全 文 ：基金项目:国家自然科学基金(81260490)
作者简介:美合日阿依·伊萨克(1988 －) ，女(维吾尔族) ，在读硕士，研究方向:心血管药理学研究。
通信作者:艾尼瓦尔·吾买尔(1962 －) ，男(维吾尔族) ，教授，博士生导师，研究方向:心血管药理学研究，E-mail:anwar． umar@ 126． com。
榅桲叶多糖含量测定和纯化工艺研究
美合日阿依·伊萨克，艾尼瓦尔·吾买尔
(新疆医科大学基础医学院，乌鲁木齐 830011)
摘要:目的 测定榅桲叶中多糖的含量及其精制工艺研究。方法 采用蒽酮-硫酸法测定榅桲叶中多糖的
含量，比较 6 种大孔吸附树脂对榅桲叶多糖的吸附率、解吸率和脱色率的影响，从中筛选出适合榅桲叶多糖分离纯
化的树脂。结果 经静态吸附和解吸实验，初步确定 HPD-100 型大孔吸附树脂为纯化榅桲叶中多糖的适宜树脂，
其吸附、解吸和脱色效果最好，结果分别为 56． 2%、76． 6%、63． 0%，纯化后榅桲叶中多糖含量为 63． 0%。结论
优选的纯化工艺简单可行、稳定。
关键词:榅桲叶;多糖;含量测定;纯化
中图分类号:Ｒ917 文献标识码:A 文章编号:1009-5551(2015)06-0715-03
doi:10． 3969 / j． issn． 1009-5551． 2015． 06． 013
Content determination and purification of polysaccharide in leaves
of Cydonia oblonga Mill
Isak Mihray，Umar Anwar
(College of Basic Medical，Xinjiang Medical University，Urumqi 830011，China)
Abstract:Objective Determination of the content of polysaccharide in Cydonia oblonga Mill leaves and its refi-
ning process．Methods By anthrone sulfuric acid method was used to determine the content of polysaccharide in
leaves of Cydonia oblonga Mill，comparing the six kinds of macroporous adsorption resin of quince leaf polysaccha-
ride adsorption rate，desorption rate and decolorization rate influence，from screened for quince leaf polysaccha-
ride，isolation and purification of resin． Ｒesults By static adsorption and desorption experiments，initially identi-
fied HPD-100 macroporous adsorption resin for the purification of quince leaf polysaccharide is suitable for resin，
the adsorption，desorption and decolorization effect best． The results were 56． 2%，76． 6%，63． 0%，purified in
leaves of Cydonia oblonga Mill polysaccharide content was 63． 0% ． Conclusion The optimized purification
process is simple and feasible and stable．
Key words:Cydonia oblonga Mill，s leaf;polysaccharides;content determination;purification
榅桲英文名 quince，拉丁文名:Cydonia oblonga
Mill(COM) ，异名:C． vulgaris Pers。科属:蔷薇科榅
桲属，别名:木梨，新疆维吾尔族人称榅桲为“比
也”，当地汉族人称此为木瓜。榅桲属仅榅桲一种，
是古老珍奇稀少的果树之一［1］。榅桲自古以来，不
仅是新疆人民喜欢的水果，也是维吾尔医药常用的
疗效很好的一种药物，其除了具有降血压、降血脂等
作用外，还有补血、补脑、补肾、止咳、止泻、利尿、开
胃、月经不调、心脏病等功效，特别是止咳、止泻、调
月经作用甚佳［2 － 4］。
第 38 卷 第 6 期 新 疆 医 科 大 学 学 报 Vol． 38 No． 6
2015 年 6 月 Journal of Xinjiang Medical University Jun． 2015
目前，有关榅桲叶中多糖的含量测定和纯化工
艺的研究尚未见报道，造成了资源的极大浪费。本
研究通过蒽酮-硫酸法测定关榅桲叶中多糖的含量，
采用大孔树脂纯化，为榅桲叶资源的合理开发利用
提供实验依据。
1 仪器和材料
岛津 UV -2550 紫外分光光度计(日本岛津公
司) ，DK-S24 型电热恒温水浴锅(上海精宏试验设
备有限公司) ，赛多利斯 BS型电子天平(德国 Sarto-
rius公司) ，TDL-5A型离心机(上海非恰尔分析仪器
有限公司) ，SHB-Ⅲ循环水式多用真空泵(郑州长城
科工贸有限公司) ，DHG-9075A 型电热鼓风干燥箱
(上海一恒科学仪器有限公司)。
葡萄糖(天津市天新精细化工开发中心) ，蒽酮
(国药集团化学试剂有限公司) ，浓硫酸(天津市风
船化学试剂科技有限公司，20121218) ，试剂均为分
析纯，大孔树脂 AB-8(天津市光复精细化工研究所，
20130311) ，S-8(天津市光复精细化工研究所) ，
HPD-100(沧州宝恩吸附材料科技有限公司) ，HPD-
400(沧州宝恩吸附材料科技有限公司) ;聚酰胺 14-
30 (浙 江 省 台 州 市 路 桥 四 甲 生 化 塑 料 厂，
20091017) ，聚酰胺 30-60(浙江省台州市路桥四甲
生化塑料厂，20120312)。
2 方法与结果
2． 1 榅桲叶中多糖的提取分离 称取榅桲叶，加一
定量的 95%乙醇超声提取，抽虑，挥干至无醇味。
加 20 倍的蒸馏水在 80℃下、超声提取 60 min，提取
2 次，合并提取液浓缩，离心后用 sevag 法脱蛋白，加
入 95%乙醇使含醇量达 80%醇沉，静置过夜，沉淀
用丙酮和乙醚依次洗涤，干燥即得榅桲叶粗
多糖［5］。
2． 2 榅桲叶中多糖的含量测定
2． 2． 1 对照品溶液的配制 精密称取 105℃干燥
至恒重的葡萄糖对照品 10 mg，置 100 mL 容量瓶
中，加蒸馏水溶解稀释至刻度，摇匀，即得 0． 1 mg /
mL葡萄糖对照品溶液。
2． 2． 2 供试品溶液的配制 精密称取提取的粗多
糖 10 mg，置 25 mL量瓶中，加蒸馏水溶解并稀释至
刻度。
2． 2． 3 蒽酮-硫酸试剂的配制 精密称取蒽酮
50 mg，置 50 mL棕色容量瓶中，用 95% ～ 98%浓硫
酸溶解并定容至刻度，摇匀，即得。临用现配。
2． 2． 4 标准曲线的绘制［6 － 9］ 分别精密吸取对照
品溶液 0． 2、0． 4、0． 6、0． 8、1． 0、1． 2 mL 于试管中加
蒸馏水至 2． 0 mL，精密加入蒽酮-硫酸试剂 6 mL，置
沸水浴中保温 15 min，取出。立即放入冰水浴中冷
却 15 min，取出。以相应试剂为空白，在 625 nm 波
长处测定吸光度。以吸光度为纵坐标，葡萄糖浓度
为横坐标，绘制标准曲线。得到的标准曲线方程为:
Y = 50． 069 0X － 0． 016 3，r = 0． 999 1;线性范围:
0． 002 5 ～ 0． 150 0 mg /mL。
2． 2． 5 样品含量测定 精密量取 0． 2 mL 供试品溶
液，加入具塞试管中，置冰水浴中，再精密加入蒽酮-
硫酸试剂 6 mL，然后在沸水浴中保温 15 min，取出，
立即放入冰水浴中冷却 15 min，取出，在 625 nm 波
长处测定吸光度，再算含量结果，叶粗多糖含量为
39． 6%。
2． 2． 6 精密度考察 精密吸取供试品溶液 0． 2 mL
于 5 个 10 mL 容量瓶中，余下操作按“2． 2． 4”项下
方法进行，计算 ＲSD 结果，ＲSD = 1． 2%，说明仪器
精密度良好。
2． 2． 7 重复性考察 精密称取 5 份同一批粗多糖
10 mg 置 25 mL 容量瓶中，加蒸馏水溶解并稀释至
刻度。分别精密吸取供试品溶液 0． 2 mL 于 10 mL
容量瓶中，余下操作按“2． 2． 4”项下方法进行，计算
ＲSD，结果 ＲSD =1． 5%，表明该方法重复性良好。
2． 2． 8 稳定性考察 精密吸取供试品溶液 0． 2 mL
于 10 mL容量瓶中，余下操作按绘制标准曲线项下
方法进行测定，分别于 0、10、20、30、60、90 min 测定
光度，计算 ＲSD，结果 ＲSD =1． 9%，表明供试品溶液
显色后 90 min内稳定。
2． 2． 9 加样回收率试验 精密吸取供试品溶液
0． 2 mL共 6 份，各精密加入 0． 1 mg /mL对照品溶液
0． 2 mL，余下操作按“2． 2． 4”项下方法进行，测定光
度，计算加样回收率为 100． 5%。
2． 3 榅桲叶中多糖的纯化
2． 3． 1 大孔吸附树脂预处理 精密称取 6 种［酰胺
(14-30)、聚酰胺(30-60)、AB-8、S-8、HPD-100、HPD-
400］孔树脂各 5 g，用 95%乙醇溶液侵泡24 h，滤出
树脂，用去离子水洗净至无醇味，然后分别用 4%
HCI溶液浸泡 4 h，蒸馏水洗至中性，用 4% NaOH溶
液浸泡 4 h，最后用去离子水洗至中性待用［10］。
2． 3． 2 静态吸附和解吸实验［11 － 12］ 根据榅桲叶中
多糖的吸附率、解吸率和脱色率来选择合适的树脂
纯化多糖。分别称取经预处理的 6 种干大孔吸附树
脂各1 g置100 mL锥形瓶中，加50 mL 1． 0 mg /mL榅
617 新 疆 医 科 大 学 学 报 第 38 卷
桲叶子粗多糖溶液，每隔 10 min 振摇 1 次，连续 5
次后静置 24 h。滤出树脂，从滤液中精密吸取
0． 2 mL于试管中，加蒸馏水至 2． 0 mL，密加入蒽酮-
硫酸试剂 6 mL，置沸水浴中保温 15 min，取出，立即
放入冰水浴中冷却 15 min，取出，以相应试剂为空
白，在 625 nm波长处测定吸光度。测定上清液剩余
多糖浓度及色素含量。根据公式计算树脂的吸附
率:吸附率(%)=(C0 － Ce)/C0 × 100%［公式中:C0
为吸附前溶液浓度(mg /mL) ;Ce 为吸附平衡后溶液
浓度(mg /mL) ］。
将吸附多糖后的树脂进行解吸，用滤纸吸干吸
附后的树脂表面残留溶液后，装入干燥的锥形瓶中，
加蒸馏水，每隔 10 min 振摇 1 次，连续 5 次后静置
24 h解吸，滤出树脂，测定滤液中多糖含量。按下
公式计算解吸率:解吸率 = C1 /(C0-Ce)× 100%［C1
为解吸液浓度(mg /mL) ］;根据吸附前后测定吸光
度，按下公式计算脱色率:脱色率 = A1 － A2 /A1 ×
100%［式中:A1 为脱色前吸光度;A2 为脱色后吸
光度］。
通过以上结果筛选出符合试验条件的树脂类型
用于后续试验，HPD-100 非极性树脂对多糖吸附和
解吸能力较强，对色素吸附能力较强，结果分别为:
56． 2%、76． 6%和 63． 0%。因此，综合考虑吸附率、
解吸率及脱色率，初步筛选出 HPD-100 进行下一步
试验。纯化后榅桲叶中多糖含量为 63%，结果见
表 1。
表 1 各种树脂吸附率、解吸率和脱色率结果
型号 吸附率 /% 解吸率 /% 脱色率 /%
聚酰胺(14-30) 23． 4 58． 3 61． 0
聚酰胺(30-60) 32． 2 57． 4 61． 3
AB-8 28． 8 48． 5 40． 4
S-8 26． 5 59． 0 46． 5
HPD-100 56． 2 76． 6 63． 0
HPD-400 51． 4 73． 6 62． 3
3 结论
蒽酮-硫酸法是测定多糖含量较为经典有效的
方法之一，但影响该法显色的因素较多。为了减少
试验过程中的误差，蒽酮-硫酸试剂必须现配现用。
大孔径树脂色谱是吸附原理和分子筛原理相结合的
新的色谱方法，有利于有效成分高度富集、杂质少、
缩小剂量。通过本实验，最终选择了 HPD-100 为榅
桲叶多糖分离纯化的最佳吸附树脂。HPD-100 型大
孔吸附树脂可以使榅桲叶多糖含量达到 63%。
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［收稿日期:2014-06-20］
(本文编辑 施洋)
717第 6 期 美合日阿依·伊萨克，等:榅桲叶多糖含量测定和纯化工艺研究