅｄ　ｂｙ　ＲＡＰＤ
ａｎａｌｙｓｉｓ．Ｍｕｓｈｒｏｏｍ　ｓａｍｐｌｅｓ　ｆｒｏｍ　Ｊｉｌｉｎ　ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｅｄ　ｔｏ　ｔｈｅ　ｐｒｅｖｉｏｕｓｌｙ　ｄｅｓｉｇｎａｔｅｄ　ｔｙｐｅ　Ａ，ｗｈｅｒｅａｓ　ｔｗｏ　ｎｅｗ
ｔｙｐｅｓ　ｗｅｒｅ　ｏｂｓｅｒｖｅｄ　ａｍｏｎｇ　ｓａｍｐｌｅｓ　ｆｒｏｍ　Ｔｉｂｅｔ　ａｎｄ　Ｙｕｎｎａｎ．ＵＰＧＭＡ－ｂａｓｅｄ　ｃｌｕｓｔｅｒｉｎｇ　ｓｅｐａｒａｔｅｄ　ｔｈｅ　５９ｔｅｓｔ
ｓｔｒａｉｎｓ　ｉｎｔｏ　ｔｈｒｅｅ　ｇｒｏｕｐｓ　ａｔ　ａｎ　ｏｖｅｒａｌ　ｓｉｍｉｌａｒｉｔｙ　ｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔ　ｏｆ　０．７０２．
Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ｔｒｉｃｈｏｌｏｍａ　ｍａｔｓｕｔａｋｅ；ｍｔ　ＳＳＵ；ＩＧＳ１－ＲＦＬＰ；ＲＡＰＤ；ｇｅｎｅｔｉｃ　ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ；ｇｅｏｇｒａｐｈｉｃａｌ　ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ
　　Ｔｒｉｃｈｏｌｏｍａ　ｍａｔｓｕｔａｋｅｉｓ　ａｎ　ｉｍｐｏｒｔａｎｔ　ｅｄｉｂｌｅ
ｍｙｃｏｒｒｈｉｚａｌ　ｆｕｎｇｕｓ　ｏｆ　ｈｉｇｈ　ｅｃｏｎｏｍｉｃ　ｖａｌｕｅ，ｔｈｅ
ｔａｓｔｅ　ａｎｄ　ｔｅｘｔｕｒｅ　ｏｆ　ｗｈｉｃｈ　ｉｓ　ｗｉｄｅｌｙ　ａｐｐｒｅｃｉａｔｅｄ
ｂｙ　ｃｏｎｓｕｍｅｒｓ
［１］．Ａｔ　ｐｒｅｓｅｎｔ，ａｒｔｉｆｉｃｉａｌ　ｃｕｌｔｉｖａｔｉｏｎ
ｏｆ　Ｔ．ｍａｔｓｕｔａｋｅ　ｈａｓ　ｎｏｔ　ｂｅｅｎ　ｒｅａｌｉｚｅｄ，ａｎｄ
ｃｏｎｔｉｎｕｉｎｇ　ｃｏｎｓｕｍｅｒ　ｄｅｍａｎｄ　ｐｏｓｅｓ　ａｎ　ｅｎｏｒｍｏｕｓ
ｔｈｒｅａｔ　ｔｏ　ｔｈｅ　ｎａｔｕｒａｌ　ｍｕｓｈｒｏｏｍ　ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ．
Ａｎｎｕａｌ　ｈａｒｖｅｓｔｓ　ｆｒｏｍ　ｔｈｅ　ｗｉｌｄ　ｈａｖｅ　ｄｅｃｒｅａｓｅｄ
ｍａｒｋｅｄｌｙ　ｉｎ　ｒｅｃｅｎｔ　ｙｅａｒｓ　ｄｕｅ　ｔｏ　ｄｅｆｏｒｅｓｔａｔｉｏｎ　ａｎｄ
ｏｔｈｅｒ　ｈｕｍａｎ　ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ［２］，ａｎｄ　Ｔ．ｍａｔｓｕｔａｋｅ　ｉｓ
ｎｏｗ　ｃｌａｓｓｉｆｉｅｄ　ａｓ　ａ　Ｇｒａｄｅ　２ｅｎｄａｎｇｅｒｅｄ　ｓｐｅｃｉｅｓ　ｉｎ
Ｃｈｉｎａ．Ｃｏｎｓｅｑｕｅｎｔｌｙ，ｒｅｓｅａｒｃｈ　ｏｎ　Ｔ．ｍａｔｓｕｔａｋｅ
ｂｙ　ｂｏｔｈ　ｄｏｍｅｓｔｉｃ　ａｎｄ　ｆｏｒｅｉｇｎ　ｓｃｈｏｌａｒｓ　ｉｓ　ｃｕｒｒｅｎｔｌｙ
ｆｏｃｕｓｅｄ　ｏｎ　ｐｒｏｔｅｃｔｉｎｇ　ａｎｄ　ｍａｋｉｎｇ　ｂｅｔｔｅｒ　ｕｓｅ　ｏｆ
ｔｈｉｓ　ｖａｌｕａｂｌｅ　ｒｅｓｏｕｒｃｅ．
Ｔｈｅ　ｇｅｎｕｓ　Ｔｒｉｃｈｏｌｏｍａ　ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ　ｍｏｒｅ
ｔｈａｎ　７０ｓｐｅｃｉｅｓ［３］ｔｈａｔ　ａｒｅ　ｎｏｔ　ａｌｗａｙｓ　ｒｅａｄｉｌｙ
ｒｅｃｏｇｎｉｚｅｄ　ｆｒｏｍ　ｔｈｅ　ａｐｐｅａｒａｎｃｅ　ｏｆ　ｔｈｅ
ｍｕｓｈｒｏｏｍ　ｆｒｕｉｔ　ｂｏｄｉｅｓ．Ｈｏｓｔ　ｐｌａｎｔｓ　ｉｎｃｌｕｄｅ
ｂｏｔｈ　ｂｒｏａｄｌｅａｆ　ｔｒｅｅｓ （Ｃａｓｔａｎｏｐｓｉｓ　ｓｐｐ．，
Ｑｕｅｒｃｕｓ　ｓｐｐ．）ａｎｄ　ｃｏｎｉｆｅｒｓ（Ｐｉｎｕｓ　ｄｅｎｓｉｆｌｏｒａ，
Ｐ．ｔｈｕｎｂｅｒｇｉｉ，Ｐ．ｐｕｍｉｌａ）ｗｈｉｃｈ　ａｌｓｏ　ａｄｄｓ　ｔｏ
ｔｈｅ　ｄｉｆｆｉｃｕｌｔｙ　ｏｆ　ｉｄｅｎｔｉｆｙｉｎｇ　ｓｐｅｃｉｅｓ　ｂａｓｅｄ　ｏｎ
ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ．Ｈｏｗｅｖｅｒ，ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ
ｏｆ　ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　 ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　 ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ， ＩＴＳ
ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ，ａｎｄ　ｔｈｅ　Ｖ４ａｎｄ　Ｖ９ｄｏｍａｉｎｓ　ｏｆ　ｔｈｅ
ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ　ＳＳＵ，ｃａｎ　ｂｅ　ｕｓｅｄ　ｆｏｒ　ｓｐｅｃｉｅｓ
ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ．
Ｕｎｄｅｒｓｔａｎｄｉｎｇ　ｔｈｅ　ｇｅｎｅｔｉｃ　ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　ａ
ｐａｒｔｉｃｕｌａｒ　ｒｅｓｏｕｒｃｅ　ｉｓ　ａ　ｐｒｅｒｅｑｕｉｓｉｔｅ　ｆｏｒ　ｉｔｓ
ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ　ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｕｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ． Ｂｏｔｈ
Ｃｈｉｎｅｓｅ　ａｎｄ　ｆｏｒｅｉｇｎ　ｒｅｓｅａｒｃｈｅｒｓ　ｈａｖｅ　ｓｔｕｄｉｅｄ
ｔｈｅ　ｇｅｎｅｔｉｃ　ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ　ａｍｏｎｇ　ｎａｔｕｒａｌ　ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ
ｏｆ　Ｔ．ｍａｔｓｕｔａｋｅ　ｕｓｉｎｇ　ｔｈｅ　ｈｉｇｈｌｙ　ｒｅｐｅｔｉｔｉｖｅ
ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ　ｍａｒＹ１　ａｎｄ　ｍａｒＹ２Ｎ ［８，９］，ａｎｄ
ｖａｒｉｏｕｓ　ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ｍａｒｋｅｒｓ　ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ　ＩＧＳ１－
ＲＦＬＰ［１０－１２］，ＳＳＲ ［１３］，ＲＡＰＤ ［１４］ａｎｄ　ＳＲＡＰ［１５］．
Ｅｉｇｈｔ　ｄｉｓｔｉｎｃｔ　ＩＧＳ１　ｒＤＮＡ　ｔｙｐｅｓ，Ａ，Ｂ，Ｃ，Ｄ，
Ｅ，Ｆ，Ｇ　ａｎｄ　Ｈ，ｗｅｒｅ　ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ　ｕｓｉｎｇ　ｔｈｅ
ｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎ　ｅｎｄｏｎｕｃｌｅａｓｅ　Ｃｆｒ１３Ｉ［１０］，ａｎｄ　ｔｈｅ
ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｖａｒｉｏｕｓ　ｔｙｐｅｓ　ｗａｓ　ｏｆｔｅｎ
ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　 ｗｉｔｈ　 ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　 ｇｅｏｇｒａｐｈｉｃａｌ
ｌｏｃａｔｉｏｎｓ．ＳＳＲ［１３］， ＲＡＰＤ［１４］ ａｎｄ　ＳＲＡＰ［１５］
ｒｅｖｅａｌｅｄ　ｔｈａｔ　ｇｅｎｅｔｉｃ　ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｉｎ　Ｔ．ｍａｔｓｕｔａｋｅ
Ｎｏ．１ ＭＡ　Ｙｉｎｐｅｎｇ，ＣＨＥＮ　Ｑｉａｎｇ，ＺＨＡＯ　Ｍｅｎｇｒａｎ，ｅｔ　ａｌ
ｗａｓ　ｒｅｌａｔｅｄ　ｔｏ　ｇｅｏｇｒａｐｈｉｃ　ｏｒｉｇｉｎ　ａｎｄ　ｐｌａｎｔ
ｈｏｓｔ．Ｔｈｕｓ，ｓｔｒａｉｎｓ　ｇｒｏｗｉｎｇ　ｗｉｔｈｉｎ　ａ　ｓｍａｌｅｒ
ｇｅｏｇｒａｐｈｉｃａｌ　ａｒｅａ　ｅｘｈｉｂｉｔｅｄ　ｃｌｏｓｅｒ　ｇｅｎｅｔｉｃ
ａｆｆｉｎｉｔｙ，ａｓ　ｄｉｄ　ｓｔｒａｉｎｓ　ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　ｗｉｔｈ　ａ　ｇｉｖｅｎ
ｈｏｓｔ　ｓｐｅｃｉｅｓ．
Ｉｎ　Ｃｈｉｎａ， Ｔ． ｍａｔｓｕｔａｋｅ　ｉｓ　ｍａｉｎｌｙ
ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｅｄ　ｉｎ　Ｈｅｉｌｏｎｇｊｉａｎｇ，Ｊｉｌｉｎ，Ｓｉｃｈｕａｎ，
Ｇａｎｓｕ， Ｇｕｉｚｈｏｕ， Ｙｕｎｎａｎ　ａｎｄ　Ｔｉｂｅｔ［１６］．
Ａｌｔｈｏｕｇｈ　ｒｅｓｅａｒｃｈ　ｄａｔａ　ｒｅｌａｔｉｎｇ　ｔｏ　ｔｈｅ　ｇｅｎｅｔｉｃ
ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　Ｔ．ｍａｔｓｕｔａｋｅ　ｉｎ　Ｙｕｎｎａｎ　ｈａｖｅ　ｂｅｅｎ
ｒｅｐｏｒｔｅｄ［１２］，ｌｉｔｔｌｅ　ｉｓ　ｋｎｏｗｎ　ａｂｏｕｔ　ｔｈｅ　ｎａｔｕｒａｌ
ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ　ｆｒｏｍ　Ｔｉｂｅｔ　ａｎｄ　Ｊｉｌｉｎ．Ｉｎ　ｔｈｉｓ　ｓｔｕｄｙ，
５９　Ｔ．ｍａｔｓｕｔａｋｅ　ｓａｍｐｌｅｓ　ｗｅｒｅ　ｃｏｌｅｃｔｅｄ　ｆｒｏｍ
３０　ｌｏｃａｔｉｏｎｓ　ｉｎ　Ｔｉｂｅｔ，Ｊｉｌｉｎ　ａｎｄ　Ｙｕｎｎａｎ，ａｎｄ
ｔｈｅｉｒ　ｉｄｅｎｔｉｔｙ　ｃｏｎｆｉｒｍｅｄ　ｕｓｉｎｇ　ＩＴＳ　ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ，
ａｎｄ　ｔｈｅ　Ｖ４　ａｎｄ　Ｖ９　ｄｏｍａｉｎｓ　ｏｆ　ＳＳＵ．Ｇｅｎｅｔｉｃ
ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ　ａｍｏｎｇ　ｔｈｅ　ｓｔｒａｉｎｓ　ｗａｓ　ａｎａｌｙｚｅｄ　ｕｓｉｎｇ
ＩＧＳ１－ＲＦＬＰ　ａｎｄ　ＲＡＰＤ．
１　Ｍａｔｅｒｉａｌｓ　ａｎｄ　Ｍｅｔｈｏｄｓ
１．１ Ｍａｔｅｒｉａｌｓ
　　Ａ　ｔｏｔａｌ　ｏｆ　５９　Ｔ．ｍａｔｓｕｔａｋｅ　ｓｔｒａｉｎｓ　ｗｅｒｅ
ｃｏｌｅｃｔｅｄ　ｆｒｏｍ　Ｔｉｂｅｔ（１－２３），Ｊｉｌｉｎ（２４－３２）ａｎｄ
Ｙｕｎｎａｎ（３３－５９）ｉｎ　Ｃｈｉｎａ（ｓｅｅ　Ｔａｂｌｅ　１ｉｎ　ｔｈｅ
Ｃｈｉｎｅｓｅ　ｖｅｒｓｉｏｎ）．Ｓａｍｐｌｅｓ　ｆｒｏｍ　Ｔｉｂｅｔ　ａｎｄ　Ｊｉｌｉｎ
ｗｅｒｅ　ｆｒｅｓｈ　ｍｕｓｈｒｏｏｍ　ｆｒｕｉｔ　ｂｏｄｉｅｓ　ｗｈｉｌｅ　ｔｈｏｓｅ
ｆｒｏｍ　Ｙｕｎｎａｎ　ｗｅｒｅ　ｄｒｙ　ｓｐｏｒｏｐｈｏｒｅｓ．Ｓａｍｐｌｅｓ
ｆｒｏｍ　Ｔｉｂｅｔ　ａｎｄ　Ｙｕｎｎａｎ　ｗｅｒｅ　ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　ｗｉｔｈ
ｂｒｏａｄ－ｌｅａｆ　ｔｒｅｅｓ，ｗｈｉｌｅ　ｔｈｏｓｅ　ｆｒｏｍ　Ｊｉｌｉｎ　ｗｅｒｅ
ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　ｗｉｔｈ　ｃｏｎｉｆｅｒ　ｈｏｓｔｓ．Ｏｎｌｙ　ｏｎｅ　ｆｒｕｉｔ
ｂｏｄｙ　ｗａｓ　ｃｏｌｅｃｔｅｄ　ｆｒｏｍ　ｅａｃｈ　ｓａｍｐｌｉｎｇ　ｓｉｔｅ．
１．２Ｐｒｉｍｅｒｓ
　　Ｐｒｉｍｅｒｓ　ｕｓｅｄ　ｆｏｒ　ＰＣＲ　ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｗｅｒｅ　ａｓ
ｆｏｌｏｗｓ：ＩＴＳ１ａｎｄ　ＩＴＳ４（ｒＤＮＡ　ＩＴＳ　ｒｅｇｉｏｎ）［６］；
Ｖ４ＵＡ２／Ｖ４ＲＡ２ａｎｄ　Ｖ９Ｕ２／Ｖ９Ｒ２（Ｖ４ａｎｄ　Ｖ９
ｄｏｍａｉｎｓ， ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ ）［１７］； ５ＳＡ／ＣＮＬ１２
（ＩＧＳ１）［１８］； Ｌ０２ （ＴＧＧＧＣＧＴＣＡＡ）， Ｌ０３
（ＣＣＡＧＣＡＧＣＴＴ），Ｌ０５ （ＡＣＧＣＡＧＧＣ－ＡＣ），
Ｌ１７ （ＡＧＣＣＴＧＡＧＣＣ） ａｎｄ　Ｌ２０ （ＴＧＧ－
ＴＧＧＡＣＣＡ）（ＲＡＰＤ）．Ｐｒｉｍｅｒｓ　ｗｅｒｅ　ｓｙｎｔｈｅ－
ｓｉｚｅｄ　ｂｙ　Ｂｅｉｊｉｎｇ　Ｌｉｕｈｅ　Ｈｕａｄａ　Ｇｅｎｅ　Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ
（ＢＧＩ），Ｂｅｉｊｉｎｇ，Ｃｈｉｎａ．
１．３Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ＤＮＡ
　 　ＤＮＡ　ｗａｓ　ｅｘｔｒａｃｔｅｄ　ｆｒｏｍ　Ｔ．ｍａｔｓｕｔａｋｅ
ｆｒｕｉｔ　ｂｏｄｙ　ｓａｍｐｌｅｓ（０．５ｇ）ｕｓｉｎｇ　ｔｈｅ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ
ｋｉｔ　ＤＰ３０５－０３（Ｔｉａｎｇｅｎ　Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　ａｎｄ
Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　Ｃｏ．Ｌｔｄ，Ｂｅｉｊｉｎｇ，Ｃｈｉｎａ）ａｃｃｏｒｄｉｎｇ
ｔｏ　ｔｈｅ　ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｅｒ’ｓ　ｉｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎｓ　ａｎｄ　ｓｔｏｒｅｄ　ａｔ
－ ２０ ℃． ＤＮＡ　ｑｕａｌｉｔｙ　ｗａｓ　ａｓｓｅｓｓｅｄ　ｂｙ
ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ　ｏｎ　１％ （ｗ／ｖ）ａｇａｒｏｓｅ　ｇｅｌｓ．
１．４ＰＣＲ　ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ
　　ＩＴＳ、Ｖ４、Ｖ９ａｎｄ　ＩＧＳ１ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｗａｓ
ｃａｒｒｉｅｄ　ｏｕｔ　ｉｎ　５０ μＬ　ｒｅａｃｔｉｏｎ　ｍｉｘｔｕｒｅｓ
ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ：５μＬ　１０×Ｅｘ　Ｔａｑ　Ｂｕｆｆｅｒ，４μＬ
ｄＮＴＰ（０．２　ｍｍｏｌ／Ｌ），２μＬ　ｐｒｉｍｅｒｓ（０．４μｍｏｌ／Ｌ）
１．２５　Ｕ　Ｔａｑ　ＤＮＡ　ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ，１μＬ　ｔｅｍｐｌａｔｅ
ＤＮＡ （２０　ｎｇ　ＤＮＡ），ａｎｄ　ｄｄＨ２Ｏ　ｔｏ　ｖｏｌｕｍｅ．
Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ　ｗｅｒｅ　ａｓ　ｆｏｌｏｗｓ：１
ｃｙｃｌｅ　ａｔ　９４℃ｆｏｒ　５　ｍｉｎ，３５　ｃｙｃｌｅｓ　ａｔ　９４℃ｆｏｒ
３０　ｓ，４２～５５ ℃ ｆｏｒ　３０　ｓ，７２ ℃ ｆｏｒ　３０　ｓ；
ｆｏｌｏｗｅｄ　ｂｙ　ａ　ｆｉｎａｌ　ｅｘｔｅｎｓｉｏｎ　ａｔ　７２ ℃ ｆｏｒ
７　ｍｉｎ．
ＲＡＰＤ　ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｗａｓ　ｃａｒｒｉｅｄ　ｏｕｔ　ｉｎ
２０μＬ　ｒｅａｃｔｉｏｎ　ｍｉｘｔｕｒｅｓ　ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ：２μＬ１０×
Ｅｘ　Ｔａｑ　Ｂｕｆｆｅｒ，２μＬ　ｄＮＴＰ（０．２　ｍｍｏｌ／Ｌ），
１μＬ　ｐｒｉｍｅｒ（０．４μｍｏｌ／Ｌ），０．５　Ｕ　Ｔａｑ　ＤＮＡ
ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ（Ｔａｋａｒａ），ａｎｄ　１μＬ　ｔｅｍｐｌａｔｅ　ＤＮＡ
（２０　ｎｇ）．Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ　ｗｅｒｅ　ａｓ
ｆｏｌｏｗｓ：１　ｃｙｃｌｅ　ａｔ　９４℃ｆｏｒ　５　ｍｉｎ；３５　ｃｙｃｌｅｓ　ａｔ
９４℃ｆｏｒ　１　ｍｉｎ，３７ ℃ｆｏｒ　１　ｍｉｎ，７２ ℃ ｆｏｒ
２　ｍｉｎ；ｆｏｌｏｗｅｄ　ｂｙ　ａ　ｆｉｎａｌ　ｅｘｔｅｎｓｉｏｎ　ａｔ　７２ ℃
ｆｏｒ　７　ｍｉｎ．
Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｐｒｏｄｕｃｔｓ　ｗｅｒｅ　ｄｅｔｅｃｔｅｄ　ｂｙ
ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ　ｏｎ　１％ （ｗ／ｖ）ａｇａｒｏｓｅ　ｇｅｌｓ．
１．５Ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ　ｏｆ　ＰＣＲ　ｐｒｏｄｕｃｔｓ
　　ＰＣＲ　ａｍｐｌｉｆｉｅｄ　ＩＴＳ　ｒｅｇｉｏｎｓ、Ｖ４ａｎｄ　Ｖ９
ｄｏｍａｉｎｓ，ａｎｄ　ＩＧＳ１ｍａｒｋｅｒｓ　ｗｅｒｅ　ｓｕｂｊｅｃｔｅｄ　ｔｏ
ｂｉｄｉｒｅｃｔｉｏｎａｌ　ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ　ｅｉｔｈｅｒ　ｄｉｒｅｃｔｌｙ （ＢＧＩ）
ｏｒ，ｉｆ　ａｂｎｏｒｍａｌｉｔｉｅｓ　ｗｅｒｅ　ｄｅｔｅｃｔｅｄ， ａｆｔｅｒ
ｃｌｏｎｉｎｇ．ＰＣＲ　ｐｒｏｄｕｃｔｓ　ｗｅｒｅ　ｐｕｒｉｆｉｅｄ　ｕｓｉｎｇ　ｔｈｅ
ＵＮＩＱ－１０ｔｙｐｅ　ＤＮＡ　ｇｅｌ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｋｉｔ（Ｓａｎｇｏｎ，
Ｓｈａｎｇｈａｉ， Ｃｈｉｎａ）， ｌｉｇａｔｅｄ　 ｔｏ　 ｐＧＥＭ－Ｔ
（Ｔａｋａｒａ），ｐｕｒｉｆｉｅｄ　ａｎｄ　ｃｌｏｎｅｄ　ａｃｃｏｒｄｉｎｇ　ｔｏ　ｔｈｅ
ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｅｒ’ｓ　ｉｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎｓ．
１．６ＩＧＳ１－ＲＦＬＰ　ａｎａｌｙｓｉｓ
　　ＩＧＳ１ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｐｒｏｄｕｃｔｓ　ｗｅｒｅ　ｄｉｇｅｓｔｅｄ
ｆｏｒ　４ ｈ ａｔ　３７ ℃ ｕｓｉｎｇ　Ｃｆｒ１３Ｉｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎ
３２
ＡＣＴＡ　ＥＤＵＬＩＳ　ＦＵＮＧＩ　 Ｖｏｌ．１９
ｅｎｄｏｎｕｃｌｅａｓｅ（Ｎｅｗ　Ｅｎｇｌａｎｄ　Ｂｉｏｌａｂｓ，Ｂｅｉｊｉｎｇ，
Ｃｈｉｎａ）．Ｒｅａｃｔｉｏｎ　ｍｉｘｔｕｒｅｓ　ｃｏｎｔａｉｎｅｄ：１ μＬ
ｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎ　ｅｎｄｏｎｕｃｌｅａｓｅ，１μＬ１０× ＮＥ　ｂｕｆｆｅｒ
４，５μＬ　ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｐｒｏｄｕｃｔ，ａｎｄ　ｄｄＨ２Ｏ　ｔｏ
１０μＬ　ｖｏｌｕｍｅ．Ｄｉｇｅｓｔｓ　ｗｅｒｅ　ａｎａｌｙｚｅｄ　ｂｙ　ＰＡＧＥ
ｕｓｉｎｇ　１０％ （ｗ／ｖ）ｐｏｌｙａｃｒｙｌａｍｉｄｅ　ｇｅｌｓ．
１．７Ｄａｔａ　ａｎａｌｙｓｉｓ
　　Ｓｉｍｉｌａｒｉｔｙ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｆ　ＩＴＳ　ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ　ｄａｔａ
ｗａｓ　ｃａｒｒｉｅｄ　ｏｕｔ　ｕｓｉｎｇ　ＢＬＡＳＴ．ＩＴＳ、Ｖ４、Ｖ９ａｎｄ
ＩＧＳ１ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ　ｗｅｒｅ　ａｌｉｇｎｅｄ　ｕｓｉｎｇ　ＤＮＡＭＡＮ
（Ｖｅｒｓｉｏｎ　５．２．２，Ｌｙｎｎｏｎ　Ｂｉｏｓｏｆｔ，Ｑｕｅｂｅｃ，
Ｃａｎａｄａ）．ＲＡＰＤ　ｂａｎｄｓ　ｗｅｒｅ　ａｎａｌｙｚｅｄ　ｕｓｉｎｇ
ＮＴｓｙｓ＿２．０２ｓｏｆｔｗａｒｅ，ａｎｄ　ｇｅｎｅｔｉｃ　ｓｉｍｉｌａｒｉｔｙ
ｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔｓ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ｓａｍｐｌｅｓ　ｗｅｒｅ　ｃａｌｃｕｌａｔｅｄ．
Ｃｌｕｓｔｅｒ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｗａｓ　ｃａｒｒｉｅｄ　ｏｕｔ　ｕｓｉｎｇ　ｔｈｅ
ＵＰＧＭＡ　ｍｅｔｈｏｄ．
２　Ｒｅｓｕｌｔｓ　ａｎｄ　Ａｎａｌｙｓｉｓ
２．１ＩＴＳ　ｓｅｑｕｅｎｃｅ　ａｎａｌｙｓｉｓ
　 　 Ａｌ　ｔｈｅ　ｓａｍｐｌｅｓ　ｗｅｒｅ　ｃｏｎｆｉｒｍｅｄ　ａｓ　Ｔ．
ｍａｔｓｕｔａｋｅ．Ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ　ｄａｔａ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ＩＴＳ
ｍａｒｋｅｒｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｓａｍｐｌｅｓ　ｃｏｌｅｃｔｅｄ　ｆｒｏｍ　ａｌ　ｔｈｒｅｅ
ｐｒｏｖｉｎｃｅｓ　ｗｅｒｅ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｓａｍｅ　ｓｉｚｅ，ａｎｄ　ｅｘｈｉｂｉｔｅｄ
９９－１００％ ｓｅｑｕｅｎｃｅ　ｓｉｍｉｌａｒｉｔｙ　ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　Ｔ．
ｍａｔｓｕｔａｋｅ　ＩＴＳ　ｓｅｑｕｅｎｃｅ　ｄｅｐｏｓｉｔｅｄ　ｉｎ　ＧｅｎＢａｎｋ
（ＥＵ２９４３０２）．Ｂａｓｅ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓ　ｗｅｒｅ　ｒｅｃｏｒｄｅｄ　ｉｎ
ｓａｍｐｌｅｓ　ｆｒｏｍ　ｔｈｅ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｐｒｏｖｉｎｃｅｓ；ｆｏｒ
ｅｘａｍｐｌｅ，ａｔ　ｐｏｓｉｔｉｏｎ　４７４，ａｌ　ｔｈｅ　ｓａｍｐｌｅｓ　ｆｒｏｍ
Ｊｉｌｉｎ　ｈａｄ　ｏｖｅｒｌａｐｐｉｎｇ　Ｃ／Ｔ　ｐｅａｋｓ　ｗｈｅｒｅａｓ
ｓａｍｐｌｅｓ　ｆｒｏｍ　Ｙｕｎｎａｎ　ａｎｄ　Ｔｉｂｅｔ　ｈａｄ　ａ　Ｔ
ｒｅｓｉｄｕｅ．Ａｔ　ｐｏｓｉｔｉｏｎ　５６３，ａｌ　ｔｈｅ　ｓａｍｐｌｅｓ　ｆｒｏｍ
Ｔｉｂｅｔ　ｈａｄ　ａ　Ｇ　ｒｅｓｉｄｕｅ，ｗｈｉｌｅ　ｔｈｅ　ｐｏｓｉｔｉｏｎ　ｉｎ
ｓａｍｐｌｅｓ　ｆｒｏｍ　Ｙｕｎｎａｎ　ａｎｄ　Ｊｉｌｉｎ　ｗａｓ　ｏｃｃｕｐｉｅｄ
ｂｙ　Ａ．
２．２Ｖ４ａｎｄ　Ｖ９ｄｏｍａｉｎｓ　ｏｆ　ＳＳＵ
　　Ｔｈｅ　Ｖ４ｄｏｍａｉｎ　ｏｆ　ａｌ　ｔｈｅ　ｔｅｓｔ　ｓａｍｐｌｅｓ
ｃｏｎｓｉｓｔｅｄ　ｏｆ　２２５ ｂｐ，ａｎｄ　ｔｈｅ　ｓｅｑｕｅｎｃｅ　ｗａｓ
ｉｄｅｎｔｉｃａｌ　ｔｏ　ｔｈｅ　Ｖ４ｄｏｍａｉｎ　ｏｆ　Ｔ．ｍａｔｓｕｔａｋｅ　ＳＳＵ
ｄｅｐｏｓｉｔｅｄ　 ｉｎ　 ＧｅｎＢａｎｋ （Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ　 Ｎｏ．
ＡＦ４６５６１７．１）．Ｔｈｅ　Ｖ９ｄｏｍａｉｎ　ｏｆ　ａｌ　ｔｈｅ　ｔｅｓｔ
ｓａｍｐｌｅｓ　ｃｏｎｓｉｓｔｅｄ　ｏｆ　２７０ｂｐ，ａｎｄ　ｅｘｈｉｂｉｔｅｄ　ａ
９８％ｓｅｑｕｅｎｃｅ　ｓｉｍｉｌａｒｉｔｙ　ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　Ｖ９ｄｏｍａｉｎ　ｏｆ
ＳＳＵ　ｏｆ　Ｔ．ｍａｔｓｕｔａｋｅ　ｄｅｐｏｓｉｔｅｄ　ｉｎ　ＧｅｎＢａｎｋ
（Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ　Ｎｏ． ＡＦ４６５６１７．１）． Ａ　ｂａｓｅ
ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ　ｗａｓ　ｄｅｔｅｃｔｅｄ　ａｔ　ｐｏｓｉｔｉｏｎ　１４４ａｎｄ　ｂａｓｅｓ
ｗｅｒｅ　ｍｉｓｓｉｎｇ　ｉｎ　ｔｈｅ　Ｖ９ ｄｏｍａｉｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｔｅｓｔ
ｓａｍｐｌｅｓ　ａｔ　ｐｏｓｉｔｉｏｎｓ　３９，１４７，１５４ａｎｄ　１５７．
２．３ＩＧＳ１－ＲＦＬＰ　ａｎｄ　ＩＧＳ１ｓｅｑｕｅｎｃｅ　ａｎａｌｙｓｉｓ
　 　Ｓｅｑｕｅｎｃｅ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｒｅｖｅａｌｅｄ　ｔｈｒｅｅ　Ｃｆｒ１３Ｉ
ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ　ｓｉｔｅｓ　ｉｎ　ｔｈｅ　ＩＧＳ１ｒｅｇｉｏｎ　ｏｆ　ａｌ　ｔｈｅ
ｓｔｒａｉｎｓ．Ｔｈｕｓ，ＰＡＧＥ　ｏｆ　Ｃｆｒ１３Ｉｄｉｇｅｓｔｓ　ｏｆ　ＩＧＳ１
ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｐｒｏｄｕｃｔｓ　ｇｅｎｅｒａｔｅｄ　ｆｒｏｍ　ｔｈｅ　５９　Ｔ．
ｍａｔｓｕｔａｋｅ　ｓａｍｐｌｅｓ　ｒｅｖｅａｌｅｄ　ｆｏｕｒ　ｂａｎｄｓ　ｉｎ　ｅｖｅｒｙ
ｃａｓｅ．Ａｃｔｕａｌ　ＩＧＳ１－ＲＦＬＰ　ｂａｎｄ　ｓｉｚｅｓ　ｗｅｒｅ　ａｓ
ｆｏｌｏｗｓ：Ｊｉｌｉｎ（２１５，１３３，６３ａｎｄ　４５ｂｐ），Ｔｉｂｅｔ
（２１５，１３８，６３ａｎｄ　４５ｂｐ）ａｎｄ　Ｙｕｎｎａｎ （２１９，
１３３，６３ ａｎｄ　４５ ｂｐ）．Ｓａｍｐｌｅｓ　ｆｒｏｍ　Ｊｉｌｉｎ
ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｅｄ　ｔｏ　ｔｙｐｅ　Ａ　ａｓ　ｄｅｓｉｇｎａｔｅｄ　ｉｎ　Ｒｅｆ．１０，
ｗｈｅｒｅａｓ　ｔｗｏ　ｎｅｗ　ｔｙｐｅｓ，ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ　ｏｆ　１３８ｂｐ
ａｎｄ　２１９ｂｐ，ｗｅｒｅ　ｏｂｓｅｒｖｅｄ　ｉｎ　ｓａｍｐｌｅｓ　ｆｒｏｍ
Ｔｉｂｅｔ　ａｎｄ　Ｙｕｎｎａｎ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．
ＩＧＳ１ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｏｂｔａｉｎｅｄ　ｆｒｏｍ　ｆｉｖｅ
ｓａｍｐｌｅｓ　ｒａｎｄｏｍｌｙ　ｓｅｌｅｃｔｅｄ　ｆｒｏｍ　ｅａｃｈ　ｏｆ　ｔｈｅ
ｔｈｒｅｅ　ｐｒｏｖｉｎｃｅｓ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ　ｏｆ
ＩＧＳ１ｉｎ　ｔｈｅ　ｓａｍｐｌｅｓ　ｆｒｏｍ　Ｔｉｂｅｔ，Ｊｉｌｉｎ　ａｎｄ
Ｙｕｎｎａｎ　ｃｏｎｓｉｓｔｅｄ　ｏｆ　４６１，４５６ａｎｄ　４６０ｂｐ，
ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．ＩＧＳ１ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ　ｗｅｒｅ　ｒｅｇｉｏｎ－
ｓｐｅｃｉｆｉｃ：ｉ．ｅ．ｗｈｅｒｅａｓ　ｓａｍｐｌｅｓ　ｆｒｏｍ　ｔｈｅ　ｓａｍｅ
ｐｒｏｖｉｎｃｅ　ｈａｄ　ｔｈｅ　ｓａｍｅ　ｓｅｑｕｅｎｃｅ，ｔｈｅｓｅ　ｗｅｒｅ
ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｔｏ　ｔｈｅ　ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ　ｏｆ　ｓａｍｐｌｅｓ　ｆｒｏｍ　ｔｈｅ
ｏｔｈｅｒ　ｔｗｏ　ｐｒｏｖｉｎｃｅｓ．Ｆｏｕｒ　ｂａｓｅ　ｉｎｓｅｒｔｉｏｎｓ　ａｔ
ｐｏｓｉｔｉｏｎ　３０２ ｗｅｒｅ　ｒｅｃｏｒｄｅｄ　ｉｎ　Ｔ．ｍａｔｓｕｔａｋｅ
ｓａｍｐｌｅｓ　ｆｒｏｍ　Ｙｕｎｎａｎ，ａｎｄ　ｆｉｖｅ　ｂａｓｅ　ｉｎｓｅｒｔｉｏｎｓ
ａｔ　ｐｏｓｉｔｉｏｎ　３７８ ｉｎ　Ｔ． ｍａｔｓｕｔａｋｅ　ｓａｍｐｌｅｓ
ｃｏｌｅｃｔｅｄ　ｉｎ　Ｔｉｂｅｔ．Ｓａｍｐｌｅ　ｓｉｍｉｌａｒｉｔｙ　ｖａｌｕｅｓ
ｗｅｒｅ　０．９９１（Ｊｉｌｉｎ　ａｎｄ　Ｙｕｎｎａｎ），０．９８９ （Ｊｉｌｉｎ
ａｎｄ　Ｔｉｂｅｔ）ａｎｄ　０．９８１（Ｙｕｎｎａｎ　ａｎｄ　Ｔｉｂｅｔ）．
２．４Ｃｌｕｓｔｅｒ　ｄｉａｇｒａｍ　ｏｆ　Ｔ．ｍａｔｓｕｔａｋｅ　ｓｔｒａｉｎｓ
ｂａｓｅｄ　ｏｎ　ＲＡＰＤ
　　Ｔｈｅ　ｆｉｖｅ　ＲＡＰＤ　ｐｒｉｍｅｒｓ　ｕｓｅｄ　ｉｎ　ｔｈｉｓ　ｓｔｕｄｙ
ｇｅｎｅｒａｔｅｄ　４３ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｂａｎｄｓ，ｏｆ　ｗｈｉｃｈ　３６
（８３．７％）ｗｅｒｅ　ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃ．ＵＰＧＭＡ－ｂａｓｅｄ
ｃｌｕｓｔｅｒｉｎｇ　ｓｅｐａｒａｔｅｄ　ｔｈｅ　ｔｅｓｔ　ｓｔｒａｉｎｓ　ｉｎｔｏ　ｔｈｒｅｅ
ｇｒｏｕｐｓ　ａｔ　ａ　ｓｉｍｉｌａｒｉｔｙ　ｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔ　ｏｆ　０．７０２
（Ｆｉｇｕｒｅ　１，ｓｅｅ　ｔｈｅ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　ｖｅｒｓｉｏｎ）．Ｔｈｅ
ｍｉｎｉｍａｌ　ｓｉｍｉｌａｒｉｔｙ　ｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔｓ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｓａｍｐｌｅｓ
ｆｒｏｍ　Ｔｉｂｅｔ，Ｙｕｎｎａｎ　ａｎｄ　Ｊｉｌｉｎ　ｗｅｒｅ　０．７２０，
４２
Ｎｏ．１ ＭＡ　Ｙｉｎｐｅｎｇ，ＣＨＥＮ　Ｑｉａｎｇ，ＺＨＡＯ　Ｍｅｎｇｒａｎ，ｅｔ　ａｌ
０．７４０ ａｎｄ　０．８０４，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ． Ｏｕｒ　ｄａｔａ
ｒｅｖｅａｌｅｄ　ａ　ｒｉｃｈ　ｇｅｎｅｔｉｃ　ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ　ａｍｏｎｇ　ｎａｔｕｒａｌ
ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ　ｏｆ　Ｔ．ｍａｔｓｕｔａｋｅｉｎ　Ｃｈｉｎａ．Ｒｅｇｉｏｎａｌ
ｆｅａｔｕｒｅｓ　ｗｅｒｅ　ａｌｓｏ　ｅｖｉｄｅｎｔ　ｉｎ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ｇｅｎｅｔｉｃ
ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ　ａｍｏｎｇ　Ｔ．ｍａｔｓｕｔａｋｅ　ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ　ｆｒｏｍ
Ｔｉｂｅｔ　ａｎｄ　Ｙｕｎｎａｎ　ｗａｓ　ｈｉｇｈｅｒ　ｃｏｍｐａｒｅｄ　ｗｉｔｈ
ｔｈｏｓｅ　ｏｒｉｇｉｎａｔｉｎｇ　ｆｒｏｍ　Ｊｉｌｉｎ．Ｓａｍｐｌｅｓ　ｃｏｌｅｃｔｅｄ
ｉｎ　Ｔｉｂｅｔ　ａｎｄ　Ｙｕｎｎａｎ，ｗｈｅｒｅ　ｔｈｅ　ｈｏｓｔ　ｐｌａｎｔｓ
ｗｅｒｅ　ｂｒｏａｄ－ｌｅａｆ　ｔｒｅｅｓ，ｅｘｈｉｂｉｔｅｄ　ａ　ｃｌｏｓｅｒ　ｇｅｎｅｔｉｃ
ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ　 ｃｏｍｐａｒｅｄ　 ｗｉｔｈ　 ｔｈｅ　 ｃｏｎｉｆｅｒ－
ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　Ｊｉｌｉｎ　ｓｔｒａｉｎｓ．
３　Ｄｉｓｃｕｓｓｉｏｎ
　　ＩＴＳ　ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ　ａｒｅ　ｔｈｅ　ｐｒｅｆｅｒｒｅｄ　ｍｏｌｅｃｕｌａｒ
ｍａｒｋｅｒｓ　ｆｏｒ　ｉｄｅｎｔｉｆｙｉｎｇ　ａｎｄ　ｃｌａｓｓｉｆｙｉｎｇ　ｆｕｎｇｉ［１９］．
Ｈｏｗｅｖｅｒ，ｏｕｒ　ｄａｔａ　ｒｅｖｅａｌｅｄ　ｓｅｔｓ　ｏｆ　ｏｖｅｒｌａｐｐｉｎｇ
ｐｅａｋｓ　ｉｎ　ｔｈｅ　ＩＴＳ　ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ　ｏｆ　Ｔ．ｍａｔｓｕｔａｋｅ
ｓｐｅｃｉｍｅｎｓ　ｆｒｏｍ　Ｊｉｌｉｎ　ｔｈａｔ　ｎｅｃｅｓｓｉｔａｔｅｄ　ａ　ｃｌｏｎｉｎｇ
ｓｔｅｐ　ｐｒｉｏｒ　ｔｏ　ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ　ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ．Ｐｒｅｖｉｏｕｓｌｙ，
ＨＵＡＮＧｅｔ　ａｌ［２０］ｒｅｐｏｒｔｅｄ　ｔｈａｔ　ｆａｉｌｕｒｅ　ｔｏ　ｄｉｒｅｃｔｌｙ
ｓｅｑｕｅｎｃｅ　ＩＴＳ　ｒｅｇｉｏｎｓ　ｏｆ　Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓ　ｎｅｂｒｏｄｅｎｓｉｓ
ｗａｓ　ｄｕｅ　ｔｏ　ｂａｓｅ　ｐａｉｒ　ｉｎｓｅｒｔｉｏｎ／ｄｅｌｅｔｉｏｎ
ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ｔｈｅ　ｔｗｏ　ｎｕｃｌｅｉ　ｏｆ　ｔｈａｔ
ｆｕｎｇｕｓ，ｌｅａｄｉｎｇ　ｕｓ　ｔｏ　ｓｐｅｃｕｌａｔｅ　ｔｈａｔ　ｓｉｍｉｌａｒ
ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓ　ａｐｐｌｙ　ｔｏ　ｔｈｅ　ｎｕｃｌｅｉ　ｏｆ　Ｔ．ｍａｔｓｕｔａｋｅ．
Ｔｈｅ　Ｖ４ａｎｄ　Ｖ９ｄｏｍａｉｎｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ＳＳＵ　ａｒｅ　ｈｉｇｈｌｙ
ｃｏｎｓｅｒｖｅｄ　ｉｎｔｅｒ－ｓｐｅｃｉｆｉｃａｌｙ　ｂｕｔ　ｎｏｔ　ｉｎｔｒａ－
ｓｐｅｃｉｆｉｃａｌｙ　ａｎｄ，ａｃｃｏｒｄｉｎｇ　ｔｏ　ＭＯＵＨＡＭＡＤＯＵ
ｅｔ　ａｌ［７］，ｃｏｕｌｄ　ｓｅｒｖｅ　ａｓ　ａ　ＤＮＡ　ｂａｒｃｏｄｅ　ｆｏｒ
Ｔｒｉｃｈｏｌｏｍａａｎｄ　ｏｔｈｅｒ　ｂａｓｉｄｉｏｍｙｃｅｔｅｓ．Ｏｕｒ　ｄａｔａ
ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ｓｅｑｕｅｎｃｅ　ｏｆ　ｔｈｅ　Ｖ４ｄｏｍａｉｎ　ｉｎ　ａｌ
ｔｈｅ　ｓａｍｐｌｅｓ　ｅｘａｍｉｎｅｄ　ｉｎ　ｔｈｉｓ　ｓｔｕｄｙ　ｗａｓ　ｉｄｅｎｔｉｃａｌ
ｔｏ　ｔｈｅ　Ｖ４ ｄｏｍａｉｎ　ｏｆ　Ｔ． ｍａｔｓｕｔａｋｅ　ＳＳＵ
ｄｅｐｏｓｉｔｅｄ　 ｉｎ　 ＧｅｎＢａｎｋ （Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ　 Ｎｏ．
ＡＦ４６５６１７．１）．Ｔｈｉｓ　ｍａｋｅｓ　ｔｈｅ　Ｖ４ｄｏｍａｉｎ　ｍｏｒｅ
ｓｕｉｔａｂｌｅ　ｆｏｒ　ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｔ． ｍａｔｓｕｔａｋｅ
ｃｏｍｐａｒｅｄ　ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　Ｖ９ｒｅｇｉｏｎ　ｓｉｎｃｅ　ｔｈｅｒｅ　ｗａｓ
ｏｎｌｙ　ａ　９８％ｓｉｍｉｌａｒｉｔｙ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ｔｈｅ　Ｖ９ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ
ｏｆ　ｔｈｅ　ｔｅｓｔ　ｓａｍｐｌｅｓ　ａｎｄ　ｔｈｅ　Ｖ９ｄｏｍａｉｎ　ｏｆ　Ｔ．
ｍａｔｓｕｔａｋｅ　 ＳＳＵ　 ｄｅｐｏｓｉｔｅｄ　 ｉｎ　 ＧｅｎＢａｎｋ
（Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ　Ｎｏ．ＡＦ４６５６１７．１）．
Ｔｈｅ　ＩＧＳ１－ＲＦＬＰ　ｍｅｔｈｏｄ　ｉｓ　ｍｏｒｅ　ｃｏｓｔ－
ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ　ａｎｄ　ｒｅｄｕｃｅｓ　ｔｈｅ　ｄｅｐｅｎｄｅｎｃｅ　ｏｎ
ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ　ｃｏｍｐａｎｉｅｓ，ａｎｄ　ｉｓ　ｗｉｄｅｌｙ　ｕｓｅｄ　ｉｎ
ｇｅｎｅｔｉｃ　ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｓｔｕｄｉｅｓ．Ａｌｔｈｏｕｇｈ　ｔｈｅ　ｂａｎｄ
ｐａｔｔｅｒｎｓ　ｏｂｓｅｒｖｅｄ　ｂｙ　ＰＡＧＥ　ａｌｏｎｅ　ｆａｉｌｅｄ　ｔｏ
ｄｉｓｔｉｎｇｕｉｓｈ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ｓａｍｐｌｅｓ　ｃｏｌｅｃｔｅｄ　ｆｒｏｍ　ｔｈｅ
ｔｈｒｅｅ　ｐｒｏｖｉｎｃｅｓ，ｃｌｅａｒ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓ　ｗｅｒｅ　ｅｖｉｄｅｎｔ
ａｆｔｅｒ　ｔｒｅａｔｍｅｎｔ　ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　Ｃｆｒ１３Ｉ ｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎ
ｅｎｚｙｍｅ　ａｎｄ　ｈｉｇｈ－ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎ　ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ
ＩＧＳ１－ＲＦＬＰ　ｄｉｇｅｓｔｉｏｎ　ｐｒｏｄｕｃｔｓ．
Ｏｕｒ　ｄａｔａ　ｄｅｍｏｎｓｔｒａｔｅｄ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ＩＴＳ　ａｎｄ
ＩＧＳ１ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ　ｏｆ　Ｔ．ｍａｔｓｕｔａｋｅ　ｓｔｒａｉｎｓ　ｅｘｈｉｂｉｔ
ｄｉｓｔｉｎｃｔｉｖｅ　ｒｅｇｉｏｎａｌ　ｆｅａｔｕｒｅｓ． Ａｌｔｈｏｕｇｈ　ｔｈｅｓｅ
ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ　ｗｅｒｅ　ｉｄｅｎｔｉｃａｌ　ｉｎ　ｓａｍｐｌｅｓ　ｃｏｌｅｃｔｅｄ　ｆｒｏｍ
ｓｉｔｅｓ　ｗｉｔｈｉｎ　ｔｈｅ　ｓａｍｅ　ｐｒｏｖｉｎｃｅ，ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ　ｉｎ
ｓａｍｐｌｅｓ　ｃｏｌｅｃｔｅｄ　ｉｎ　ｏｎｅ　ｐｒｏｖｉｎｃｅ　ｄｉｆｆｅｒｅｄ　ｆｒｏｍ　ｔｈｅ
ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ　ｒｅｃｏｒｄｅｄ　ｉｎ　ｓａｍｐｌｅｓ　ｆｒｏｍ　ａｎｏｔｈｅｒ
ｐｒｏｖｉｎｃｅ．Ｆｏｒ　ｅｘａｍｐｌｅ，ａｔ　ｐｏｓｉｔｉｏｎ　４７４ｏｆ　ＩＧＳ１，
ａｌ　ｔｈｅ　ｓａｍｐｌｅｓ　ｆｒｏｍ　Ｊｉｌｉｎ　ｈａｄ　ｏｖｅｒｌａｐｐｉｎｇ　Ｃ／Ｔ
ｐｅａｋｓ　ｗｈｅｒｅａｓ　ｓａｍｐｌｅｓ　ｆｒｏｍ　Ｙｕｎｎａｎ　ａｎｄ　Ｔｉｂｅｔ
ｈａｄ　ａ　Ｔ　ｒｅｓｉｄｕｅ．Ｔｈｅｒｅｆｏｒｅ，ｉｔ　ｍａｙ　ｂｅ　ｐｏｓｓｉｂｌｅ　ｔｏ
ｉｄｅｎｔｉｆｙ　ｔｈｅ　ｇｅｏｇｒａｐｈｉｃａｌ　ｏｒｉｇｉｎ　ｏｆ　ａ　ｓｔｒａｉｎ　ｂａｓｅｄ
ｏｎ　ｓｐｅｃｉｆｉｃ　ｓｉｔｅｓ　ｗｉｔｈｉｎ　ｔｈｅ　ＩＴＳ　ｏｒ　ＩＧＳ１
ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ． Ｆｕｒｔｈｅｒ　ｒｅｓｅａｒｃｈ　ｉｓ　ｒｅｑｕｉｒｅｄ　ｔｏ
ｄｅｔｅｒｍｉｎｅ　ｉｆ　ｉｔ　ｉｓ　ｐｏｓｓｉｂｌｅ　ｔｏ　ｕｓｅ　ＩＴＳ　ａｎｄ／ｏｒ　ＩＧＳ１
ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ　ｔｏ　ｉｄｅｎｔｉｆｙ　ｔｈｅ　ｈｏｓｔ　ｐｌａｎｔ　ａｓ　ａ　ｂｒｏａｄ－ｌｅａｆ
ｔｒｅｅ　ｏｒ　ａ　ｃｏｎｉｆｅｒ．
Ｓａｍｐｌｅｓ　ｆｒｏｍ　Ｊｉｌｉｎ　ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｅｄ　ｔｏ　ｔｙｐｅ　Ａ
ａｓ　ｄｅｓｉｇｎａｔｅｄ　ｉｎ　Ｒｅｆ．１０，ｗｈｅｒｅａｓ　ｔｗｏ　ｎｅｗ
ｔｙｐｅｓ，ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ　ｏｆ　１３８ｂｐ　ａｎｄ　２１９ｂｐ，ｗｅｒｅ
ｏｂｓｅｒｖｅｄ　ｉｎ　ｓａｍｐｌｅｓ　ｆｒｏｍ　Ｔｉｂｅｔ　ａｎｄ　Ｙｕｎｎａｎ，
ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｃｆｒ１３Ｉｄｉｇｅｓｔｓ　ｏｆ　ＩＧＳ１ｉｎ　Ｔ．
ｍａｔｓｕｔａｋｅ　ｓｔｒａｉｎｓ　ｆｒｏｍ　Ｔｉｂｅｔ　ａｎｄ　Ｙｕｎｎａｎ
ｒｅｖｅａｌｅｄ　ａ　ｓｅｑｕｅｎｃｅ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｆｒｏｍ　ｔｙｐｅｓ　Ａ－Ｈ
ｍａｐｐｅｄ　ｂｙ　ＧＵＥＲＩＮ－ＬＡＧＵＥＴＴＥ　ｅｔ　ａｌ［１０］ａｎｄ
Ｔ．ｍａｔｓｕｔａｋｅ　ｆｒｏｍ　Ｊａｐａｎ． ＳＨＡ　ｅｔ　ａｌ［１２］
ｒｅｐｏｒｔｅｄ　ｔｈａｔ　Ｔ．ｍａｔｓｕｔａｋｅ　ｓｔｒａｉｎｓ　ｆｒｏｍ　Ｙｕｎｎａｎ
ｂｅｌｏｎｇｅｄ　ｔｏ　ｔｙｐｅ　Ａ， ｂｕｔ　ｂａｓｅｄ　ｏｎ　ｏｕｒ
ｉｎｔｅｒｐｒｅｔａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ＩＧＳ　ｓｅｑｕｅｎｃｅ（ＤＱ３２３０５８），
ａｎｄ　ｔｈｅ　ｆｏｕｒ　ｆｒａｇｍｅｎｔｓ（２１９，１３３，６３，４５ｂｐ）
ｇｅｎｅｒａｔｅｄ　ｂｙ　Ｃｆｒ１３Ｉｄｉｇｅｓｔｉｏｎ，ｔｈｉｓ　ｉｓ　ｉｎｃｏｒｒｅｃｔ．
Ｉｎ　ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ，ｏｕｒ　ｄａｔａ　ｒｅｐｏｒｔｅｄ　ｈｅｒｅ　ｒｅｖｅａｌ
ｔｈｅ　ｅｘｉｓｔｅｎｃｅ　ｏｆ　ｕｎｉｑｕｅ　Ｔ．ｍａｔｓｕｔａｋｅ　ｇｅｒｍｐｌａｓｍ
ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ　ｉｎ　Ｃｈｉｎａ，ｗｈｉｃｈ　ｅｘｈｉｂｉｔ　ａｂｕｎｄａｎｔ
ｇｅｎｅｔｉｃ　ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ．
５２
ＡＣＴＡ　ＥＤＵＬＩＳ　ＦＵＮＧＩ　 Ｖｏｌ．１９
Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅｓ
［１］ＨＡＬＬ　ＩＲ，ＹＵＮ　Ｗ，ＡＭＩＣＵＣＣＩ　Ａ．Ｃｕｌｔｉｖａｔｉｏｎ　ｏｆ
ｅｄｉｂｌｅ　ｅｃｔｏｍｙｃｏｒｒｈｉｚａｌ　ｍｕｓｈｒｏｏｍｓ［Ｊ］． Ｔｒｅｎｄｓ
Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ，２００３，２１（１０）：４３３－４３８．
［２］ＧＩＬＬ　ＷＭ，ＧＵＥＲＩＮ－ＬＡＧＵＥＴＴＥ　Ａ，ＬＡＰＥＹＲＩＥ
Ｆ，ｅｔ　ａｌ． Ｍａｔｓｕｔａｋｅ－ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌ　ｅｖｉｄｅｎｃｅ　ｏｆ
ｅｃｔｏｍｙｃｏｒｒｈｉｚａ　ｆｏｒｍａｔｉｏｎ　ｂｅｔｗｅｅｎ　Ｔｒｉｃｈｏｌｏｍａ
ｍａｔｓｕｔａｋｅ　ａｎｄ　ｈｏｓｔ　ｒｏｏｔｓ　ｉｎ　ａ　ｐｕｒｅ　Ｐｉｎｕｓ　ｄｅｎｓｉｆｌｏｒａ
ｆｏｒｅｓｔ　ｓｔａｎｄ［Ｊ］．Ｎｅｗ　Ｐｈｙｔｏｌ，２０００，１４７（２）：
３８１－３８８．
［３］ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｓｐｅｃｉｅｓｆｕｎｇｏｒｕｍ．ｏｒｇ
［４］ＷＡＮＧ　Ｙ， ＨＡＬＬ　ＩＲ， ＥＶＡＮＳ　ＬＡ．Ｅｃｔｏｍｙ－
ｃｏｒｒｈｉｚａｌ　ｆｕｎｇｉ　ｗｉｔｈ　ｅｄｉｂｌｅ　ｆｒｕｉｔｉｎｇ　ｂｏｄｉｅｓ　１．
Ｔｒｉｃｈｏｌｏｍａ　ｍａｔｓｕｔａｋｅ　ａｎｄ　ｒｅｌａｔｅｄ　ｆｕｎｇｉ［Ｊ］．Ｅｃｏｎ
Ｂｏｔ，１９９７，５１（３）：３１１－３２７．
［５］ＨＯＳＦＯＲＤ　Ｄ，ＰＩＬＺ　Ｄ，ＭＯＬＩＮＡ　Ｒ．Ｅｃｏｌｏｇｙ　ａｎｄ
ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ　 ｏｆ　 ｔｈｅ　 ｃｏｍｍｅｒｃｉａｌｙ　 ｈａｒｖｅｓｔｅｄ
Ａｍｅｒｉｃａｎ　ｍａｔｓｕｔａｋｅ　ｍｕｓｈｒｏｏｍ［Ｍ］．Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐｔ．ｏｆ
Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ， Ｆｏｒｅｓｔ　Ｓｅｒｖｉｃｅ， Ｐａｃｉｆｉｃ　Ｎｏｒｔｈｗｅｓｔ
Ｒｅｓｅａｒｃｈ　Ｓｔａｔｉｏｎ，１９９７．
［６］ＷＨＩＴＥ　ＴＪ， ＢＲＵＮＳ　Ｔ， ＬＥＥ　Ｓ，ｅｔ　ａｌ．
Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｄｉｒｅｃｔ　ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ　ｏｆ　ｆｕｎｇａｌ
ｒｉｂｏｓｏｍａｌ　ＲＮＡ　ｇｅｎｅｓ　ｆｏｒ　ｐｈｙｌｏｇｅｎｉｅｓ． ＰＣＲ
ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ：ａｇｕｉｄｅ　ｔｏ　ｍｅｔｈｏｄｓ　ａｎｄ　ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ［Ｍ］．
Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ：Ｓａｎ　Ｄｉｅｇｏ　Ａｃａｄｅｍｉｃ　Ｐｒｅｓｓ， １９９０：
３１５－３２２．
［７］ＭＯＵＨＡＭＡＤＯＵ　Ｂ，ＣＡＲＲＩＣＯＮＤＥ　Ｆ，ＧＲＹＴＡ
Ｈ，ｅｔ　ａｌ． Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ　ｏｆ　ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ
ｒｉｂｏｓｏｍａｌ　ＤＮＡ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｆｕｎｇａｌ　ｇｅｎｕｓ　Ｔｒｉｃｈｏｌｏｍａ：
Ｂａｒｃｏｄｉｎｇ　ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ［Ｊ］．Ｆｕｎｇａｌ　Ｇｅｎｅｔ　Ｂｉｏｌ，
２００８，４５（９）：１２１９－１２２６．
［８］ＭＵＲＡＴＡ　Ｈ，ＹＡＭＡＤＡ　Ａ．ｍａｒＹ１，ａ　ｍｅｍｂｅｒ　ｏｆ
ｔｈｅ　ｇｙｐｓｙ　 ｇｒｏｕｐ　 ｏｆ　 ｌｏｎｇ　 ｔｅｒｍｉｎａｌ　 ｒｅｐｅａｔ
ｒｅｔｒｏｅｌｅｍｅｎｔｓ　 ｆｒｏｍ　 ｔｈｅ　 ｅｃｔｏｍｙｃｏｒｒｈｉｚａｌ
ｂａｓｉｄｉｏｍｙｃｅｔｅ　Ｔｒｉｃｈｏｌｏｍａ　ｍａｔｓｕｔａｋｅ ［Ｊ］． Ａｐｐｌ
Ｅｎｖｉｒｏｎ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ，２０００，６６（８）：３６４２－３６４５．
［９］ ＭＵＲＡＴＡ　Ｈ，ＭＩＹＡＺＡＫＩ　Ｙ，ＹＡＭＡＤＡ　Ａ．
ｍａｒＹ２　Ｎ，ａ　ＬＩＮＥ－ｌｉｋｅ　ｎｏｎ－ｌｏｎｇ　ｔｅｒｍｉｎａｌ　ｒｅｐｅａｔ
（ｎｏｎ－ＬＴＲ）ｒｅｔｒｏｅｌｅｍｅｎｔ　ｆｒｏｍ　ｔｈｅ　ｅｃｔｏｍｙｃｏｒｒｈｉｚａｌ
ｈｏｍｏｂａｓｉｄｉｏｍｙｅｅｔｅ　Ｔｒｉｃｈｏｌｏｍａ　ｍａｔｓｕｔａｋｅ ［Ｊ］．
Ｂｉｏｓｃｉ　Ｂｉｏｔｅｃｈ　Ｂｉｏｃｈｅｍ，２００１，６５（１０）：２３０１－２３０５．
［１０］ＧＵＥＲＩＮ－ＬＡＧＵＥＴＴＥ　Ａ， ＭＡＴＳＵＨＩＴＡ　 Ｎ，
ＫＩＫＵＣＨＩ　Ｋ，ｅｔ　ａｌ．Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ａ　ｐｒｅｖａｌｅｎｔ
Ｔｒｉｃｈｏｌｏｍａ　ｍａｔｓｕｔａｋｅ　ｒｉｂｏｔｙｐｅ　ｉｎ　Ｊａｐａｎ　ｂｙ　ｒＤＮＡ
　　ＩＧＳ１ｓｐａｃｅｒ　ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｍｙｃｏｌ　Ｒｅｓ，２００２，
１０６（４）：４３５－４４３．
［１１］ＭＡＴＳＵＳＨＩＴＡ　Ｎ，ＫＩＫＵＣＨＩ　Ｋ，ＳＡＳＡＫＩ　Ｙ，ｅｔ
ａｌ．Ｇｅｎｅｔｉｃ　ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ　ｏｆ　Ｔｒｉｃｈｏｌｏｍａ　ｍａｔｓｕｔａｋｅ
ａｎｄ　Ｔ．ｎａｕｓｅｏｓｕｍｆｒｏｍ　ｔｈｅ　Ｎｏｒｔｈｅｒｎ　Ｈｅｍｉｓｐｈｅｒｅ
ｂａｓｅｄ　ｏｎ　ａｎａｌｙｓｅｓ　ｏｆ　ｒｉｂｏｓｏｍａｌ　ＤＮＡ　ｓｐａｃｅｒ　ｒｅｇｉｏｎｓ
［Ｊ］．Ｍｙｃｏｓｃｉｅｎｃｅ，２００５，４６（２）：９０－９６．
［１２］ＳＨＡ　Ｔ，ＺＨＡＮＧ　Ｈ，ＤＩＮＧ　Ｈ，ｅｔ　ａｌ．Ｇｅｎｅｔｉｃ
ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　Ｔｒｉｃｈｏｌｏｍａ　ｍａｔｓｕｔａｋｅ　ｉｎ　Ｙｕｎｎａｎ
Ｐｒｏｖｉｎｃｅ［Ｊ］．Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｓｃｉ　Ｂｕｌ，２００７，５２（９）：
１２１２－１２１６．
［１３］ＬＩＡＮ　ＣＬ，ＮＡＲＩＭＡＴＳＵ　Ｍ，ＮＡＲＡ　Ｋ，ｅｔ　ａｌ．
Ｔｒｉｃｈｏｌｏｍａ　ｍａｔｓｕｔａｋｅ　ｉｎ　ａ　ｎａｔｕｒａｌ　Ｐｉｎｕｓ　ｄｅｎｓｉｆｌｏｒａ
ｆｏｒｅｓｔ：ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｅｎｃｅ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ａｂｏｖｅ－ａｎｄ　ｂｅｌｏｗ－
ｇｒｏｕｎｄ　ｇｅｎｅｔｓ，ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ　ｗｉｔｈ　ｍｕｌｔｉｐｌｅ　ｈｏｓｔ　ｔｒｅｅｓ
ａｎｄ　 ａｌｔｅｒａｔｉｏｎ　 ｏｆ　 ｅｘｉｓｔｉｎｇ　 ｅｃｔｏｍｙｃｏｒｒｈｉｚａｌ
ｃｏｍｍｕｎｉｔｉｅｓ［Ｊ］．Ｎｅｗ　Ｐｈｙｔｏｌ，２００６，１７１（４）：
８２５－８３６．
［１４］ＢＡＯ　ＤＰ，ＫＯＩＫＥ　Ａ，ＹＡＯ　ＦＪ，ｅｔ　ａｌ．Ａｎａｌｙｓｅｓ　ｏｆ
ｔｈｅ　ｇｅｎｅｔｉｃ　ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　ｍａｔｓｕｔａｋｅ　ｉｓｏｌａｔｅｓ　ｃｏｌｅｃｔｅｄ
ｆｒｏｍ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｅｃｏｌｏｇｉｃａｌ　ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔｓ　ｉｎ　Ａｓｉａ［Ｊ］．Ｊ
Ｗｏｏｄ　Ｓｃｉ，２００７，５３（４）：３４４－３５０．
［１５］ＭＡ　ＤＬ，ＹＡＮＧ　ＧＴ，ＭＵ　ＬＱ，ｅｔ　ａｌ．Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ
ｏｆ　ＳＲＡＰ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｇｅｎｅｔｉｃ　ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　Ｔｒｉｃｈｏｌｏｍａ
ｍａｔｓｕｔａｋｅ　ｉｎ　ｎｏｒｔｈｅａｓｔｅｒｎ　Ｃｈｉｎａ ［Ｊ］． Ａｆｒ　Ｊ
Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ，２０１０，９（３８）：６２４４－６２５０．
［１６］ＭＡＯ　ＸＬ．Ｍｕｓｈｒｏｏｍ　ｉｎ　Ｃｈｉｎａ［Ｍ］．Ｂｅｉｊｉｎｇ：
Ｓｃｉｅｎｃｅ　Ｐｒｅｓｓ，２００９：１３８．（ｉｎ　Ｃｈｉｎｅｓｅ）
［１７］ＧＯＮＺＡＬＥＺ　Ｐ，ＬＡＢＡＲＥＲＥ　Ｊ．Ｓｅｑｕｅｎｃｅ　ａｎｄ
ｓｅｃｏｎｄａｒｙ　ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ　ｓｍａｌ－
ｓｕｂｕｎｉｔ　Ｖ４，Ｖ６，ａｎｄ　Ｖ９ｄｏｍａｉｎｓ　ｒｅｖｅａｌ　ｈｉｇｈｌｙ
ｓｐｅｃｉｅｓ－ｓｐｅｃｉｆｉｃ　ｖａｒｉａｔｉｏｎｓ　ｗｉｔｈｉｎ　ｔｈｅ　ｇｅｎｕｓ　Ａｇｒｏｃｙｂｅ
［Ｊ］．Ａｐｐｌ　Ｅｎｖｉｒｏｎ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ，１９９８，６４（１１）：
４１４９－４１６０．
［１８］ＨＥＮＲＩＯＮ　Ｂ，ＬＥ　ＴＡＣＯＮ　Ｆ，ＭＡＲＴＩＮ　Ｆ．Ｒａｐｉｄ
ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ　 ｏｆ　 ｇｅｎｅｔｉｃ　 ｖａｒｉａｔｉｏｎ　 ｏｆ
ｅｃｔｏｍｙｃｏｒｒｈｉｚａｌ　ｆｕｎｇｉ　ｂｙ　ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｒｉｂｏｓｏｍａｌ
ＲＮＡ　ｇｅｎｅｓ［Ｊ］．Ｎｅｗ　Ｐｈｙｔｏｌ，１９９２，１２２：２８９－２９８．
［１９］ＢＲＯＣＫ　ＰＭ，ＤＯＲＩＮＧ　Ｈ，ＢＩＤＡＲＴＯＮＤＯ　ＭＩ．
Ｈｏｗ　ｔｏ　ｋｎｏｗ　ｕｎｋｎｏｗｎ　ｆｕｎｇｉ：ｔｈｅ　ｒｏｌｅ　ｏｆ　ａ
ｈｅｒｂａｒｉｕｍ［Ｊ］．Ｎｅｗ　Ｐｈｙｔｏｌ，２００９，１８１（３）：７１９－７２４．
［２０］ＨＵＡＮＧ　ＣＹ，ＸＵ　ＪＹ，ＧＡＯ　Ｗ，ｅｔ　ａｌ．Ａ　ｒｅａｓｏｎ
ｆｏｒ　ｏｖｅｒｌａｐ　ｐｅａｋｓ　ｉｎ　ｄｉｒｅｃｔ　ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ　ｏｆ　ｒＲＮＡ　ｇｅｎｅ
ＩＴＳ　ｉｎ　Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓ　ｎｅｂｒｏｄｅｎｓｉｓ［Ｊ］．ＦＥＭＳ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ
Ｌｅｔｔ，２０１０，３０５（１）：１４－１７．
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