全 文 ：毛果算盘子提取工艺及没食子酸含量测定*
黄红泓1，甄汉深2，柳贤福1
(1．广西中医药大学赛恩斯新医药学院，南宁 530222;2．广西中医药大学药学院，南宁 530001)
摘 要 目的 建立测定广西不同产地毛果算盘子中没食子酸含量的高效液相色谱(HPLC)法。方法 采用正交
实验优化毛果算盘子的提取工艺，用 HPLC法测定毛果算盘子中没食子酸的含量。色谱柱为 Hypersil C18柱(250 mm ×
4． 6 mm，5 μm) ，流动相为甲醇-0． 2%磷酸溶液(10∶ 90) ，检测波长为 270 nm，流速 1． 0 mL·min －1，柱温 30 ℃。结果
没食子酸在 0． 031 ～ 0． 186 μg呈良好的线性关系(r = 0． 999 9)，平均加样回收率为 102． 81%，ＲSD为 2． 05%(n = 9)。结
论 所建立的方法简单、稳定、重复性好，可用于毛果算盘子药材的质量控制。
关键词 毛果算盘子;没食子酸;提取工艺;含量测定;色谱法，高效液相
中图分类号 Ｒ286;Ｒ927． 1 文献标识码 B 文章编号 1004 － 0781(2015)03 － 0392 － 03
毛果算盘子为大戟科植物毛果算盘子(Glochidion
eriocarpum Champ．)的干燥地上部分，别名毛七公、漆
大伯、两面毛、漆大姑。味苦、涩，性平，全年可采收。
具有驱风利湿、散瘀、止血、消肿的功效，用于急性胃肠
炎、痢疾、风湿性关节痛、跌打损伤、创伤出血、湿疹、漆
疮、皮炎等的治疗［1］。其含有酚类、鞣质类［1-3］和三萜
类化合物，以及微量元素。韦松基等［4］对毛果算盘子
和算盘子的显微特征进行了比较研究。刘布鸣等［5-6］
采用薄层色谱研究表明，漆大姑药材与没食子酸对照
品色谱在相应的位置上显相同颜色斑点，并从漆大姑
中分离出没食子酸类化合物。
已有文献证实没食子酸具有抗炎、抗突变、抗氧化
等多种生物学活性［7］，对血管亦有收缩作用［8］。没食
子酸为毛果算盘子主要成分之一，其生物学活性与文
献记载的毛果算盘子功效相似，故选择没食子酸成分
为含量测定指标。目前文献报道只有用薄层扫描法测
定漆大姑中没食子酸的含量，笔者尚未见高效液相色
谱(HPLC)法测定的报道。因此，笔者在本实验中建
立毛果算盘子中没食子酸的 HPLC测定方法。
1 仪器与试药
1． 1 仪器 安捷伦 Agilent1200 高效液相色谱仪，可
变波长检测器(G-1313A)。LG16-W 高速微量离心机
(北京医用离心机厂)，SB3200T 超声波清洗仪(上海
能信超声有限公司) ，Millipore Simplicity-185 超纯水仪
(美国密里博公司) ，BP211D电子分析天平(德国赛多
利斯，精度:0． 01 mg)。
收稿日期 2014 － 01 － 21 修回日期 2014 － 02 － 15
基金项目 * 广西高校科学资助项目(LX2014668)
作者简介 黄红泓(1977 －) ，女，广西梧州人，讲师，硕士，
从事药学和中药学教学和科研工作。电话:0771 － 4736399，E-
mail:929762704@ qq． com。
1． 2 试药 没食子酸(中国食品药品检定研究院，批
号:110831-200803，供含量测定)。甲醇(美国 Fisher
科学世界公司，批号:A372-4)、乙腈为色谱纯(美国
Fisher科学世界公司，批号:A943-4)，其余试剂为分析
纯(北京化工厂)。毛果算盘子药材于 2012 年 4 月采
自广西 10 个地区，分别经广西中医药大学药学院中药
鉴定教研室宁小清副教授及广西中医药大学赛恩斯新
医药学院生药教研室苑敏副教授鉴定，均为大戟科植
物毛果算盘子(Glochidion eriocarpum Champ．)的干燥
地上部分(表 1)。标本存放于广西中医药大学赛恩斯
新医药学院标本室。
表 1 毛果算盘子药材编号与产地
序号 产地 序号 产地
S1 广西藤县太平镇 S6 广西蒙山县
S2 广西横县 S7 广西藤县濛江镇
S3 广西南宁市 S8 广西梧州市
S4 广西钦州市 S9 广西柳州市
S5 广西桂林市 S10 广西河池市
2 方法与结果
2． 1 色谱条件 采用 Hypersil C18柱(250 mm ×
4． 6 mm，5 μm) ;流动相为甲醇-0． 2%磷酸溶液(10∶
90) ;检测波长 270 nm;流速为 1． 0 mL·min －1。柱温
20 ℃;进样量 5 μL。
2． 2 溶液的制备 取 105 ℃干燥至恒重的没食子酸
对照品 1． 55 mg，精密称定，置 25 mL 量瓶，加甲醇适
量使溶解并定容，摇匀，即得浓度为0． 062 mg·mL －1
没食子酸对照品溶液。取毛果算盘子药材粉末约 1 g，
精密称定，精密加入甲醇 40 mL，称重，静置 12 h，超声
提取 40 min，放冷，用甲醇补足减失的质量，摇匀，滤
过，取续滤液于离心管，12 000 r·min －1离心 10 min，
·293· Herald of Medicine Vol. 34 No. 3 March 2015
取上清液 5 μL，注入液相色谱仪测定，即得。
2． 3 专属性实验 分别精密吸取上述没食子酸对照
品溶液和毛果算盘子供试品溶液各 5 μL进样分析，结
果见图 1。没食子酸的保留时间为 6． 0 min，与各自相
邻峰的分离度 ＞ 1． 5。
1．没食子酸
图 1 没食子酸对照品(A)和毛果算盘子样品(B)HPLC
色谱图
2． 4 供试品处理的正交实验 根据没食子酸的性质
及初步预实验结果，采用正交实验 L9(3
4)进行毛果算
盘子的甲醇超声提取工艺研究，以没食子酸的含量为
评价指标，正交设计表及分析结果见表 2 ～ 4。
表 2 正交设计因素水平表
水平 A/% B /mL C /min
1 80 20 30
2 90 30 40
3 100 40 50
A:甲醇浓度，B:甲醇用量，C:提取时间
因素极差 Ｒ越大，说明因素的水平改变对实验结
果影响越大。由实验结果的直观分析及方差分析可知，
影响没食子酸提取效果的因素大小顺序为 A ＞B ＞C，即甲
醇浓度 ＞甲醇用量 ＞提取时间，其中甲醇浓度和甲醇用量
对实验结果有显著性影响，根据实验结果确定最佳提取方
法为A3B3C2，即用100%甲醇40 mL超声处理40 min。
表 3 没食子酸 L9(3
4)正交实验表与结果
序号 A B C
D
(空白)
含量 /
(mg·g －1)
1 1 1 1 1 0． 242 1
2 1 2 2 2 0． 435 8
3 1 3 3 3 0． 512 1
4 2 1 2 3 0． 405 5
5 2 2 3 1 0． 582 5
6 2 3 1 2 0． 614 7
7 3 1 3 2 0． 631 2
8 3 2 1 3 0． 754 8
9 3 3 2 1 0． 932 1
K1 0． 397 0． 426 0． 537 0． 586
K2 0． 534 0． 591 0． 591 0． 561
K3 0． 773 0． 686 0． 575 0． 557
Ｒ 0． 376 0． 260 0． 054 0． 029
A:甲醇浓度，B:甲醇用量，C:提取时间
为进一步考察优选工艺的可靠性和稳定性，取 3
份 S1 号样品粉末，按上述最优工艺条件 A3 B3 C2进行
验证实验，按“1． 2． 1”项所述方法进行测定，结果没食
子酸含量为 0． 93，0． 91，0． 89 mg· g －1。平均含量
0． 91 mg·g －1，ＲSD = 1． 98%。与正交实验方案中的
最高值相同，说明优化成功。
表 4 没食子酸方差分析表
方差
来源
离差
平方和
f 方差 F P
A 0． 217 2 217． 0 19． 0 ＜ 0． 05
B 0． 104 2 104． 0 19． 0 ＜ 0． 05
C 0． 005 2 5． 0 19． 0 ＞ 0． 05
D(误差) 0． 00 2
A:甲醇浓度，B:甲醇用量，C:提取时间
2． 5 线性关系考察 精密吸取“2． 2”项对照品溶液 1，
2，3，4，5，6 mL，分别置于 10 mL量瓶中，加入甲醇定容，
摇匀，分别取上述 6 个不同浓度的对照溶液 5 μL 注入
高效液相色谱仪，按“2． 4”项色谱条件测定其峰面积。
以对照品溶液进样量(μg)为横坐标，其色谱峰峰面积
为纵坐标，绘制标准工作曲线，得出没食子酸回归方程
为 Y =3 090． 8X +1． 0，r =0． 999 9;结果表明没食子酸在
进样量为 0． 031 ～0． 186 μg之间呈良好的线性关系。
2． 6 精密度实验 精密吸取 S1 供试品溶液 5 μL，注
·393·医药导报 2015 年 3 月第 34 卷第 3 期
入高效液相色谱仪，按“2． 1”项色谱条件，连续进样 6
次，测定样品中没食子酸的峰面积。结果测得样品中
没食子酸峰面积 ＲSD为 1． 09%，表明所用液相色谱仪
的精密度较好。
2． 7 重复性实验 取 S1 毛果算盘子药材粉末 1 g，精
密称定，共取 6 份，按“2． 2”项供试品制备方法制备，
精密吸取供试品溶液 5 μL，按“2． 1”项色谱条件进行
测定，计算没食子酸含量，ＲSD为 2． 02%。结果表明，
用上述方法测定没食子酸的含量，重复性好。
2． 8 稳定性实验 取 S1 毛果算盘子药材粗粉约 1 g，
精密称定，按“2． 2”项供试品制备方法制备，室温下保
存，分别在 0，2，6，10，16，24 h 精密吸取供试品溶液
5 μL，注入液相色谱仪，按“2． 1”项色谱条件测定，考
察稳定性。结果测得样品中没食子酸峰面积 ＲSD 值
为 1． 47%，表明供试品溶液在 24 h内保持稳定。
2． 9 加样回收率实验 取已知含量 S1 号样品粉末约
0． 5 g，精密称定，精密加入甲醇 40 mL，精密加入没食
子酸 0． 37，0． 45，0． 56 mg(加入量为样品含量的 80%，
100%和 120%)。按“2． 2”项供试品制备方法制备，各
平行制备 3 份，分别测定含量，计算加样回收率(毛果
算盘子药材没食子酸含量以0． 91 mg·g －1计) ，结果见
表 5。实验结果可知，没食子酸的平均加样回收率为
102． 81%，ＲSD =2． 05%。
表 5 毛果算盘子加样回收实验结果 n = 9
样品质量 /
g
原有量 加入量 测得量
mg
回收
率 /%
0． 500 3 4603 0． 37 0． 835 1 101． 30
0． 501 2 4611 0． 37 0． 841 5 102． 81
0． 500 7 4606 0． 37 0． 853 7 106． 24
0． 500 6 4606 0． 45 0． 918 3 101． 71
0． 500 1 4601 0． 45 0． 930 9 104． 62
0． 501 3 4612 0． 45 0． 917 8 101． 47
0． 500 9 4608 0． 56 1． 017 1 99． 34
0． 500 2 4602 0． 56 1． 038 3 103． 23
0． 500 7 4606 0． 56 1． 046 2 104． 57
2． 10 样品测定 分别取广西不同产地(2012 年 4 月
份采收)毛果算盘子药材粉末(每个产地各 3 份)约
1 g，精密称定，精密加入甲醇 40 mL，称质量，静置
12 h，超声提取 40 min，放冷，用甲醇补足减失的质量，
摇匀，滤过，取续滤液于离心管，12 000 r·min －1离心
10 min，取上清液 5 μL，注入液相色谱仪测定，即得。
用标准曲线法计算，实验结果见表 6。
表 6 不同产地毛果算盘子药材含量测定结果 n = 3
编号
含量 /
(mg·g －1)
编号
含量 /
(mg·g －1)
S1 0． 92 S6 0． 74
S2 0． 69 S7 0． 92
S3 0． 89 S8 0． 52
S4 0． 59 S9 0． 86
S5 0． 91 S10 0． 78
3 讨论
笔者在本实验中采用 HPLC法测定毛果算盘子中
没食子酸的含量，该方法简单，质量控制方法切实可
行，可在一定程度上反映毛果算盘子药材的质量。
不同产地的毛果算盘子中的没食子酸含量差异较
大。从不同产地毛果算盘子药材含量测定结果可以看
出，1，7 号产地的毛果算盘子中没食子酸的含量较高。
本文在前期单因素考察实验中发现，甲醇的浓度
越高提取效果越好，在 50%甲醇提取条件下，提取效
果并不佳。而在甲醇达到 80%才能达到一定的提取
效果，且每上一个 10%浓度梯度，提取的效果存在显
著差异。本实验设定了甲醇 80%，90%，100% 3 个浓
度进行正交实验，结果显示 100%甲醇提取效果最佳，
且甲醇浓度对实验结果影响差异有统计学意义。
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DOI 10． 3870 /yydb． 2015． 03． 029
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