全 文 ：第３２卷 第２期
２０１３年　３月
华　中　农　业　大　学　学　报
Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｈｕａｚｈｏｎｇ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ
Ｖｏｌ．３２　Ｎｏ．２
Ｍａｒ．２０１３，６～１１
收稿日期：２０１２－０５－０６
基金项目：国家自然科学基金项目（３０９７００７４）和国家重点基础研究发展计划（“９７３”计划）项目（２０１０ＣＢ１２６５００）
王　宁，硕士研究生．研究方向：根瘤菌共生固氮体系分子机制．Ｅ－ｍａｉｌ：ｗａｎｇｎｉｎｇ１４２４２４＠１６３．ｃｏｍ
通讯作者：李友国，博士，教授．研究方向：生物固氮．Ｅ－ｍａｉｌ：ｙｏｕｇｕｏｌｉ＠ｍａｉｌ．ｈｚａｕ．ｅｄｕ．ｃｎ
紫云英结瘤受体激酶靶蛋白的筛选与鉴定
王　宁　李一星　刘　燕　陈大松　李友国
华中农业大学生命科学技术学院／农业微生物学国家重点实验室，武汉４３００７０
摘要　利用酵母双杂交技术，以结瘤受体激酶（ＮＯＲＫ）蛋白的跨膜结构域（ＴＭ）为诱饵，进行了与其相互作
用靶蛋白的筛选鉴定。结果获得４１个候选阳性克隆，通过测序和在 ＮＣＢＩ中进行Ｂｌａｓｔ比对分析，发现其中一
个具有重要生物学功能的互作蛋白翻译延伸因子ＡｓＥＦ１－α，并将该蛋白相应的编码基因命名为ＡｓＥＦ１－α。进一
步的验证表明靶蛋白ＡｓＥＦ１－α与诱饵互作的关键结构域是ＥＦ１－α－Ⅲ。
关键词　紫云英；结瘤受体激酶；翻译延伸因子蛋白（ＥＦ１－α）；蛋白互作；酵母双杂交
中图分类号　Ｓ　１５４．３８＋１　　文献标识码　Ａ　　文章编号　１０００－２４２１（２０１３）０２－０００６－０６
　　共生固氮是根瘤菌与豆科植物之间复杂的分子
对话过程，该过程受到根瘤菌和豆科宿主植物双方
基因的调控［１－４］。豆科植物中与共生固氮相关的基
因包括早期结瘤基因和晚期固氮基因。早期结瘤基
因中的共生受体激酶（ＳＹＭＲＫ）基因、结瘤受体激
酶（ＮＯＲＫ）基因与信号转导和根瘤形成相关。
陈大松等［５］分离获得紫云英结瘤受体激酶基因
（ＡＹ９４６２０３），全长２　８２０ｂｐ。基因序列Ｂｌａｓｔ分析
表明它与多种豆科植物的共生受体激酶基因或结瘤
受体激酶基因序列具有较高同源性，与非豆科植物
同类基因的同源性较低［３］。紫云英 ＮＯＲＫ序列也
和其他豆科植物ＳＹＭＲＫ基因一样，编码胞外、跨
膜、胞内３个氨基酸结构域，含有富亮氨酸重复序
列。ＮＯＲＫ编码的蛋白分子质量１０３．７ｋｕ，等电点
５．６，氨基端带有疏水性信号肽。
目前关于结瘤受体激酶的具体功能研究还不太
清楚，ＮＯＲＫ蛋白这种具有胞外序列相似的家族在
植物中是广泛存在的。豆科植物紫云英中存在一套
与共生结瘤相关的功能基因，这些基因在接受来自
根瘤菌的共生信号 Ｎｏｄ　ｆａｃｔｏｒ（结瘤因子）刺激后，
通过一系列的表达调控在紫云英中引起钙离子激
增，从而激活ＣＣａＭＫ蛋白的功能。接着将共生信
号传递给下游的一些功能基因，进一步激活 ＮＩＮ
基因，最后由 ＮＩＮ 基因启动下游结瘤基因表达而
形成根瘤。有研究表明 ＮＯＲＫ基因与 Ｎｏｄ　ｆａｃｔｏｒ
的接受传递系统相关［４－７］，为探究 ＮＯＲＫ在根瘤形
成过程中的功能机制，本研究筛选出与紫云英中结
瘤受体激酶ＮＯＲＫ相互作用的靶蛋白，并通过酵母
双杂交技术验证２个蛋白的相互作用，同时定位靶
蛋白相互作用的关键结构域，并分析和讨论二者之
间的作用机制，以期为深入研究这２个基因的功能
机制提供理论基础，并且为构建早期结瘤信号传递
网络提供新的材料和依据。
１　材料与方法
１．１　菌株和质粒
用于酵母双杂交筛选的酵母菌株 Ｙ１８７和
ＡＨ１０９、酵母质粒ｐＧＢＫＴ７和ｐＧＡＤＴ７购于Ｃｌｏｎ－
ｔｅｃｋ公司。用于质粒克隆的大肠杆菌ＤＨ１０Ｂ由华
中农业大学农业微生物学国家重点实验室提供。
１．２　主要仪器和试剂
ＰＣＲ仪（Ｂｉｏ－Ｒａｄ），Ｔａｑ　ＤＮＡ 聚合酶，ＥｘＴａｑ
酶，Ｔ４ＤＮＡ连接酶（Ｆｅｒｍｅｎｔａｓ），各种限制性内切
酶，ＤＮＡ及蛋白质分子量标准均为Ｆｅｒｍｅｎｔａｓ公司
产品。
１．３　诱饵基因扩增及诱饵质粒构建
根据笔者所在实验室克隆鉴定的 ＮＯＲＫ基因
序列信息（ＡＹ９４６２０３），设计引物。
上游引物：５′－ＣＧＧＡＡＴＴＣＡＴＴＣＴＧＴＴＴＴＴＴＴ－
ＧＣＣＧＴＴＡＣＡ－３′（下划线为ＥｃｏＲⅠ酶切位点）；下游引
DOI:10.13300/j.cnki.hnlkxb.2013.02.013
　第２期 王　宁 等：紫云英结瘤受体激酶靶蛋白的筛选与鉴定 　
物：５′－ＣＧＧＧＡＴＣＣＴＧＴＧＡＣＣＡＣＣＴＣＴＡＡＡＴＡＣＴＣ－
ＣＡＡ－３′（下划线为ＢａｍＨⅠ酶切位点）。提取紫云英根
瘤总 ＲＮＡ，以总 ＲＮＡ 为模板进行反转录 ＰＣＲ
（ＲＴ－ＰＣＲ），以反转录产物单链ＤＮＡ为模板，采用
高保真性酶扩增 ＴＭ 区域（１７１ｂｐ）。ＰＣＲ扩增反
应体系和程序为：１０×ＥｘＴａｑ　Ｂｕｆｆｅｒ　２μＬ，模板
１μＬ，引物１０μｍｏｌ／Ｌ各１μＬ，２．５ｍｍｏｌ／Ｌ　ｄＮＴＰ
１μＬ，０．１μＬ　Ｅｘ　Ｔａｑ，以ｄｄＨ２Ｏ补充体系至２０μＬ。
９５℃预变性５ｍｉｎ；９５℃变性３０ｓ，５０℃退火４５ｓ，
７２℃延伸３０ｓ，３０个循环；７２℃最后延伸１０ｍｉｎ。
ＰＣＲ产物及ｐＧＢＫＴ７质粒，采用限制酶ＥｃｏＲⅠ及
ＢａｍＨⅠ进行双酶切。利用 Ｔ４ＤＮＡ连接酶进行
连接、转化大肠杆菌，从而构建出重组诱饵质粒ｐＧ－
ＢＫＴ７－ＮＯＲＫ－ＴＭ，并通过双酶切及测序分析重组
质粒的正确性。
１．４　诱饵质粒转化及紫云英ｃＤＮＡ文库筛选
利用ＬｉＡｃ转化法将验证无误的诱饵质粒ｐＧ－
ＢＫＴ７－ＮＯＲＫ－ＴＭ转化酵母 Ｙ１８７感受态细胞，涂
布于ＳＤ／－Ｔｒｐ平板上，２８℃培养。通过酵母菌落
ＰＣＲ检测诱饵质粒是否转化成功。将转化成功的
菌株分别划线于ＳＤ／－Ｔｒｐ／－Ｈｉｓ和ＳＤ／－Ｔｒｐ＋Ｘ－ｇａｌ
的平板上，９６ｈ内观察平板上菌落是否变成蓝色，
以检查其自激活性。挑取ＳＤ／－Ｔｒｐ平板上的单菌
落（直径大于２ｍｍ）接种于ＳＤ／－Ｔｒｐ液体培养基中
摇床振荡培养（２００ｒ／ｍｉｎ），２４ｈ后测定其Ｄ６００ｎｍ，
观察是否超过０．８，以确定其是否具有毒性。将检
测无自激活性和无毒性的诱饵酵母菌株Ｙ１８７（ｐＧ－
ＢＫＴ７－ＮＯＲＫ－ＴＭ）与前期已构建好的紫云英根瘤
组织ｃＤＮＡ文库菌株 ＡＨ１０９（ｐＧＡＤＴ７－ｃＤＮＡ）杂
交，２８℃摇床（５０～１００ｒ／ｍｉｎ）培养２０～２４ｈ后，涂
布ＳＤ／－Ｔｒｐ／－Ｌｅｕ／－Ｈｉｓ／－Ａｄｅ的大平板，筛选阳性
克隆子，同时在 ＳＤ／－Ｌｅｕ，ＳＤ／－Ｔｒｐ和 ＳＤ／－Ｔｒｐ／－
Ｌｅｕ平板上涂布计算杂交效率。
１．５　阳性克隆子的鉴定
将在ＳＤ／－Ｔｒｐ／－Ｌｅｕ／－Ｈｉｓ／－Ａｄｅ平板上可以生
长的阳性克隆接种于ＳＤ／－Ｔｒｐ／－Ｌｅｕ／－Ｈｉｓ／－Ａｄｅ＋
Ｘ－ｇａｌ平板，在２８℃暗培养２～４ｄ，观察克隆子是否
显蓝色而加以确证。将复筛获得的阳性克隆进行菌
落ＰＣＲ，检查插入ｃＤＮＡ片段大小。从酵母菌株抽
提阳性克隆质粒并转化大肠杆菌，利用载体抗性不
同分离出克隆有文库插入ｃＤＮＡ片段的阳性克隆。
最后，抽提大肠杆菌阳性克隆质粒进行酵母回转，小
范围“一对一”杂交等再次验证阳性克隆的真实性。
将最终确定的阳性克隆进行测序，将测序结果与
ＮＣＢＩ数据库比对，用 ＤＮＡＭＡＮ 和ＥｘＰＡＳｙ软件
进行生物信息学分析。
１．６　靶蛋白与诱饵蛋白互作关键结构域的确定
根据测序所得到的目的基因序列设计引物
（表１），利用ＰＣＲ技术分别扩增靶蛋白的３个结构
域，将其分别构建到载体ｐＧＡＤＴ７上，分别将任意
２个结构域组合后构建到载体ｐＧＡＤＴ７上，转化酵
母ＡＨ１０９，与诱饵菌株进行小范围杂交，将杂交后
的菌液混合物用ｄｄＨ２Ｏ洗涤后，以一定的稀释度涂
布 ＳＤ／－Ｔｒｐ／－Ｌｅｕ 和 ＳＤ／－Ｔｒｐ／－Ｌｅｕ／－Ｈｉｓ／－Ａｄｅ＋
Ｘ－ｇａｌ平板，２８℃暗培养２～４ｄ，比较观察菌落生长
情况和变蓝情况，同时测定二倍体杂合子的β－半乳
糖苷酶活性（Ｍｉｌｅｒ单位，Ｕ），确定靶蛋白与诱饵蛋
白相互作用的关键结构域。
表１　靶蛋白中不同结构域截短ＰＣＲ扩增所用的引物
Ｔａｂｌｅ　１　ＰＣＲ　ｐｒｉｍｅｒｓ　ｕｓｅｄ　ｆｏｒ　ｔａｒｇｅｔ　ｄｏｍａｉｎ　ｔｒｕｎｃａｔｉｏｎ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ　ｉｎｔｅｒａｃｔｉｎｇ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ＡｓＥＦ１－α
目标结构域区段
Ｔａｒｇｅｔ　ｄｏｍａｉｎｓ
引物序列
Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ　ｏｆ　ｐｒｉｍｅｒｓ
片段大小／ｂｐ
Ｓｉｚｅｓ
Ｒａｓ＋ＥＦ１－Ⅱ＋ＥＦ１－Ⅲ
Ｒａｓ－ｕｐ　５′－ＣＣＧＧＡＡＴＴＣＣＣＡＴＴＡＴＧＧＣＴＧＧＧＧＧＧＴＧＡＣＡＡＣＡ－３′ ７２０
ＥＦ１－Ⅲ－ｄｏｗｎ　５′－ＣＧＣＧＧＡＴＣＣ　ＣＴＴＣＴＣＣＡＣＡＣＴＣＴＴＡＡＴＡＡＣＴＣＣＣ－３′
Ｒａｓ＋ＥＦ１－Ⅱ
Ｒａｓ－ｕｐ　５′－ＣＣＧＧＡＡＴＴＣＣＣＡＴＴＡＴＧＧＣＴＧＧＧＧＧＧＴＧＡＣＡＡＣＡ－３′ ３９６
ＥＦ１－Ⅱ－ｄｏｗｎ　５′－ＣＧＣＧＧＡＴＣＣＴＴＣＣＴＴＡＧＣＴＧＧＧＴＣＡＴＣＣＴＴＡＧＡＧ－３′
ＥＦ１－Ⅱ＋ＥＦ１－Ⅲ
ＥＦ１－Ⅱ－ｕｐ　５′－ＣＣＧＧＡＡＴＴＣＣＣＣＡＡＧＡＧＡＣＣＴＴＣＡＧＡＣＡＡＧＣＣＡＣ－３′ ６２１
ＥＦ１－Ⅲ－ｄｏｗｎ　５′－ＣＧＣＧＧＡＴＣＣＣＴＴＣＴＣＣＡＣＡＣＴＣＴＴＡＡＴＡＡＣＴＣＣＣ－３′
Ｒａｓ＋ＥＦ１－Ⅲ
Ｒａｓ－ｕｐ　５′－ＣＣＧＧＡＡＴＴＣＣＣＡＴＴＡＴＧＧＣＴＧＧＧＧＧＧＴＧＡＣＡＡＣＡ－３′
４２３ＥＦ１－Ⅲ－ｄｏｗｎ　５′－ＣＧＣＧＧＡＴＣＣＣＴＴＣＴＣＣＡＣＡＣＴＣＴＴＡＡＴＡＡＣＴＣＣＣ－３′
Ｒａｓ＋ＥＦ１－Ⅲ－Ｒａｓ－ｄｏｗｎ　５′－ＣＧＧＧＧＴＡＣＣＣＣＴＧＧＧＴＧＧＣＴＴＧＴＣＴＧＡＡＧＧＴＣＴＣ－３′
Ｒａｓ＋ＥＦ１－Ⅲ －ＥＦ１－Ⅲ－ｕｐ　５′－ＣＧＧＧＧＴＡＣＣＧＣＣＴＣＣＡＡＣＴＣＴＡＡＧＧＡＴＧＡＣＣＣＡＧ－３′
７
　　 华 中 农 业 大 学 学 报 第３２卷　
２　结果与分析
２．１　诱饵质粒ｐＧＢＫＴ７－ＮＯＲＫ－ＴＭ的构建
采用本文“１．３”设计的引物，以紫云英根（瘤）部
组织 ｃＤＮＡ 为模板，扩增两端带有 ＥｃｏＲⅠ 和
ＢａｍＨⅠ位点的紫云英ＮＯＲＫ－ＴＭ结构域，获得预
期大小为１７１ｂｐ的片段，经ＥｃｏＲⅠ和ＢａｍＨⅠ酶
切，克隆于相同双酶切后的ＢＤ载体ｐＧＢＫＴ７质粒
上，构建重组质粒ｐＧＢＫＴ７－ＮＯＲＫ－ＴＭ。经双酶切
及测序分析正确后，将诱饵质粒转化酵母Ｙ１８７，涂
布选择培养基ＳＤ／－Ｔｒｐ。转化子在ＳＤ／－Ｔｒｐ／－Ｈｉｓ
平板上不能生长，在 ＳＤ／－Ｔｒｐ＋Ｘ－ｇａｌ的平板上显
白色，说明诱饵没有自激活性。同时，菌体在液体中
振荡培养时可以正常生长，说明所构建的诱饵质粒
对酵母生长没有毒性，可以用于紫云英ｃＤＮＡ文库
中靶蛋白的筛选。
２．２　蛋白互作阳性克隆的筛选与验证
将检测无自激活性和无毒性的诱饵菌株 Ｙ１８７
（ｐＧＢＫＴ７－ＮＯＲＫ－ＴＭ）与已构建好的紫云英根
（瘤）部组织ｃＤＮＡ 文库菌株 ＡＨ１０９（ｐＧＡＤＴ７－ｃＤ－
ＮＡ）［１］杂交，在ＳＤ／－Ｔｒｐ／－Ｌｅｕ／－Ｈｉｓ／－Ａｄｅ平板上筛选得
到１７５个杂交子，然后在ＳＤ／－Ｔｒｐ／－Ｌｅｕ／－Ｈｉｓ／－Ａｄｅ＋Ｘ－
ｇａｌ平板上复筛，获得４１个显蓝色的阳性克隆。抽提阳
性克隆子质粒，利用ｐＧＡＤＴ７质粒上的通用引物 （５′－
ＣＴＡＴＴＣＧＡＴＧＡＴＧＡＡＧＡＴＡＣＣＣＣＡＣＣＡＡＡＣＣ －３′，５′－
ＡＧＴＧＡＡＣ－ＴＴＧＣＧＧＧＧＴＴＴＴＴＣＡＧＴＡＴＣＴＡＣＧＡ－３′）
进行 ＰＣＲ检测。结果显示插入ｃＤＮＡ 片段位于
７００～１　５００ｂｐ之间，然后将扩增获得单一条带的目
标质粒转化大肠杆菌ＤＨ１０Ｂ，利用ｐＧＡＤＴ７质粒
上的抗性标记筛选目标质粒。如菌落ＰＣＲ检测条
带大小与筛库时检测大小一致，则将此转化正确且
条带单一的克隆进行插入片段的全长测序。
２．３　目标克隆中ｃＤＮＡ插入片段的序列分析
将测序获得的ｃＤＮＡ 序列在 ＮＣＢＩ中进行
Ｂｌａｓｔ分析发现，阳性克隆主要包含两大类。一类为
甲硫氨酸亚砜还原酶结构域（图１）。甲硫氨酸亚砜
还原酶可将甲硫氨酸亚砜还原为甲硫氨酸。生物通
过这个过程可以缓解氧化压力。另一类为真核翻译
延伸因子１α亚科超家族。真核翻译延伸因子蛋白
包含Ｒａｓ、ＥＦ１－α－Ⅱ和ＥＦ１－α－Ⅲ３个结构域（图２），
具有调控细胞增殖和分化、参与细胞信号传导等重
要的生物学功能。本研究着重探讨 ＡｓＥＦ１－α与诱
饵蛋白ＮＯＲＫ－ＴＭ的相互作用。
　图中黑色方框区域代表ＳｅＩＲ结构域，该结构域与蓖麻的甲硫氨
酸亚砜还原酶具有８６％的同源性，而其与大豆中一种未知蛋白具
有８７％的同源性。Ｉｎ　ｔｈｅ　ｆｉｇｕｒｅ　ｔｈｅ　ｂｌａｃｋ　ｂｏｘ　ｒｅｐｒｅｓｅｎｔｓ　ＳｅＩＲ
（ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ）ｄｏｍａｉｎ，ｔｈｉｓ　ｄｏｍａｉｎ　ｈａｓ　ａ　８６％ｈｏｍｏｌｏｇｙ　ｗｉｔｈ　ａ　ｍｅ－
ｔｈｉｏｎｉｎｅ　ｓｕｌｆｏｘｉｄｅ　ｒｅｄｕｃｔａｓｅ　ｉｎ　ｃａｓｔｏｒ，ｗｈｉｌｅ　ａ　８７％ｈｏｍｏｌｏｇｙ　ｗｉｔｈ
ａｎ　ｕｎｋｎｏｗｎ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｉｎ　ｓｏｙｂｅａｎ．
图１　甲硫氨酸亚砜还原酶蛋白序列
Ｆｉｇ．１　Ｔｈｅ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｓｅｑｕｅｎｃｅ　ｏｆ
ｍｅｔｈｉｏｎｉｎｅ－Ｒ－ｓｕｌｆｏｘｉｄｅ　ｒｅｄｕｃｔａｓｅ
　图中的实线，点线和虚线方框区域分别代表 Ｒａｓ、ＥＦ１－α－Ⅱ和
ＥＦ１－α－Ⅲ３个结构域。Ｔｈｅ　ｆｕｌ，ｄｏｔｔｅｄ　ａｎｄ　ｄａｓｈｅｄ　ｂｏｘ（ｒｅｇｉｏｎ）ｒｅ－
ｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ　ｒｅｐｒｅｓｅｎｔ　ｔｈｅ　Ｒａｓ，ＥＦ１－α－Ⅱａｎｄ　ＥＦ１－α－Ⅲｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ　ｄｏ－
ｍａｉｎｓ．
图２　ＡｓＥＦ１－α超家族蛋白序列
Ｆｉｇ．２　Ｔｈｅ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｓｅｑｕｅｎｃｅ　ｏｆ　ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ
ｅｌｏｎｇａｔｉｏｎ　ｆａｃｔｏｒ－１　ａｌｐｈａ
　Ａ：分别含有３个独立结构域的ＡＤ质粒 Ｔｈｅ　ｔｈｒｅｅ　ｐｌａｓｍｉｄｓ　ｏｆ
ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｍｕｔａｎｔｅｄ　ｆｒａｇｍｅｎｔｓ　ｃｌｏｎｅｄ　ｉｎ　ｐＧＡＤＴ７ ；１：ｐＧＡＤＴ７－
Ｒａｓ；２：ｐＧＡＤＴ７－ＥＦ１－α－Ⅱ；３：ｐＧＡＤＴ７－ＥＦ１－α－Ⅲ；Ｂ：分别含有
２个组合结构域的 ＡＤ质粒 Ｔｈｅ　ｆｏｕｒ　ｐｌａｓｍｉｄｓ　ｏｆ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｔｗｏ
ｆｒａｇｍｅｎｔｓ　ｃｌｏｎｅｄ　ｉｎ　ｐＧＡＤＴ７；１，５：ＡＤ－Ｒａｓ＋ＥＦ１－α－Ⅱ＋ＥＦ１－α－
Ⅲ；２，６：ＡＤ－Ｒａｓ＋ＥＦ１－α－Ⅱ；３，７：ＡＤ－ＥＦ１－α－Ⅱ＋ＥＦ１－α－Ⅲ；４，８：
ＡＤ－Ｒａｓ＋ＥＦ１－α－Ⅲ；Ｍ：１ｋｂ　ｌａｄｄｅｒ；Ｍ１２：Ｍａｒｋｅｒ　１２．
图３　不同截短结构域所构建ＡＤ质粒的酶切验证
Ｆｉｇ．３　Ｔｈｅ　ｅｎｚｙｍａｔｉｃ　ｄｉｇｅｓｔｉｏｎ　ｏｆ　ｄｉｆｅｒｅｎｔ
ｍｕｔａｔｅｄ　ｆｒａｇｍｅｎｔｓ　ｃｌｏｎｅｄ　ｉｎ　ｐＧＡＤＴ
８
　第２期 王　宁 等：紫云英结瘤受体激酶靶蛋白的筛选与鉴定 　
２．４　靶蛋白ＡｓＥＦ１－α与诱饵蛋白ＮＯＲＫ－ＴＭ互作
的关键结构域确定
　　抽提测序正确的目标质粒ｐＧＡＤＴ７－ＡｓＥＦ１－α，
回转酵母 ＡＨ１０９，根据测序所得到的 ＡｓＥＦ１－α基
因序列设计引物，利用ＰＣＲ扩增靶蛋白 ＡｓＥＦ１－α
中的Ｒａｓ、ＥＦ１－α－Ⅱ和ＥＦ１－α－Ⅲ３个结构域，将其分
别构建到载体ｐＧＡＤＴ７上，同时将任意２个结构域
组合后也分别构建于载体ｐＧＡＤＴ７，经酶切（图３）
和测序分析正确后转化酵母ＡＨ１０９，与诱饵菌株进
行小范围杂交，并测定杂合子的β－半乳糖苷酶活性
（图４，图５）。结果显示：ＡｓＥＦ１－α蛋白与空载体
ｐＧＢＫＴ７没有相互作用，说明靶蛋白ＡｓＥＦ１－α无自
激活性。当３个结构域单独存在时，ＥＦ１－α－Ⅲ与诱
饵ＮＯＲＫ－ＴＭ 具有微弱相互作用。在结构域重新
组合后，ＥＦ１－α－Ⅱ与ＥＦ１－α－Ⅲ以及Ｒａｓ与ＥＦ１－α－Ⅲ
构成的重组结构域均表现出与诱饵ＮＯＲＫ－ＴＭ的
互作，且与全长 ＡｓＥＦ１－α 相比，互作强度略高
（图５）。因此推测，结构域ＥＦ１－α－Ⅲ是靶蛋白ＡｓＥＦ１－α
与诱饵ＮＯＲＫ－ＴＭ互作的关键结构域，另外２个结
构域，尤其是Ｒａｓ结构域起到一定的辅助作用。
图４　靶蛋白ＡｓＥＦ１－α与ＮＯＲＫ－ＴＭ的互作假阳性排除
Ｆｉｇ．４　Ｅｘｃｌｕｄｅ　ｆａｌｓｅ－ｐｏｓｉｔｉｖｅ　ｔｅｓｔ　ｏｆ　ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ　ｂｅｔｗｅｅｎ
ｔｈｅ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ＡｓＥＦ１－αａｎｄ　ＮＯＲＫ－ＴＭ
图５　截短突变体在蛋白互作中的β－半乳糖苷酶活性测定
Ｆｉｇ．５　Ｔｈｅ　ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ　ｏｆβ－ｇａｌａｃｔｏｓｉｄａｓｅ　ａｃｔｉｖｉｔｙ（Ｍｉｌｅｒ　Ｕｎｉｔｓ）ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｍｕｔａｎｔｓ　ｉｎｔｅｒａｃｔｉｎｇ
ｗｉｔｈ　ｂａｉｔ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｙｅａｓｔ　ｔｗｏ－ｈｙｂｒｉｄ　ｓｙｓｔｅｍ
３　讨　论
本研究利用紫云英结瘤受体激酶（ＮＯＲＫ）的
ＴＭ结构域为诱饵，从紫云英根（瘤）部组织ＡＤ　ｃＤ－
ＮＡ文库中筛选获得与 ＮＯＲＫ－ＴＭ 发生相互作用
的靶蛋白 ＡｓＥＦ１－α。ＮＯＲＫ控制着两大共生菌系
（固氮根瘤菌及放线菌和菌根真菌）对植物根部侵染
的早期阶段。有研究表明 ＮＯＲＫ基因参与了结瘤
因子的接受传递，进而启动信号转导形成根瘤，虽然
ＮＯＲＫ蛋白这种具有胞外序列相似的家族在植物
９
　　 华 中 农 业 大 学 学 报 第３２卷　
中是广泛存在的，但目前关于结瘤受体激酶的具体
功能还不太清楚［４－７］，因此，本研究试图通过分离鉴
定其相互作用的靶蛋白，从新的角度说明和分析结
瘤受体激酶在共生固氮过程中的功能机制。
真核生物中翻译延伸因子 ＥＦ１－α包含 Ｒａｓ、
ＥＦ１－α－Ⅱ和ＥＦ１－α－Ⅲ３个结构域，可能参与多种细
胞功能。ＥＦ１－α帮助依赖于ＧＴＰ的氨酰ｔＲＮＡ与
核糖体的结合，与真核细胞骨架的肌动蛋白相互作
用，在伸缩环微丝的组织形成中发挥关键调节作
用［８－９］，也可能在细胞转化和细胞凋亡方面发挥功能
作用［１０］。Ｒａｓ家族调控基因表达，在信号传导网络
中起着极为重要的开关作用，同时在正常细胞增殖
中亦具有极重要的作用［１１－１４］。另外，ｒａｓ也是一类
原癌基因，位于细胞膜上，介导各种酪氨酸激酶引起
的细胞增殖分化［１５－１６］。最近的研究显示，Ｒａｓ与乳腺
癌等肿瘤的发生具有相关性［１７］。百合的ＬｌＥＦ１－α１可
以与ＣＣａＭＫ蛋白相互作用，被ＣＣａＭＫ通过Ｃａ２＋和
ＣａＭ依赖的方式直接磷酸化［１７］，可能参与Ｃａ２＋信号
途径。根据以上研究结果，预测紫云英翻译延伸因子
（ＡｓＥＦ１－α）参与了早期结瘤过程中的信号转导。
本研究表明紫云英翻译延伸因子 ＡｓＥＦ１－α与
诱饵蛋白ＮＯＲＫ－ＴＭ存在相互作用，并将其互作关
键结构域定位于 ＡｓＥＦ１－α的 ＥＦ１－α－Ⅲ 结构域，
ＡｓＥＦ１－α蛋白可能参与 ＮＯＲＫ蛋白影响根瘤形成
过程中的信号转导，但其传递途径及具体机制还需
要进一步的研究。例如，可以通过双分子荧光互补
技术（ＢｉＦＣ）研究２个互作蛋白在细胞内的共定
位，通过免疫荧光或免疫电镜研究２个蛋白的亚
细胞或超显微定位，通过超表达和ＲＮＡｉ技术研究
目标靶蛋白ＡｓＥＦ１－α在共生固氮过程中的生物学
功能等。
参 考 文 献
［１］　刘燕，谷慧琳，熊小波，等，紫云英 ＡＤ－ｃＤＮＡ文库构建及与豆
血红蛋白Ｌｂ相互作用靶蛋白的筛选［Ｊ］．微生物学报，２０１０，
５０（１２）：１６０７－１６１２．
［２］　代广中，袁兆栋，苟洪兰，等．百脉根离子通道蛋白Ｐｏｌｕｘ与翻
译延伸因子ＥＦ１Ａ的相互作用［Ｊ］．华中农业大学学报，２０１２，
３１（１）：３４－３８．
［３］　ＧＩＬＥＳ　Ｅ　Ｄ，ＯＬＤＲＯＹＤ，ＡＬＬＡＮ　Ｄ　Ｊ．Ｃｏｏｒｄｉｎａｔｉｎｇ　ｎｏｄｕｌｅ
ｍｏｒｐｈｏｇｅｎｅｓｉｓ　ｗｉｔｈ　ｒｈｉｚｏｂｉａｌ　ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ　ｉｎ　Ｌｅｇｕｍｅｓ［Ｊ］．Ａｎｎｕ
Ｒｅｖ　Ｐｌａｎｔ　Ｂｉｏｌ，２００８，５９：５１９－５４６．
［４］　胡晓晶，储晓洁，康恒，等．百脉根结瘤信号通道蛋白 ＮＳＰ１与
ＮＳＰ２的相互作用［Ｊ］．华中农业大学学报，２０１１，３０（２）：１３２－
１３７．
［５］　ＰＥＲＨＡＬＤ　Ａ，ＥＮＤＲＥ　Ｇ，ＫＥＶＥＩ　Ｚ，ｅｔ　ａｌ．Ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ　ｔｏ　ｏｂｔａｉｎ
ｓｔａｂｌｅ　ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ　ｐｌａｎｔｓ　ｆｒｏｍ　ｎｏｎ－ｅｍｂｒｙｏｇｅｎｉｃ　ｌｉｎｅｓ：ｃｏｍｐｌｅ－
ｍｅｎｔａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｎｎ１ｍｕｔａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ＮＯＲＫ　ｇｅｎｅ　ｉｎ　Ｍｅｄｉｃａｇｏ
ｓａｔｉｖａ　ＭＮ１００８［Ｊ］．Ｐｌａｎｔ　Ｃｅｌ　Ｒｅｐ，２００６，２５：７９９－８０６．
［６］　ＧＡＢＲＩＥＬＬＡ　Ｅ，ＡＴＴＩＬＡ　Ｋ，ＺＯＬＴＡＮ　Ｋ，ｅｔ　ａｌ．Ａ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ
ｋｉｎａｓｅ　ｇｅｎｅ　ｒｅｇｕｌａｔｉｎｇ　ｓｙｍｂｉｏｔｉｃ　ｎｏｄｕｌｅ　ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ［Ｊ］．Ｎａ－
ｔｕｒｅ，２００２，４１７：９６２－９６６．
［７］　ＺＨＵ　Ｈ，ＣＨＥＮ　Ｔ，ＺＨＵ　Ｍ，ｅｔ　ａｌ．Ａ　ｎｏｖｅｌ　ＡＲＩＤ　ＤＮＡ－ｂｉｎｄｉｎｇ
ｐｒｏｔｅｉｎ　ｉｎｔｅｒａｃｔｓ　ｗｉｔｈ　ＳｙｍＲＫ　ａｎｄ　ｉｓ　ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ　ｄｕｒｉｎｇ　ｅａｒｌｙ
ｎｏｄｕｌｅ　ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ　ｉｎ　Ｌｏｔｕｓ　ｊａｐｏｎｉｃａｓ［Ｊ］．Ｐｌａｎｔ　Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ，
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［８］　ＮＵＭＡＴＡ　Ｏ，ＫＵＲＡＳＡＷＡ　Ｙ，ＧＯＮＤＡ　Ｋ，ｅｔ　ａｌ．Ｔｅｔｒａｈｙ－
ｍｅｎａ　ｅｌｏｎｇａｔｉｏｎ　ｆａｃｔｏｒ－１ａｌｐｈａ　ｉｓ　ｌｏｃａｌｉｚｅｄ　ｗｉｔｈ　ｃａｌｍｏｄｕｌｉｎ　ｉｎ
ｔｈｅ　ｄｉｖｉｓｉｏｎ　ｆｕｒｒｏｗ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ （Ｔｏｋｙｏ），
２０００，１２７（１）：５１－５６．
［９］　ＣＨＥＮ　Ｅ，ＰＲＯＥＳＴＯＵ　Ｇ，ＢＯＵＲＢＥＡＵ　Ｄ，ｅｔ　ａｌ．Ｒａｐｉｄ　ｕｐ－ｒｅｇ－
ｕｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｐｅｐｔｉｄｅ　ｅｌｏｎｇａｔｉｏｎ　ｆａｃｔｏｒ　ＥＦ－１ａｌｐｈａ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｌｅｖｅｌｓ　ｉｓ
ａｎ　ｉｍｍｅｄｉａｔｅ　ｅａｒｌｙ　ｅｖｅｎｔ　ｄｕｒｉｎｇ　ｏｘｉｄａｔｉｖｅ　ｓｔｒｅｓｓ－ｉｎｄｕｃｅｄ　ａｐｏｐ－
ｔｏｓｉｓ［Ｊ］．Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ　Ｃｅｌ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２０００，２５９（１）：１４０－１４８．
［１０］ＹＵＫＳＥＬ　Ｂ，ＡＢＤＵＬ　Ｒ．Ｌｅｇｕｍｅ　ｓｍａｌ　ＧＴＰａｓｅｓ　ａｎｄ　ｔｈｅｉｒ　ｒｏｌｅ
ｉｎ　ｔｈｅ　ｅｓｔａｂｌｉｓｈｍｅｎｔ　ｏｆ　ｓｙｍｂｉｏｔｉｃ　ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎｓ　ｗｉｔｈ　Ｒｈｉｚｏｂｉｕｍ
ｓｐｐ［Ｊ］．Ｐｌａｎｔ　Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ　＆Ｂｅｈａｖｉｏｒ，２００９，４（４）：２５７－２６０．
［１１］ＡＵＲＩＡＣ　Ｍ　Ｃ，ＴＩＭＭＥＲＳ　Ａ　Ｃ　Ｊ．Ｎｏｄｕｌａｔｉｏｎ　ｓｔｕｄｉｅｓ　ｉｎ　ｔｈｅ
ｍｏｄｅｌ　ｌｅｇｕｍｅ　Ｍｅｄｉｃａｇｏ　ｔｒｕｎｃａｔｕｌａ：ａｄｖａｎｔａｇｅｓ　ｏｆ　ｕｓｉｎｇ　ｔｈｅ
ｃｏｎｓｔｉｔｕｔｉｖｅ　ＥＦ１ａｌｐｈａ　ｐｒｏｍｏｔｅｒ　ａｎｄ　ｌｉｍｉｔａｔｉｏｎｓ　ｉｎ　ｄｅｔｅｃｔｉｎｇ
ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ　ｒｅｐｏｒｔｅｒ　ｐｒｏｔｅｉｎｓ　ｉｎ　ｎｏｄｕｌｅ　ｔｉｓｓｕｅｓ［Ｊ］．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ
Ｐｌａｎｔ－Ｍｉｃｒｏｂｅ　Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ，２００７，２０（９）：１０４０－１０４７．
［１２］ＲＥＨＮＥＲ　Ｓ　Ａ，ＢＵＣＫＬＥＹ　Ｅ．Ａ　Ｂｅａｕｖｅｒｉａ　ｐｈｙｌｏｇｇｅｎｙ　ｉｎ－
ｆｅｒｒｅｄ　ｆｒｏｍ　ｎｕｃｌｅａｒ　ＩＴＳ　ａｎｄ　ＥＦ１－ａｌｐｈａ　ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ：ｅｖｉｄｅｎｃｅ　ｆｏｒ
ｃｒｙｐｔｉｃ　ｄｉｖｅｒｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｌｉｎｋｓ　ｔｏ　Ｃｏｒｄｙｃｅｐｓ　ｔｅｌｅｏｍｏｒｐｈｓ［Ｊ］．
Ｍｙｃｏｌｏｇｉａ，２００５，９７（１）：８４－９８．
［１３］ＳＨＥＰＨＥＲＤ　Ｊ　Ｃ，ＷＡＬＬＤＯＲＦ　Ｕ，ＨＵＧ　Ｐ，ｅｔ　ａｌ．Ｆｒｕｉｔ　ｆｌｉｅｓ
ｗｉｔｈ　ａｄｄｉｔｉｏｎａｌ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｅｌｏｎｇａｔｉｏｎ　ｆａｃｔｏｒ　ＥＦ－１ａｌｐｈａ
ｌｉｖｅ　ｌｏｎｇｅｒ［Ｊ］．ＰＮＡＳ，１９８９，８６（１９）：７５２０－７５２１．
［１４］ＧＯＮＥＮ　Ｈ，ＳＭＩＴＨ　Ｃ　Ｅ，ＳＩＥＧＥＬ　Ｎ　Ｒ，ｅｔ　ａｌ．Ｐｒｏｔｅｉｎ　ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ
ｅｌｏｎｇａｔｉｏｎ　ｆａｃｔｏｒ　ＥＦ－１ａｌｐｈａ　ｉｓ　ｅｓｓｅｎｔｉａｌ　ｆｏｒ　ｕｂｉｑｕｉｔｉｎ－ｄｅｐｅｎｄ－
ｅｎｔ　ｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｃｅｒｔａｉｎ　Ｎ　ａｌｐｈａ－ａｃｅｔｙｌａｔｅｄ　ｐｒｏｔｅｉｎｓ　ａｎｄ　ｍａｙ
ｂｅ　ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｅｄ　ｆｏｒ　ｂｙ　ｔｈｅ　ｂａｃｔｅｒｉａｌ　ｅｌｏｎｇａｔｉｏｎ　ｆａｃｔｏｒ　ＥＦ－Ｔｕ［Ｊ］．
ＰＮＡＳ，１９９４，９１（１６）：７６４８－７６５２．
［１５］ＣＬＯＲＥ　Ａ　Ｍ，ＤＡＮＮＥＮＨＯＦＦＥＲ　Ｊ　Ｍ，ＬＡＲＫＩＮＳ　Ｂ　Ａ．ＥＦ－１
ａｌｐｈａ　ｉｓ　ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　ｗｉｔｈ　ａ　ｃｙｔｏｓｋｅｌｅｔａｌ　ｎｅｔｗｏｒｋ　ｓｕｒｒｏｕｎｄｉｎｇ
ｐｒｏｔｅｉｎ　ｂｏｄｉｅｓ　ｉｎ　ｍａｉｚｅ　ｅｎｄｏｓｐｅｒｍ　ｃｅｌｓ［Ｊ］．Ｔｈｅ　Ｐｌａｎｔ　Ｃｅｌ，
１９９６，８（１１）：２００３－２０１４．
［１６］ＧＬＹＮＮ　Ｎ　Ｃ，ＨＡＲＥ　Ｍ　Ｃ，ＰＡＲＲＹ　Ｄ　Ｗ，ｅｔ　ａｌ．Ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃ　ａ－
ｎａｌｙｓｉｓ　ｏｆ　ＥＦ－１ａｌｐｈａ　ｇｅｎｅ　ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ　ｆｒｏｍ　ｉｓｏｌａｔｅｓ　ｏｆ　Ｍｉｃｒｏｄｏ－
ｃｈｉｕｍ　ｎｉｖａｌｅ　ｌｅａｄｓ　ｔｏ　ｅｌｅｖａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｖａｒｉｅｔｉｅｓ　ｍａｊｕｓ　ａｎｄ　ｎｉｖａｌｅ　ｔｏ
ｓｐｅｃｉｅｓ　ｓｔａｔｕｓ［Ｊ］．Ｍｙｃｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２００５，１０９：８７２－８８０．
０１
　第２期 王　宁 等：紫云英结瘤受体激酶靶蛋白的筛选与鉴定 　
［１７］ＷＡＮＧ　Ｗ，ＰＯＯＶＡＩＡＨ　Ｂ　Ｗ．Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｐｌａｎｔ　ｃｈｉｍｅｒｉｃ
ｃａｌｃｉｕｍ／ｃａｌｍｏｄｕｌｉｎ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｋｉｎａｓｅ　ｗｉｔｈ　ａ　ｈｏｍｏｌｏｇ
ｏｆ　ｅｕｋａｒｙｏｔｉｃ　ｅｌｏｎｇａｔｉｏｎ　ｆａｃｔｏｒ－１α［Ｊ］．Ｔｈｅ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ
Ｃｈｅｍｉｓｙｒｙ，１９９９，２７４（１７）：１２００１－１２００８．
Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ　ａｎｄ　ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔａｒｇｅｔ　ｐｒｏｔｅｉｎｓ　ｉｎｔｅｒａｃｔｉｎｇ　ｗｉｔｈ
ＮＯＲＫ（ｎｏｄｕｌａｔｉｏｎ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ　ｋｉｎａｓｅ）ｏｆ　Ａｓｔｒａｇａｌｕｓ　ｓｉｎｉｃｕｓ
ＷＡＮＧ　Ｎｉｎｇ　ＬＩ　Ｙｉ－ｘｉｎｇ　ＬＩＵ　Ｙａｎ　ＣＨＥＮ　Ｄａ－ｓｏｎｇ　ＬＩ　Ｙｏｕ－ｇｕｏ
Ｃｏｌｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｌｉｆｅ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　ａｎｄ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ／Ｓｔａｔｅ　Ｋｅｙ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　ｏｆ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，
Ｈｕａｚｈｏｎｇ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｗｕｈａｎ　４３００７０，Ｃｈｉｎａ
Ａｂｓｔｒａｃｔ　Ｔｈｅ　ｎｏｄｕｌａｔｉｏｎ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ　ｋｉｎａｓｅ（ＮＯＲＫ）ｏｆ　Ａｓｔｒａｇａｌｕｓ　ｓｉｎｉｃｕｓ　ｍａｉｎｌｙ　ｃｏｎｔａｉｎｓ　ｔｈｒｅｅ
ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ　ｄｏｍａｉｎｓ　ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ　ｒｅｐｅｔｉｔｉｖｅ　ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　Ｎ－ｔｅｒｍｉｎａｌ　ｌｅｕｃｉｎｅ－ｒｉｃｈ　ｄｏｍａｉｎ（ＬＲＲ），ｔｈｅ　ｃｅｎ－
ｔｒａｌ　ｔｒａｎｓｍｅｍｂｒａｎｅ　ｄｏｍａｉｎ（ＴＭ），ａｎｄ　ｔｈｅ　Ｃ－ｔｅｒｍｉｎａｌ　ｋｉｎａｓｅ　ｄｏｍａｉｎ（ＰＫ），ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｕｓｉｎｇ　ｙｅａｓｔ
ｔｗｏ－ｈｙｂｒｉｄ　ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ　ａｎｄ　ＴＭ　ｄｏｍａｉｎ　ａｓ　ｔｈｅ　ｂａｉｔ　ｐｒｏｔｅｉｎ，ｉｔｓ　ｉｎｔｅｒａｃｔｉｎｇ　ｔａｒｇｅｔ　ｐｒｏｔｅｉｎｓ　ｗｅｒｅ　ｓｃｒｅｅｎｅｄ
ａｎｄ　ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ．４１ｏｒｉｇｉｎａｌ　ｐｏｓｉｔｉｖｅ　ｃｌｏｎｅｓ　ｗｅｒｅ　ｏｂｔａｉｎｅｄ．Ａｆｔｅｒ　ｔｈｅ　ｉｎｓｅｒｔｅｄ　ｃＤＮＡ　ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ　ａｎｄ　Ｂｌａｓｔ
ａｎａｌｙｓｅｓ　ｉｎ　ｔｈｅ　ＮＣＢＩ　ｄａｔａｂａｓｅ，ａｎ　ｉｎｔｅｒａｃｔｉｎｇ　ｔａｒｇｅｔ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　ｓａｍｅ　ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　ｆｕｎｃｔｉｏｎ　ａｓ　ａ　ｔｒａｎｓ－
ｌａｔｉｏｎ　ｅｌｏｎｇａｔｉｏｎ　ｆａｃｔｏｒ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ＥＦ１αｗａｓ　ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ．Ｔｈｅ　ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｅｎｃｏｄｉｎｇ　ｇｅｎｅ　ｗａｓ　ｎａｍｅｄ
ＡｓＥＦ１－α．Ｔｈｅ　ｆｕｒｔｈｅｒ　ｃｏｎｆｉｒｍｅｄ　ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ｋｅｙ　ｉｎｔｅｒａｃｔｅｄ　ｄｏｍａｉｎ　ｏｆ　ＡｓＥＦ１－αｐｒｏｔｅｉｎ
ｗａｓ　ｌｏｃａｔｅｄ　ｉｎ　ｔｈｅ　ＥＦ１－α－Ⅲ．Ｔｈｅｓｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｐｒｏｖｉｄｅ　ａ　ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌｙ　ｔｈｅｏｒｅｔｉｃａｌ　ｂａｓｉｓ　ｆｏｒ　ｆｕｔｕｒｅ　ｉｎ－ｄｅｐｔｈ
ｓｔｕｄｙ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｇｅｎｅｓ’ｆｕｎｃｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｍｅｃｈａｎｉｓｍ，ａｎｄ　ａｌｓｏ　ｐｒｏｖｉｄｅ　ｎｏｖｅｌ　ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｍａｔｅｒｉａｌ　ｆｏｒ　ｅｓｔａｂｌｉｓ－
ｈｉｎｇ　ｅａｒｌｙ　ｒｏｏｔ　ｎｏｄｕｌａｔｉｏｎ　ｓｉｇｎａｌｉｎｇ　ｎｅｔｗｏｒｋ　ｉｎ　ｌｅｇｕｍｅ　ｐｌａｎｔ．
Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ　Ａｓｔｒａｇａｌｕｓ　ｓｉｎｉｃｕｓ；ＮＯＲＫ；ＥＦ１－α；ｐｒｏｔｅｉｎ　ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ；ｙｅａｓｔ　ｔｗｏ－ｈｙｂｒｉｄ
（责任编辑：张志钰）
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