全 文 ：凤尾草抗糖尿病活性成分的研究
姚学军， 孟素蕊， 王 喆
(天津医科大学第二医院，天津 300211)
收稿日期:2013-09-03
作者简介:姚学军 (1984—) ，女，药师，从事药房工作。Tel:15900292515，E-mail:15900292515@ 163． com
摘要:目的 研究凤尾草抗糖尿病的活性成分。方法 凤尾草全草用 75%乙醇提取，利用硅胶、凝胶等柱色谱及制
备液相色谱进行分离，并根据理化性质和有机波谱技术鉴定了化合物结构，进一步通过测定黄酮苷类化合物对胰岛素
抵抗的 HepG2 细胞葡萄糖消耗量以及对 AMPK和 ACC磷酸化水平的影响来评价其抗糖尿病活性。结果 从凤尾草中
分离鉴定了 9 个化合物，分别为:芹菜素-4-O-α-L-鼠李糖苷 (1) ，芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖-4-O-α-L-鼠李糖苷 (2) ，
柚皮素-7-O-β-D-葡萄糖苷 (3) ，木犀草素 (4) ，2β，5α-二羟基-(-)-16-贝壳杉烯 (5) ，pterosin B (6) ，24Ｒ-ethyl-
cholest-4-en-3-one (7) ，cassipourol (8) ，cyclolaudenol (9) ，此外化合物 (2)能够显著提高胰岛素抵抗 HepG2 细胞
葡萄糖消耗及 AMPK和 ACC磷酸化水平。结论 化合物 (7) ～ (9)为首次从该植物中分离得到，化合物 (2)具
有较强的抗糖尿病活性。
关键词:凤尾草;黄酮苷;抗糖尿病活性
中图分类号:Ｒ284. 1 文献标志码:B 文章编号:1001-1528(2014)08-1782-04
doi:10. 3969 / j． issn． 1001-1528. 2014. 08. 054
凤尾草为凤尾蕨科植物凤尾草，别名井栏边草的干燥
全草，多分布于华北、中南、华东、华南、西南地区。民
间及临床用全草清热利湿、抗菌消炎、消肿止痛、凉血止
血，其根茎用于治疗糖尿病、抗肿瘤效佳。文献报道其主
要化学成分为黄酮［1-2］，以及对映贝壳杉烷型二萜［3-5］。本
实验运用硅胶柱色谱、凝胶柱色谱的方法从凤尾草乙醇浸
膏中分离鉴定了 9 个化合物，包括黄酮苷类化合物，二萜
类化合物、倍半萜类化合物及三萜类化合物，其中化合物
7 ～ 9 为首次从该植物中分离得到，此外，本实验对分离得
到的黄酮苷类化合物进行了两种细胞活性的筛选，结果显
示化合物 2 具有较强的抗糖尿病活性。
1 仪器与材料
Bruker AV 400 核磁共振仪 (TMS 内标) ;JASCO 半制
备高效液相色谱仪 (PU-2089，ＲI-2031，UV-2075，日本分
光公司) ;YMC-Pack ODS-A SH-343-5 色谱柱 (20 mm ×
250 mm，5 μm) ;A sahipak GS-20G H200142，H200143 色
谱柱 (20 mm × 500 mm，5 μm) ;UV-3310 型紫外-可见分
光光度计 (日本 Hitachi) ;柱色谱和薄层色谱用硅胶 (青
岛海洋化工厂) ;37℃，5%CO2 细胞培养箱 (Heal Force公
司) ;超净工作台 (苏州净化设备有限公司) ;全自动酶标
板分析仪 (BIO-ＲAD公司) ;倒置显微镜 (Olympus公司) ;
所用试剂均为分析纯;氘代试剂 (Aldrich 公司) ;含酚红
或不含酚红 DMEM 培养液 (北京四环科技公司) ;胎牛血
清 (FBS) ，PBS (HyClone) ;葡萄糖试剂盒 (上海荣盛生
物药业有限公司) ;25% (含 EDTA)胰蛋白酶 (Bioind) ;
胰岛素 (法国 Lily 公司) ;HepG2 细胞 (中科院上海细胞
库) ;AMPK及 ACC抗体 (美国 CST公司)。
凤尾草 Pteris multifida Poir 采自湖南 (2005 年 4 月) ，
由中南民族大学生命科学院万定荣教授鉴定，标本
(D20050419)存放于天津医科大学第二附属医院药剂科中
药房。
2 实验方法
2. 1 提取分离 取自然干燥的凤尾草全草 3. 0 kg，粉碎后
用 75%的乙醇加热回流提取 3 次，每次 6 h，提取液减压浓
缩，得浸膏 400 g，将浸膏以水混悬，依次用水饱和的石油
醚 (60 ～ 90 ℃)、醋酸乙酯和正丁醇萃取，得石油醚提取
物 42 g，醋酸乙酯提取物 25 g，正丁醇提取物 38 g。凤尾
草石油醚提取物及乙酸乙酯提取物分别以硅胶柱层析
(400 g，100 ～ 200 目)分离，用石油醚-乙酸乙酯 (8 ∶ 1，
6 ∶ 1，4 ∶ 1，3 ∶ 1，2 ∶ 1，1 ∶ 1，1 ∶ 2，1 ∶ 3) ，100% 乙酸
乙酯，乙酸乙酯-甲醇 (95 ∶ 5，90 ∶ 10，80 ∶ 20)和 100%
甲醇依次梯度洗脱，通过 TLC 合并类似组分，石油醚层分
离得到 7 个组分 (A-G) ，乙酸乙酯层分离得到 5 个组分
(H-L)。
组分 C经过凝胶渗透柱层析 Toyopeal HW-40 分离，二
氯甲烷-甲醇 (2 ∶ 1)洗脱，得到 Fr. 1 ～ Fr. 4，Fr. 2
(879. 9 mg)再经制备高效液相色谱分离纯化，得到化合物
6 (6. 5 mg)和化合物 2 (22. 6 mg) ;组分 E经过凝胶渗透
柱层析 Toyopeal HW-40 分离，二氯甲烷-甲醇 (2 ∶ 1)洗
脱，得到 Fr. 1 ～ Fr. 3，Fr. 3 (934. 7 mg)再经制备高效液相
色谱及制备薄层色谱法分离纯化，分别得到化合物 8 (4. 5
mg)和化合物 9 (10. 0 mg)。组分 G 经过凝胶渗透柱层析
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Vol． 36 No． 8
Toyopeal HW-40 分离，二氯甲烷-甲醇 (2 ∶ 1)洗脱，得到
Fr. 1 ～ Fr. 4，Fr. 2 (453. 9 mg)再反复经制备高效液相色谱
法分离纯化，分别得到化合物 1 (12. 1 mg) ，化合物 7
(6. 8 mg) ，化合物 3 (6. 2 mg) ，组分 K经过凝胶渗透柱层
析 Toyopeal HW-40分离，二氯甲烷-甲醇 (2 ∶ 1)洗脱，得
到 Fr. 1 ～ Fr. 4，Fr. 3 (546. 9 mg)再反复经制备高效液相色
谱法及重结晶法分离纯化，分别得到化合物 4 (24. 2 mg) ，
化合物 5 (11. 1 mg)。
2. 2 胰岛素抵抗 HepG2 细胞葡萄糖消耗实验 胰岛素抵
抗 HepG2 细胞模型的建立及药物处理按文献方法 ［4-5］
稍作改进。将处于对数生长期的细胞消化后，用含 10%
FBS的 DMEM 培养基调整细胞密度为 105 个 /mL，转入 96
孔板中。待细胞单层贴壁后，加入新配制的含有 10 －7 mol /
L胰岛素的培养液，并设无胰岛素的空白孔，于 37 ℃ 5%
CO2 培养箱中孵育 36 h后弃去培养液，先用 pH 4. 0 的无酚
红的 DMEM洗 4 次，再用无酚红 DMEM洗 2 次后，换上无
血清的培养基 37 ℃孵育 24 h 后，用葡萄糖临床试剂盒检
测培养基的葡萄糖含量。实验分别设正常细胞组、胰岛素
抵抗模型组、化合物处理组 (终浓度分别为 1、5、10
μmol /L)。以不铺细胞的空白孔为空白对照，计算 24 h 各
组细胞的葡萄糖消耗量。根据初筛 3 个浓度下的葡萄糖消
耗量重新设定 5 个浓度进行 EC50值的测定，测定的数据经
SPSS 11. 0 统计软件系统进行统计学分析，以 x ± s 表示，
组间差异的显著性采用 t 检验方法进行，EC50的计算采用
非线性拟合方法进行。
2. 3 AMPK 及 ACC 磷酸化水平的检测 本实验采用免疫
印迹法 (Western Blot 法) ，方法简述如下:细胞加裂解液
裂解后取上清，加入 5X 蛋白上样缓冲液 95 ℃沸煮 5 min
后在 10%的十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶中电泳后转移
至 PVDF膜上，然后用 5%的脱脂牛奶封闭 1 h，洗膜后分
别加入 AMPK、ACC和 β-actin的抗体，浓度为 1 ∶ 1 000 稀
释，4 ℃过夜。再次洗膜后加入第二抗体进行反映，室温
孵育 1 h，洗膜后 ECL 荧光显色和曝光。利用图像分析系
统确定 X线光胶片上蛋白条带的相对灰度。
3 结果
3. 1 结构鉴定
化合物 1:黄色粉末，mp 247 ～ 249 ℃。1H-NMＲ
(CDCl3，400 MHz)δ:6. 88 (1H，s，H-3) ，6. 21 (1H，s，H-
6) ，6. 51 (1H，s，H-8) ，8. 04 (2H，d，J = 8. 3 Hz，H-2，
6) ，7. 21 (2H，d，J = 8. 3 Hz，H-3，5) ，12. 90 (1H，br
s，OH-5) ，5. 54 (1H，br s，H-1″) ，1. 10 (3H，d，J = 6. 1
Hz，H-6″)。13C-NMＲ (CDCl3，100 MHz)δ:164. 1 (C-2) ，
104. 8 (C-3) ，182. 8 (C-4) ，162. 4 (C-5) ，98. 6 (C-6) ，
165. 3 (C-7) ，95. 0 (C-8) ，158. 4 (C-9) ，104. 9 (C-10) ，
124. 9 (C-1) ，129. 3 (C-2，6) ，117. 7 (C-3，5) ，160. 0
(C-3) ，99. 9 (C-1″) ，71. 0 (C-2″) ，71. 3 (C-3″) ，72. 7 (C-
4″) ，70. 8 (C-5″) ，18. 9 (C-6″)。以上光谱数据与文献 ［6］
报道基本一致，因此鉴定化合物 1 为芹菜素-4-O-α-L-鼠李
糖苷。
化合物 2:黄色粉末，mp 212 ～ 214 ℃。1H-NMＲ
(CDCl3，400 MHz)δ:6. 96 (1H，s，H-3) ，6. 46 (1H，s，H-
6) ，6. 86 (1H，s，H-8) ，8. 07 (2H，d，J = 8. 4 Hz，H-2，
6) ，7. 22 (2H，d，J = 8. 4 Hz，H-3，5) ，12. 89 (1H，br
s，OH-5) ，5. 54 (1H，br s，H-1″) ，1. 10 (3H，d，J = 6. 1
Hz，H-6″) ，5. 08 (1H， J = 7. 4 Hz，H-1)。 13C-NMＲ
(CDCl3，100 MHz)δ:164. 6 (C-2) ，104. 8 (C-3) ，183. 0
(C-4) ，162. 1 (C-5) ，100. 6 (C-6) ，164. 0 (C-7) ，95. 9 (C-
8) ，158. 0 (C-9) ，105. 9 (C-10) ，124. 8 (C-1) ，129. 4 (C-
2，6) ，117. 7 (C-3，5) ，160. 1 (C-3) ，99. 1 (C-1″) ，
71. 0 (C-2″) ，71. 3 (C-3″) ，72. 6 (C-4″) ，70. 8 (C-5″) ，
18. 9 (C-6″) ，100. 9 (C-1) ，74. 1 (C-2) ，77. 4 (C-3″) ，
70. 5 (C-4″) ，78. 1 (C-5″) ，61. 6 (C-6″)。以上光谱数据与
文献 ［6］报道基本一致，因此鉴定化合物 2 为芹菜素-7-
O-β-D-葡萄糖-4-O-α-L-鼠李糖苷。
化合物 3:黄色粉末，mp 224 ～ 226 ℃。1H-NMＲ
(CDCl3，400 MHz)δ:5. 47 (1H，d，J = 12. 8 Hz，H-2) ，
6. 21 (1H，s，H-6) ，6. 19 (1H，s，H-8) ，7. 38 (2H，d，J =
8. 3 Hz，H-2，6) ，6. 85 (2H，d，J = 8. 3 Hz，H-3，5) ，
12. 01 (1H，br s，OH-5) ，9. 69 (1H，br s，OH-4) ，5. 02
(1H，d，J = 7. 48 Hz，H-1″)。13C-NMＲ (CDCl3，100 MHz)
δ:78. 5 (C-2) ，42. 1 (C-3) ，197. 6 (C-4) ，163. 4 (C-5) ，
96. 2 (C-6) ，165. 0 (C-7) ，95. 2 (C-8) ，162. 5 (C-9) ，
103. 2 (C-10) ，128. 3 (C-1) ，128. 1 (C-2，6) ，115. 1 (C-
3，5) ，157. 0 (C-3) ，100. 2 (C-1″) ，72. 9 (C-2″) ，77. 6
(C-3″) ，69. 5 (C-4″) ，76. 7 (C-5″) ，60. 7 (C-6″)。以上光
谱数据与文献［7］报道基本一致，因此鉴定化合物 3 为柚
皮素-7-O-β-D-葡萄糖苷。
化合物 4:黄色粉末，mp ＞ 300 ℃。1H-NMＲ (CDCl3，
400 MHz)δ:6. 66 (1H，s，H-3) ，6. 19 (1H，s，H-6) ，6. 44
(1H，s，H-8) ，7. 40 (1H，d，J = 2. 1 Hz，H-2) ，6. 89 (1H，
d，J = 8. 3 Hz，H-5) ，7. 43 (1H，dd，J = 2. 2，8. 3 Hz，H-
6)。13C-NMＲ (CDCl3，100 MHz)δ:164. 4 (C-2) ，103. 3
(C-3) ，182. 1 (C-4) ，161. 9 (C-5) ，99. 3 (C-6) ，164. 7 (C-
7) ，94. 3 (C-8) ，157. 8 (C-9) ，104. 1 (C-10) ，121. 9 (C-
1) ，113. 8 (C-2) ，146. 2 (C-3) ，150. 2 (C-4) ，116. 5
(C-5) ，119. 4 (C-6)。以上光谱数据与文献［8］报道基本
一致，因此鉴定化合物 4 为木犀草素。
化合物 5:无色针状结晶 (甲醇) ，mp 205. 1 ～
206. 7 ℃。1H-NMＲ (CDCl3，500 MHz)δ:2. 48 (1H，d，J =
16 Hz，H-1) ，1. 17 (1H，d，J = 7. 6 Hz，H-1) ，4. 33 (1H，
m，H-2) ，2. 13 (1H，m，H-3) ，2. 10 (1H，m，H-3) ，1. 70
(1H，m，H-5) ，1. 80，1. 31 (each 1H，m，H-6) ，1. 54，
1. 75 (each 1H，m，H-7) ，1. 43 (1H，br s，H-9) ，1. 58，
1. 39 (each 1H，m，H-11) ，2. 90，1. 65 (each 1H，m，H-
12) ，2. 76 (1H，br s，H-13) ，4. 21 (1H，br s，H-15) ，
5. 46，5. 63 (each 1H，s，H-17) ，0. 88 (3H，s，H-18) ，0. 92
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(3H，s，H-19) ，1. 08 (3H，s，H-20)。13C-NMＲ (CDCl3，
125 MHz)δ:52. 7 (C-1) ，64. 4 (C-2) ，51. 0 (C-3) ，35. 3
(C-4) ，48. 6 (C-5) ，20. 2 (C-6) ，36. 6 (C-7) ，60. 8 (C-8) ，
56. 4 (C-9) ，41. 9 (C-10) ，19. 1 (C-11) ，33. 7 (C-12) ，
55. 3 (C-13) ，37. 4 (C-14) ，83. 4 (C-15) ，161. 7 (C-16) ，
108. 3 (C-17) ，19. 6 (C-18) ，23. 3 (C-19) ，43. 3 (C-20)。
以上光谱数据与文献 ［4］ 报道基本一致，因此鉴定化合
物 5 为 2β，5α-二羟基-(-)-16-贝壳杉烯。
化合物 6:黄色粉末，mp 104 ～ 106 ℃。1H-NMＲ
(CDCl3，400 MHz)δ:7. 09 (1H，s，H-4) ，3. 76 (2H，t，
J = 7. 4 Hz，H-13) ，3. 02 (2H，t，J = 7. 4 Hz，H-12) ，2. 68
(3H，s，H-14) ，2. 55-2. 65 (2H，m，H-3) ，2. 43 (3H，s，
H-11) ，1. 27 (3H，d，J = 6. 3 Hz H-10)。13C-NMＲ (CDCl3，
100 MHz) δ:210. 3 (C-1) ，163. 4 (C-2) ，34. 7 (C-3) ，
125. 8 (C-4) ，144. 4 (C-5) ，134. 8 (C-6) ，138. 0 (C-7) ，
42. 8 (C-8) ，152. 6 (C-9) ，16. 8 (C-10) ，21. 4 (C-11) ，
61. 6 (C-12) ，32. 8 (C-13) ，13. 7 (C-14)。以上光谱数据与
文献［9］报道基本一致，因此鉴定化合物 6 为 pterosin B。
化合物 7:无色针状结晶 (三氯甲烷) ，mp 97 ～ 99
℃。1H-NMＲ (CDCl3，500 MHz)δ:0. 71 (3H，s，H-18) ，
0. 84 (3H，d，J = 7. 0，H-26) ，0. 86 (3H，d，J = 7. 0，H-
27) ，0. 87 (3H，m，H-29) ，0. 94 (3H，d，J = 6. 5，H-21) ，
1. 20 (3H，s，H-19) ，1. 38 (1H，m，H-20) ，1. 69 (1H，m，
H-25) ，5. 72 (1H，s，H-4)。13C-NMＲ (CDCl3，125 MHz)δ:
36. 4 (C-1) ，34. 7 (C-2) ，199. 6 (C-3) ，123. 7 (C-4) ，
171. 7 (C-5) ，32. 7 (C-6) ，31. 8 (C-7) ，35. 3 (C-8) ，53. 5
(C-9) ，38. 3 (C-10) ，20. 8 (C-11) ，39. 3 (C-12) ，42. 1 (C-
13) ，55. 6 (C-14) ，23. 9 (C-15) ，27. 8 (C-16) ，55. 7 (C-
17) ，11. 7 (C-18) ，17. 1 (C-19) ，35. 9 (C-20) ，20. 9 (C-
21) ，33. 6 (C-22) ，25. 7 (C-23) ，45. 5 (C-24) ，28. 8 (C-
25) ，20. 9 (C-26) ，18. 7 (C-27) ，22. 8 (C-28) ，11. 9 (C-
29)。以上光谱数据与文献［10］报道基本一致，因此鉴定
化合物 7 为 24Ｒ-ethylcholest-4-en-3-one。
化合物 8:无色油状物。1H-NMＲ (CDCl3，500 MHz)δ:
1. 28，1. 05 (each 1H，m，H-2) ，1. 26 (1H，m，H-3) ，1. 24
(1H，m，H-4) ，1. 50 (1H，m，H-5) ，1. 38 (1H，m，H-6) ，
1. 28 (1H，m，H-7) ，1. 34 (1H，m，H-8) ，1. 40 (1H，m，
H-9) ，1. 38，1. 28 (each 1H，m，H-10) ，1. 53 (1H，m，H-
11) ，1. 99，1. 13 (1H，m，H-12) ，5. 40 (1H，qt，J = 1. 4，
7. 0 Hz，H-14) ，4. 14 (1H，d，J = 7. 0 Hz，H-15) ，0. 87
(3H，s，H-16) ，0. 85 (3H，s，H-17) ，0. 84 (3H，d，J = 7. 1
Hz，H-18) ，0. 83 (3H，d，J = 6. 6 Hz，H-19) ，1. 66 (3H，br
s，H-20)。13C-NMＲ (CDCl3，125 MHz)δ:36. 7 (C-1) ，
39. 5 (C-2) ，24. 9 (C-3) ，37. 4 (C-4) ，28. 1 (C-5) ，32. 9
(C-6) ，24. 6 (C-7) ，37. 4 (C-8) ，32. 8 (C-9) ，37. 5 (C-
10) ，25. 2 (C-11) ，30. 9 (C-12) ，140. 4 (C-13) ，123. 2 (C-
14) ，59. 5 (C-15) ，22. 8 (C-16) ，22. 7 (C-17) ，19. 8 (C-
18) ，19. 8 (C-19) ，16. 3 (C-20)。以上光谱数据与文献
［11］报道基本一致，因此鉴定化合物 8 为 cassipourol。
化合物 9:无色针状结晶，mp 94 ～ 96 ℃。1H-NMＲ
(CDCl3，500 MHz)δ:1. 01 (3H，s，H-18) ，0. 80 (3H，s，
H-29) ，0. 90 (3H，d，J = 6. 5 Hz，H-21) ，0. 32 (1H，d，J =
4. 2 Hz，H-19) ，0. 55 (1H，d，J = 4. 2 Hz，H-19) ，0. 91
(1H，s，H-28) ，3. 29 (1H，dd，J = 11. 5，4. 5 Hz，H-3) ，
1. 67 (3H，brs，H-27)。13C-NMＲ (CDCl3，125 MHz)δ:32. 0
(C-1) ，30. 4 (C-2) ，78. 8 (C-3) ，40. 8 (C-4) ，47. 1 (C-5) ，
21. 1 (C-6) ，27. 2 (C-7) ，48. 0 (C-8) ，20. 0 (C-9) ，26. 1
(C-10) ，26. 1 (C-11) ，35. 7 (C-12) ，45. 8 (C-13) ，48. 4
(C-14) ，32. 9 (C-15) ，26. 4 (C-16) ，49. 0 (C-17) ，18. 0
(C-18) ，29. 9 (C-19) ，40. 5 (C-20) ，12. 0 (C-21) ，33. 6
(C-22) ，36. 1 (C-23) ，33. 2 (C-24) ，150. 3 (C-25) ，20. 9
(C-26) ，109. 7 (C-27) ，19. 5 (C-28) ，14. 0 (C-29) ，25. 4
(C-30)。以上光谱数据与文献［12］报道基本一致，因此鉴
定化合物 9 为 cyclolaudenol。
3. 2 化合物对胰岛素抵抗 HepG2 细胞葡萄糖消耗的影响
本实验对分离得到的黄酮苷类化合物进行了活性测定，
利用胰岛素抵抗的 HepG2 细胞为体外模型，测定化合物
1 ～ 4 对胰岛素抵抗 HepG2 细胞葡萄糖消耗量的影响，结果
如表 1 所示，化合物 1 ～ 4 能够剂量依存性地促进胰岛素抵
抗 HepG2 细胞的葡萄糖消耗。
表 1 化合物 1 ～ 4 对胰岛素抵抗HepG2 细胞葡萄糖消耗量
的影响 (n =3)
组别 葡萄糖消耗量 /(mmol·L －1)
化合物 1(1 μmol·L －1) 8. 182 ± 0. 25
化合物 1(5 μmol·L －1) 9. 016 ± 0. 18*
化合物 1(10 μmol·L －1) 9. 260 ± 0. 25＊＊
化合物 2(1 μmol·L －1) 8. 297 ± 0. 45*
化合物 2(5 μmol·L －1) 9. 388 ± 0. 35＊＊
化合物 2(10 μmol·L －1) 9. 744 ± 0. 45＊＊
化合物 3(1 μmol·L －1) 8. 974 ± 0. 36*
化合物 3(5 μmol·L －1) 10. 353 ± 0. 39＊＊
化合物 3(10 μmol·L －1) 10. 686 ± 0. 36＊＊
化合物 4(1 μmol·L －1) 8. 687 ± 0. 39*
化合物 4(5 μmol·L －1) 10. 178 ± 0. 39＊＊
化合物 4(10 μmol·L －1) 10. 204 ± 0. 39＊＊
正常细胞 9. 501 ± 0. 472＊＊
胰岛素抵抗模型细胞 6. 952 ± 0. 419
注:与胰岛素抵抗模型组相比，* P ＜ 0. 05，＊＊P ＜ 0. 01
根据初步活性结果，确定了 EC50的浓度测定范围，对
化合物 1 ～ 4 进行了 EC50浓度测试，测试浓度分别为 (1、
5、10、50、100 μmol /L)。结果见表 2。
表 2 化合物 1 ～ 4 对胰岛素抵抗 HepG2 细胞葡萄糖量的
EC50值
组别 EC50值 /(μmol·L －1)
化合物 1 ＞ 200
化合物 2 5. 35
化合物 3 13. 98
化合物 4 9. 65
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2014 年 8 月
第 36 卷 第 8 期
中 成 药
Chinese Traditional Patent Medicine
August 2014
Vol． 36 No． 8
3. 3 化合物 2 对胰岛素抵抗 HepG2 细胞 Akt磷酸化水平的
影响 腺苷酸活化蛋白激酶 (AMPK)是一种重要的蛋白
激酶，主要作用是协调代谢和能量平衡。AMPK 被激活后
在增加葡萄糖摄取、增强胰岛素敏感性、增加脂肪酸氧化
以及调节基因转录等方面发挥重要作用［13］。本实验利用胰
岛素抵抗的 HepG2 细胞，测定化合物 2 在浓度分别为 1、
5、10 μmol /L下对胰岛素抵抗状态下 HepG2 细胞腺苷酸活
化蛋白激酶 (AMPK)及其下游底物乙酰辅酶 A 羧化酶
(ACC)的磷酸化水平，实验结果如图 1 所示，化合物 2 能
够显著提高胰岛素抵抗 HepG2 细胞 AMPK 及其下游底物
ACC的磷酸化水平，并呈现剂量依赖性，显示化合物 2 可
能通过提高 AMPK 磷酸化水平来提高葡萄糖消耗，提示化
合物 2 具有一定的抗糖尿病活性。
注:与正常组比较，# P ＜ 0. 05，## P ＜ 0. 01;与胰岛素抵抗组比
较，*P ＜ 0. 05，＊＊P ＜ 0. 01
图 1 化合物 2 的不同浓度对胰岛素抵抗 HepG2 细胞
AMPK及 ACC磷酸化水平的影响 (n =3)
4 讨论
本实验从凤尾草石油醚和乙酸乙酯极性部位提取分离
得到 9 个化合物，其中化合物 7 ～ 9 为首次从该植物中分离
得到。根据凤尾草治疗糖尿病的临床应用以及文献报道黄
酮及黄酮苷类化合物具有显著的抗糖尿病活性［14-16］，本实
验以胰岛素抵抗 HepG2 细胞对黄酮类化合物 1 ～ 4 进行抗
糖尿病作用的初步筛选，初步筛选结果表明，黄酮苷类化合
物 2 能够显著提高胰岛素抵抗的 HepG2 细胞葡萄糖消耗
量;进一步对 AMPK及其下游底物 ACC磷酸化水平评价表
明，化合物 2 能显著提高胰岛素抵抗 HepG2 细胞 AMPK 及
ACC磷酸化水平，改善胰岛素抵抗，提高细胞对葡萄糖的
利用，显示了明确的体外抗糖尿病作用。本实验首次利用
胰岛素抵抗的 HepG2 细胞模型对凤尾草的抗糖尿病活性进
行了初步研究，为中药凤尾草的抗糖尿病应用提供了实验
依据。
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