全 文 ：HPLC测定覆盆子中椴树苷和山奈酚的含量
平欲晖，李彩丽，谢一辉*
（江西中医药大学，江西南昌 330004）
摘 要：建立 HPLC测定覆盆子中椴树苷和山奈酚含量的方法。采用高效液相色谱法，SHISEIDO C18色谱柱（4.6 mm ×
250 mm，5 μm）。流动相为甲醇—0.1 %磷酸水（52 ∶ 48，体积比），流速 1 mL/min，柱温 25℃，检测波长 366 nm。覆盆子中椴
树苷、山奈酚分离效果良好，线性范围分别为 3.2 μg/mL～160 μg/mL和 0.168 μg/mL～8.4 μg/mL。该方法准确灵敏、稳定可
靠，可用于覆盆子的质量控制。
关键词：覆盆子；椴树苷；山奈酚；HPLC
Determination of Tiliroside and Kaempferol in Rubus Chingii Hu
PING Yu-hui，LI Cai-li，XIE Yi-hui*
（Jiangxi University of Traditional Chinese Medicine，Nanchang 330004，Jiangxi，China）
Abstract： To establish a HPLC method for the determination of tiliroside and kaempferol in rubus chingii hu.
The method of HPLC was used to determine the content of tiliroside and kaempferol in rubus chingii hu.The
method was established on SHISEIDO C18 column （ 4.6 mm × 250 mm， 5 μm） with the mixture of methanol
- 0.1 %H3PO4 water （ 52 ∶ 48） as the mobile phase. The flow rate was 1 mL/min， and the column temperature at
25℃， the detection wavelength was set at 366 nm. This method had a good separation performance for tiliroside
and kaempferol in rubus chingii hu， and the linear range were 3.2 μg/mL-160 μg/mL and 0.168 μg/mL-
8.4 μg/mL，respectively. This method is accurate， sensitive， stable and reliable， can be used in the quality con－
trol of raspberry.
Key words： rubus chingii hu； tiliroside； kaempferol； HPLC
食品研究与开发
Food Research And Development
2016 年 4 月
第 37 卷第 7 期
DOI：10.3969/j.issn.1005-6521.2016.07.034
基金项目：江西省科技攻关计划项目《覆盆子的炮制及其炮制品质量
标准的研究》（赣科发计字[2006]38）
作者简介：平欲晖（1969—），女（汉），副教授，本科，从事药物成分及
质量控制研究。
*通信作者：谢一辉（1958—），男（汉），教授，本科，研究方向：中药成
分及质量控制研究。
覆盆子为蔷薇科植物华东覆盆子（Rubus chingii
Hu）的干燥果实，性温，味甘、酸，归肝、肾、膀胱经[1]，具
有益肾固精缩尿，养肝明目的功效，还具有抗诱变、抗
氧化、改善记忆、延缓衰老、增强免疫活性、抗炎、抑菌
等药理作用、用于遗精滑精、遗尿尿频、阳痿早泄、目暗
昏花等症的治疗[2-8]，还具有降血脂、降血糖的作用[9-11]。
目前，中国药典对覆盆子药材的质量控制方法尚不完
善，尚没有检查和含量测定项。国内学者报道过用
HPLC法测定覆盆子中的椴树苷、黄酮苷、没食子酸、
芦丁等多种成分的含量 [12-14]，但还未见有学者同时测
定覆盆子中椴树苷和山奈酚两个成分的报道，作者以
椴树苷和山奈酚为指标性成分，建立了其含量测定方
法，并对全国 11个不同地区的覆盆子样品进行了含量
测定。为覆盆子的质量控制提供了科学依据。
1 仪器与试剂
Agilent 1200型高效液相色谱仪（VWD检测器、四元
泵、自动进样器、柱温箱、在线真空脱气机）：美国安捷伦
公司；AE-240型十万分之一天平：瑞士梅特勒公司；SL-
100型高速多功能粉碎机：浙江省永康市松青五金工具
厂；HH-2型数显恒温水浴锅：国华电器有限公司。
覆盆子药材：分别购于德兴、福州、浙江等 11个地
区，经江西中医药大学刘庆华老师鉴定为蔷薇科悬钩
子属植物华东覆盆子（Rubus chingii Hu）的干燥未成熟
果实；椴树苷对照品（20120111）、山奈酚对照品
（201000924）：上海永恒生物科技有限公司；甲醇为色
检测分析
139
谱纯；水为三蒸水；其他试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
SHISEIDO 反相 C18 色谱柱（4.6 mm × 250 mm，
5 μm），流动相为甲醇-0.1 % 磷酸水（52 ∶ 48），流速
1 mL/min，检测波长 366 nm，柱温 25℃。在此色谱条件
下，椴树苷和山奈酚色谱峰能与其他峰达到基线分
离，结果见图 1。
2.2 对照品溶液的制备
分别精密称取椴树苷对照品 9.98 mg和山奈酚对
照品 11.84 mg，至于 25 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇
匀，即得 1 mL含椴树苷 0.399 2 mg的对照品溶液和
1 mL含山奈酚 0.473 6 mg的对照品储备液。分别吸取
一定量的对照品储备液制成椴树苷（0.032 mg/mL）山
奈酚（0.001 68 mg/mL）的混合标准品溶液。
2.3 供试品溶液的制备
取覆盆子粉碎，过 60目筛，精密称定称取约 1.5 g。
置于圆底烧瓶中，精密加入已配制好的 80 %的甲醇
30 mL，称定质量，在 80 ℃回流提取 1 h，取出，冷却并
补重，摇匀，微孔滤膜过滤，作为供试品溶液。
2.4 方法学考察
2.4.1 线性关系考察试验
精密移取椴树苷和山奈酚对照品母液一定体积，
用甲醇稀释成梯度浓度，所含椴树苷分别为 3.2、19.2、
25.6、28.8、32、96、160 μg/mL，山奈酚为 0.168、0.176、
1.512、1.68、3.6、6.72、8.4 μg/mL。吸取不同质量浓度混
合对照品溶液 20 μL，分别进样，以对照品浓度（x）为
横坐标、峰面积（y）为纵坐标进行线性回归，得回归方
程，椴树苷：y=21 923.45x-50.78，r=0.999 9；山奈酚：y=
9 8342.43x-9.021 6，r=0.999 7。结果表明椴树苷和山奈
酚分别在 3.2 μg/mL～160 μg/mL，0.168 μg/mL～8.4 μg/mL
范围内与峰面积呈良好线性关系。
2.4.2 精密度试验
精密吸取椴树苷（0.032mg/mL）山奈酚（0.001 68 mg/
mL）的混合对照品溶液 20 μL，按照上述色谱条件，连
续进样 6次。测得椴树苷峰面积的 RSD为 0.71 %，山
奈酚峰面积的 RSD为 1.19 %。结果表明，所用仪器精
密度良好。
2.4.3 重复性试验
精密称取覆盆子粉末 6份，按 2.3项下方法制备
供试品溶液，照上述色谱条件进样分析，测得椴树苷
和山奈酚的含量分别为 504.47、23.42 μg/g，RSD 分别
为 1.24 %、1.05 %，表明该试验重复性良好。
2.4.4 稳定性试验
取供试品溶液，分别于配制后 0、2、4、8、10、12 h进
样 20 μL，记录峰面积，结果椴树苷和山奈酚的 RSD分
别为 1.48%、1.74%，表明供试品溶液在 12 h内稳定。
2.4.5 加样回收率试验
准确称取已知含量的覆盆子样品 6份，每份约 1.3 g，
分别加入椴树苷和山奈酚对照品适量，按 2.3项下方
法制备供试品溶液，照上述色谱条件进样分析，计算
回收率，结果见表 1。
图 1 混合对照品（A）和覆盆子药材样品（B）高效液相色谱图
Fig.1 HPLC chromatograms of mixed reference substances（A）
and the rubes chingii hu sample（B）
0 2.5 22.5
时间/min
5.0 7.5 10.0 12.5 15.0 17.5 20.0
2
1
0 2.5 22.5
时间/min
5.0 7.5 10.0 12.5 15.0 17.5 20.0
2
1
1.椴树苷；2.山奈酚。
成分
取样
量/g
加入对照
品量/mg
样品中的
含量/mg
实测
量/mg
回收
率/%
平均回
收率/%
RSD/
%
椴树苷 1.299 4 0.566 9 0.669 2 1.228 5 98.66 100.27 1.74
1.300 3 0.566 9 0.669 7 1.244 9 101.47
1.301 1 0.566 9 0.670 1 1.256 103.36
1.299 8 0.650 7 0.669 4 1.306 4 97.90
1.300 5 0.650 7 0.669 8 1.326 1 100.87
1.300 9 0.650 7 0.670 0 1.328 6 101.22
1.300 4 0.846 3 0.669 7 1.506 3 98.85
1.300 2 0.846 3 0.669 6 1.509 99.18
1.300 1 0.846 3 0.669 6 1.523 8 100.94
山奈酚 1.299 4 0.025 6 0.031 1 0.056 97.44 99.25 1.48
1.300 3 0.025 6 0.031 1 0.056 5 99.31
表 1 覆盆子中椴树苷和山奈酚的加样回收率
Table 1 Recovery tests of tiliroside and kaempferol in rubus
chingii hu
平欲晖，等：HPLC测定覆盆子中椴树苷和山奈酚的含量 检测分析
A
B
140
成分
取样
量/g
加入对照
品量/mg
样品中的
含量/mg
实测
量/mg
回收
率/%
平均回
收率/%
RSD/
%
1.301 1 0.025 6 0.031 1 0.057 2 101.97
1.299 8 0.032 2 0.031 1 0.062 6 97.93
1.300 5 0.032 2 0.031 1 0.063 1 99.43
1.300 9 0.032 2 0.031 1 0.063 2 99.72
1.300 4 0.036 9 0.031 1 0.067 1 97.62
1.300 2 0.036 9 0.031 1 0.067 7 99.26
1.300 1 0.036 9 0.031 1 0.068 2 100.62
续表 1 覆盆子中椴树苷和山奈酚的加样回收率
Continue table 1 Recovery tests of tiliroside and kaempferol in
rubus chingii hu
2.5 样品含量测定
取不同产地覆盆子药材粉末各 1.5 g，精密称定，
按 2.3项下方法制备供试品溶液，分别进样 20 μL，按
上述色谱条件测定，记录峰面积，计算椴树苷和山奈
酚的含量，结果见表 2。
3 讨论
本试验采用 HPLC法测定了覆盆子中椴树苷和山
奈酚，方法简单、准确，重复性好，为覆盆子质量标准的
建立提供了一定的科学依据。
本试验考察了回流、超声两种提取方法，结果发
现回流提取法有效成分含量较高，故采用回流提取方
法。回流提取时主要考察了提取溶剂（30%、50%、70%、
80 %、90 %、100 %的甲醇）、溶剂用量（5、10、15、20、
25 mL）、提取时间（30、60、90、120 min）、提取温度（70、
80、90℃），鉴于节约溶剂、时间及有效成分的量考虑，
本实验采用的最佳提取工艺为 1.5 g 覆盆子加入到
30 mL 80 %的甲醇中在 80℃条件下回流 1 h。
高效液相色谱法的测定结果表明，不同地区生长
的覆盆子中椴树苷和山奈酚含量差异较大，其中以德
兴地区的覆盆子中椴树苷、山奈酚含量最高。所以有
必要对覆盆子的种植进行规范化处理，完善质量监管
机制。
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收稿日期：2014-10-25
产地 椴树苷含量/（mg/g） 山奈酚含量/（μg/g）
1天津 0.176 9 10.3
2福州 0.340 7 11.2
3湖南 0.218 2 9.7
4樟树 0.233 2 11.3
5银川 0.197 8 16.0
6黄庆仁 0.212 0 10.2
7浙江 0.278 6 9.5
8海南 0.205 6 8.2
9贵州 0.182 0 6.7
10同仁堂 0.319 3 11.0
11德兴 0.515 0 23.9
表 2 不同产地覆盆子中椴树苷和山奈酚含量测定结果
Table 2 The determined contents of tiliroside and kaempferol in in
rubus chingii hu of different areas
平欲晖，等：HPLC测定覆盆子中椴树苷和山奈酚的含量检测分析
141