全 文 ：中华灾害救援医学 2015 年 9 月 第 3 卷 第 9 期 Chinese Journal of Disaster Medicine, Vol.3 , No.9 , September , 2015 509
HPLC 法同时测定地锦草中芦丁、异槲皮苷、
紫云英苷的含量
汪 慧，钱巧珍，王 静，顾亚琴，舒 燕，郦红岩
【摘要】 目的 建立同时测定地锦草药材中芦丁、异槲皮苷和紫云英苷含量的高效液相色谱（high performance liquid
chromatography，HPLC）测定方法。方法 色谱柱： Kromasil C18（5 μm，250×4.6 mm）；流动相：乙腈 - 水 - 冰醋酸（20:80:0.15）；
流速为 1.0 ml/min，检测波长：360 nm，柱温：30 ℃。结果 芦丁、异槲皮苷、紫云英苷三种成分的相对保留时间分别约为 8.1、
10.5、16.1 min，能够达到基线分离，分离度分别为 2.8、4.1、3.8；回收率分别为 100.43%、100.34%、100.32%；线性范围分别为
0.660~21.200、0.486~15.560、0.480~15.200 μg。结论 HPLC 测定法简便准确，重复性好，为地锦草的质量控制提供了依据。
【关键词】 地锦草；芦丁；异槲皮苷；紫云英苷；高效液相色谱法
【中国图书分类号】 R284.1
Simultaneous determination of contents of Rutin, Isoquercitrin and Astragalin in Herba Euphorbia by HPLC
WANG Hui, QIAN Qiaozhen, WANG Jing, GU Yaqin, SHU Yan, and LI Hongyan. Jiangsu Jibeier Pharmaceutical Joint Stock
Limited Liability Company, Zhenjiang 212009, China
Corresponding author: LI Hongyan, E-mail: lhy707@126.com
【Abstract】 Objective To establish high performance liquid chromatography （HPLC） for simultaneously determinating the
contents of rutin, isoquercitrin, astragalin in Herba Euphorbia. Methods The chromatographic column was Kromasil C18 （5 μm, 250×4.6
mm）; mobile phase was composed of acetonitrile-water-glacial acetic acid （20:80:0.15）; detection wavelength （360 nm）; column
temperature （30℃）.Current speed was 1.0 ml/min. Results Relative retention time of rutin, isoquercitrin, astragalin were 8.1, 10.5 and
16.1 respectively, which can achieve the baseline separation, and the separation degree were 2.8, 4.1, 3.8, respectively; recovery rate were
100.43%, 100.34% and 100.32%, respectively; linear range of methods were 0.660~21.200, 0.486~15.560, 0.480~15.200 μg. Conclusions
HPLC was simple, accurate and repeatable, and may provide the basis for quality control of Herba Euphorbiac.
【Key words】 Herba Euphorbia; Rutin; Isoquercitrin; Astragalin; high performance liquid chromatography
DOI：10.13919/j.issn.2095-6274.2015.09.009
作者简介：汪 慧，本科学历，工程师，E-mail： 5062342765@qq.com
作者单位： 212009 镇江，江苏吉贝尔药业股份有限公司
通讯作者： 郦红岩，E-mail： lhy707@126.com
地 锦 草 为 大 戟 科 植 物 地 锦 Euphorbia humifusa
Willd. 或班地锦 Euphorbia maculata L. 的干燥全草，是
中医、维医常用药材，药用价值高，具有清热解毒、凉
血止血、利湿退黄功效，可用于治疗痢疾、泄泻、咯血、
尿血，便血、崩漏、疮疖痈肿、湿热黄疸 [1-3]。其主要成
分有黄酮类、三萜类、香豆素类、甾醇类、鞣质及酚酸
类化合物。目前，对地锦草中黄酮类成分的含量测定
报道较多，2010 版《中国药典》也将槲皮素列为其含量
检测指标，但未见同时测定地锦草中芦丁、异槲皮苷、
紫云英苷含量的报道，本研究通过参考相关文献 [4-6]，
对地锦草中的这 3 种成分进行了含量测定，为地锦草
的质量控制提供依据。
1 材料与方法
1.1 材料 岛津 LC-10A 高效液相色谱仪，LC-10ATVP
泵，SPD-10AVP 可见紫外检测器；浙大智达 N2000 双
通道色谱工作站；Satorius CP225D 电子天平；Branson
SB3200 超声波清洗器；金坛中大 HH 恒温水浴锅。
芦丁对照品（购自中国食品药品检定研究院，供
含 量 测 定 用，批 号：100080-200707）、异 槲 皮 苷（购
自中国食品药品检定研究院，供含量测定用，批号：
111809-201403）、紫云英苷对照品（购自上海源叶生
物科技有限公司，批号：20130420），乙腈、冰醋酸为
色谱纯，水为注射用水，其余试剂均为分析纯。地锦
草药材（购自江苏九泰医药有限公司）经江苏大学欧
阳臻教授鉴定。
1.2 方法
1.2.1 色谱条件 色谱柱：Kromasil C18 （5 µm，250×
4.6 mm）；流动相：乙腈 - 水 - 冰醋酸（20：80：0.15）；
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流速：1.0 ml/min；柱温：30 oC；检测波长：360 nm；进
样 20 μl。理论板数：按芦丁峰计算应不低于 3000。
1.2.2 对照品溶液的制备 精密称取芦丁、异槲皮苷、
紫云英苷对照品适量，加乙睛 - 水溶液（90 ∶ 10）制成
含芦丁、异槲皮苷及紫云英苷均为 0.1 mg/ml 的混合溶
液，即得对照品溶液。
1.2.3 供试品溶液的制备 取地锦草药材，粉碎，过
筛，精密称取 2.0 g，置索氏提取器中，加石油醚（60~90
℃）回流至无色，弃去醚液，药渣挥至无醚味，转移至
具塞锥形瓶中，精密加 70% 乙醇 50 ml，密塞，称定重
量，加热回流 1 h，放冷，再称定重量，用 70% 乙醇补
足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液 5 ml，置
25 ml 量瓶中，加流动相定容至刻度，摇匀，即得供试
品溶液。
1.2.4 线性关系的考察 精密吸取不同浓度的对照品
溶液注入液相色谱仪，以进样量（μg）为横坐标（X），
以峰面积积分值 A 为纵坐标（Y），进行线性回归，绘制
标准曲线，计算得回归方程。
1.2.5 精密度试验 精密吸取同一浓度的混合对照品
溶液，依法测定，连续进样 5 次，测定峰面积，考察其
精密度。
1.2.6 供试液稳定性试验 取同一供试液样品，分别
在 0、2、4、6、8、12、24 h 测 定 峰 面 积，计 算 每 一 成
分峰面积的相对标准偏差（relative standard deviation，
RSD），观察其在 24 h 内的稳定性情况。
1.2.7 重复性试验 分别精密称取同一份药材样品 6
份，按“供试品溶液的制备”项步骤操作，测定，计算
样品中各成分的含量以及 RSD。
1.2.8 回收率测定 精密称取已知含量的样品 6 份约
1.0 g，分别加入芦丁、异槲皮苷、紫云英苷对照品溶液，
按“供试品溶液的制备”项下步骤处理，得供试品溶
液。进样，计算各成分的回收率情况。
1.2.9 样品测定 分别精密称取不同批次的地锦草药
材，按“供试品溶液的制备”项下操作、测定，计算药
材中各成分的含量。
2 结 果
2.1 线性关系的考察 芦丁、异槲皮苷、紫云英苷三
种成分的相对保留时间分别约为 8.1、10.5、16.1 min 左
右，能够达到基线分离，分离度分别为 2.8、4.1、3.8。
芦丁、异槲皮苷、紫云英苷对照品的标准曲线的回归
方 程 见 表 1。 芦 丁 在 0.660~21.200 μg、异 槲 皮 苷 在
0.486~15.560 μg、紫云英苷在 0.480~15.200 μg 范围内
呈良好的线性关系。
2.2 精密度试验 各成分的精密度良好，芦丁、异槲皮
苷、紫云英苷的 RSD 分别为 1.24%、1.43%、1.34%。
2.3 供试液稳定性试验 样品在 24 h 内具有良好的稳
定性，各成分峰面积 RSD 分别为 1.86%、1.63%、1.75%。
2.4 重复性试验 6 份供试品中芦丁、异槲皮苷、紫云
英苷平均含量分别为 15.187、22.453、9.264 mg/g，RSD
分别为 1.48％、1.53%、1.79%。
2.5 回收率测定 加样回收率数据见表 2。
2.6 样品测定 不同批次的地锦草药材中芦丁、异槲
皮苷、紫云英苷的含量数据见表 3。
成分 回归方程 相关系数
芦丁 Y=15267X ＋ 21.054 r=0.9999
异槲皮苷 Y=22675X ＋ 109.910 r=0.9993
紫云英苷 Y=16068X ＋ 17.601 r=0.9999
表 1 芦丁、异槲皮苷、紫云英苷对照品的标准曲线
图 1 芦丁、异槲皮苷、紫云英苷对照品与供试品溶液的色谱图
A. 对照品，B. 供试品溶液；1. 芦丁，2. 异槲皮苷，3. 紫云英苷
1 2
3
A
1
2
3
B
电
压
（
m
v）
电
压
（
m
v）
时间（min） 时间（min）
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3 讨 论
药材中同时测定芦丁、异槲皮苷、紫云英苷的含
量的报道较多 [7，8]，但大多采用梯度洗脱来对样品进行
分离，本研究经过筛选，采用等度洗脱来进行含量测
定，简化了方法，降低了对仪器的使用要求，并获得了
满意的效果。
流动相的选择：笔者曾对甲醇 - 乙腈 - 水、乙腈 -
水、甲醇 - 水、甲醇 -0.1% 磷酸溶液、乙腈 - 水 - 冰醋
酸等流动相分别进行系统筛选优化，最后确定采用乙
腈 - 水 - 冰醋酸系统作为流动相，并且对乙腈 - 水 - 冰
醋酸的比例进行了调整试验，最终在乙腈 - 水 - 冰醋
酸（20 ∶ 80 ∶ 0.15）的条件下，三种指标成分能够很
好的达到基线分离，出峰时间适中，且其他成分对测
定无干扰。样品提取条件的选择：在研究过程中分别
进行了不同溶剂（甲醇、乙醇、50% 乙醇、70% 乙醇）、
不同提取方法（加热回流、超声提取）和不同提取时间
（0.5、1、1.5 h）的比较，最后确定以 70% 乙醇回流提取
1 h 较为合适，提取时间较短，有效成分不能完全提取，
时间较长则有效成分被损耗。
【参考文献】
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及其抗真菌作用的研究进展 [J]. 医药导报 , 2011, 30
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中国实验方剂学杂志 , 2014, 20（15） ： 92-95.
王 幻 , 唐 辉 , 王国军 , 等 . HPLC 测定天山花楸叶提
取物中 6 种黄酮成分 [J]. 中国实验方剂学杂志 , 2014,
20（15） ： 58-61.
（2015-03-10 收稿 2015-04-15 修回）
（责任编辑 张亚丽）
表 2 芦丁、异槲皮苷、紫云英苷加样回收率试验结果
成分 取样量（g） 原有量（mg） 加入量（mg） 测得量（mg） 回收率（%） 平均值（%） RSD（%）
芦丁 1.0035 15.2402 15.3116 30.6718 100.78 100.43 1.87
1.0112 15.3571 30.3436 97.88
1.0027 15.2280 30.3396 98.69
0.9996 15.1809 30.7925 101.96
1.0009 15.2143 30.5987 100.48
1.0017 15.2128 30.9524 102.79
异槲皮苷 1.0022 22.5024 22.5025 45.1141 100.48 100.34 0.84
1.0036 22.5338 44.9663 99.69
1.0019 22.4957 45.2974 101.33
1.0002 22.4575 45.1021 100.63
1.0025 22.5091 44.7928 99.03
1.0031 22.5226 45.2251 100.89
紫云英苷 1.0013 9.2760 9.3011 18.7127 101.46 100.32 1.65
1.0018 9.2807 18.3818 97.85
1.0023 9.2853 18.7865 102.15
1.0005 9.2686 18.4573 98.79
1.0026 9.2881 18.6893 101.08
　 1.0028 9.2899 18.6489 100.62
表 3 不同批次样品中芦丁、异槲皮苷、紫云英苷
含量测定结果
成分 1 2 3 4 5 6
芦丁 15.622 15.187 14.196 18.643 14.023 15.428
异槲皮苷 22.141 22.453 21.753 23.852 21.695 21.281
紫云英苷 9.864 9.264 8.258 10.276 9.534 9. 617
（mg/g）
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