全 文 ：第 35 卷第 5 期
2016 年 10 月
中 国 野 生 植 物 资 源
Chinese Wild Plant Ｒesources
Vol． 35 No． 5
Oct． 2016
doi:10． 3969 / j． issn． 1006 － 9690． 2016． 05． 010
收稿日期:2016 － 03 － 12
基金项目:湖南省科技计划一般项目(2014NK3053);湖南省教育厅科学研究一般项目(15C0807)。
作者简介:张朝辉(1980—)，女，硕士，从事色谱与药物分析研究。E － mail:zhangzhaohui113@ 126． com
HPLC法同时测定薜荔中的芦丁和绿原酸含量
张朝辉，丁芳林
(湖南生物机电职业技术学院，湖南 长沙 410127)
摘 要 采用 HPLC法对薜荔不同部位中的芦丁和绿原酸含量进行了测定。方法采用 InertSustain C18色谱柱，乙腈
－ 0． 2%磷酸水溶液作为流动相，对薜荔叶、薜荔壳和薜荔籽中的芦丁和绿原酸含量进行了测定比较。结果表明:
芦丁和绿原酸在 25 ～200μg /mL范围内的浓度与峰面积均呈良好的线性关系，平均回收率分别为 101． 4%和 99． 2%;
薜荔不同部位中绿原酸的含量顺序为:薜荔叶 ＞薜荔壳 ＞薜荔籽;薜荔叶中芦丁含量远远大于薜荔壳和薜荔籽。
本方法简单、快速、准确，重复性好，可以明确了解薜荔中不同药用部位绿原酸及芦丁的含量差异，这将为薜荔的进
一步开发利用提供理论依据。
关键词 薜荔;芦丁;绿原酸;高效液相色谱法
中图分类号:Ｒ284． 1 文献标识码:A 文章编号 1006 － 9690(2016)05 － 0037 － 04
Simultaneous Determination for the Contents of Ｒutin
and Chlorogenic Acid in Ficus pumila L． by HPLC
Zhang Zhaohui，Ding Fanglin
(Hunan Biological and Electromechanical Polytechnic College，Changsha 410127，China)
Abstract An HPLC method was developed for the determination of the contents of rutin and chlorogenic
acid in different parts of Ficus pumila L． An InertSustain C18column was used． The mobile phase consis-
ted of acetonitrile and 0． 2% aqueous phosphoric acid． The contents of rutin and chlorogenic acid in leaf，
shell and seed were compared． The results showed that concentrations of rutin and chlorogenic acid in the
range of 25 ～200μg /mL had a good linear relationship with peak area，the average recovery were 101． 4%
and 99． 2% for rutin and chlorogenic acid respectively;the content sequence of chlorogenic acid in differ-
ent parts of Ficus pumila L． is as follows:leaf ＞ shell ＞ seed;the rutin content in leaf is far greater than
in shell and seed． the method is simple，rapid，accurate，reproducible and can be used to clearly under-
stand the content differences of chlorogenic acid and rutin in different parts of Ficus pumila L．，which
will provide a theoretical basis for the further and rational development and utilization of Ficus pumila L．
Key words Ficus pumila L．;rutin;chlorogenic acid;HPLC
薜荔是桑科榕属植物［1］，主产我国，分布广，野
生资源极为丰富，其生长不择土壤、气候，耐干旱，极
易人工种植，是一种很有开发潜力的安全、健康性新
型天然植物资源。
薜荔含有丰富的黄酮类物质，广泛分布在薜荔
的叶、种子等部位［2 － 3］，具有抗动脉硬化、降胆固醇、
抗菌、抗炎、增强免疫、祛风除湿、活血通络等作
用［4 － 5］。魏伟等［6］对薜荔的干燥花序托进行化学成
分研究，确定其化学成分中存在芦丁和绿原酸。绿
原酸具抗菌、抗病毒、抗氧化作用，芦丁具抗氧化、抗
病毒、舒张血管作用。薜荔中芦丁和绿原酸的含量
测定对薜荔的开发有非常重要的意义。何鹏等［7］
对广王不留行(薜荔的干燥花序托)中的芦丁和绿
原酸含量进行了同时测定，目前关于同时测定薜荔
不同药效部位中绿原酸和芦丁含量的研究尚未见
报道。
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中 国 野 生 植 物 资 源 第 35 卷
本文在前人研究的基础上，选取了薜荔中作为
凉粉食材的薜荔壳和薜荔籽以及最易采摘且来源最
丰富的药用活性部位薜荔叶作为研究对象，对其中
的芦丁和绿原酸含量进行了测定和比较，以期了解
不同药用部位中绿原酸及芦丁的含量是否有差异。
1 材料与方法
1． 1 材料与试剂
材料:薜荔果采集于湖南省永州市祁阳县肖家
村镇八庙村，薜荔叶采集于湖南生物机电职业技术
学院藤本研究基地，样品均经湖南生物机电职业技
术学院藤本所专家进行鉴定。
试剂:芦丁对照品(中国食品药品检定研究
院)，绿原酸对照品(中国药品生物制品检定所)，乙
腈(色谱纯，美国 TEDIA 公司)，其它试剂均为分析
纯，所用水均为超纯水。
1． 2 仪器
LC －20AT 高效液相色谱仪 (配备 LC －20AD
高压泵、SPD － M20A 检测器、LC － solution 工作站、
CTO －20A柱温箱、SIL － 20A 自动进样器，日本岛
津公司)，HH －600 数显三用恒温水浴箱(无锡沃信
仪器有限公司)，KQ － 100E 型超声波(昆山市超声
仪器有限公司)，FW177 型中草药粉碎机(上海隆拓
仪器设备有限公司)，ZOOMWO － L 系列超纯水系
统，美国奥豪斯 CP64C 分析天平(天津市顺诺仪器
科技有限公司)。
1． 3 色谱条件
色谱柱为 InertSustain C18柱(4． 6mm × 250 mm，
5μm)，流速 1． 0 mL /min，进样量 20 μL，柱温为 35
℃。检测波长:绿原酸 326 nm，芦丁 254 nm。
流动相:流动相采用 410 mL 0． 2%磷酸水溶液，
用 0． 45 μm水膜过滤，与 90 mL 乙腈混匀，超声脱
气 15 min备用。
1． 4 对照品储备溶液的制备
先准确称取经 105 ℃干燥至恒重的绿原酸和芦
丁对照品各 10 mg，加甲醇溶解定容至 1 mL，分别配
成 1 mg /mL的绿原酸和芦丁储备液，再由标准储备
液根据需要配成所需浓度的混合标准溶液。标准储
备液及由其稀释而成的标准混合溶液均置于 4 ℃冰
箱中保存。
1． 5 样品前处理
1． 5． 1 薜荔叶的处理
将采取的新鲜薜荔叶置于 70 ℃烘箱中干燥，粉
碎，过 40 目筛。称取干粉 1． 00 g，加入 60%的乙醇
水溶液定容至 100 mL，浸提 1 h，在 75 ℃水浴超声 1
h。超声条件为:频率 40 kHz，功率 100 W。然后趁
热过滤，滤液冷却至室温用 60% 乙醇定容至 100
mL。提取液过 0． 45μm有机膜，备测。
1． 5． 2 薜荔籽的提取
将摘取的新鲜薜荔果切成小块，将果壳和薜荔
籽分离，薜荔籽置于 70 ℃烘箱中烘干，粉碎，过 40
目筛。称取干粉 1． 00 g，加入 60%的乙醇水溶液定
容至 100 mL，浸提 1 h，在 75 ℃超声 1 h。超声条件
为:频率 40 kHz，功率 100 W。趁热过滤，滤液冷却
至室温用 60% 乙醇定容至 100 mL。提取液过
0． 45μm有机膜，备测。
1． 5． 3 薜荔壳的提取
将摘取的新鲜薜荔果切成小块，将果壳和薜荔
籽分离，果壳置于 70 ℃烘箱中烘干，粉碎，过 40 目
筛。称取干粉 1． 00 g，加入 60%的乙醇水溶液定容
至 100 mL，浸提 1h，在 75℃超声 1 h。超声条件为:
频率 40 kHz，功率 100 W。趁热过滤，滤液冷却至室
温用 60%乙醇定容至 100 mL。提取液过 0． 45μm
有机膜，备测。
2 结果与分析
2． 1 色谱条件的优化
参考文献资料［7 － 8］，考察了不同流动相对分离
的影响。结果表明，采用梯度淋洗分离效果好，但是
流动相组成复杂且基线不稳定。本文在反复改变有
机相和水相配比的基础上，采用乙腈 － 0． 2%磷酸水
溶液(体积比 18∶ 82)作流动相，获得了合适的分析
时间和满意的分离效果。在波长选择上，比较绿原
酸和芦丁的紫外光谱图，发现两者的紫外吸收情况
相差很远，很难选取统一波长进行检测，实验中采用
PDA做检测器，选取绿原酸的检测波长为 326 nm，
芦丁的检测波长为 254 nm，获得了理想的实验
结果。
2． 2 提取条件的选择
提取条件对实验结果有很大的影响。常用的提
取方法有回流提取、索氏提取［9］等，但这些方法有操
作繁琐且耗时等缺点。本文在前人研究的基础上，采
用浸提法和超声提取法相结合，样品先用 60%的乙
醇水溶液浸提，然后再进行超声提取，此方法不仅操
作简便，缩短了提取时间，且获得了满意的提取效果。
2． 3 线性关系的考察
分别精密移取两种对照品储备溶液 0． 25 mL、
0． 5 mL、1． 0 mL、1． 5 mL和 2． 0 mL至 10 mL容量瓶
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第 5 期 张朝辉，等:HPLC法同时测定薜荔中的芦丁和绿原酸含量
中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，配成浓度为 25、50、
100、150 和 200 μg /mL的混合标准系列溶液。分别
精密吸取上述溶液 20 μL 注入色谱仪，按上述色谱
条件进行测定，色谱图见图 1。利用色谱峰面积对
溶液浓度进行线性回归，得到芦丁和绿原酸的线性
回归方程分别为:Y = 36 773X － 21 042 和 Y =
10 114 ． 0X + 10 357;相关系数分别为:0． 999 6 和
0． 999 8;两者在 25 ～ 200 μg /mL范围内均呈现良好
的线性关系。
a． 绿原酸;b． 芦丁
图 1 200μg /mL芦丁和绿原酸混合标样色谱图
2． 4 精密度
取同一浓度混合对照品溶液，在同样色谱条件
下，连续进样 5 次，测定绿原酸和芦丁峰面积的 ＲSD
分别为 0． 49% 和 0． 38%，结果表明仪器精密度
良好。
2． 5 稳定性
取同一经过处理后的薜荔叶样品，分别在 0、4、
8、12 h测定绿原酸和芦丁的峰面积，绿原酸和芦丁
的 ＲSD 分别为 0． 55%和 0． 84%。说明样品液在
12 h内稳定。
2． 6 重复性
取薜荔叶粉末 5 份，按薜荔叶的制备方法制备
样品，测定样品含量，绿原酸和芦丁的 ＲSD 分别为
0． 93%和 1． 27%，表明方法重复性良好。
2． 7 加样回收率
精密称取已知含量的薜荔叶样品 5 份，分别精密
加入一定量的绿原酸对照品和芦丁对照品，按薜荔叶
的制备方法制备样品，进样测定，计算回收率。结果
表明，绿原酸的平均回收率为 99． 2%(ＲSD =1． 2%)，
芦丁的平均回收率为 101． 4%(ＲSD =2． 0%)。
2． 8 样品测定
分别精密称取薜荔叶、薜荔籽和薜荔壳粉末各
3 份，按 1． 5 制备方法制得供试品溶液，按上述色谱
条件，进样 20 μL 注入液相色谱仪进行测定。结果
分析中通过比较目标物的紫外光谱图对样品色谱峰
进行定性和纯度比对，结果见图 2 和图 3。通过比
对，说明 2 个目标物的紫外光谱图和峰纯度基本与
标样一致。定量测定结果见色谱图 4 和表 1。由图
4 和表 1 可知，薜荔不同部位中绿原酸的含量顺序
为:薜荔叶 ＞薜荔壳 ＞薜荔籽;薜荔不同部位中芦丁
含量测定情况为:薜荔叶中芦丁含量为 0． 917%，但
是薜荔壳和薜荔籽中的芦丁在本方法中没有被检
出。参考文献资料，何鹏等［7］测得不同批次广东产
薜荔的干燥花序托(俗称果实，包括薜荔壳和薜荔
籽)中芦丁含量基本在 0． 04% ～ 0． 07%之间，这说
明薜荔壳和薜荔籽中芦丁的含量非常低，薜荔叶中
的芦丁含量远远大于薜荔壳和薜荔籽。
表 1 薜荔不同部位中绿原酸和芦丁含量 %
样品 薜荔叶 薜荔壳 薜荔籽
绿原酸含量
平均值
ＲSD
0． 325
1． 06
0． 254
0． 7
未检出
芦丁含量
平均值
ＲSD
0． 917
0． 66
未检出 未检出
3 讨论与结论
(1)实验结果表明，薜荔不同部位中绿原酸的
含量比较为:薜荔叶 ＞薜荔壳 ＞薜荔籽;薜荔不同部
位中芦丁含量比较为:薜荔叶中的芦丁含量较高，薜
荔壳和薜荔籽中芦丁的含量非常低，薜荔叶中的芦
丁含量远远大于薜荔壳和薜荔籽。其中薜荔壳和薜
荔籽中的芦丁可能因为浓度太低，在现有提取方法
中没有被检出，要获得准确含量，还需要进一步
浓缩。
(2)采用高效液相色谱法对薜荔不同部位中芦
丁和绿原酸含量进行了检测和比较，该法简单、快
速、准确，可以明确了解薜荔中不同药用部位绿原酸
及芦丁的含量差异，为薜荔的质量评价及其资源合
理开发利用提供了参考依据。
(3)薜荔是一种很有开发潜力的安全、健康性
新型天然植物资源，但其化学成分和药理作用均很
不明确，使其未能科学应用，造成了该植物资源的浪
费。因此有必要对薜荔中的化学成分和药理活性进
行深入研究，为进一步开发国家药用植物资源，扩大
其应用范围提供研究基础。
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中 国 野 生 植 物 资 源 第 35 卷
参考文献:
［1］吴松成． 薜荔的开发利用及栽培技术［J］． 林业科技通讯，2001
(1):38．
［2］裴健儒，姚茂君． 薜荔的营养成分及其功能性应用的探讨［J］．
农产品加工，2009，(1) :64 － 66．
［3］唐翠娥，梁瑞红，刘伟，等． 薜荔概述及研究进展［J］． 农产品
加工，2007，(2) :18 － 19．
［4］延玺，刘会青，邹永青，等． 黄酮类化合物生理活性及合成研究
进展［J］． 有机化学，2008，28(9):1534 ～ 1544．
［5］李凤林，李青旺，冯彩宁，等． 天然黄酮类化合物提取方法研究
进展［J］． 中国食品添加剂，2008，(5) :60 － 64．
［6］魏伟，范春林，王贵阳，等． 广王不留行的化学成分研究［J］．
中草药． 2014，45(5):615 － 621。
［7］何鹏，王英，金建平，等． HPLC同时测定广东王不留行中绿原
酸和芦丁的含量［J］．中国现代中药，2014，16(12):992 － 995．
［8］杜倩，汤道权，刘晓，等．药用植物蓬子菜不同药用部位中芦丁
及绿原酸的含量比较［J］． 安徽农业科学，2011，39(24):14632
－ 14633．
［9］薛晓丽． 高效液相色谱法测定金银花中绿原酸的含量［J］． 江
苏农业科学，2010 (2 ):296 － 297．
—04—