全 文 ：西北林学院学报 ２０１５，３０（３）：１９１～１９６
Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｎｏｒｔｈｗｅｓｔ　Ｆｏｒｅｓｔｒｙ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ
　　ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００１－７４６１．２０１５．０３．３３
重瓣榆叶梅花中蛋白质提取工艺及动态含量研究
　收稿日期：２０１４－０９－０５　修回日期：２０１４－１１－０４
　基金项目：国家自然科学基金（３０６７１６５５）。
　作者简介：徐毅励，男，在读硕士，研究方向：生物物理专业，大分子结构。Ｅ－ｍａｉｌ：ｘｕｙｉｌｉｑｑ＠１２６．ｃｏｍ
＊通信作者：陈媛梅，女，副教授，研究方向：天然化合物的提取分离与物理化学性质。Ｅ－ｍａｉｌ：ｃｈｙｍ１１＠ｂｊｆｕ．ｅｄｕ．ｃｎ
徐毅励，陈媛梅＊
（北京林业大学 理学院，北京１０００８３）
摘　要：重瓣榆叶梅花中蛋白质提取研究表明，最佳提取工艺为采用ｐＨ７．０的磷酸氢二钠提取液、液
料比为３０∶１（ｍＬ∶ｇ）、３０℃、５００Ｗ、超声提取３次（每次１２０ｍｉｎ）。在该提取工艺条件下，测得开花
１４ｄ花中蛋白质含量最高，为１３．２３７ｍｇ·ｇ－１；开花２１ｄ花中蛋白质含量最低，仅为５．１５０ｍｇ·ｇ－１。
关键词：重瓣榆叶梅花；超声提取；蛋白质；液料比；动态含量
中图分类号：Ｓ７１３　　　文献标志码：Ａ　　　文章编号：１００１－７４６１（２０１５）０３－０１９１－０６
Ｏｐｔｉｍａｌ　Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　ａｎｄ　Ｄｙｎａｍｉｃ　Ｃｏｎｔｅｎｔ　ｏｆ　Ｐｒｏｔｅｉｎ　ｉｎ　ｔｈｅ
Ｆｌｏｗｅｒ　ｏｆ　Ａｍｙｇｄａｌｕｓ　ｔｒｉｌｏｂａ　ｆ．ｍｕｌｔｉｐｌｅｘ
ＸＵ　Ｙｉ－ｌｉ，ＣＨＥＮ　Ｙｕａｎ－ｍｅｉ＊
（Ｃｏｌｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｂｅｉｊｉｎｇ　Ｆｏｒｅｓｔｒｙ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｂｅｉｊｉｎｇ１０００８３，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｃｒｕｄｅ　ｐｒｏｔｅｉｎｓ　ｗｅｒｅ　ｅｘｔｒａｃｔｅｄ　ｆｒｏｍ　ｔｈｅ　ｆｌｏｗｅｒｓ　ｏｆ　Ａｍｙｇｄａｌｕｓ　ｔｒｉｌｏｂａ　ｆ．ｍｕｌｔｉｐｌｅｘ．Ｔｈｅ　ｏｐｔｉｍａｌ
ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｗｅｒｅ　ｏｂｔａｉｎｅｄ：Ｓｏｌｖｅｎｔ：ｄｉｓｏｄｉｕｍ　ｈｙｄｒｏｇｅｎ　ｐｈｏｓｐｈａｔｅ　ｗｉｔｈ　ｐＨ＝７．０，ｒａｔｉｏｎ
ｏｆ　ｓｏｌｖｅｎｔ　ｔｏ　ｍａｔｅｒｉａｌ：３０∶１（ｍＬ∶ｇ）．Ｔｈｅ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｗａｓ　ｃｏｎｄｕｃｔｅｄ　ｆｏｒ　３ｔｉｍｅｓ（１２０ｍｉｎ　ｅａｃｈ）ａｔ　３０℃ａｉ－
ｄｅｄ　ｂｙ　ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃ　ｗａｖｅ（５００Ｗｏｆ　ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃ　ｇｅｎｅｒａｔｏｒ　ｐｏｗｅｒ）．Ｂｙ　ａｂｏｖｅ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ，ｉｔ　ｗａｓ
ｆｏｕｎｄ　ｔｈｅ　ｈｉｇｈｅｓｔ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ｏｆ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｗａｓ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｆｌｏｗｅｒｓ　ｃｏｌｅｃｔｅｄ　ａｔ　ｔｈｅ　１４ｔｈ　ｄａｙ　ａｆｔｅｒ　ｂｌｏｓｓｏｍｉｎｇ，ａｂｏｕｔ
１３．２３７ｍｇ·ｇ－１，ｌｏｗｅｓｔ　ａｔ　ｔｈｅ　２１ｓｔ　ｄａｙ，ａｂｏｕｔ　５．１５０ｍｇ·ｇ－１．
Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ａｍｙｇｄａｌｕｓ　ｔｒｉｌｏｂａ　ｆ．ｍｕｌｔｉｐｌｅｘ；ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃ　ｗａｖｅ　ａｉｄｅｄ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ；ｐｒｏｔｅｉｎ；ｌｉｑｕｉｄ　ｒａｔｉｏ；ｄｙ－
ｎａｍｉｃ　ｃｏｎｔｅｎｔ
　　重瓣榆叶梅（Ａｍｙｇｄａｌｕｓ　ｔｒｉｌｏｂａ　ｆ．ｍｕｌｔｉｐｌｅｘ）又
名小桃红，属蔷薇科（Ｒｏｓａｃｅａｅ）植物。具有开花早、花
期长、花朵大、颜色鲜艳、纯正等特点，是一种观赏价
值很高的园林绿化彩化树种［１］；其分布地域广，耐干
燥土壤，适应性强，易成活［２］。重瓣榆叶梅花粉营养
成分丰富，含有蛋白质、氨基酸、脂肪、维生素、微量元
素、生物酶、黄酮类等化合物，从花粉中将有效成份提
取出来，可用于保健食品、药品以及营养性化妆品［３］。
因此，它既可美化环境，又极具经济价值。
植物蛋白对人体生理代谢以及膳食营养结构的
调节具有重要作用，是人类最主要的蛋白质资源之
一［４］。蛋白质组学方法在致病机制、耐药性等方面
的应用研究正逐渐引起重视。在进行蛋白质组学方
法研究中，建立一种稳定、可靠的蛋白质提取方法非
常重要［５］。我国关于重瓣榆叶梅的研究主要是栽培
技术及其果仁成分的分析，目前未见重瓣榆叶梅花
的蛋白质提取工艺及其动态含量的研究报道。本文
参考国内外相关文献的基础上［６－１９］，对蛋白质提取
方法进行改进，并测定了不同时期花中蛋白质的含
量。采用单因素试验和正交试验，对重瓣榆叶梅花
中蛋白质的提取工艺进行研究，以期为重瓣榆叶梅
花的综合开发利用提供科学根据。
１　材料与方法
１．１　材料与试剂
材料：分别采集北京林业大学校园内花苞、开花
１周、开花２周、开花３周４个时期的重瓣榆叶梅花
（其中，开花３周，树上的花已凋谢大半），冷藏于
－３０℃冰箱中。
试剂：Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ、盐酸、磷酸氢二钠、丙酮、氢氧
化钠、盐酸、聚乙烯吡咯烷酮（ＰＶＰ）均为分析纯。牛
血清蛋白（９５％）。水均为超纯水。
１．２　主要仪器
３Ｋ３０台式高速冷冻离心机（北京时代北利离心
机有限公司），ＩｔｅｍＡＲ２１４０电子天平；电热鼓风干
燥箱（重庆万达仪器有限公司），ＫＱ５００ＤＢ型超声
波清洗器（昆山市超声仪器有限公司），ＵＶ－２４５０紫
外可见分光光度计（日本岛津公司）。
１．３　方法
１．３．１　标准曲线的绘制　采用改良 Ｂｒａｄｆｏｒｄ
法［１８－２０］测定蛋白质吸光度并绘制标准曲线：配制
０．２０、０．４０、０．６０、０．８０ｍｇ·ｍＬ－１和１．００ｍｇ·
ｍＬ－１系列浓度的蛋白质标准液，各取１．０００ｍＬ考
马斯亮蓝工作液于５只比色皿中作对照液，用于调
零；再向其中加入上述各标准液１０μＬ混匀，于波长
５９５ｎｍ处，测定吸光度值。每个浓度的标准液平行
测定５次，取平均值作为测定结果。以浓度（ｍｇ·
ｍＬ－１）为横坐标（ｘ），ＯＤ５９５值（在波长５９５ｎｍ处测
得的蛋白质溶液的吸光度值）为纵坐标（ｙ），绘制蛋
白质的标准曲线（图１）。根据待测样品的ＯＤ５９５值，
从标准曲线中计算出样品浓度。
１．３．２　提取液的制备　称取开花后２周的鲜重瓣
榆叶梅花１．０００　０ｇ，置预冷的研钵中，加入０．０５０　０
ｇ　ＰＶＰ，然后加入液氮迅速冷却并充分研磨至粉末，
将粉末移入到提取管中，加入一定量的提取液，在设
定条件下超声提取一定时间，取出后在高速冷冻离
心机中，调节离心机转速至１０　０００ｒ·ｍｉｎ－１离心２５
ｍｉｎ，上清液为粗蛋白提取液。用上述方法测定提
取液的ＯＤ５９５值，根据蛋白质的标准曲线计算含量。
所有试验均重复５次，取平均值。
１．３．３　单因素试验　选取溶剂类型、超声功率、超
声温度、超声时间、超声次数、液料比、提取液ｐＨ值
等因素为研究对象，以粗提蛋白质的提取率为考察
指标，选用开花２周的重瓣榆叶梅花（花瓣开放最旺
盛）为材料进行单因素试验。
１．３．４　正交试验　在单因素试验的基础上，选取对
提取影响较大的因素进行正交试验，以确定最佳
工艺。
１．３．５　验证试验　在正交试验的基础上，按照已确
定的最佳工艺参数，进行超声提取并测定开花２周
的重瓣榆叶梅花中蛋白质的含量，以检验最佳工艺
的可行性。
１．３．６　重复性试验　准确称取开花２周的重瓣榆
叶梅花５份，每份１．０００　０ｇ，在最佳工提取艺条件
下，测定样品中蛋白质的含量。５次平行试验，取平
均值。
１．３．７　精密度试验　为检验仪器的精密度，准确称
取开花２周的重瓣榆叶梅花１．０００　０ｇ，按最佳工艺
提取，测定样品中蛋白质的含量。平行测定吸光度
５次。
１．３．８　不同时期花中蛋白质含量的测定　分别准
确称取不同时期的重瓣榆叶梅花各５份，每份
１．０００　０ｇ，在最佳提取工艺条件下，测定蛋白质含
量。重复５次，取平均值。
２　结果与分析
２．１　标准曲线的绘制
用最小二乘法作线性回归，方程为
ｙ＝０．１７２　２ｘ＋０．００４，ｒ２＝０．９９８　１。
在０．２０～１．００ｍｇ·ｍＬ－１的范围内，ＯＤ５９５值
与蛋白质浓度呈良好的线性关系（图１）。
图１　蛋白质的标准曲线
Ｆｉｇ．１　Ｔｈｅ　ｓｔａｎｄａｒｄ　ｃｕｒｖｅ　ｏｆ　ｐｒｏｔｅｉｎ
２．２　不同提取因子对重瓣榆叶梅花中蛋白质提取
率的影响
２．２．１　提取溶剂的选择　在液料比（提取液体积／
ｍＬ与试验材料质量／ｇ的比值）为１０∶１、溶剂ｐＨ
＝７．０等保持不变的条件下，５００Ｗ、２５℃、９０ｍｉｎ
超声提前３次，不同溶剂类型对超声提取蛋白质的
提取效果（图２）可知，磷酸氢二钠溶液＞Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ
溶液＞丙酮＞超纯水。
２．２．２　ｐＨ 对蛋白质提取率的影响　在液料比
１０∶１（ｍＬ∶ｇ）条件下，５００Ｗ、２５℃、９０ｍｉｎ超声提
前３次，ｐＨ为５．０、６．０、７．０、８．０、９．０与１０．０的磷
酸氢二钠溶液（用１ｍｏＬ·Ｌ－１　ＮａＯＨ 溶液和１
ｍｏＬ·Ｌ－１　ＨＣｌ溶液调节提取液的ｐＨ值）对蛋白质
提取率的影响（图３）结果表明，ｐＨ从５．０至７．０，蛋
白质的提取率逐渐升高，而在７．０至１０．０蛋白质的
２９１ 西北林学院学报 ３０卷　
提取率迅速下降。可见，提取液磷酸氢二钠溶液的
ｐＨ以７．０为宜。
图２　不同溶剂类型对重瓣榆叶梅花中蛋白质提取率的影响
Ｆｉｇ．２　Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｓｏｌｖｅｎｔｓ　ｏｎ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｒａｔｅ　ｏｆ　ｔｈｅ
ｆｌｏｗｅｒ　ｏｆ　Ａ．ｔｒｉｌｏｂａ　ｆ．ｍｕｌｔｉｐｌｅｘ
图３　ｐＨ值重瓣榆叶梅花中蛋白质提取率的影响
Ｆｉｇ．３　Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｐＨ　ｏｎ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｒａｔｅ
２．２．３　液料比对蛋白质提取率的影响　以ｐＨ７．０
的磷酸氢二钠为提取液，５００Ｗ、２５℃、９０ｍｉｎ超声
提前３次的条件下，液料比对蛋白质提取率的影响
（图４）结果表明，当液料比较低时，测得蛋白质的提
取率随着液料比的增加而升高。当液料比超过２５
∶１（ｍＬ∶ｇ）时，所得浓度趋于平稳。结合从降低成
本角度考虑，提取液用量不宜过大，选择液料比为
２５∶１（ｍＬ∶ｇ）为宜。
图４　液料比对重瓣榆叶梅花中蛋白质提取率的影响
Ｆｉｇ．４　Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｓｏｌｖｅｎｔ　ｔｏ　ｍａｔｅｒｉａｌ　ｒａｔｉｏ　ｏｎ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｒａｔｅ
２．２．４　超声温度对蛋白质提取率的影响　以
ｐＨ７．０的磷酸氢二钠为提取液，液料比２５∶１（ｍＬ
∶ｇ），５００Ｗ、９０ｍｉｎ、超声提取３次条件下，超声温
度对蛋白质提取率的影响（图５）结果表明，２０℃～
４０℃范围，随着超声温度的升高，蛋白质的提取率升
高。温度为３０℃时，蛋白质提取率达到最高。温度
高于３０℃之后，其提取率随温度的升高反而降低。
因此，适宜超声提取温度为３０℃。
图５　超声温度对重瓣榆叶梅花中蛋白质提取率的影响
Ｆｉｇ．５　Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃ　ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ　ｏｎ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｒａｔｅ
２．２．５　超声功率对蛋白质提取率的影响　以
ｐＨ７．０的磷酸氢二钠为提取液，液料比为２５∶１
（ｍＬ∶ｇ），３０℃、９０ｍｉｎ超声３次条件下，超声功率
对蛋白质提取率的影响结果（图６）表明，超声功率
在１００～５００Ｗ 时，随着超声功率的增大，蛋白质的
提取率升高，５００Ｗ时蛋白质的提取率达最大。
图６　超声功率对重瓣榆叶梅花中蛋白质提取率的影响
Ｆｉｇ．６　Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃ　ｐｏｗｅｒ　ｏｎ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｒａｔｅ
２．２．６　超声次数对蛋白质提取率的影响　以
ｐＨ７．０的磷酸氢二钠为提取液，液料比为２５∶１
（ｍＬ∶ｇ），５００Ｗ、３０℃超声提取９０ｍｉｎ条件下，超
声提取次数对蛋白质提取率的影响结果（图７）表
明，蛋白质的提取率随超声次数的增加而增大，而超
过３次后变化较为缓慢；超声次数过多时，会增加溶
剂用量及所需时间。因此，从方便操作、经济成本、
提取得率等方面综合考虑，超声提取次数以３次
为宜。
２．２．７　超声时间对蛋白质提取率的影响　以
ｐＨ７．０的磷酸氢二钠为提取液，液料比为２５∶１
３９１第３期 徐毅励 等：重瓣榆叶梅花中蛋白质提取工艺及动态含量研究
（ｍＬ∶ｇ），３０℃、５００Ｗ、超声提取３次条件下，超声
时间对蛋白质提取率的影响结果（图８）表明，超声
提前时间在３０～９０ｍｉｎ范围内，蛋白质的提取浓度
随着超声时间的延长而快速增加，９０～１５０ｍｉｎ内
则增加缓慢。适宜的超声提前时间为１２０ｍｉｎ。
图７　超声次数对重瓣榆叶梅花中蛋白质提取率的影响
Ｆｉｇ．７　Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｔｉｍｅｓ　ｏｎ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｒａｔｅ
２．３　不同提取因子对蛋白质提取率的影响优化
选取对蛋白质提取率影响较为显著且复杂的４
个因素，采用Ｌ９（３４）正交表设计试验，以蛋白质提
取率为考察指标，对重瓣榆叶梅花中蛋白质的提取
工艺进行研究。不同因素对提取浓度影响的重要性
顺序为Ｂ＞Ａ＞Ｄ＞Ｃ，即液料比＞ｐＨ＞超声温度＞
超声时间，最佳水平组为Ａ２Ｂ３Ｃ３Ｄ２，即液料比
３０∶１、ｐＨ７．０、超声提取时间１２０ｍｉｎ、超声温度
３０℃（表１）；为求验证，准确称取开花两周的重瓣榆
叶梅花５份，每份１．０００　０ｇ，在优化工艺条件下，测
定样品中蛋白质的含量。每份５次平行试验，取其
平均值。所得蛋白质的平均提取率为１３．２２８ｍｇ·
ｇ－１，ＲＳＤ值为０．３０６％（表２）。
图８　超声时间对重瓣榆叶梅花中蛋白质提取率的影响
Ｆｉｇ．８　Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｌｅｎｇｔｈ　ｏｆ　ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃ　ｔｒｅａｔｍｅｎｔ　ｔｉｍｅ
ｏｎ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｒａｔｅ
２．４　重复性试验
准确称取５份开花２周的重瓣榆叶梅花，每份
１．０００　０ｇ，在最佳工艺条件下进行５次平行试验，
ＲＳＤ为０．２９５％，说明该工艺重现性好，稳定可行
（表３）。
表１　不同提取因子对蛋白质提取率的影响优化
Ｔａｂｌｅ　１　Ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ　ｏｆ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｆａｃｔｏｒｓ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙ
试验号 Ａ：（ｐＨ） Ｂ：液料比／（ｍＬ∶ｇ） Ｃ：超声时间／ｍｉｎ　 Ｄ：超声温度／℃ 蛋白质提取率／（ｍｇ·ｇ－１）
１　 １（６．０） １（２０∶１） １（６０） １（２５） ４．１００
２　 １（６．０） ２（２５∶１） ２（９０） ２（３０） ９．８７５
３　 １（６．０） ３（３０∶１） ３（１２０） ３（３５） １０．４１０
４　 ２（７．０） １（２０∶１） ２（９０） ３（３５） ６．５６０
５　 ２（７．０） ２（２５∶１） ３（１２０） １（２５） １０．１７５
６　 ２（７．０） ３（３０∶１） １（６０） ２（３０） １２．０６０
７　 ３（８．０） １（２０∶１） ３（１２０） ２（２５） ７．５６０
８　 ３（８．０） ２（２５∶１） １（６０） ３（３０） ５．１７５
９　 ３（８．０） ３（３０∶１） ２（９０） １（２５） ８．０１０
ｋ１ ２４．３８５　 ２１．６８　 ２１．３３５　 ２２．２８５
ｋ２ ２８．７９５　 ２５．２２５　 ２４．４４５　 ２９．４９５
ｋ３ ２０．７４５　 ３０．４８　 ２８．１４５　 ２２．１４５
Ｋ１ ８．１２８　 ７．２２６　 ７．１１２　 ７．４２８
Ｋ２ ９．５９８　 ８．４０８　 ８．１４８　 ９．８３２
Ｋ３ ６．９１５　 １０．１６　 ９．３８２　 ７．３８２
Ｒ　 ２．６８３　 ２．９３４　 ２．２７０　 ２．４５
优化方案 Ａ２ Ｂ３ Ｃ３ Ｄ２
表２　最佳工艺条件验证试验
Ｔａｂｌｅ　２　Ｔｈｅ　ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ　ｒｅｓｕｌｔ　ｏｆ　ｖｅｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ
指标 １　 ２　 ３　 ４　 ５　 ＲＳＤ／％
蛋白质提取率／（ｍｇ·ｇ－１） １３．２３８　 １３．２０３　 １３．２５２　 １３．２３７　 １３．２１２　 ０．３０６
４９１ 西北林学院学报 ３０卷　
表３　最佳工艺条件重复性试验结果
Ｔａｂｌｅ　３　Ｔｈｅ　ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ　ｒｅｓｕｌｔ　ｏｆ　ｒｅｐｅａｔａｂｉｌｉｔｙ
指标 １　 ２　 ３　 ４　 ５　 ＲＳＤ／％
蛋白质提取率／（ｍｇ·ｇ－１） １３．２５２　 １３．２０３　 １３．２４２　 １３．２３７　 １３．２１９　 ０．２９５
２．５　精密度试验
准确称取开花２周的重瓣榆叶梅花１．０００　０ｇ
一份，用最佳工艺条件提取后，测定样品中蛋白质的
含量５次，取平均值（表４）。蛋白质的平均提取率
为１３．２２３ｍｇ·ｇ－１，ＲＳＤ 值为０．２１０％（ｎ＝５），试
验表明该方法精密度高，所得数据准确。
表４　精密度试验结果
Ｔａｂｌｅ　４　Ｔｈｅ　ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ　ｒｅｓｕｌｔ　ｏｆ　ｐｒｅｃｉｓｉｏｎ
指标 １　 ２　 ３　 ４　 ５　 ＲＳＤ／％
蛋白质提取率／（ｍｇ·ｇ－１） １３．２３２　 １３．２１３　 １３．２４２　 １３．２１７　 １３．２０９　 ０．２１０
２．６　不同时期花中蛋白质的含量分析
在筛选出的最佳提取工艺条件下，不同时期重
瓣榆叶梅花中蛋白质的含量不同（表５），花苞期到
开花２周花中蛋白质含量逐渐升高，在开花２周时
达到最高，可达１３．２３７ｍｇ·ｇ－１；而开花２周至开
花３周的花中蛋白质含量迅速下降，直至开花３周
时降低到５．１５０ｍｇ·ｇ－１。
表５　不同时期花中蛋白质含量
Ｔａｂｌｅ　５　Ｃｏｎｔｅｎｔｓ　ｏｆ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｆｌｏｗｅｒ　ｏｆ　Ａ．ｔｒｉｌｏｂａ
ｆ．ｍｕｌｔｉｐｌｅｘｆｏｒ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｂｌｏｏｍｉｎｇ　ｐｅｒｉｏｄｓ
开花时间／ｄ　 ０　 ７　 １４　 ２１
蛋白质提取
／（ｍｇ·ｇ－１）
６．８１０　 ８．４２５　 １３．２３７　 ５．１５０
３　结论与讨论
采用单因素试验和正交试验优化了重瓣榆叶梅
花中蛋白质的提取工艺，得出其最佳提取方案为以
ｐＨ７．０的磷酸氢二钠为提取液、液料比为３０∶１
（ｍＬ∶ｇ）、５００Ｗ、３０℃、１２０ｍｉｎ超声提取３次。该
方法蛋白质提取率高，重复性好，精密度高，适用于
重瓣榆叶梅花中蛋白质的提取。
在最佳提取工艺条件下，测定了花苞、开花２
周、开花２周及开花３周的花中蛋白质含量。从花
苞期至开花２周后蛋白质含量逐渐升高，且在开花
２周时蛋白质含量最高；而由开花２周至开花３周
花中蛋白质含量下降，且开花后３周花中蛋白质含
量最低。测定出的花中蛋白质含量的升降趋势与重
瓣榆叶梅花的生长周期中的代谢特点相一致。大部
分蛋白质可溶于水、有机溶剂、稀盐、稀碱或稀酸溶
液中，而稀盐溶液和缓冲溶液对蛋白质稳定性好、溶
解度大。磷酸盐溶液可螯合某些金属离子和解离酶
分子与其他杂质的静电结合，使与细胞颗粒结合不
太紧密的蛋白质和酶溶解在水溶液中。在一定ｐＨ
范围内的磷酸溶液可维持蛋白质的结构，对花中蛋
白质起保护作用。
蛋白质是具有等电点的两性电解质，提取液的
ｐＨ值应选择在偏离等电点两侧的ｐＨ范围内，提取
时，应防止过酸或过碱而引起蛋白质可解离基团发
生变化，从而导致蛋白质构象的不可逆变化。在
ｐＨ为７．０，蛋白质提取率达到最大值。
当液料比超过２５∶１（ｍＬ∶ｇ）时，所得浓度趋
于平稳，可能是物料一定时，提取液用量越大，物料
与提取液的接触面浓度差越大、渗透压越大，蛋白质
也就越容易浸出［２１］。当达到一定比值（２５∶１）后，
重瓣榆叶梅花中蛋白质的提取量已接近最大，因此
继续增加液料比时，浓度增加不明显，超声功率在
１００～５００Ｗ时，随着超声功率的增大，蛋白质的提
取率升高，因为超声波功率越大，空化和机械化作用
越强烈，分子扩散速度越大［２１］，超声提取开始时随
着超声时间的延长，蛋白质的溶出速度大于降解速
度，所得蛋白质提取率呈上升趋势；超声９０ｍｉｎ后，
溶液体系的渗透压达到平衡，进而蛋白质的溶解趋
于平稳［２１］。
不同时期重瓣榆叶梅花中蛋白质的含量不同，
其原因可能是随着重瓣榆叶梅花的生长，其空间结
构变得更复杂，代谢活动增强，生理功能逐渐完善。
蛋白质分子的种类、数量、空间结构决定了其植物器
官、组织的代谢功能。生物体内几乎所有的生理代
谢活动需要酶的参与，绝大部分酶的化学本质是蛋
白质。从花苞期至开花２周，重瓣榆叶梅花是处于
生长期，所以其蛋白质含量逐渐增多。重瓣榆叶梅
花开花两周达到成熟，是功能最完善、代谢活动最强
时期，所以这个时期花中蛋白质含量最高。而在重
瓣榆叶梅花开花２周后，花开始凋谢，随着重瓣榆叶
梅花的衰败，其花中酶开始降解，蛋白质含量减少。
因此，在开花２周至３周花中蛋白质含量迅速下降。
在开花３周，重瓣榆叶梅花大部分凋落，此时期花中
很多代谢酶已降解，致使蛋白质含量最低。
５９１第３期 徐毅励 等：重瓣榆叶梅花中蛋白质提取工艺及动态含量研究
参考文献：
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６９１ 西北林学院学报 ３０卷