全 文 ：分光光度法测定垂头菊中黄酮含量的研究
胡树青　(青海民族学院化学系 , 青海西宁 810007)
摘要　采用分光光度法测定垂头菊中芦丁的含量。结果表明 ,吸光度在 0.180～ 0.732 范围内呈良好的线形关系 ,相关系数为 0.999 8。
芦丁回收率为 101%, RSD为 0.66%(n=6)。
关键词　分光光度法;垂头菊;芦丁
中图分类号　O656　　文献标识码　A　　文章编号　0517-6611(2007)07-01887-02
Determination of Flavonoid in Flos Cremanthodii with Spectrophotography
HU Shu-qing　(Chemistry Department , Qinghai Nationalities University, Xining, Qinghai 810007)
Abstract　 In this article, the content of flavonoid in Flos Cremanthodii was determined by spectrophotography method.The result showed that therewas
a good linear relationship at the range of 0.180～ 0.732.The relative coefficient was 0.999 8.The recovery rate of rutin was 101%, and the RSD was
0.66%(n=6).
Key words　 Spectrophotometer method;Flos Cremanthodii;Rutin
　　垂头菊(Flos Cremanthodii)为菊科垂头菊属多年草本植
物 ,生于海拔 4 200～ 4750m的山坡草地 、灌从及高山流石滩
上 ,分布于我国西藏南部和尼泊尔 。垂头菊体轻 、质软 、气芬
芳 、味微甘 ,能够清热 、消肿 、止痛 ,用于治疗风湿引起的疼
痛 、感染性发烧 、血热 、痛疽 、疗疮热性炭疽等症 。黄酮类化
合物具有较强的生理活性 ,是垂头菊中一类重要的化合物。
笔者用分光光度计法测定垂头菊中总黄酮的含量。
1　材料与方法
1.1　材料　①供试植物。垂头菊为 2001年从西藏林州采
集。②试剂。甲醇 、石油醚等均为分析纯 。芦丁(批号:080-
9002 ,中国药品生物制品检定所)。 ③主要仪器。HH-4 数显
恒温水浴锅(常州国华电器有限公司),RE5285A旋转蒸发器
(上海亚荣生华仪器厂), SHB-B95型循环水式多用真空泵(郑
州长城科工贸有限公司),KQ3200B型超声波清洗器(昆山市
超身仪器有限公司),索式提取器 , 721-分光光度计(上海第三
仪器厂)。
1.2　方法
1.2.1　样品提取。
(1)回流法。精确称取垂头菊粗粉(过 100目筛)3.000g
置索式提取器中 ,加 60ml石油醚回流提取至无色 ,冷却后 ,
倾出石油醚提取液 ,加 60ml甲醇 ,回流提取至无色 ,冷却 ,过
滤 ,将提取液转入 50ml容量瓶中 ,用甲醇定容至刻度。
(2)超声波法。精确称取垂头菊粗粉(过 40目筛)3.000 g
置于圆底烧瓶中 ,加入甲醇 20ml置于超声清洗器中(50 ℃)
超声提取 45min;甲醇液过滤 ,滤渣和滤纸上再加入 20ml甲
醇 ,置相同条件下超声提取 30min;再次过滤后 ,滤渣和滤纸
上再加入 20ml甲醇 ,置相同条件下超声提取 20min ,减压蒸
干后残渣加 20ml甲醇超声提取 30min ,上层清液转入 50ml
容量瓶中 ,合并滤液 ,用甲醇定容至刻度。
1.2.2　样品分析。
1.2.2.1　对照品储备液的制备 。取 120 ℃减压干燥至恒重
的芦丁对照品 20mg ,置 100ml容量瓶中 ,加甲醇定容至刻度 ,
摇匀 ,即得 0.2000mg/ml的对照品溶液 。
1.2.2.2　吸收波长的确定。取对照品 2 ml置 25 ml容量瓶
作者简介　胡树青(1964-),男 , 青海循化人 ,副教授 ,从事物理化学
研究。
收稿日期　2006-12-05
中 ,加水 10ml ,加 5%亚硝酸钠溶液 1 ml ,不断摇匀后放置 6
min。加 10%硝酸铝溶液 1ml ,不断摇匀后放置 6 min ,加入 1
mol/L氢氧化钠溶液 10ml ,再加水定容至刻度 ,摇匀 ,放置 15
min。在分光光度计上于 420～ 640 nm处扫描 ,由扫描结果确
定测定检测波长为 508 nm。
图 1　芦丁的吸收曲线
1.2.2.3　标准曲线的绘制。精确吸取对照品储备液 0、2.0 、
3.0、4.0、6.0、8.0、10.0 ml ,分别置于 25 ml 容量瓶中 ,按照
“1.2.2.2”中的方法 ,以第 1份溶液为空白 ,在 508 nm波长处
测定吸光度 ,以吸光度为横坐标 ,浓度为纵坐标 ,绘制标准曲
线 ,得标准曲线为:C=-0.00466+0.1148A , R=0.999 8 ,线
性范围为0.180～ 0.732 ,具体结果见表 1、图 2。
　　表1 芦丁溶液的标准曲线
芦丁标准溶液体积∥ml 浓度∥mg/ml 吸光度A值
　　　　　0.0 0.000 0.000
2.0 0.016 0.180
3.0 0.024 0.249
4.0 0.032 0.318
6.0 0.048 0.458
8.0 0.064 0.607
10.0 0.080 0.732
1.2.2.4　稳定性考察试验。取样品溶液 0.5 ml ,置 25ml容
量瓶中 , 按照“1.2.2.2”中的方法 ,每隔 10min测定 1次 。
1.2.2.5　样品回收率试验。取样品 6份 ,每份 0.5ml ,分为 2
组 ,每份样品中分别加入芦丁对照品 3 ml ,按照“1.2.2.2”中
的方法 ,制得溶液 6份 ,在波长为 508 nm 处分别测定其吸光
度 ,计算回收率。
1.2.2.6　重复性试验。取样品溶液 3份 ,每份吸取 0.5 ml于
安徽农业科学 , Journal of Anhui Agri.Sci.2007 ,35(7):1887-1888　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　责任编辑　陈娟　责任校对　胡先祥
DOI :10.13989/j.cnki.0517-6611.2007.07.002
图2　芦丁溶液的标准曲线
25 ml容量瓶中 ,按照“1.2.2.2”中的方法 ,分别测定样品中的
总黄酮含量 ,比较方法的重复性。
1.2.2.7　样品中的总黄酮含量测定 。精确吸取制备好的 6
份样品溶液各 0.5 ml于 25 ml容量瓶中 ,按照“1.2.2.2”中的
方法进行测定 ,并计算样品中总黄酮的含量。
2　结果与分析
2.1　稳定性　试验表明 ,30 min内样品溶液稳定性最好 ,时
间延长 ,样品吸光度下降 ,故选择测定时间为 10～ 30min。
2.2 　样品回收率 　试验表明 ,样品回收率平均值为
100.94%,说明该方法回收率较高。
2.3　样品中的总黄酮含量及方法的重复性　试验表明 ,样
品中总黄酮平均含量为 16.30 mg , RSD 为 0.66%,说明该方
法重复性良好。
2.4　提取方法比较　由表 2可知 ,用溶剂法和超声波法均
能提取出样品中的总黄酮 ,其中溶剂法提取的总黄酮平均含
量较高 ,说明溶剂法能更彻底地提取出样品中的总黄酮。
　　表2 样品含量
样品 样品含量∥mg/g 平均含量∥mg/ g
溶剂提取 重复 1 15.72
重复 2 16.20 16.30
重复 3 16.97
超声提取 重复 1 15.77
重复 2 15.53 15.55
重复 3 15.34
3　讨论
根据Al(NO3)3 在碱性条件下与黄酮形成络合物会在一
定波长下呈现最大吸收峰的特点 ,利用 NaNO2-Al(NO3)3 -
NaOH体系在分光光度计上测定垂头菊中的总黄酮含量 。试
验表明 ,该法线性关系好 ,简便快捷 ,条件一致时 ,可比性强 ,
结合HPLC分析数据进行修正后可用作定量分析 。
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(上接第 1886页)
OD 460值几乎都降为 0;当底物 LAS浓度大于 1200 mg/L时 ,
菌株停止生长。
2.5　培养时间对 LAS降解率的影响　由图 9可知 ,菌株降
解LAS的最佳时间为 24 h ,虽然延长培养时间 LAS的降解
率有所增加 ,但效果不明显 。
图9　培养时间对 LAS降解率的影响
3　结论
试验表明 ,LAS降解菌的最佳降解条件为温度 30 ℃、
pH值6.0、150ml装液量 、转速 120 r/min 、底物 LAS 浓度 200
～ 600 mg/L 、培养时间 24h 。该条件下 LAS降解菌的生长量
和降解率均达最大 ,分别为 0.443OD460 、89.4%。LAS 降解
菌株最高LAS耐受力可达 1 200mg/L。
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