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山药零余子多糖抗氧化活性及对糖尿病小鼠降血糖作用



全 文 :梁 潇,黄月琴,陈建平. 山药零余子多糖抗氧化活性及对糖尿病小鼠降血糖作用[J]. 江苏农业科学,2014,42(3):273 - 275.
山药零余子多糖抗氧化活性及对糖尿病小鼠降血糖作用
梁 潇1,黄月琴2,陈建平2
(1.中国人民解放军总医院,北京 100853;2.淮南师范学院化学与化工系,安徽淮南 232001)
摘要:提取山药零余子中的多糖,探讨其体外抗氧化活性和对糖尿病小鼠的降血糖作用。结果表明,山药零余子
多糖的还原力随着浓度的提高显著增强,对 DPPH·和·OH具有较强的清除能力,并呈一定的剂量关系,4. 0 mg /mL
剂量时清除率分别可达到 91. 15%和 89. 06%;山药零余子多糖能显著降低造模小鼠的血糖,且大剂量的山药零余子
多糖降糖更明显。山药零余子多糖具有较好的抗氧化性和降血糖作用,这为安全天然食品抗氧化剂、降血糖药剂的开
发提供了新来源。
关键词:山药零余子;多糖;抗氧化活性;降血糖作用
中图分类号:R284. 1 文献标志码:A 文章编号:1002 - 1302(2014)03 - 0273 - 02
收稿日期:2013 - 07 - 28
基金项目:淮南师范学院重点基金(编号:2011LK76zd);淮南师范学
院青年基金(编号:2010LK13)。
作者简介:梁 潇(1986—),女,安徽淮南人,硕士,药师,从事药物分
析研究。E - mail:liangxiao0520@ sina. cn。
山药零余子为薯蓣科多年生草质藤本植物薯蓣
(Dioscorea opposite Thunb.)叶腋间的珠芽[1],俗称“山药蛋”,
呈卵圆形或椭圆形,直径 0. 4 ~ 2. 0 cm;外表皮淡黄色,有细
皱纹;顶端中间略有茎痕,质坚硬;断面灰白色至灰褐色,气味
淡而不苦,口嚼黏腻;主要含淀粉、多糖(包括黏液质及糖蛋
白)、蛋白质、多种游离氨基酸等有效成分[2],是药用价值很
高的药材,可食用,具医疗价值[3]。山药零余子资源很丰富,
产量可达 3 000 ~ 6 000 kg /hm2,除了少部分煮食和作为繁殖
材料外,大部分作为废弃物被抛弃。为进一步提高零余子的
开发利用价值,提高山药产业的附加值,对山药零余子多糖抗
氧化活性及对糖尿病小鼠降血糖作用进行研究,以期为山药
零余子的综合开发利用奠定理论基础。
1 材料与方法
1. 1 材料
供试山药零余子,购于河南省焦作市;ICR 小鼠,SPF 级,
体重 20 ~ 25 g,购自北京维通利华实验动物技术有限公司。
1. 2 方法
1. 2. 1 山药零余子多糖 山药零余子粉碎后于 60 ~ 80 ℃热
水提取 5 h,收集提取液,减压浓缩至适当体积,按 Sevag 法去
除蛋白,再用乙醇沉淀为粗品多糖。
1. 2. 2 试验动物造模及分组处理 ICR 雄性小鼠 80 只,在
试验环境中适应 4 d 后禁食 12 h,经腹腔一次性注射四氧嘧
啶,剂量为 150 rag /kg;再饲养 3 d后禁食 6 h,测定空腹血糖,
并选择空腹血糖在 10 mmol /L 以上的试验小鼠作为糖尿病
小鼠。
将 ICR雄性小鼠分为 5 组,即正常对照组、糖尿病模型组
和山药多糖模型组 3 个剂量组,每组 10 只小鼠。山药多糖模
型组小鼠分别以 10、20、30 rag /kg山药多糖灌胃,正常对照组
和糖尿病模型组均灌胃等量的蒸馏水。每日 1 次,连续给药
30 d,分别测定小鼠不同时期的体重和空腹血糖。小鼠耐糖
量检测在试验结束时进行,将空腹 6 h后的小鼠,用葡萄糖以
25 g /kg 剂量灌胃处理,分别测定小鼠口服葡萄糖后 0、1、2 h
的血糖值[4]。
1. 2. 3 山药零余子多糖还原力测定 取不同浓度样品溶液
2. 5 mL于试管中,依次加入 2. 5 mL磷酸缓冲液(0. 2 mol /L,
pH值 6. 6)和 2. 5 mL 1%六氰合铁酸钾溶液,于 50 ℃水浴保
温 20 min后,快速冷却,再加入 2. 5 mL 10%三氯乙酸溶液,
混匀,5 000 r /min离心 10 min;移取上清液 2. 5 mL于试管中,
依次加入 2. 5 mL蒸馏水、0. 5 mL 0. 1%三氯化铁溶液,充分
混匀,静置 10 min 后,以蒸馏水做参比液,在波长为 700 nm
处测定吸光度。吸光度越大表示还原能力越强[5]。
1. 2. 4 山药零余子多糖对 DPPH·清除能力的测定 取样
品液 2 mL,加入 2 mL 0. 000 1 mol /L DPPH溶液(溶于 95%乙
醇),混匀后在室温下避光反应 20 min,1 000 r /min 离心
10 min,在波长为 517 nm处测得吸光度为 Di;空白组为 2 mL
样品液加入 2 mL 95%乙醇溶液,517 nm处测得吸光度为 Dj;
对照组为 2 mL DPPH溶液与 2 mL 蒸馏水混合,517 nm 处测
得吸光度为 Dc,以等体积蒸馏水和 95%乙醇混合液作为空白
进行调零。清除率计算公式为:DPPH·清除率 =[1 -(Di -
Dj)/Dc]× 100%
[6]。
1. 2. 5 山药零余子多糖对对·OH 清除能力的测定 样品
组试管中依次加入 pH 值为 7. 4 的 0. 4 mol /L 磷酸缓冲液、
2. 5 mmol /L 邻二氮菲溶液、样品液、2. 5 mmol /L 硫酸亚铁溶
液各 1 mL,0. 02 mol /L H2O2 0. 5 mL;损伤组中用 1 mL 蒸馏
水代替样品液;空白组中用 1. 5 mL 蒸馏水代替样品液和
H2O2 溶液。37 ℃恒温水浴反应 l h,快速测定 536 nm处的吸
光度[7]。样品对·OH的清除率计算公式为:·OH 清除率 =
(D0 - D2)/(D1 - D2)× 100%。其中,D0 为加入样品液和
H2O2 的 ·OH 体系吸光度;D1 为加样品液而不加 H2O2 的
·OH 体系吸光度;D2 为加 H2O2 不加样品液的·OH 体系吸
光度。
1. 2. 6 血糖测定 采集试验小鼠眼眶内眦静脉血,空腹血糖
采集禁食 6 h后的小鼠静脉血。取血清用葡萄糖氧化酶 -过
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DOI:10.15889/j.issn.1002-1302.2014.03.118
氧化酶法测定血糖。
1. 2. 7 数据分析 试验数据用“平均值 ±标准差”表示,以
Minitab 16 统计软件进行单因子方差分析,采用邓肯氏新复
极差法进行各组间比较。
2 结果与分析
2. 1 山药零余子多糖的还原能力
还原力是物质抗氧化能力的一个重要指标,还原力强弱
是多糖抗氧化性的重要参数。山药零余子多糖样品在
700 nm 处吸光度的高低,可以间接反映多糖抗氧化能力的大
小。由图 1 可知,随着山药零余子多糖试验样品浓度升高,吸
光度逐渐增加,多糖还原力也呈增加趋势;多糖浓度为
5 mg /mL 时,吸光度最高,还原力最强。
2. 2 山药零余子多糖对 DPPH·的清除能力
由图 2 可知,不同浓度的山药零余子多糖对 DPPH·均
有一定程度的清除作用,且随着浓度升高清除率增加;山药零
余子提取物浓度为 4. 0 mg /mL 时,对 DPPH·的清除率为
91. 15%。回归分析表明,山药零余子多糖对 DPPH·的清除
效果与多糖浓度符合一元一次方程模型,其方程为 y =
22. 994x + 10. 242 9(r2 = 0. 994 6)。
2. 3 山药零余子多糖对·OH 的清除能力
羟基自由基是体内最活泼的氧,累积过剩时可以引起多
种病理变化,而多糖可以提供氢原子,与羟基自由基结合成
水,达到清除自由基的效果。由图 3 可知,不同浓度山药零余
子多糖对体系中产生的·OH 均有一定的清除作用,且随着
山药零余子多糖浓度升高,清除效果逐渐增强;山药零余子多
糖浓度为 4. 0 mg /mL时,对·OH的清除率达到 89. 06%。
2. 4 山药零余子多糖对各组试验小鼠空腹血糖的影响
由表 1 可知,造模前,对照组、山药多糖组小鼠空腹血糖
含量无显著性差异;造模后,各小组血糖含量与正常对照组差
异显著;治疗后,各多糖剂量组的糖尿病小鼠血糖含量均降
低,高剂量(30 mg /kg)山药多糖降糖更加明显。这说明山药
零余子多糖可有效降低糖尿病小鼠的高血糖水平。
表 1 山药零余子多糖对各组试验小鼠空腹血糖的影响
组别
鼠数
(只)
剂量
(mg /kg)
造模前血糖含量
(mmol /L)
造模后血糖含量
(mmol /L)
治疗后血糖含量
(mmol /L)
正常对照组 10 0 5. 53 ± 0. 64aA 6. 15 ± 0. 57aA 6. 09 ± 0. 72aA
模型对照组 10 0 6. 12 ± 0. 78aA 15. 32 ± 0. 64bB 15. 08 ± 0. 73dB
山药多糖组 10 10 5. 92 ± 0. 76aA 15. 28 ± 0. 52bB 14. 23 ± 0. 53cB
10 20 5. 76 ± 0. 57aA 15. 95 ± 0. 64cB 13. 89 ± 0. 70cB
10 30 5. 95 ± 0. 76aA 16. 03 ± 0. 61cB 12. 71 ± 1. 06bB
注:同列数据后不同大写字母表示差异极显著(P < 0. 01),小写字母表示差异显著(P < 0. 05)。
3 小结与讨论
自由基的氧化损伤与许多疾病的发病机理有关,人体通
过适当摄入具有抗氧化活性的物质可以降低体内自由基水
平,防止脂质过氧化。脂质过氧化与衰老密切相关,甚至诱发
许多疾病[8]。本试验结果表明,山药零余子多糖具有显著的
抗氧化活性,还原力强,4. 0 mg /mL 剂量对 DPPH·和·OH
的清除能力分别为 91. 15%和 89. 06%。
四氧嘧啶诱发糖尿病的机理已经清楚,它能选择性地破
坏胰岛 β细胞,使胰岛内的分泌细胞减少、细胞肿胀、空泡增
多等,在胰岛 β细胞被破坏的机制中,自由基起着至关重要的
作用[9]。本研究结果表明,山药零余子多糖可明显降低四氧
嘧啶糖尿病小鼠血糖,这可能与增加胰岛素分泌、改善受损坏
的胰岛 β细胞功能及清除多余的自由基等有关。
本研究利用化学模型表明山药零余子多糖具有较强的抗
氧化和降血糖作用,为以后安全有效、具营养作用的天然抗氧
化剂和降血糖药剂的开发提供了新资源,这既提高了药农的
收入,又将山药零余子变废为宝。
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赵 文,刘国顺,贾方方,等. 烤烟烟碱含量的高光谱预测模型[J]. 江苏农业科学,2014,42(3):275 - 279.
烤烟烟碱含量的高光谱预测模型
赵 文1,刘国顺1,贾方方1,丁松爽1,高静静1,邢雪霞1,2
(1.河南农业大学烟草学院 /国家烟草栽培生理生化研究基地,河南郑州 450002;
2.中国烟草总公司南阳市公司,河南南阳 473000)
摘要:利用高光谱参数预测烤烟叶片中的烟碱含量,选取大田试验条件下不同光照强度处理的烟株测定光谱反射
率。选择 18 个高光谱参数与烟碱含量进行相关性分析并构建回归方程,进而建立烤烟叶片烟碱含量的高光谱参数预
测模型,并对模型进行均方根误差和相对误差检验。结果表明:烟碱含量与选取的高光谱参数之间的相关系数均达到
极显著水平,最高为 0. 83。选取其中相关性最好的 8 个高光谱参数并建立多种函数的回归模型发现,抛物线的拟合
精度 r2 在各方程中为最优,达到 0. 773。结合误差检验得出:选取的 8 个参数中误差检验与预测模型的精度相符合,
说明预测模型稳定性良好,能够进行烟碱含量的快速、简便、准确的预测,尤其以 NDSI导数、RSI导数、SASI 导数的抛
物线预测模型为最佳。
关键词:烤烟;高光谱;烟碱含量;预测模型
中图分类号:TS41 + 1 文献标志码:A 文章编号:1002 - 1302(2014)03 - 0275 - 05
收稿日期:2013 - 10 - 31
基金项目:中国烟草总公司特色优质烟叶开发重大专项[编号:
110201101001(TS - 01)]。
作者简介:赵 文(1987—),男,河南民权人,硕士研究生,主要从事
烟草栽培高光谱研究。E - mail:paituoa@ 163. com。
通信作者:刘国顺,教授,主要从事烟草栽培研究。E - mail:
liugsh1851@ 163. com。
烟碱作为烟草特有的化学成分,对烟叶的刺激性、生理强
度以及香吃味都有很大的影响[1 - 2]。有研究表明,烟叶中的
烟碱含量介于 1. 5% ~ 3. 5%之间时,烟叶为优质水平;烟碱
含量过低时,则吸食平淡乏味;烟碱含量过高时,则烟气劲头
过大[3 - 4]。近年来,随着高光谱遥感技术的发展,基于高光谱
原理的无损伤测试技术已经逐步在农业上得到应用,目前国
内外学者已经对多种作物进行了光谱反射率及化学组分的相
关性研究。Johnson等研究了 2 160 nm 波段处树叶反射率的
一阶导数与叶片全氮含量间的相关性,结果发现相关性在整
个可见光至红外波段范围内最好,用光谱分析方法估测鲜叶
的含氮量时发现,其精度大于 85%[5]。牛铮等的研究表明,
小麦鲜叶片的精细光谱特征能够较好地反映出其 7 种化学组
分含量,尤其对粗蛋白、氮、钾含量的反映最好,r2 均达到 0. 8
以上[6]。高光谱预测在烟草上的应用尚处于起步阶段,李向
阳等采用逐步回归方法建立了 K326 烤烟叶片烟碱含量的回
归方程,认为一阶导数光谱回归模型的模拟效果较好,但要达
到田间实时实地检测,还要考虑外界环境的影响[7]。吴玉萍
等指出,不同品种烤烟间的烟碱含量差异显著,因此研究不同
品种烤烟的大田环境光谱预测模型很有必要[8]。刘良云等
认为,460 ~ 740 nm波段光谱反射率与烟碱和全氮含量呈极
显著负相关,430 ~ 710 nm 波段光谱透过率与全氮含量呈极
显著负相关、与烟碱含量呈显著负相关[9]。有研究表明,利
用 PPR(550,450)和 NRI(近红外)建立的烟叶氮素、烟碱、钾
离子含量的光谱预测模型都有很好的稳定性。辛荣等指出,
利用多元分析中的逐步回归法、主成分分析法建立全氮预测
模型的效果较好[10]。此类研究虽然较多,但尚未见涉及不同
光照强度处理下高光谱对烟碱含量的预测模型。由于光照强
度对烤烟烟碱含量的影响较大,且光照强度过低会导致烟碱
含量升高,烟叶品质下降[11],因此本试验采用在大田中使用
不同层数的纱布遮阴处理烟叶,通过对不同生育期内光谱反
射率的测定研究烤烟烟碱含量与光谱之间的关系,旨在建立
一个精确的烟碱高光谱参数预测模型,为快速测定烤烟叶片
中的烟碱含量提供新的研究方法和思路。
—572—江苏农业科学 2014 年第 42 卷第 3 期