全 文 ：基金项目：新疆医科大学大学生创新性实验计划重点项目（ＣＸ２０１２０１３）；第四次全国中药资源普查（试点）项目（２０１１－２０１３）
作者简介：葛 亮（１９８０－），男，硕士，实验师，研究方向：民族药质量评价研究，Ｅ－ｍａｉｌ：ｇｅｌｉａｎｇ９１７＠１６３．ｃｏｍ。
正交试验优选新疆党参中总黄酮超声提取工艺
葛 亮１，２，施 洋２，３，曾 诚２
（１新疆名医名方与特色方剂学重点实验室；２新疆医科大学中医学院；３新疆医科大学学报编辑部，乌鲁木齐 ８３００１１）
摘要：目的 研究新疆党参总黄酮的最佳提取工艺。方法 采用亚硝酸钠－硝酸铝－氢氧化钠法测定新疆党
参总黄酮的含量，通过单因素考察及正交试验进行提取工艺优选。结果 超声提取新疆党参总黄酮的最佳工艺
为：超声提取３次，乙醇浓度为８０％，料液比（ｇ／ｍＬ）为１∶２０，超声时间为３０ｍｉｎ，测得新疆党参总黄酮的含量为
０．１９２％。结论 亚硝酸钠－硝酸铝－氢氧化钠法操作简单快捷，适用于提取新疆党参中的总黄酮。
关键词：新疆党参；总黄酮；超声提取；正交试验
中图分类号：Ｒ９１４．１ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００９－５５５１（２０１３）０７－０９４５－０３
Ａ ｓｔｕｄｙ ｏｎ ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｐｒｏｃｅｓｓ ｏｆ ｔｏｔａｌ ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ ｆｒｏｍ
Ｃｏｄｏｎｏｐｓｉｓｃｌｅｍａｔｉｄｅａ（ｓｃｈｒｅｎｋ）ｃｌａｒｋｅ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ
ＧＥ Ｌｉａｎｇ１，２，ＳＨＩ Ｙａｎｇ２，３，ＺＥＮＧ Ｃｈｅｎｇ２
（１ Ｘｉｎｊｉａｎｇ Ｋｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆ Ｆａｍｏｕｓ Ｐｒｅｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ａｎｄ Ｓｃｉｅｎｃｅ ｏｆ Ｆｏｒｍｕｌａｓ；２ Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ
Ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｘｉｎｊｉａｎｇ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ；３ Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｊｏｕｒｎａｌ Ｅｄｉｔｏｒｉａｌ，
Ｘｉｎｊｉａｎｇ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｕｒｕｍｑｉ ８３００１１，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｓｔｕｄｙ ｔｈｅ ｂｅｓｔ ｏｐｔｉｍａｌ ｐｒｏｃｅｓｓ ｏｆ ｅｘｔｒａｃｔｉｎｇ ｔｏｔａｌ ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ ｆｒｏｍ Ｃｏｄｏｎｏｐｓｉｓ
ｃｌｅｍａｔｉｄｅａ（ｓｃｈｒｅｎｋ）Ｃｌａｒｋｅ．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｕｓｉｎｇ ｔｈｅ ｓｉｎｇｌｅ ｆａｃｔｏｒ ａｎｄ ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ ｔｏ ｃｈｏｏｓｅ ｔｈｅ
ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｔｏｔａｌ ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｄｅｔｅｒｍｉｎｇ ｔｈｅ ｃｏｎｔｅｎｔ ｏｆ ｔｏｔａｌ ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ ｂｙ ｔｈｅ
ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｒｙ ｉｎ ｔｈｅ ＮａＮＯ２－Ａｌ（ＮＯ３）３－ＮａＯＨ ｓｙｓｔｅｍ ａｔ ５１０ｎｍ．Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｔｈｅ ｏｐｔｉｍｕｍ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ
ｆｏｒ ｅｘｔｒａｃｔｉｎｇ ｔｈｅ ｔｏｔａｌ ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ ｂｙ ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃ ｗａｖｅ ｗｅｒｅ ａｓ ｆｏｌｏｗｓ：ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃ ｔｉｍｅ ｗａｓ ｔｈｒｅｅ ｔｉｍｅｓ，ａｌ－
ｃｏｈｏｌ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｗａｓ ８０％，ｍａｔｅｒｉａｌ－ｌｉｑｕｉｄ ｒａｔｉｏ ｗａｓ １∶２０ａｎｄ ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃ ｔｉｍｅ ｗａｓ ３０ｍｉｎ．Ｔｈｅ ｃｏｎｔｅｎｔ
ｏｆ ｔｏｔａｌ ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ ｅｘｔｒａｃｔｅｄ ｗａｓ ｕｐ ｔｏ ０．１８８％．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ Ｔｈｅ ｏｐｔｉｍｉｚｅｄ ｍｅｔｈｏｄ ｗａｓ ｓｔａｂｌｅ ａｎｄ ｅｆｆｉ－
ｃｉｅｎｔ，ａｎｄ ｃａｎ ｂｅ ｕｓｅｄ ｆｏｒ ｅｘｔｒａｃｔｉｎｇ ｔｏｔａｌ ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ ｆｒｏｍＣｏｄｏｎｏｐｓｉｓ ｃｌｅｍａｔｉｄｅａ（ｓｃｈｒｅｎｋ）Ｃｌａｒｋｅ．
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：Ｃｏｄｏｎｏｐｓｉｓ ｃｌｅｍａｔｉｄｅａ（ｓｃｈｒｅｎｋ）Ｃｌａｒｋｅ；ｔｏｔａｌ ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ；ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃ ｗａｖｅ ｅｘｔｒａｃｔ；ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ
ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ
新疆党参 Ｃｏｄｏｎｏｐｓｉｓ ｃｌｅｍａｔｉｄｅａ （ｓｃｈｒｅｎｋ）
Ｃｌａｒｋｅ为桔梗科党参属多年生草本植物，药用其
根，其性甘、平，补脾胃，益气血，生津止渴，是重要的
传统补益中药，民间用于治疗功能性子宫出血、体虚
无力、胃下垂、风湿性心脏病等［１］。新疆党参在新疆
分布广泛，资源丰富。据报道新疆党参含１２种生命
必需微量元素［２］，含３７种挥发油［３］，含糖类、黄酮、
生物碱等成分。已有报道运用微波技术从新疆党参
中提取总黄酮［４－６］、多糖并测定其含量［７－１０］，测定新
疆党参中豆甾醇、果糖的含量［１１］，新疆党参在小鼠
脑内抗自由基作用优于潞党参［１２］。现阶段有关新
疆党参化学成分的相关报道较少，对其总黄酮的提
第３６卷 第７期 新 疆 医 科 大 学 学 报 Ｖｏｌ．３６ Ｎｏ．７
２０１３年７月 Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｘｉｎｊｉａｎｇ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｊｕｌｙ．２０１３
取工艺研究未见报道。本试验首次采用单因素考察
结合正交试验优选新疆党参中总黄酮超声提取最佳
工艺，为新疆党参的进一步开发利用提供理论依据。
１ 仪器与试药
１．１ 仪器 ＴＵ－１８１０ＰＣ可见紫外分光光度计（北京
普析通用仪器有限责任公司），梅特勒ＡＬ２０４电子天
平（梅特勒－托利多仪器上海有限公司），ＫＱ－４００ＤＢ型
数控超声器（昆山市超声仪器有限公司），ＲＥ－５２ＣＳ旋
转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂），ＢＳ２２０２Ｓ分析天平
（北京赛多利斯仪器系统有限公司）。
１．２ 试药 新疆党参采自新疆乌鲁木齐市昌吉地
区（干燥粉碎为细粉备用），经新疆医科大学附属中
医医院李永和主任药师鉴定为菊科植物新疆党参
Ｃｏｄｏｎｏｐｓｉｓ ｃｌｅｍａｔｉｄｅａ（ｓｃｈｒｅｎｋ）Ｃｌａｒｋｅ的干燥地
上部分和根。芦丁标准品（成都曼斯特生物制品有
限公司），其他所用试剂均为分析纯。
２ 方法与结果
２．１ 芦丁标准溶液的制备 精密称取于１２０℃干
燥至恒重的芦丁标准品１０．００ｍｇ，置于５０ｍＬ的容
量瓶中，加入７０％乙醇，超声使之溶解，并用７０％乙
醇稀释至刻度，摇匀，制成０．２ｍｇ／ｍＬ的芦丁标准
品溶液。
２．２ 标准曲线的建立 采用亚硝酸钠－硝酸铝－氢
氧化钠法，精确移取芦丁标准溶液０、１．０、２．０、３．０、
４．０、５．０、６．０ｍＬ，分别加入体积分数为７０％的乙醇
至６．０ｍＬ，加入５％ＮａＮＯ２ 溶液１ｍＬ，混匀，放置
６ｍｉｎ，加入１０％ Ａｌ（ＮＯ３）３ 溶液１ｍＬ，混匀，放置
６ｍｉｎ，再加入５％ＮａＯＨ溶液１０ｍＬ，摇匀，最后加
入体积分数为７０％的乙醇定容至２５ｍＬ，放置
１５ｍｉｎ，进行全波长扫描，在５１０ｎｍ处有最大吸收。
以５１０ｎｍ处的吸光度（Ｙ）为纵坐标，以样品浓度
（Ｘ）为横坐标，计算得标准方程：Ｙ ＝１１．６９６ ４ Ｘ－
０．００２ ４，ｒ＝０．９９９ ７。
２．３ 新疆党参中总黄酮含量的测定 精密称取一
定量的新疆党参细粉，用一定量、一定体积分数的乙
醇在一定条件下采用超声提取，将过滤得到的滤液定
容，得供试品溶液。精确移取供试品溶液２ｍＬ，按照
“２．２项下”操作，在最大吸收波长５１０ｎｍ处测定吸
光度，根据标准方程计算新疆党参中总黄酮含量。
２．４ 提取工艺研究 经过预试验与单因素考察，确
定超声次数为３次，选择料液比（Ａ）、乙醇浓度（Ｂ）、
超声时间（Ｃ）３个为考察因素，每个因素选择３个水
平（表１）。采用Ｌ９（３４）正交设计，以总黄酮含量为
考察指标，优选新疆党参总黄酮的最佳提取工艺，试
验安排与结果见表２、３（其中Ｄ为空白）。
表１ 提取工艺因素水平表
水平
因 素
Ａ：料液比／（ｇ／ｍＬ） Ｂ：乙醇浓度／％ Ｃ：超声时间／ｍｉｎ
１ １∶１５ ７０ １５
２ １∶２０ ８０ ２０
３ １∶２５ ９０ ３０
表２ 正交试验表
序号
列 号
Ａ Ｂ Ｃ Ｄ
评价指标
总黄酮含量／％
１ １ １ １ １ ０．１３８
２ １ ２ ２ ２ ０．１４２
３ １ ３ ３ ３ ０．１５５
４ ２ １ ２ ３ ０．１７８
５ ２ ２ ３ １ ０．１８８
６ ２ ３ １ ２ ０．１６２
７ ３ １ ３ ２ ０．１８４
８ ３ ２ １ ３ ０．１７５
９ ３ ３ ２ １ ０．１６３
Ｋ１ ０．４３５ ０．５００ ０．４７５
Ｋ２ ０．５２８ ０．５０５ ０．４８３
Ｋ３ ０．５２２ ０．４８０ ０．５２７
Ｒ ０．０９３ ０．０２５ ０．０５２
表３ 方差分析表
变异来源 离均差平和 自由度 均方 Ｆ比 概率
Ａ ０．００１ ８０６ ２ ０．０００ ９０３ ０ ２１．３３０ ７１０
Ｂ ０．０００ １１７ ２ ０．０００ ０５８ ３ １．３７７ ９５３ ０．０５
Ｃ ０．０００ ５２３ ２ ０．０００ ２６１ ０ ６．１７３ ２２８
误差 ０．０００ ０８５ ２ ０．０００ ０４２ ３
注：Ｆ０．０５（２，２）＝１９．００。
２．５ 精密度试验 准确吸取样品溶液２ｍＬ，按样
品含量测定方法连续测定 ６ 次，其 ＲＳＤ 值为
１．２５％，表明检测仪器精密度良好。
２．６ 稳定性试验 准确吸取同一新制备的样品溶
液２ｍＬ，间隔６０ｍｉｎ测定１次，连续测定６次，其
ＲＳＤ值为１．５４％，表明样品溶液在６ｈ内稳定。
２．７ 重复性试验 准确称取新疆党参细粉６份，每
份各１ｇ，按最佳工艺提取制备样品溶液，并按照样
品含量测定方法处理并测定，结果 ＲＳＤ 值为
１．６５％，表明该法有较好的重复性。
２．８ 加样回收率试验 按上法制成６份样品溶液，
分别加入芦丁标准溶液适量，同法操作，测得其平均
６４９ 新 疆 医 科 大 学 学 报 第３６卷
回收率为９９．５８％，ＲＳＤ为１．７３％。
数据统计分析用正交设计助手Ⅱ Ｖ３．１，方差
分析结果见表３。从正交结果可知：各因素对综合
评分的影响大小顺序为：Ａ （料液比）＞Ｃ（超声时
间）＞Ｂ（乙醇浓度），每个因素３个水平之间的趋势
为Ａ２＞Ａ３＞Ａ１、Ｂ２＞Ｂ１＞Ｂ３、Ｃ３＞Ｃ２＞Ｃ１。直观分
析得提取工艺为Ａ２Ｂ２Ｃ３，即超声提取３次，乙醇浓
度为８０％，料液比为１∶２０（ｇ／ｍＬ），超声时间为３０
ｍｉｎ。方差分析结果表明：Ａ因素有显著性影响 （Ｐ
＜０．０５），Ｂ因素与Ｃ因素无影响。全面综合考察以
Ａ２Ｂ２Ｃ３ 组合为佳，即用８０％乙醇超声提取３次，料
液比１∶２０（ｇ／ｍＬ），超声时间３０ｍｉｎ。
２．９ 验证试验 根据上述试验所确定的最佳工艺
Ａ２Ｂ２Ｃ３，准确称取新疆党参细粉３份各１ｇ，以确定
的最佳工艺提取，测定其总黄酮的含量分别为
０．１９５％、０．１８９％、０．１９２％，平均含量为０．１９２％。
结果表明，该工艺较稳定。
３ 讨论
本研究所采用单因素考察结合正交试验优选新
疆党参总黄酮的最佳提取工艺，可充分提取总黄酮
成分，为开发利用新疆特色药用植物资源提供理论
依据。本试验采用亚硝酸钠－硝酸铝－氢氧化钠法测
定新疆党参中总黄酮的含量，其精密度、稳定性、重
复性、加样回收率均良好，为新疆党参中总黄酮的含
量测定提供了一种简便可行的方法，为新疆党参的
质量控制提供了评价手段。
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［收稿日期：２０１３－０４－１６］
（本文编辑 施洋
）
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间的表达，凡前面带有具体数据者应采用ｄ、ｈ、ｍｉｎ、ｓ，而不用天、小时、分钟、秒。量的符号一律用斜体
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（本刊编辑部）
７４９ 第７期 葛 亮，等：正交试验优选新疆党参中总黄酮超声提取工艺